CN103952498A - 猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒及其应用 - Google Patents

猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103952498A
CN103952498A CN201410194405.3A CN201410194405A CN103952498A CN 103952498 A CN103952498 A CN 103952498A CN 201410194405 A CN201410194405 A CN 201410194405A CN 103952498 A CN103952498 A CN 103952498A
Authority
CN
China
Prior art keywords
porcine circovirus
type
pcv2
pcr
sybr green
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410194405.3A
Other languages
English (en)
Inventor
李秀丽
张莉
郭慧娟
鄢明华
孙英峰
田向学
王利丽
任卫华
池晶晶
路超
李富强
杨春蕾
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science
Original Assignee
Tianjin Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science filed Critical Tianjin Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science
Priority to CN201410194405.3A priority Critical patent/CN103952498A/zh
Publication of CN103952498A publication Critical patent/CN103952498A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用于检测猪圆环病毒2型的试剂盒及其应用，属于分子生物学领域。所述的特异性引物组包括：PCV2-Fgggctccagtgctgttattc SEQIDNO：1；PCV2-Rtagcgggagtggtaggagaa SEQIDNO：2。本发明应用荧光PCR的原理，建立了猪圆环病毒2型的SYBR Green荧光PCR检测方法。该试剂盒具有特异性强、敏感性高、稳定性好等特点，适合进行高通量样品的分析。

Description

猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒及其应用
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，涉及是一种用于检测猪圆环病毒2型的荧光PCR试剂盒及其应用。
背景技术
猪圆环病毒(Porcine circovirus ,PCV)为圆环病毒科圆环病毒属的成员，根据PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列可将其分为PCV1和PCV2两个基因型。PCV1广泛存在于猪源肾细胞中，人们广泛认为PCV1不具有感染性；而PCV2与断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)、猪皮炎-肾病综合征（Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）、母猪流产与繁殖障碍等密切相关, 常发生混合感染造成猪的免疫失败。目前，该病在世界各主要养猪国家均有发生，给养猪业造成了十分严重的经济损失。迄今，国内外学者已经建立了病毒分离鉴定、PCR、间接免疫荧光（IFA）、免疫组化（IHA）等多种方法用于PCV2的检测，但以上方法都不能对PCV2 进行定量检测。实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescence quantitative PCR)是近几年发展起来的一种新的核酸检测技术，该技术可实现对病毒的实时定量检测，己在人类和畜禽传染病的诊断中得到越来越广泛的应用。
本专利依据荧光定量PCR技术的原理，针对猪圆环病毒2型CAP基因保守序列，通过各种条件的优化和筛选，设计出１组引物，可用于样品中猪圆环病毒2型的检测。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种用于检测猪圆环病毒2型的特异性引物组，其特征在于：
PCV2-F gggctccagtgctgttattc SEQ ID NO：1
PCV2-R tagcgggagtggtaggagaa SEQ ID NO：2
（1）它是针对猪圆环病毒2型CAP基因的保守区域设计的。
（2）可检测出猪圆环病毒2型。
本发明的另一个目的是提供含有上述引物组的试剂盒。所述的试剂盒包括：
（1）荧光PCR反应液：
每个反应液中含有：Platinum® SYBR®Green qPCR SuperMix-UDG with ROX (2×)12.5 μL，
PCV2-F引物(10 μmol/L )1μL，PCV2-R 引物(10 μmol/L)1μ L。
（2）用于试剂盒的引物为：
PCV2-F gggctccagtgctgttattc SEQ ID NO：1
PCV2-R tagcgggagtggtaggagaa SEQ ID NO：2
（3）阳性对照标准品：含有圆环病毒2型CAP基因的克隆质粒PMD-18T-CAP,质粒的最终浓度为1×1010拷贝/μL；
（4）阴性对照标准品：猪圆环病毒2型阴性猪的组织DNA，通过PCR检测为阴性的样本。
本发明所述用于检测猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒的制备方法，其特征是包括下述步骤：
（1）待检样品的DNA提取
（2）荧光PCR检测：根据待检样品的数量将荧光定量PCR反应液分装到PCR管中，每管12.5μL；PCR管中加入样品DNA模板3~5μL，加水补充至25μL体系；并设立阳性对照、阴性对照和空白对照的荧光PCR检测。
（3） 扩增反应过程：PCR管放入荧光PCR仪，扩增程序为95℃预变性 3min；95℃变性 10s，63℃退火/延伸30s，共40个循环。
（4）结果判定：动力学曲线呈指数扩增，Ct值≤34，且阴性和空白对照无扩增，阳性对照成立，检测样品的Tm值在81℃至82℃之间，判定为猪圆环病毒2型阳性。
本试剂盒的荧光PCR优化过程：
（1） 引物浓度的优化 将引物PCV2-R，PCV2-F稀释至浓度均为 10μmol/L，分别取0.25μL、0.5μL、0.75μL、1μL、1.25μL的上下游引物，以标准品质粒为模板，采用矩阵法，进行荧光 PCR扩增，结果表明：当PCV2-F和PCV2-R均为1μl时，对质粒标准品的检测可获得较小的Ct值和较大的△Rn值。
（2） 循环条件的优化 为了获得荧光PCR引物的最佳工作条件，使用筛选的最佳引物工作浓度，分别按照以下程序进行PCR反应，每个样品作3个平行重复，同时以无菌三蒸水作空白对照。
两步法：95℃预变性 10s；94℃变性 5s，60℃退火/延伸20s，共40 个循环。
三步法：95℃预变性 10s；95℃变性 5s，55℃退火20s，72℃延伸15s，共40 个循环。反应特异性较低时，可适当提高退火/延伸温度（~66℃），扩增效率较差时，可适当延长退火/延伸时间（~30s)。结果表明，双温循环及退火温度为63℃为最佳的循环条件。
本发明进一步公开了用于检测猪圆环病毒2型的特异性引物组在制备用于检测猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒中的应用。实验结果表明：所建立的荧光定量PCR检测方法的检出率比传统PCR方法的检出率高，说明其敏感性更好。
本发明公开的用于检测猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒与现有技术相比所具有的积极效果在于：
（1）本发明的试剂制备简单、方法简便快捷，特异性强，敏感性好，可以区分猪圆环病毒1型和2型。
（2）本发明的猪圆环病毒2型荧光PCR试剂盒适用于临床病例、病料、细胞培养物等样品，可同时检测多样品高通量检测。
附图说明
图1为试剂盒特异性试验结果；自左向右，依次为从左至右的曲线依次为阳性对照、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪蓝耳病病毒（PRRSV）、猪圆环病毒1型（PCV1）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪流感病毒H3N2亚型（SIV）、猪瘟病毒（CSFV）及阴性对照，直线为空白对照水；
图2为试剂盒敏感性试验结果；从左至右依次为6.84×109、6.84×108、6.84×107、6.84×106、6.84×105、6.84×104、6.84×103、6.84×102、6.84×10拷贝/μl质粒标准品，直线为6.84拷贝/μl质粒准品和空白对照；
图3为常规PCR敏感性试验结果；从左至右依次为6.84×109、6.84×108、6.84×107、6.84×106、6.84×105、6.84×104、6.84×103、6.84×102、6.84×10拷贝/μl质粒标准品，直线为6.84拷贝/μl质粒准品B：空白对照，M：TaKaRa Marker 100bp。
具体实施方式
为了更充分地解释本发明的实施方法，提供了用于检测猪圆环病毒2型荧光定量PCR试剂盒的实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。其中所用的试剂原料均有市售。本发明所述的猪圆环病毒2型引物组序列见表1。
对照毒株包括：猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）、伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪蓝耳病病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪流感病毒H3N2亚型（SIV.）
表1
PCV2-F gggctccagtgctgttattc SEQ ID NO：1
PCV2-R Tagcgggagtggtaggagaa SEQ ID NO：2
表2 对照毒株来源
菌种名称 亚型 来源
猪圆环病毒（PCV1） 1型 哈尔滨兽医研究所赠送
猪圆环病毒（PCV2） 2型 美国明尼苏达大学赠送
伪狂犬病毒（PRV） 购自中国兽药监察所
猪细小病毒（PPV） 购自中国兽药监察所
猪蓝耳病病毒（PRRSV） 美洲型 美国明尼苏达大学赠送
猪瘟病毒（CSFV） 市售猪瘟兔化弱毒疫苗株
猪流感病毒（SIV） H3N2亚型 美国明尼苏达大学赠送
实施例1
1、猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒特异性试验：
（1）对照毒株包括：猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）、伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪蓝耳病病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪流感病毒H3N2亚型（SIV）
（2）病毒DNA提取：采用天根生物公司的细胞/组织DNA提取试剂盒，方法参考说明书。
（3）病毒RNA提取：采用常规TRizol方法提取病毒RNA，并反转录为cDNA。
2、扩增反应：
（1）试剂：Platinum® SYBR®Green qPCR SuperMix-UDG with ROX由Invitrogen公司生产；PCV2-F引物，PCV2-R引物
（2）扩增反应体系：扩增反应的总体积为25μL，其各种成分及终浓度分别为：Platinum® SYBR®Green qPCR SuperMix-UDG with ROX (2×)12.5 μL，PCV2-F(10 μmol/L )1μL，PCV2-R (10 μmol/L)1μ L，样品DNA模板3~5μL，加水补充至25μL。
（3）扩增反应过程：在荧光PCR仪上，95℃预变性 3min；95℃变性 10s，63℃退火/延伸30s，共40个循环；
（4）特异性检测结果表明，经荧光定量PCR 检测， PCV2有特异性扩增曲线且在15个循环前出现，而检测 PRRSV、PCV1、PPV、PRV、SIV及CSFV均在34个循环后有扩增曲线，表明该方法具有良好的特异性，见图1。
实施例2
1、猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒敏感性试验:
（1）标准品制备：将克隆质粒PMD-18T-CAP进行 10 倍梯度稀释，取6.84×109~6.84×100拷贝/μL数量级的标准品作为模板，同时设空白对照，分别进行荧光定量 PCR 实验和常规PCR，测定两种方法的敏感性。
2、扩增反应：
（1）试剂：Platinum® SYBR®Green qPCR SuperMix-UDG with ROX由Invitrogen公司生产；PCV2-F引物，PCV2-R引物；
（2）荧光PCR反应体系：扩增反应的总体积为25μL，其各种成分及终浓度分别为：Platinum® SYBR®Green qPCR SuperMix-UDG with ROX (2×)12.5 μL，PCV2-F(10 μmol/L )1μL，PCV2-R (10 μmol/L)1μL，质粒DNA模板1μL，加水补充至25μL。
荧光PCR扩增过程：95℃预变性 3min；95℃变性 10s，63℃退火/延伸30s，共40 个循环。
（3）常规PCR反应体系：10×PCR buffer （含Mg2+）2μL，dNTP 2μL，PCV2-F(10 μmol/L )1μL，PCV2-R (10 μmol/L)1μL，taq DNA聚合酶0.5μL，质粒DNA模板1μL，加水补充至20μL。
常规PCR扩增过程：95℃预变性 3min；95℃变性 30s，63℃ 30s，72℃ 30s，共35 个循环；72℃ 10min；4℃ pause。
（4）敏感性结果表明：荧光定量 PCR检测 PCV2 的敏感性（6.84×10拷贝/μl）比普通 PCR的敏感性（6.84×104拷贝/μl）高 3个数量级，即灵敏1000倍。见图 2和图3。
实施例3
临床样品的检测
1、临床样品采集：
（1）采集临床发病猪的脾脏、淋巴结等脏器，分别在灭菌的乳钵内剪碎，充分研磨后用Hank′s液稀释成5倍混悬液，4℃4000r/min离心30min，取上清液，按DNA提取试剂盒说明书提取组织中的病毒DNA。
（2）采集临床发病猪的血清样品，按DNA提取试剂盒说明书提取组织中的病毒DNA。
2、荧光PCR检测：
（1）试剂：Platinum® SYBR®Green qPCR SuperMix-UDG with ROX由Invitrogen公司生产PCV2-F引物，PCV2-R引物，
（2）扩增反应体系：每个反应液中含有：Platinum® SYBR®Green qPCR SuperMix-UDG with ROX (2×)12.5 μL，PCV2-F(10 μmol/L )1μL，PCV2-R (10 μmol/L)1μL，样品DNA模板3~5μL，加水补充至25μL体系。
（3）扩增反应过程：95℃预变性 3min；95℃变性 10s，63℃退火/延伸30s，共40 个循环；
3、结果判定：
（1）阴性和空白对照：Ct值为0 。
（2）阳性对照：Ct值应≤30。
（3）待检样品：Ct值≤34，Tm值在81℃与82℃之间，判定为猪圆环病毒2型阳性。
4、临床样品的结果表明：
30份临床疑似PCV2感染病例的病料样品分别取自脑、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、肠道和淋巴结等组织和器官，检测结果表明，实时荧光PCR方法检测出26份为阳性样品，所建立的荧光定量PCR检测方法的检出率比传统PCR方法的检出率高36.7%，说明其敏感性更好，见表1。
表1 临床样品的检测结果
在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明亦不受说明书中所举实例实施方式的限制。
SEQUENCE LISTING
<110> 天津市畜牧兽医研究所
<120> 猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒及其应用
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gggctccagt gctgttattc 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
tagcgggagt ggtaggagaa 20

Claims (4)

1.一种用于检测猪圆环病毒2型的特异性引物组，其特征在于：
PCV2-F gggctccagtgctgttattc SEQ ID NO：1
PCV2-R tagcgggagtggtaggagaa SEQ ID NO：2。
2.一种含有权利要求1所述猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在于它是由下述成分组成：
（1）荧光PCR反应液：
每个反应液中含有：
Platinum® SYBR®Green qPCR SuperMix-UDG with ROX (2×)12.5 μL，
PCV2-F(10 μmol/L )1μL，PCV2-R (10 μmol/L)1μL
阳性对照标准品：含有圆环病毒2型CAP基因的克隆质粒PMD-18T-CAP,质粒的最终浓度为1×1010拷贝/μL；
阴性对照标准品：猪圆环病毒2型阴性猪的组织DNA，通过PCR检测为阴性的样本。
3.一种采用权利要求2所述试剂盒进行猪圆环病毒2型的检测方法，其特征在于：按如下的步骤进行：
（1）扩增反应体系：在反应体系中加入样品DNA模板3~5μL，加水补充至25μL体系；
（2） 扩增反应过程：在荧光PCR仪上，95℃预变性 3min；95℃变性 10s，63℃退火/延伸30s，共40 个循环；
（3）扩增反应结束，根据荧光定量PCR分析软件的数据确定检测样品是否含有猪圆环病毒2型。
4.权利要求1所述用于检测猪圆环病毒2型的特异性引物组在制备用于检测猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒中的应用。
CN201410194405.3A 2014-05-09 2014-05-09 猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒及其应用 Pending CN103952498A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410194405.3A CN103952498A (zh) 2014-05-09 2014-05-09 猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410194405.3A CN103952498A (zh) 2014-05-09 2014-05-09 猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103952498A true CN103952498A (zh) 2014-07-30

Family

ID=51329845

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410194405.3A Pending CN103952498A (zh) 2014-05-09 2014-05-09 猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103952498A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107287350A (zh) * 2017-06-27 2017-10-24 广东温氏食品集团股份有限公司 一种检测猪圆环病毒3型的引物、试剂盒及方法
CN107338332A (zh) * 2017-08-30 2017-11-10 江西农业大学 猪圆环病毒3型SYBR Green I实时荧光定量PCR检测引物对及试剂盒
CN109825642A (zh) * 2019-02-25 2019-05-31 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 用于检测毛皮海豹粪便相关环状单链dna病毒的实时荧光定量pcr引物、探针及其应用
CN113025755A (zh) * 2021-03-30 2021-06-25 广东省农业科学院动物卫生研究所 一种检测猪圆环病毒2e型的试剂及其应用
CN115074465A (zh) * 2022-06-25 2022-09-20 新乡学院 一种利用TB Green П qPCR检测PCV3的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103484572A (zh) * 2013-10-16 2014-01-01 天津市畜牧兽医研究所 一种用于检测猪流感病毒的试剂盒及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103484572A (zh) * 2013-10-16 2014-01-01 天津市畜牧兽医研究所 一种用于检测猪流感病毒的试剂盒及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AKOS GELLERT等: "A Cucumber Mosaic Virus Based Expression System for the Production of Porcine Circovirus Specific Vaccines", 《PLOS ONE》 *
韩玉环等: "猪圆环病毒2 型实时定量PCR 检测方法的建立", 《北京农学院学报》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107287350A (zh) * 2017-06-27 2017-10-24 广东温氏食品集团股份有限公司 一种检测猪圆环病毒3型的引物、试剂盒及方法
CN107338332A (zh) * 2017-08-30 2017-11-10 江西农业大学 猪圆环病毒3型SYBR Green I实时荧光定量PCR检测引物对及试剂盒
CN109825642A (zh) * 2019-02-25 2019-05-31 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 用于检测毛皮海豹粪便相关环状单链dna病毒的实时荧光定量pcr引物、探针及其应用
CN113025755A (zh) * 2021-03-30 2021-06-25 广东省农业科学院动物卫生研究所 一种检测猪圆环病毒2e型的试剂及其应用
CN113025755B (zh) * 2021-03-30 2023-06-13 广东省农业科学院动物卫生研究所 一种检测猪圆环病毒2e型的试剂及其应用
CN115074465A (zh) * 2022-06-25 2022-09-20 新乡学院 一种利用TB Green П qPCR检测PCV3的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102443629B (zh) 一种沙门氏菌荧光定量pcr检测试剂盒及其检测方法
CN103952498A (zh) 猪圆环病毒2型SYBR Green荧光PCR诊断试剂盒及其应用
CN107190104B (zh) 五种猪腹泻病毒多重实时荧光定量pcr快速诊断试剂盒及应用
CN104263853B (zh) 荧光定量pcr检测猪主要病毒的试剂盒
CN101307367B (zh) 猪圆环病毒2型的快速检测技术
CN111321248B (zh) 非洲猪瘟病毒mgf-505r基因荧光pcr检测试剂、试剂盒及其应用
CN108456747A (zh) 一种鉴别猪圆环病毒的多重pcr检测试剂盒
CN103131798A (zh) 一种诺如病毒实时荧光rt-pcr检测试剂盒及其应用
CN105907890B (zh) 一种快速区分HP-PRRS疫苗GDr180株与野毒株的引物、探针及方法
CN107287350A (zh) 一种检测猪圆环病毒3型的引物、试剂盒及方法
CN104651534A (zh) 一种猪圆环病毒环介导等温扩增试剂盒及其应用
Chen et al. Development of recombinase aided amplification combined with disposable nucleic acid test strip for rapid detection of porcine circovirus type 2
CN107312875B (zh) 检测猪圆环病毒3型的环介导等温扩增方法的引物组
CN102559858B (zh) 猪圆环病毒ⅱ型实时荧光定量pcr检测的引物及试剂盒
CN103820580B (zh) 猪圆环病毒2型lamp诊断试剂盒
CN109439801B (zh) 一种蜜蜂以色列急性麻痹病毒实时荧光rt-pcr检测试剂盒及其检测方法
CN107326099B (zh) 五种猪腹泻病毒富集多重pcr快速检测试剂盒及其应用
CN113174446A (zh) 一种用于牛病毒性腹泻病毒分型的一步法双重rt-pcr检测方法
CN104561383A (zh) 流感病毒a型、b型联合检测引物、探针、试剂盒及应用
CN111621596A (zh) 一种猪圆环病毒3型实时荧光定量pcr检测引物探针组、试剂盒及方法
CN112063763A (zh) 检测猪圆环病毒4型的环介导等温扩增引物组、试剂盒及应用
CN101875974A (zh) 检测百日咳杆菌的引物组、检测试剂盒以及检测方法
CN104263852B (zh) 荧光定量pcr检测猪呼吸繁殖障碍疾病相关病毒试剂盒
CN105755121A (zh) 一种肉鸭肠道产气荚膜梭菌的检测方法
CN104388593A (zh) 一种用于检测猪圆环病毒的Taqman Real-time PCR试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20140730