CN103933564A - 疫苗 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及疫苗的领域，特别是涉及组合疫苗和共同施用日程。本发明人公开了，在儿科疫苗中CRM的使用过度可能引起对某些抗原的旁观者免疫干扰，并提供了对这个问题的解决方案。

Description

疫苗
本申请为申请号为200880023236.X的分案申请，要求2007年5月2日的优先权。
发明领域
本发明涉及疫苗的领域，特别是涉及初次免疫日程，以及带有我们的这种免疫日程的试剂盒。
背景
被推荐在常规的婴儿免疫日程中施用的疫苗的不断提高的数量使得利用组合疫苗成为关键的，以最小化不适和维持高顺应性。如果新近引入的疫苗可以与当前的疫苗组合地使用，它们的掺入将被大大地便利化。然而，组合疫苗带有干扰疫苗内其他抗原的免疫反应的抗原的风险，同样地，不同疫苗的共同施用带有类似的风险。WHO近来在每周流行病学记录(2007年3月23日NO.12)中声明，疫苗“不应当显著地干扰同时给与的其他疫苗的免疫反应”。因而，对于在这些情况下监视免疫反应的重要性和最小化免疫干扰的风险存在着世界范围的共识。
CRM-197是糖抗原的流行的载体，已经用于批准的疫苗，包括例如和的初次免疫日程。然而，本发明人发现CRM可能对针对某些抗原的免疫反应具有副作用，这些抗原在此被称为敏感抗原。发明人还发现其他新近理解的方式，在所述方式中免疫干扰可能对敏感抗原发生，以及可以减少这种干扰的方法。
1940年代引入的诊断百日咳疾病的疫苗接种在降低儿童和婴儿中由于这种疾病的发病和死亡方面是非常成功的。在具有婴儿百日咳疫苗接种高覆盖度的国家中，这种成就在进几十年已经伴随着该疾病的流行病学向高年龄组和非常幼小的婴儿转移，它们处于严重并发症的高风险中。
在6到8周开始的疫苗接种日程留下了几个月的窗口，在此未免疫的或部分免疫的婴儿可能对于来自紧密接触的百日咳感染是易受攻击的。针对百日咳的极早的新生儿疫苗接种已经是保护非常幼小的婴儿的方法，通过降低他们对疾病易受攻击的时间。由于出生时新生儿的免疫系统的部分不成熟，免疫一般不引起快速的抗体反应，但是可能引起有效的免疫引发，其可以作为将来的反应的基础(Siegrist CA.Neonatal andearly life vaccinology.Vaccine2001，19：3331-3346)。
在60年代使用当时可用的DTPw疫苗研究了这种方法，其产生了暂时的“免疫麻痹”，与标准的后期疫苗接种日程相比具有降低的免疫反应(Provenzano W，Wetterlow LH Sullivan CL.Immunization andantibody response in the newborn infant.I-Pertussis inoculation withintwenty-four hours of birth.1965NEJM；Vol.273No.17：959-965)。利用非细胞的百日咳DTPa组合疫苗的方法的可行性后来在Siegrist和小组的前临床研究中展现(Roduit C，Bozzotti P Mielcarek N，et al.Immunogenicity and protective efficacy of neonatal vaccinatior againstBordetella pertussis in a murine model：evidence for early control ofpertussis Infect Immun2002Jul；70(7)：3521-8)。
发明人设计了临床的研究来评估Pt疫苗的出生给药来加速针对百日咳的抗体反应发生的可行性。研究了对初次免疫日程的抗体反应的效果。
发明概述
本发明人发现了CRM或其他强抗原(参见下文的定义)例如糖类缀合物载体的使用过度，可能引起对被降低的敏感抗原的免疫反应；令人惊讶地，即使CRM不被缀合到敏感抗原，和即使敏感抗原和CRM不处在同一容器中但是被共同施用或在初次免疫期间以交错的方式施用。
因此，在本发明的一个实施方式中，提供了包含至少九种糖类缀合物的疫苗试剂盒，其中两种到七种之间、包括两种和七种的糖类缀合物被缀合到CRM载体蛋白，所述试剂盒适用于初次免疫日程，所述试剂盒包含：
第一容器，其包含
a)在存在CRM、DT或任何其他DT衍生物的情况下的Hib糖类缀合物，但是其不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物；
b)任选地至少一种缀合到CRM的糖类缀合物；和
c)任选地至少一种不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的其他糖类缀合物，
和第二容器，包含
d)至少一种缀合到CRM的糖类缀合物；
e)任选地至少一种不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的其他糖类缀合物，
和任选地第三容器，所述第三容器任选地包含至少一种糖类缀合物，其中
f)任选地至少一种糖类缀合物缀合到CRM；
g)任选地至少一种糖类缀合物不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物。
除了以上特别规定的，所述九种或更多种糖类可以以任何方式分布在本发明的容器中。
因而，当Hib(敏感抗原)在存在DT衍生物(例如，在DTP疫苗中的游离DT)的情况下处于本发明的第一容器中的疫苗中时，它可以与CRM上的多达7种缀合物共同施用(例如，第二容器中的)。然而，如果第九种或进一步的糖类缀合物被添加到第一、第二或第三容器的初次免疫方案(例如，脑膜炎奈瑟氏球菌糖类，如MenC)中，则它应当缀合到CRM以外的载体蛋白。
因而，当CRM不与Hib敏感抗原存在于同一容器中时，所述第一容器中的DT源可以是DTP疫苗。
以下表格提供了如上述实施方式中说明的、可以使用本发明的试剂盒共同施用的疫苗的实例。
每个糖类缀合物的平均CRM剂量应当任选地不超过一定载荷。因此在本发明的一个实施方式中，如上所述的试剂盒含有1-15μg、1-10μg、1-5μg或1-3μg的每种CRM缀合的糖类缀合物的平均CRM剂量。在本发明的进一步的实施方式中，如上所述的试剂盒含有低于35μg，例如2-30μg、5-25μg或10-20μg的总CRM载荷。
因此，在本发明的试剂盒中，9种(或更多种)糖类中的3种可以缀合到CRM。在这3种中，一种可以具有2μg CRM，一种可以具有4μgCRM，一种可以具有6μg CRM。在这种情况下，试剂盒中的平均CRM载荷是12μg/3＝4μg。
类似地，HB表面抗原(HB)已经被发现是例如CRM的敏感抗原，本发明发现了CRM作为糖类的载体的使用的限制，超过这个限制，对敏感抗原的免疫反应被降低。
因而在本发明的进一步的实施方式中，提供了包含至少七种糖类缀合物的疫苗试剂盒，其中两种和六种之间、包括两种和六种的糖类缀合物缀合到CRM载体蛋白，所述试剂盒适用于初次免疫日程，所述试剂盒包含：
第一容器，其包含
a)在存在CRM、DT或任何其他DT衍生物的情况下的HB，任选地吸附在磷酸铝上；
b)任选地至少一种缀合到CRM的糖类缀合物；和
c)任选地至少一种不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的糖类缀合物，
和第二容器，包含
d)至少一种缀合到CRM的糖类缀合物；
e)任选地至少一种不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的糖类缀合物，
和任选地第三容器，所述第三容器任选地包含至少一种糖类缀合物，其中
f)任选地至少一种糖类缀合物缀合到CRM；任选地至少一种糖类缀合物不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物。
因此，HB可以存在于第一容器中DTP疫苗，例如hexa，一种7价的链球菌疫苗的环境中，其中不超过6种糖类缀合到CRM，可以存在于第二容器中，MenC-TT可以存在于第三容器中。
每个糖类缀合物的平均CRM剂量应当任选地不超过一定载荷。因此在本发明的一个实施方式中，如上所述的试剂盒含有1-9μg、1-6μg、1-5μg或1-3μg的每种CRM缀合的糖类缀合物的平均CRM剂量。在本发明的进一步的实施方式中，如上所述的试剂盒含有低于20μg，例如2-18μg或5-15μg的总CRM载荷。
此外，发明人提出一种方法，其中相对于HB/Hib敏感抗原，超过7/8种糖类可以缀合到CRM并与敏感抗原施用，特别是通过确认了敏感抗原不处于含CRM、DT或任何其他DT衍生物的疫苗的同一容器中。因而，在本发明的进一步的实施方式中，提供了包含至少八种缀合到CRM载体蛋白的糖类缀合物，适用于初次免疫日程，所述试剂盒包括：
第一容器，其包含
a)不存在CRM、DT或任何其他DT衍生物的敏感抗原；和
b)任选地至少一种不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的糖类缀合物，
和第二容器，包含
c)缀合到CRM的至少七、八、十、十一、十三、十四或十五种糖类缀合物；
d)任选地至少一种不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的其他糖类缀合物，
和任选地第三容器，所述第三容器任选地包含至少一种糖类缀合物，其中
e)任选地至少一种糖类缀合物缀合到CRM；
f)任选地至少一种糖类缀合物不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物
这种试剂盒具有处于第一容器中的疫苗，所述疫苗不存在于DT衍生物中，例如，不存在于DTP疫苗或CRM缀合的糖类中，因而它将不倾向于CRM相关的旁观者干扰，并可以与八种或更多种缀合到CRM的缀合物共同施用，例如在第二容器中缀合到CRM的13价肺炎球菌糖类缀合物，或第二/第三容器中的+MenC-CRM。
以下表格提供了如上述实施方式中说明的、可以使用本发明的试剂盒共同施用的疫苗的实例。
此外，发明人提出一种方法，其中通过最小化与CRM缀合的糖类的数量来改善对敏感抗原的免疫反应的降低。因而，在本发明的进一步的实施方式中，提供了包含七种或更多种糖类缀合物的疫苗试剂盒，其中低于七种(例如，6、5、4、3、2、1或0种)糖类缀合物缀合到CRM载体蛋白，所述试剂盒适用于初次免疫日程，所述试剂盒包含：
第一容器，其包含
a)不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的Hib糖类缀合物；
b)任选地至少一种不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的糖类缀合物，
和第二容器，所述第二容器任选地包含至少7种糖类缀合物，其中
c)缀合到CRM的少于七种(例如，6、5、4、3、2、1或0种)的糖类，
和任选地第三容器，包含
d)任选地至少一种不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的糖类缀合物。
这样的试剂盒可以包含第一容器中的hexa，第二容器中的和第三容器中的脑膜炎球菌荚膜糖类缀合物疫苗。
以下表格提供了如上述实施方式中说明的、可以使用本发明的试剂盒共同施用的疫苗的实例，其中没有CRM上的抗原。
以下表格表明根据本发明的实施方式应当和不应当共同施用的疫苗：
*假说给出了在此列出的原则，然而尚待测试。↑和↓表明对相关抗原的反应与如果施用含DTP的疫苗(例如，hexa)而没有任何其他疫苗(即，不共同施用)时相比分别提高或降低。
在本发明的进一步的实施方式中，提供了包含九种或更多种糖类缀合物的、适合于初次免疫的组合疫苗；
a)其中存在Hib糖类缀合物但是不与CRM、DT或任何其他DT衍生物缀合；
b)其中两种到七种之间、包括两种和七种糖类缀合物缀合到CRM；
c)其中一种或多种其他糖类缀合物不缀合到CRM。
每个糖类缀合物的平均CRM剂量应当任选地不超过一定载荷。因此在本发明的一个实施方式中，如上所述的组合疫苗含有1-15μg、1-10μg、1-5μg或1-3μg的每种CRM缀合的糖类缀合物的平均CRM剂量。在本发明的进一步的实施方式中，如上所述的组合含有低于35μg，例如2-30μg、5-25μg或10-20μg的总CRM载荷。
在本发明的进一步的实施方式中，提供了包含七种或更多种糖类缀合物的、适合于初次免疫的组合疫苗；
a)其中存在HB；
其中两种到六种之间、包括两种和六种糖类缀合物缀合到CRM；
c)其中一种或多种其他糖类缀合物不缀合到CRM。
每个糖类缀合物的平均CRM剂量应当任选地不超过一定载荷。因此在本发明的一个实施方式中，如上所述的组合疫苗含有1-9μg、1-6μg、1-5μg或1-3μg的每种CRM缀合的糖类缀合物的平均CRM剂量。在本发明的进一步的实施方式中，如上所述的组合含有低于20μg，例如2-18μg或5-15μg的总CRM载荷。
IPV可以与本发明的试剂盒或组合疫苗中的敏感抗原一起施用，因为它具有对敏感抗原的免疫反应的积极效果(即，它作为免疫调节物——参见定义)。对于这种积极的效果，重要的是IPV疫苗存在于与敏感抗原同一容器中。Pw可以类似地作为免疫调节物。
因而，在一个实施方式中，提供了本发明的试剂盒或组合疫苗，其中所述具有敏感抗原的容器进一步包含IPV。
在进一步的实施方式中，提供了本发明的试剂盒或组合疫苗，其中所述具有敏感抗原的容器进一步包含Pw。
在另一个实施方式中，提供了施用本发明的试剂盒或组合疫苗的方法。
在本发明的一个实施方式中，提供了降低疫苗的初次免疫日程中CRM对敏感抗原的旁观者干扰的方法，包括一个或多个以下步骤：
a)降低所述疫苗中CRM的数量和/或CRM上的缀合物的数量(例如，到7、6、5、4、3、2、1或0种)；
b)在包含所述敏感抗原的疫苗中包括IPV；
c)在包含所述敏感抗原的疫苗中包括Pw；
d)降低包含所述敏感抗原的疫苗中的DT剂量；
e)提高所述敏感抗原的剂量；
f)如果Pa存在于包含敏感抗原的疫苗中，降低所述Pa剂量或Pa成分的数量；
g)从包含所述敏感抗原的疫苗中除去CRM，或从试剂盒中完全除去CRM，或从包含所述敏感抗原的疫苗中除去CRM、DT和DT衍生物。
在本发明的进一步的实施方式中，提供了降低对敏感抗原的旁观者干扰的方法，当使用包含八种或更多种缀合到CRM的糖类缀合物的试剂盒时，所述试剂盒包含第一容器，其包含
a)在存在CRM、DT或任何其他DT衍生物的情况下的敏感抗原；
和第二容器，其包含
b)七种或更多种缀合到CRM的糖类缀合物；
c)任选地至少一种不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的其他糖类缀合物；
和任选地第三容器，所述第三容器任选地包含至少一种糖类缀合物，其
d)任选地缀合到CRM；
e)任选地不缀合到CRM；
包括从包含所述敏感抗原的容器中除去所有CRM、DT或任何其他DT衍生物、或降低缀合到CRM的糖类缀合物的数量到不超过七种(例如，6、5、4、3、2、1或0种)的步骤。
在本发明的进一步的实施方式中，提供了使用本发明的试剂盒或组合疫苗针对由百日咳杆菌、破伤风杆菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血杆菌b型、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌引起的疾病免疫的方法，其中
a)所述试剂盒或组合疫苗中的每种抗原在初次免疫日程中施用2-3次；
b)Hib不缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物；
c)存在着7种或更多种肺炎链球菌荚膜糖类抗原缀合物；
d)存在着一种或多种奈瑟球菌荚膜糖类抗原缀合物；
e)缀合到CRM的肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌荚膜糖类抗原的数目低于8种。
在本发明的进一步的实施方式中，提供了使用本发明的试剂盒或组合疫苗针对由百日咳杆菌、破伤风杆菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血杆菌b型、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌引起的疾病免疫的方法，其中
a)所述试剂盒或组合疫苗中的每种抗原在初次免疫日程中施用2-3次；
b)降低Pa剂量或Pa成分的数量。
本发明人观察到，Pa抗原可能对针对敏感抗原的免疫反应具有副作用。
因此，在一个实施方式中，提供了本发明的试剂盒、组合疫苗或方法，其中如果存在Pa，PT(或PT衍生物)存在于Pa中，剂量不超过每0.5mL药剂10μg、1-9、1.5-8、2-6、2.5-5μg。
在进一步的实施方式中，提供了本发明的试剂盒、组合疫苗或方法，其中如果存在Pa，FHA存在于Pa中，剂量不超过每0.5mL药剂10μg、1-9、1.5-8、2-6、2.5-5μg。
在进一步的实施方式中，提供了本发明的试剂盒、组合疫苗或方法，其中如果存在Pa，PRN存在于Pa中，剂量不超过每0.5mL药剂6μg、0.5-6、0.8-5、1-4、2-3μg。
在进一步的实施方式中，提供了本发明的试剂盒、组合疫苗或方法，其中如果存在Pa，PT存在于Pa中，剂量大约2.5μg，FHA存在于Pa中，剂量大约2.5μg，已经PRN存在于Pa中，剂量大约0.8μg每0.5mL药剂。
在进一步的实施方式中，提供了本发明的试剂盒、组合疫苗或方法，其中如果存在Pa，PT存在于Pa中，剂量大约5μg，FHA存在于Pa中，剂量大约5μg，以及PRN存在于Pa中，剂量大约2.5μg每0.5mL药剂。
定义
大约或约：声称值的±10％，但应当与使用的上下文一致。
旁观者(bystander)干扰：当强抗原例如CRM197与敏感抗原一起施用时，对针对敏感抗原(例如，Hib荚膜糖类或乙型肝炎表面抗原)的免疫反应的影响。这种干扰可以被观察到，即使所述强抗原和敏感抗原不在同一疫苗容器中施用、但是被共同施用或以交错的初次免疫日程施用。例如，与包含敏感抗原和DT的组合物共同施用的CRM。
共同施用：在对医师的同一次就诊期间，在相同的或不同的位点施用的、在独立的疫苗中两种或更多种抗原的施用。通常，在不同的位点，即，导液到不同的淋巴结的位点，例如不同的四肢中施用多个疫苗。然而任选地，这不必是实情(疫苗可以在导液到相同的淋巴结的位点处施用)。
组合疫苗：使用两种或更多种独立的抗原部分赋予针对两种或更多种疾病的保护的疫苗。
CRM：解毒了野生型毒素、没有被化学上解毒的白喉毒素的任何突变体。CRM-197是通常使用的DT突变体。其他DT突变体还可以包括CRM176、CRM228、CRM45(Uchida等人J.Biol.Chem.218；3838-3844，1973)；CRM9、CRM45、CRM102、CRM103和CRM107以及Nichollsand Youle in Genetically Engineered Toxins，Ed：Frankel，Maecel DekkerInc，1992所描述的其他突变体；Glu-148的删除或或向Asp、Gln或Ser的突变和/或Ala158向Gly的突变，和在US4709017或US4950740中公开的其他突变；至少一个或多个残基Lys516、Lys526、Phe530和/或Lys534的突变和在US5917017或US6455673中公开的其他突变；或在US5843711中公开的片段。CRM不涵盖白喉毒素、白喉类毒素或白喉突变体的类毒素。
DT衍生物：一种抗原，其是白喉毒素的解毒的突变体(例如，CRM，参见上文)或白喉毒素的化学上解毒的形式或CRM，或保持了引发特异性结合白喉毒素的抗体的功能的白喉毒素的任何其他突变体或截短物。
组合的白喉-破伤风-非细胞百日咳-灭活的脊髓灰质炎疫苗-乙型肝炎-流感嗜血杆菌b型疫苗(DTPa-IPV-HB/Hib疫苗，Sanofi-Aventis)。它含有20IU DT、40IU TT、25μg PT、25μg FHA、40D-抗原单位1型脊髓灰质炎病毒、8D-抗原单位2型脊髓灰质炎病毒和32D-抗原单位3型脊髓灰质炎病毒、12μg PRP、5μg HBsAg。
Hib：缀合到载体蛋白的PRP荚膜糖类。本发明的试剂盒或组合疫苗可以含有使用或不用接头例如ADH缀合的1-10μg糖类(例如，2-8μg、3-7μg、4-6μg)每剂。Hib的实例是在已知的缀合物Hib疫苗例如(GlaxoSmithKline Biologicals s.a.)中含有的抗原。各种蛋白质载体可以用于本发明的Hib中，例如TT或NTHi PD(EP0594610)。在本发明的Hib中另一种可能的蛋白质载体是脑膜炎奈瑟氏球菌的OMC或OMP(外膜蛋白复合物)(例如，提及来自Merck&Co.Inc的PedvaxHIB内的Hib-OMC缀合物)。
免疫调节物：在疫苗中施用的抗原，当与敏感抗原和强抗原一起施用时，与如果所述敏感抗原仅与所述强抗原一起施用相比，改善针对由衍生所述敏感抗原的生物体引起的疾病的免疫反应。实例包括IPV和Pw。
hexa：组合的白喉-破伤风-非细胞百日咳-乙型肝炎-灭活的脊髓灰质炎疫苗-流感嗜血杆菌b型疫苗(DTPa-HBV-IPV/Hib疫苗，GlaxoSmithKline)。它含有至少30国际单位(IU)DT、至少40IU TT、25μg PT、25μg FHA、8μg PRN、10μg乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、40D-抗原单位1型脊髓灰质炎病毒、8D-抗原单位2型脊髓灰质炎病毒、32D-抗原单位3型脊髓灰质炎病毒和10μg缀合到TT的磷酸多核糖基核糖醇(PRP)。
penta：组合的白喉-破伤风-非细胞百日咳-乙型肝炎-灭活的脊髓灰质炎疫苗(DTPa-HBV-IPV疫苗，GlaxoSmithKline)。它含有至少30IU DT、至少40IU TT、25μg PT、25μg FHA、8μg PRN、10μgHBsAg、40D-抗原单位1型脊髓灰质炎病毒、8D-抗原单位2型脊髓灰质炎病毒和32D-抗原单位3型脊髓灰质炎病毒。
试剂盒：单独的容器中的疫苗可以与关于它们使用的说明书一起被包装(但不意味着在施用之前混合容器的内容物)。做为选择，疫苗可以与说明书单独地包装，说明书说明如何将它们与本发明的试剂盒中描述的其他疫苗一起使用。本发明的试剂盒中的疫苗可以被上色或编号或采用另一种系统，以使医师容易地识别那些疫苗/容器应当在本发明的试剂盒中一起施用，已经如何和何时施用它们(在初次免疫日程中共同施用或交错施用)。
任选地：在此在各种情况中，意图表示被叙述的可选特征是存在或不存在的。
Pa：非细胞的百日咳疫苗，一般包含PT、FHA和PRN，以及任选地凝集原2和3。
组合的白喉-破伤风-非细胞百日咳-灭活的脊髓灰质炎疫苗--流感嗜血杆菌b型疫苗(DTPa-IPV/Hib疫苗，Sanofi-Aventis)。它含有至少30IU DT、至少40IU TT、20μg PT、20μg FHA、3μg PRN、5μg FIM2和FIM3、40D-抗原单位1型脊髓灰质炎病毒、8D-抗原单位2型脊髓灰质炎病毒和32D-抗原单位3型脊髓灰质炎病毒和10μg缀合到TT的PRP。
由来自以下血清型的荚膜糖类组成的7价的肺炎链球菌疫苗：4、6B、9V、14、18C、19F和23F缀合物，全部缀合到CRM-197(Wyeth)。
13-价Prevnar：由缀合到CRM-197的荚膜糖类组成的13价的肺炎链球菌(Wyeth)。
初次免疫：通常在生命的第一年中的免疫日程，常常包含每种抗原的2或3次免疫，例如在2、4、6个月或1、3、5个月或2、3、4个月。抗原可以共同施用(在同一次就诊给与，通常在不同的四肢中，因而通常导液到不同的淋巴结)或以交错方案施用。共同施用通常是优选的，因为它包括更少的对医师的就诊，因而产生更好的顺应性。
PS6B：来自肺炎链球菌血清型6B的荚膜多糖缀合物。
PT衍生物：类毒素的百日咳毒素，或作为选择，解毒的并因而不需要化学上解毒的突变体。
糖类：可以表示多糖或低聚糖，并包括两者。糖类常常是指来自病原细菌，例如流感嗜血杆菌b、脑膜炎奈瑟氏球菌、肺炎链球菌的荚膜的糖类抗原，可以是全长多糖，或可以是细菌的“改变大小的糖类”和“寡聚糖”(其天然地具有低数量的重复单位，或其是为了可管理性在大小上降低的多糖，但仍然能在宿主中诱导保护性免疫反应)，其是疫苗领域中公知的(参见，例如EP497525)。
敏感抗原：对免疫干扰、特别是初次免疫日程中的旁观者干扰特别敏感的抗原。在疫苗中施用的抗原，当与强抗原(见下文)一起施用时，与如果所述敏感抗原自己施用相比，得到针对由衍生所述抗原的生物体引起的疾病的降低的免疫反应。实例包括乙型肝炎表面抗原、流感嗜血杆菌b抗原和PS6B。
交错施用：在对医师的同一次就诊期间，在独立的疫苗中在初次免疫日程中两种或更多种抗原的施用。这些施用一般间隔1-4周或更久。
强抗原：在疫苗中施用的抗原，当与敏感抗原一起(或同时)施用时，与如果所述敏感抗原自己施用相比，引起针对由衍生所述敏感抗原的生物体引起的疾病的降低的免疫反应。实例包括Pa、CRM-197。
一种10价肺炎链球菌疫苗，由以下缀合物组成：PS1-PD、PS4-PD、PS5-PD、PS6B-PD、PS7F-PD、PS9V-PD、PS14-PD、PS18C-TT、PS19F-DT和PS23F-PD缀合物(例如，每份人类药剂1、3、1、1、1、1、1、3、3、1μg糖类的剂量)(GlaxoSmithKline)(参见，例如WO2007/071707)。
发明详述
本发明的试剂盒和组合疫苗中的抗原将以“免疫有效量”存在，即，该数量向个体的施用，在单次剂量中或作为一系列的部分，对于疾病的治疗或预防是有效的。剂量治疗是根据公认的初次免疫日程，随后是根据需要的强化剂量。
DTP疫苗成分
本发明的DTP疫苗赋予了对由白喉棒杆菌、破伤风杆菌和百日咳杆菌引起的疾病的保护。它通常包含白喉类毒素(DT)、破伤风类毒素(TT)以及完整的细胞百日咳(Pw)或非细胞的百日咳(Pa)，其包含如下所述的一种或多种成分。
白喉抗原一般是白喉类毒素。白喉类毒素(DT)的制备是很好地记载的。可以使用任何适合的白喉类毒素。例如，DT可以通过从白喉棒杆菌的培养物纯化毒素、随后通过化学解毒来生产，但是做为选择通过重组或遗传性解毒的毒素类似物的纯化来制得(例如，CRM197，或在US4,709,017、US5,843,711、US5,601,827和US5,917,017中描述的其他突变体)。在一个实施方式中，本发明的白喉类毒素可以吸附在铝盐例如氢氧化铝上。在另一个实施方式中，本发明的白喉类毒素可以吸附在铝盐例如磷酸铝上。在进一步的实施方式中，白喉类毒素可以吸附在氢氧化铝和磷酸铝的混合物上。本发明的试剂盒或组合疫苗通常包含剂量在10-120μg、50-100μg、70-100μg或80-95μg之间的DT。
本发明的破伤风抗原一般是破伤风类毒素。制备破伤风类毒素(TT)的方法是本领域公知的。在一个实施方式中，TT通过从破伤风杆菌的培养物中纯化毒素、随后化学解毒来生产，但是作为选择通过纯化重组的、或遗传解毒的毒素类似物来制备(例如，如EP209281中描述的)。可以使用任何适合的破伤风类毒素。“破伤风类毒素”可以涵盖全长蛋白质的免疫原性片段(例如，片段C，参见EP478602)。在一个实施方式中，本发明的破伤风类毒素可以吸附在铝盐例如氢氧化铝上。在另一个实施方式中，本发明的破伤风类毒素可以吸附在铝盐例如磷酸铝上。在进一步的实施方式中，破伤风类毒素可以吸附在氢氧化铝和磷酸铝的混合物上。本发明的试剂盒或组合疫苗通常包含剂量在10-60μg、20-50μg或30-48μg之间的TT。
本发明的百日咳成分可以是非细胞的(Pa)，其中使用纯化的百日咳抗原，或完整细胞(Pw)，其中被杀灭的完整细胞百日咳被用作百日咳成分。
本发明的Pa可以包含一种或多种以下的：百日咳类毒素(PT)、丝状血球凝集素(FHA)、粘附素(PRN)、菌毛凝集原FIM2和FIM3。特别地，它可以包含PT、FHA、PRN、FIM2或FIM3、或者PT+FHA、PT+PRN、PT+FIM2、PT+FIM3、FHA+PRN、FHA+FIM2、FHA+FIM3、PRN+FIM2、PRN+FIM3或FIM2+FIM3、或者PT+FHA+PRN、PT+FHA+FIM2、PT+FHA+FIM3、PT+PRN+FIM2，PT+PRN+FIM3、PT+FIM2+FIM3、FHA+PRN+FIM2、FHA+PRN+FIM3、FHA+FIM2+FIM3或PRN+FIM2+FIM3、或者PT+FHA+PRN+FIM2、PT+FHA+PRN+FIM3或FHA+PRN+FIM2+FIM3、或者PT+FHA+PRN+FIM2+FIM3。
本发明的试剂盒或组合疫苗可以包含通过甲醛处理的公知方法或通过突变的方法(PT衍生物)解毒的PT。已经发现蛋白质的SI亚基内残基的替换产生保持了PT的免疫学和保护性质、但是具有降低的毒性或没有毒性(EP322533)的蛋白质。这种突变体可以以低于20-25μg的剂量使用。
在本发明的一个实施方式中，Pa成分以通常在批准的疫苗中使用的剂量存在(例如，)例如大约25μg PT、25μg FHA和8μg PRN。
本发明的Pw包含杀灭的完整的细胞百日咳。Pw可以通过几种方法灭活，包括无汞的方法。这样的方法可以包括热(例如，56℃，10分钟)、甲醛(例如，在37℃0.1％，24小时)、戊二醛(例如，在室温下0.05％，10分钟)、丙酮-I(例如，在室温下三次处理)和丙酮-II(例如，在室温下三次处理和在37℃第四次处理)灭活(参见，例如Gupta等人，1987，J.Biol.Stand.15：87；Gupta等人，1986，Vaccine，4：185)。制备适合于本发明的杀灭的、完整细胞百日咳杆菌(Pw)的方法在WO93/24148中公开了，还公开了生产DT-TT-Pw-HepB疫苗的适合的制剂方法。硫柳汞过去已经用于杀灭的完整细胞百日咳杆菌的制备。然而，在一个实施方式中，它不用于本发明的疫苗的制剂过程。
一般使用剂量5-50IOU、7-40IOU、9-35IOU、11-30IOU、13-25IOU、15-21IOU或大约或精确的20IOU的Pw。
在一个实施方式中，本发明的百日咳成分可以吸附在铝盐例如氢氧化铝上。在另一个实施方式中，本发明的百日咳成分可以吸附在铝盐例如磷酸铝上。在进一步的实施方式中，所述百日咳成分可以吸附在氢氧化铝和磷酸铝的混合物上。
IPV疫苗成分
本发明的IPV可以包含灭活的脊髓灰质炎病毒1型(例如，Mahoney或Brunhilde)、2型(例如MEF-1)或3型(例如Saukett)，或这三种类型的两种或全部的组合。本发明的试剂盒或组合疫苗可以包含IPV1型或IPV2型或IPV3型，或IPV1型和2型，或IPV1型和3型，或IPV2型和3型，或IPV1型、2型和3型。
制备灭活的脊髓灰质炎病毒(IPV)的方法是本领域公知的。在一个实施方式中，IPV应当包含1、2和3型，这在疫苗领域中是常规的，可以是用甲醛灭活的Salk脊髓灰质炎疫苗(参见，例如Sutter等人，2000，Pediatr.Clin.North Am.47：287；Zimmerman&Spann1999，Am FamPhysician59：113；Salk等人，1954，Official Monthly Publication of theAmerican Public Health Association44(5)：563；Hennesen，1981，Develop.Biol.Standard47：139；Budowsky，1991，Adv.Virus Res.39：255)。
在一个实施方式中，IPV不被吸附(例如，在与如果存在的其他成分混合之前)。在另一个实施方式中，本发明的IPV成分可以吸附在铝盐例如氢氧化铝上(例如，在与如果存在的其他成分混合之前或之后)在另一个实施方式中，本发明的IPV成分可以吸附在铝盐例如磷酸铝上。在进一步的实施方式中，所述IPV成分可以吸附在氢氧化铝和磷酸铝的混合物上。如果被吸附，一种或多种IPV成分可以单独地或作为混合物一起被吸附。IPV可以通过如WO2004/039417中描述的特定的干燥过程来稳定化。
脊髓灰质炎病毒可以在细胞培养物中生长。细胞培养物可以是VERO细胞系或PMKC，PMKC是来自猴肾脏的连续传代细胞系。VERO细胞可以方便地是培养的微载体。在病毒感染之前或期间的VERO细胞的培养可以涉及利用牛衍生的材料，例如小牛血清，这种材料应当从没有牛海绵状脑炎(BSE)的来源获得。培养物还可以包括例如乳白蛋白水解物的材料。在生长之后，病毒颗粒可以使用例如超滤、渗滤和层析的技术来纯化。在施用给患者之前，病毒必须被灭活，这可以通过用甲醛处理来实现。
病毒可以单独地生长、纯化和灭活，然后组合来得到松散材料混合物，用于IPV疫苗用途或用于添加到吸附的白喉和破伤风抗原和成分中，用于包含DTPw-IPV或DTPa-IPV的疫苗。
脊髓灰质炎疫苗的标准剂量当今倾向于含有40D抗原单位的灭活的脊髓灰质炎病毒1型、8D抗原单位的灭活的脊髓灰质炎病毒2型和32D抗原单位的灭活的脊髓灰质炎病毒3型(例如，)。
在一个实施方式中，本发明的IPV疫苗剂量可以包含IPV1型的10-36D-抗原单位。
在一个实施方式中，本发明的IPV疫苗剂量可以包含IPV2型的2-7D-抗原单位。
在一个实施方式中，本发明的IPV疫苗剂量可以包含IPV3型的8-39D-抗原单位。
乙型肝炎抗原
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的制备是很好地记载的。参见，例如，Hartford等人，1983，Develop.Biol.Standard54：125，Gregg等人，1987，Biotechnology5：479，EP0226846，EP0299108。它可以如下制备。一种方法包括从慢性肝炎B载体的血浆中以颗粒形式纯化抗原，因为大量的HBsAg在肝脏中合成并在HBV感染期间释放到血流中。另一种方法包括通过重组DNA方法表达蛋白质。HBsAg可以通过在酿酒酵母、毕赤氏酵母、昆虫细胞(例如Hi5)或哺乳动物细胞中表达来制备。HBsAg可以插入到质粒中，它从质粒的表达可以通过启动子例如“GAPDH”启动子(来自甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因)来控制。酵母可以在合成培养基中培养。HBsAg然后可以通过涉及例如沉淀、离子交换层析和超滤的步骤的过程来纯化。在纯化之后，HBsAg可以进行透析(例如，用半胱氨酸)。HBsAg可以以颗粒形式使用。
在此使用的，表述“乙型肝炎表面抗原”或“HBsAg”包括显示了HBV表面抗原的抗原性的任何HBsAg抗原或其片段。要理解的是，除了HBsAg S抗原的226氨基酸序列之外(参见，Tiollais，等人，1985，Nature317：489和其中参考文献)，如果希望，在此描述的HBsAg可以含有在上述参考文献和在EP0278940中描述的pre-S序列的全部或部分。特别是，HBsAg可以包含多肽，所述多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含相对于ad血清型的乙型肝炎病毒的开放阅读框，HBsAg的L-蛋白质的残基133-145和随后的残基175-400(这种肽称为L*；参见EP0414374)。本发明的范围内的HBsAg还可以包括在EP0198474(Endotronics)中描述的preS1-preS2-S多肽或其类似物，例如在EP0304578(McCormick and Jones)中描述的那些，在此描述的HBsAg还可以指突变体，例如，在WO91/14703或EP0511855A1中描述的“逃逸突变体”，特别是其中在位置145处氨基酸替换是从甘氨酸到精氨酸的HBsAg。
HBsAg可以处于颗粒形式。颗粒可以包含例如单独的S蛋白质，或可以是组合颗粒，例如，L*、S，其中L*是上文定义的，S代表HBsAg的S-蛋白。所述颗粒有益地处于它在酵母中表达的形式中。
在一个实施方式中，HBsAg是在(GlaxoSmithKlineBiologicals S.A.)中使用的抗原，其在WO93/24148中进一步描述了。
乙型肝炎表面抗原可以吸附在磷酸铝上，其可以在与其他成分混合之前进行(在WO93/24148中描述)。乙型肝炎成分应当基本上没有硫柳汞(没有硫柳汞的HBsAg的制备方法早先已经在EP1307473中公开了)。
本发明的试剂盒或组合疫苗可以包含剂量大约10μg的HB。
流感嗜血杆菌b抗原
包含来自流感嗜血杆菌B型的抗原的疫苗在WO97/00697中描述了。本发明的疫苗可以使用任何适合的Hib抗原。所述抗原可以是来自与载体蛋白缀合或混合的Hib的荚膜糖类(PRP)。所述糖类是核糖、核糖醇和磷酸盐的聚合物。Hib抗原可以任选地吸附在磷酸铝上，如WO97/00697中描述的，或如WO02/00249中描述的不吸附，或可以不经历吸附的特定过程。
抗原“不吸附在铝佐剂盐上”在此是指抗原在新鲜的铝佐剂上的表达或献身吸附步骤不在配置所述组合物的过程中涉及。
Hib可以缀合到可以提供至少一种T-辅助细胞表位的任何载体，可以是破伤风类毒素、白喉类毒素、蛋白质D或脑膜炎奈瑟氏球菌OMC。
Hib可以脂质化，可以临时地重构(例如，使用稀释剂，任选地包含本发明的疫苗的其他抗原成分)。在一个实施方式中，Hib以低剂量存在(例如，1-6μg，2-4μg，或大约或精确的2.5μg)，如在WO02/00249中描述的。
在一个实施方式中，本发明的试剂盒和组合疫苗包含剂量大约10μg的Hib。在另一个实施方式中，本发明的试剂盒和组合疫苗可以包含剂量大约2.5μg的Hib。
脑膜炎奈瑟氏球菌A、B、C、W-135或Y型抗原
本发明的试剂盒或组合疫苗可以包含选自由以下构成的组的细菌的一种或多种荚膜糖类，脑膜炎奈瑟氏球菌A型、脑膜炎奈瑟氏球菌B型、脑膜炎奈瑟氏球菌C型、脑膜炎奈瑟氏球菌Y型和脑膜炎奈瑟氏球菌W-135型(在此称为W)。
特别是，本发明的试剂盒或组合疫苗可以包含来自菌株A、B、C、Y或W，来自菌株A+B、A+C、A+Y、A+W、B+C、B+Y、B+W、C+Y、C+W或Y+W，或来自菌株A+B+C、A+B+Y、A+B+W、A+C+Y、A+C+W、B+C+Y、B+C+W或C+Y+W，或来自菌株A+B+C+Y、A+B+C+Y、A+C+Y+W、B+C+Y+W或来自菌株A+B+C+Y+W的脑膜炎奈瑟氏球菌荚膜糖类缀合物。
在一个实施方式中，本发明的脑膜炎奈瑟氏球菌成分可以吸附在铝盐例如氢氧化铝上。在另一个实施方式中，本发明的脑膜炎奈瑟氏球菌成分可以吸附在铝盐例如磷酸铝上。在进一步的实施方式中，所述脑膜炎奈瑟氏球菌成分可以吸附在氢氧化铝和磷酸铝的混合物上。在一个实施方式中，所述脑膜炎奈瑟氏球菌成分可以不吸附在佐剂例如铝佐剂盐上。
肺炎链球菌抗原
本发明的试剂盒或组合疫苗可以包含赋予对肺炎链球菌感染的保护的疫苗。这样的疫苗通常包含来自7、8、9、10、11、13或更多种肺炎链球菌血清型的糖类，或可以包含来自所有23种已知肺炎链球菌血清型的糖类。肺炎链球菌疫苗的实例包括和它们在定义小节中描述了。
在一个实施方式中，本发明的肺炎链球菌成分可以吸附在铝盐例如氢氧化铝上。在另一个实施方式中，本发明的肺炎链球菌成分可以吸附在铝盐例如磷酸铝上。在进一步的实施方式中，所述肺炎链球菌成分可以吸附在氢氧化铝和磷酸铝的混合物上。在一个实施方式中，所述肺炎链球菌成分可以不吸附在佐剂例如铝佐剂盐上。
缀合物
本发明的细菌荚膜糖类缀合物可以包含任何载体肽、多肽或蛋白质，其包含至少一种T-辅助细胞表位。使用的载体蛋白可以选自以下构成的组：破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM(包括CRM197、CRM176、CRM228、CRM45、CRM9、CRM45、CRM102、CRM103和CRM107)、重组白喉毒素(如在US4,709,017、WO93/25210、WO95/33481或WO00/48638的任一个中描述的)、来自肺炎链球菌的肺炎球菌溶血素(任选地化学地解毒的，或解毒的突变体)(参见，例如WO2004/081515和其中引用的参考文献)、来自脑膜炎奈瑟氏球菌的OMPC(EP0372501)和来自流感嗜血杆菌(EP594610)的蛋白质D(PD)。其他载体可以包括合成肽(EP0378881；EP0427347)、热激蛋白(WO93/17712；WO94/03208)、百日咳蛋白质(WO98/58668；EP0471177)、细胞因子(WO91/01146)、淋巴因子(WO91/01146)、激素(WO91/01146)、生长因子(WO91/01146)、包含来自各种病原体衍生的抗原的多个人类CD4+T细胞表位的人造蛋白质(Falugi等人，2001，Eur.J.Immunol.31：3816)、肺炎球菌的表面蛋白质PspA(WO02/091998)、铁摄取蛋白质(WO01/72337)来自C.difficile的毒素A或B(WO00/61761)、肺炎球菌的PhtD(WO00/37105)、肺炎球菌的PhtDE(例如WO01/98334&WO03/054007)、PhtX，等等。
糖类可以全部在相同的载体上，特别是来自特定生物体的所有糖类，例如MenA、MenC、MenW和MenY糖类可以全部缀合到TT、DT或CRM-197。然而，由于载体抑制的已知效力，可能有益的是，如果在本发明的每种组合物中，其中含有的糖类抗原(“n”抗原)缀合到超过一种载体上。因而，(n-1)种糖类可以在一种类型的载体上(单独地)携带，1种在不同的载体上，或者(n-2)种在一种载体上，2种在两种不同的载体上，等等。例如，在含有4种细菌糖类缀合物的疫苗中，1种、2种或全部四种可以缀合到不同的载体上。然而，蛋白质D可以用于组合物中的各种(2、3、4或更多种)糖类而没有显著的载体抑制效果。Hib可以作为TT、DT或CRM197缀合物存在，MenA、MenC、MenY和MenW可以是TT、DT、CRM197或者PD缀合物。Vi可以作为TT、DT或CRM197缀合物存在。蛋白质D是有用的载体，因为它提供了可以提供对流感嗜血杆菌的保护的进一步的抗原。在一个实施方式中，所有糖类全部缀合到同种载体蛋白上。
Vi可以缀合到载体蛋白，例如通过利用碳二亚胺(例如，EDAC)缩合化学作用的方法(假定Vi重复亚基包含羧酸基团)。这可以通过(i)Vi的COOH和蛋白质的NH2之间的单碳二亚胺反应，或(ii)在Vi的COOHC和同双功能接头分子的NH2以及蛋白质的COOH和同双功能接头分子的NH2任一之间、或Vi的COOH与异双功能接头分子的NH2和蛋白质的NH2与异双功能接头分子的COOH之间发生的双碳二亚胺反应来实现。
缀合可以与自由载体蛋白一起使用。在一个实施方式中，当给定的载体蛋白在本发明的组合物中以游离的和缀合的形式存在时，未缀合形式总体上不超过组合物中载体蛋白的总数的5％，或在另一种实施方式中，以按重量计算低于2％存在。
糖类可以通过任何已知的方法(例如，通过Likhite，美国专利4,372,945，和通过Armor等人，美国专利4,474,757)，必要时使用适合的接头来与载体蛋白连接。
糖类一般将在结合之前被活化或功能化。活化可以包括，例如，氰化试剂，例如CDAP(1-氰-二甲基氨基吡啶四氟化碳)(WO95/08348&WO96/29094)。氰化反应可以在相对温和的条件下实现，其避免了碱敏感性糖类的水解。这种合成容许与载体蛋白的直接偶联。其他适合的技术利用利用碳二亚胺、酰肼、活性酯、降樟烷、p-硝基苯甲酸、N-羟基琥珀酰亚胺、S-NHS、EDC或TSTU。
经由接头基团的连键可以使用任何已知的操作，例如，在US4,882,317和US4,695,624中描述的操作来产生。一种类型的连键包括糖类的还原性胺化，将产生的氨基与己二酸接头基团(EP0477508，Porro等人，1985，Mol.Immunol.22：907，EP0208375)的一个末端偶联，然后将蛋白质偶联到己二酸接头基团的另一个末端。其他接头包括B-丙酰胺基(WO00/10599)、硝基苯基-乙胺(Gever等人，1979，Med.Microbiol.Immunol.165：171)、卤酰基卤化物(US4,057,685)、配糖键(US4,673,574；US4,761,283；US4,808,700)、6-氨基己酸(US4,459,286)、ADH(US4,965,338)C4到C12部分(US4,663,160)，等等。作为对使用接头的替代，可以使用直接的连键。对蛋白质的直接的连键可以包括糖类的氧化，随后与蛋白质的还原性胺化，如在例如US4,761,283和US4,356,170中描述的，以及直接的CDAP反应。
在缀合之后，可以分离游离的和缀合的糖类。对于这种分离存在许多适合的方法，包括疏水层析、切向超滤、渗滤，等等(也参见Lei等人，2000，Dev Biol.(Basel).103：259；WO00/38711；US6,146,902)。在一个实施方式中，如果疫苗包含游离和缀合形式的给定糖类，未缀合的形式总体上按照整合物中糖类的总数的重量计算不超过20％(例如，≤15％、≤10％、≤5％、≤2％、≤1％)。
能够赋予对宿主的保护的糖类的数量(有效量)可以由技术人员测定。在一个实施方式中，每个剂量将包含0.1-100μg糖类，在另一个实施方式中，每个剂量将包含0.1-50μg，在进一步的实施方式中，每个剂量将包含0.1-10μg，在又一个实施方式中，每个剂量将包含1到5μg。
佐剂
本发明的试剂盒和组合疫苗可以包括药学上可接受的赋形剂，例如适合的佐剂。适合的佐剂包括铝盐，例如氢氧化铝或磷酸铝，但还可以是钙、铁、锌的盐，或可以是酰化的酪氨酸、或酰化的糖类的不溶的悬浮液，或可以是阳离子或阴离子衍化的糖类、聚磷腈、生物可降解的微球体、单磷酰基脂质A(MPL)、脂质A衍生物(例如，降低的毒性的)、3-O-脱酰基MPL、quil A、Saponin、QS21、弗氏不完全佐剂(DifcoLaboratories，Detroit，MI)、Merck Adjuvant65(Merck and Company，Inc.，Rahway，NJ)、AS-2(Smith-Kline Beecham，Philadelphia，PA)、CpG寡核苷酸、生物粘附素和粘膜粘附素、微粒、脂质体、聚氧乙烯醚制剂、聚氧乙烯酯制剂、胞壁酰肽或咪唑喹诺酮化合物(例如，咪喹莫特和它的同系物)。适合用作本发明中的佐剂的人类免疫调节物包括细胞因子，例如白细胞介素(例如，IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12，等等)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)、粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)也可以用作佐剂。
在本发明的一个实施方式中，制剂的佐剂组合物诱导主要是TH1型的免疫反应。高水平的TH1型细胞因子(例如，IFN-γ、TNFα、IL-2和IL-12)倾向于帮助诱导针对施用的抗原的细胞介导的免疫反应。在一个实施方式中，其中响应主要是Th1型的，Th1型细胞因子的水平将增加到比Th2型细胞因子水平更大的程度。这些细胞因子的水平可以使用标准分析容易地评定。关于细胞因子家族的综述，参见Mosmann andCoffman，1989，Ann.Rev.Immunol.7：145。
因此，促进主要地TH1反应的适合的佐剂系统包括，脂质A的衍生物(例如，降低毒性的)、单磷酰基脂质A(MPL)或其衍生物，特别是3-de-O-酰化的单磷酰基脂质A(3D-MPL)，和单磷酰基脂质A、任选的3-de-O-酰化的单磷酰基脂质A与铝盐的组合。增强的系统包括单磷酰基脂质A和皂角苷衍生物的组合，特别是QS21和3D-MPL的组合，如WO94/00153中所公开的，或包括较少反应原性的组合物，其中QS21用胆固醇淬灭，如WO96/33739中所公开的。在WO95/17210中描述了在水包油乳剂中包括QS21、3D-MPL佐剂和生育酚的特别强力的佐剂制剂。疫苗可以另外包含皂角苷，其可以是QS21。制剂还可以包含水包油乳剂和生育酚(WO95/17210)。未甲基化的、含CpG的寡核苷酸(WO96/02555)也是TH1反应的优选的诱导物，适合于在本发明中使用。
本发明的疫苗还可以包含上文鉴定的一种或多种佐剂的方面的组合。
Al(OH)3/AlPO4比例可以是0/115、23/92、69/46、46/69、92/23或115/0。
做为选择，本发明的疫苗的某些成分可以不明确地吸附在佐剂、特别是铝盐上。
IPV可以吸附在Al(OH)3上，DT可以吸附在Al(OH)3或AlPO4上，TT可以吸附在Al(OH)3或AlPO4上，Pw可以吸附在AlPO4上，PRN可以吸附在Al(OH)3上，HB可以吸附在AlPO4上，Hib可以吸附在AIPO4上或不吸附，Men ACWY可以吸附在Al(OH)3或AlPO4上或不吸附，MenB可以吸附在Al(OH)3或AlPO4上或不吸附，Vi可以吸附在Al(OH)3或AlPO4上或不吸附，HepA可以吸附在Al(OH)3或AlPO4上。
预先吸附在铝盐上的抗原可以在混合之前分别地预吸附。在另一个实施方式中，抗原的混合物可以在与进一步的佐剂混合之前预吸附。在一个实施方式中，IPV可以单独地吸附，或作为IPV1、2和3型的混合物吸附。
“吸附的抗原”的含义是指大于30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％被吸附。
在此使用的术语“磷酸铝”和“氢氧化铝”的含义包括适用于辅佐疫苗的所有形式的氢氧化铝或磷酸铝。例如，磷酸铝可以是不溶的磷酸铝的沉淀物(无定形的、半晶体的或晶体的)、其可以任选地但不排他地通过混合可溶性铝盐和磷酸盐来制备。“氢氧化铝”可以是不溶的(无定形的、半晶体的、晶体的)氢氧化铝的沉淀物，其可以任选地但不排他地通过中和铝盐的溶液来制备。特别适合的是可从商售来源获得的各种形式的氢氧化铝和磷酸铝凝胶，例如，Superfos(Vedbeck，2950Denmark)提供的Alhydrogel(氢氧化铝，水中的3％悬浮液)和Adju-for(磷酸铝，盐水中的2％悬浮液)。
本发明的疫苗的非免疫学的成分
除了上述的抗原和佐剂成分之外，本发明的组合疫苗一般将包含一种或多种“药学上可接受的载体或赋形剂”，其包括本身不诱导产生对接受所述组合物的个体有害的抗体的任何赋形剂。适合的赋形剂一般是大的、缓慢代谢的大分子，例如蛋白质、糖类、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、氨基酸共聚物、蔗糖(Paoletti等人，2001，Vaccine，19：2118)、海藻糖(WO00/56365)、乳糖和脂质聚合物(例如油滴或脂质体)。这样的载体是普通技术人员公知的。所述疫苗还可以含有稀释剂，例如，水、盐水、甘油，等等。另外，辅助剂物质，例如湿润剂或乳化剂、表面活性剂、pH值缓冲剂等等可以存在。无菌的无热原的磷酸盐缓冲的生理学盐水是典型的载体。药学上可接受的赋形剂的完整的论述可以在参考文献Gennaro，2000，Remington：The Science and Practice ofPharmacy，201edition，ISBN：0683306472中得到。
本发明的组合物可以被脂质化，或处于水性形式，即，溶液或悬浮液。这种类型的液体制剂容许组合物直接从它们的包装形式施用，而不需要在水介质中重构，因而对于注射是理想的。组合物可以存在于小瓶中，或者它们可以在预备的充满的注射器中存在。注射器可以有或没有针头。注射器将包括组合物的单次剂量，而小瓶可以包括单剂量或多剂量(例如，2剂)。
本发明的液体疫苗还适合于从冻干的形式重构其他疫苗。当疫苗将临时重构使用时，本发明提供了试剂盒，其可以包含两个小瓶，或可以包括一个预先填充的注射器和一个小瓶，注射器的内容物被用于在注射前重新活化小瓶的内容物。
本发明的组合疫苗可以以单位剂量形式或以多次剂量形式(例如，2剂)包装。对于多次剂量形式，小瓶优选的是预先填充的注射器。有效的剂量体积可以常规地建立，但是用于注射的组合物的典型人类剂量是0.5mL的体积。
在一个实施方式中，本发明的组合疫苗具有6.0和8.0之间的pH值，在另一个实施方式中，本发明的疫苗具有6.3和6.9之间的pH值，例如6.6±0.2。疫苗可以在该pH值下缓冲。稳定的pH值可以通过使用缓冲液来维持。如果组合物包含氢氧化铝盐，可以使用组氨酸缓冲液(WO03/009869)。组合物应当是无菌的和/或无热原的。
本发明的组合物可以对于人类是等渗的。
本发明的组合疫苗可以包括抗微生物剂，特别是当以多次剂量形式包装时。硫柳汞应当避免，因为这引起IPV成分沉淀。可以使用其他抗微生物剂，例如2-苯氧乙醇。任何防腐剂优选的以低水平存在。防腐剂可以外源地添加，和/或可以是混合形成组合物的松散抗原的成分(例如，作为百日咳抗原中的防腐剂存在)。
在一个实施方式中，本发明的组合疫苗是无硫柳汞的或疾病没有硫柳汞的。无硫柳汞或基本上无硫柳汞是指，在最终的制剂中不存在足够的硫柳汞以消极地影响IPV成分的效价。例如，如果硫柳汞在Pw或乙型肝炎表面抗原纯化过程期间使用，它应当在与IPV混合之前基本上除去。最终的疫苗中的硫柳汞含量应当低于0.025μg/μg蛋白质，0.02μg/μg蛋白质，0.01μg/μg蛋白质或0.001μg/μg蛋白质，例如0μg/μg蛋白质。在一个实施方式中，在任何成分的纯化中硫柳汞既不添加也不使用。对于乙型肝炎参见例如EP1307473，对于Pw参见上文，对于Pw加工杀灭在不存在硫柳汞的情况下实现。
本发明的组合疫苗可以包含洗涤剂，例如Tween(聚山梨酸酯)，例如Tween80。洗涤剂一般以低水平存在，例如＜0.01％。
本发明的组合疫苗可以包括钠盐(例如，氯化钠)来得到渗涨度。所述组合物可以包含氯化钠。在一个实施方式中，本发明的组合物中的氯化钠的浓度在0.1到100mg/mL(例如，1-50mg/mL、2-20mg/mL、5-15mg/mL)的范围内，在进一步的实施方式中，氯化钠的浓度是10±2mg/mL NaCl，例如，约9mg/mL。
本发明的组合疫苗一般地将包括缓冲液。磷酸盐或组氨酸缓冲液是典型的。
本发明的组合疫苗可以包括溶液中的游离磷酸盐离子(例如，通过使用磷酸盐缓冲液)以帮助抗原的非吸附。本发明的组合物中游离磷酸盐离子的浓度在一个实施方式中是0.1到10.0mM之间，在另一个实施方式中在1和5mM之间，在进一步的实施方式中约2.5mM。
本发明的组合疫苗的性质
在一个实施方式中，本发明的组合疫苗被配制为疫苗用于体内施用给宿主，以这样的方式从而组合物的单独成分被配制以使单独成分的免疫原性基本上不被组合物的其他单独成分损害。基本上不损害，是指在免疫时，获得了针对每种成分的抗体滴度，其是当抗原分离地施用时获得的滴度的超过60％、70％、80％或90％，或95-100％。因而，在优选的实施方式中，与它们的分离施用相比较，对组合中的进一步的成分没有(显著)不利的影响(就保护性效力而言)。
疫苗制剂
在一个实施方式中，本发明的组合疫苗被配制为疫苗用于体内施用给宿主，从而它们赋予一定抗体滴定度，所述抗体滴度对于可接受百分比的人类个体超过了每种抗原成分的血清保护的指标。这是在评估整个群体中疫苗的效力中重要的测试。具有相关的抗体滴度的抗原是公知的，高于所述抗体滴度则宿主被认为针对所述抗原是血清转变的，这样的滴度由一些组织例如WHO公布。在一个实施方式中，个体的统计学上显著的样品的超过80％是血清转变的，在其他实施方式中，个体的统计学上显著的样品的超过90％是血清转变的，在进一步的实施方式中，个体的统计学上显著的样品的超过93％是血清转变的，在又一个实施方式中，个体的统计学上显著的样品的超过96-100％是血清转变的。
在每个疫苗剂量中的抗原数量被选择为一种数量，其将在典型的接种中诱导免疫保护性反应而没有显著的不良副作用。这种数量将取决于采用的哪种特定免疫原而变化。一般地，预计的是，每个剂量将包含1-1000μg的总免疫原，或1-100μg，或1-40μg，或1-5μg。特定疫苗的最佳数量可以通过研究方法来确定，包括观察个体中的抗体滴度和其他反应。初次疫苗接种过程可以包括2-3剂的疫苗，在一到两个月的相隔内，例如，根据WHO对于DTP免疫的推荐。
本发明的疫苗的包装
本发明的组合疫苗可以包装在各种类型的容器中，例如小瓶中、注射器中，等等。多次剂量瓶一般将包含可重新密封的塑料口，无菌的针头可以通过它插入来取出一剂疫苗，一旦针头被取出它就重新密封。
所述疫苗可以在各种容器中提供(例如，2种或3种)。容器的内容物可以在单次注射中向宿主施用前临时地混合，或可以在不同的位点附随地施用。疫苗的剂量一般是0.5mL。
发明人令人惊讶地发现，上述方式中提供的试剂盒有益地以最佳的方式向宿主的免疫系统呈递各种抗原。所述试剂盒为执业医生提供了免疫宿主的最佳方法，具有一种或多种以下的优点：对所有抗原的保护效力，最小的反应原性，最小的载体抑制干扰，最小的佐剂/抗原干扰，或最小的抗原/抗原干扰。这样，这些目标可以用最少数目(两次)的施用实现，任选地在对医师的同一次就诊时发生。
在一个实施方式中，第一和第二容器的组合疫苗在不同的位点伴随地施用(如下文在“本发明的疫苗的施用”中描述的)，在可选择的实施方式中，发明人设想，第一和第二容器的内容物可以在作为单一疫苗施用之前被(任选地临时地)混合。
制备本发明的疫苗
本发明还提供了生产疫苗制剂的方法，包括将疫苗的成分与药学上可接受的赋形剂混合在一起的步骤。
在本发明的一个实施方式中，提供了在此描述的疫苗用于药物中，用于治疗或预防由百日咳杆菌、破伤风杆菌、白喉杆菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血杆菌b型、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌感染引起的疾病。
另外，还提供了针对百日咳杆菌、破伤风杆菌、白喉杆菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血杆菌b型、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌引起的疾病免疫人类宿主的方法，所述方法包括向所述宿主施用免疫保护剂量的本发明的疫苗。
在每个疫苗剂量中的抗原数量被选择为一种数量，其将在典型的接种中诱导免疫保护性反应而没有显著的不良副作用。这种数量将取决于应用的哪种特定免疫原和其如何呈现而变化。在一个实施方式中，每个剂量将包含0.1-100μg糖类，在另一个实施方式中，每个剂量将包含0.1-50μg，在进一步的实施方式中，每个剂量将包含0.1-10μg，在又一个实施方式中，每个剂量将包含1到5μg糖类。
在一个实施方式中，所述疫苗中的蛋白质抗原的含量处在1-100μg的范围内，在另一个实施方式中，所述疫苗中的蛋白质抗原的含量处在5-50μg的范围内，在进一步的实施方式中，所述疫苗中的蛋白质抗原的含量处在5-25μg的范围内。
疫苗制备在Vaccine Design[″The subunit and adjuvant approach″(edsPowell M.F.&Newman M.J.)(1995)Plenum Press New York]中一般地描述了。Fullerton，美国专利4,235,877描述了脂质体内的封装。公开了蛋白质与大分子的结合，例如，Likhite，美国专利4,372,945和Armor等人，美国专利4,474,757。Quil A的使用由Dalsgaard等人，1977，ActaVet Scand.18：349公开。3D-MPL可从Ribi immunochem，USA获得，并在英国专利申请No.2220211和美国专利4,912,094中公开。QS21在美国专利5,057,540中公开。
在一个实施方式中，每0.5mL剂量的松散疫苗缀合物的数量低于10μg(缀合物中的糖类)，在另一个实施方式中，缀合物的数量是1-7，在另一个实施方式中，缀合物的数量是2-6μg，或在进一步的实施方式中，约2.5、3、4或5μg。
要理解的是，某些成分，例如DTPw成分可以在添加吸附的HBsAg或其他成分之前单独地组合。
还提供了制造本发明的组合疫苗的方法，包括将抗原与药学上可接受的赋形剂混合的步骤。
本发明的疫苗的施用
本发明提供了在哺乳动物中引发免疫反应的方法，包括施用有效量的本发明的疫苗的步骤。所述疫苗可以预防性地(即，预防感染)或治疗性地(即，治疗感染后的疾病)施用。免疫反应优选的是保护性的，优选的涉及抗体。所述方法可以引起强化应答。
在初次疫苗接种后，个体可以承受一次或几次有适当间隔的强化免疫。给药处理可以是单剂量日程或多次剂量日程。多剂量可以在初次免疫日程中和/或在强化免疫日程中使用。初次剂量日程，其可以在生命的第一年中，可以跟随着强化剂量日程。初次剂量之间(例如，4-16周之间)和初次与强化之间的适合的时间可以常规地确定。
在一个实施方式中，所述哺乳动物是人类。当疫苗用于预防性用途时，所述人类优选的是儿童(例如，婴儿)或少年；当疫苗用于治疗用途时，所述人类优选的是成年人。为儿童设计的疫苗也可以施用给成年人，例如来评估安全性、剂量、免疫原性，等等。
本发明的疫苗制品可以用于保护或治疗对感染敏感的哺乳动物，通过直接向患者施用所述疫苗的方式。直接递送可以通过胃肠外注射(肌内、腹膜内、皮内、皮下、静脉内地，或到组织的细胞间隙中)；或通过直肠、口腔、阴道、体表、穿表皮、鼻内、眼睛、耳内、肺部或其他粘膜的施用。在一个实施方式中，施用是通过肌内注射到大腿或上臂。注射可以通过针头(例如，皮下注射针头)，但作为选择可以使用无针头注射。典型的肌肉内剂量是0.5mL。
细菌性感染影响身体的各个区域，因此本发明的组合物可以按各种形式制备。例如，所述组合物可以作为可注射的、液体溶液或悬浮液来制备。所述组合物可以为肺部施用准备，例如，作为吸入器，使用细粉或喷雾。所述组合物可以作为栓剂或阴道栓剂来准备。所述组合物可以为鼻部、耳部或眼睛施用来准备，例如，作为喷雾剂、滴剂、凝胶或粉剂(参见，例如Almeida&Alpar，1996，J Drug Targeting，3：455；Bergquist等人，1998，APMIS，106：800)。已经报道了DTP疫苗的成功的鼻内施用(Ryan等人，1999，Infect.Immun.，67：6270；Nagai等人，2001，Vaccine，19：4824)。
在一个实施方式中，第一和第二(以及在可用时，第三)容器的组合疫苗在不同的位点伴随地施用，在可选择的实施方式中，发明人设想，第一和第二容器的内容物可以在作为单一疫苗施用之前被(任选地临时地)混合。
本发明可以用于引发全身性和/或粘液免疫性。
检查治疗处理的效力的一种方法涉及在本发明的组合物的施用后监视细菌性感染。检查预防性处理的效力的一种方法涉及在本发明的组合物的施用后监视针对抗原的免疫反应。本发明的组合物的免疫原性可以通过将它们施用给测试个体(例如，12-16月龄的儿童，或动物模型-WO01/30390)然后测定标准的免疫学参数来确定。这些免疫反应一般将在组合物的施用后约4周测定，并与组合物的施用之前测定的值比较。不评定患者中的实际保护效力，用于评估DTP疫苗的效力的标准动物模型和体外模型以及保护的相关性是公知的。
所有引用的参考文献和公开物通过引用合并在此。
实施例
实施例1
概述
使用DTPa-Hib组合(有或者没有HBV和IPV)的婴儿疫苗接种一般产生高百分比的婴儿具有≥0.15μg/ml抗PRP的抗PRP抗体浓度，一种与缀合物免疫之后针对Hib疾病的高水平保护相联系的指标。近来，已经注意到，使用DTPa3-Hib的疫苗接种在英国与不一致的低抗体水平相关，这与突破的Hib病例相关。虽然缺少学步儿童强化一般被认为是解释了降低的Hib疾病控制的关键因素，在此表明的是，在英国与DTPa3-Hib的导入相重合的MenC-CRM197缀合物的共同施用可能在降低的抗PRP免疫反应中起到作用。将DTPa3疫苗与IPV组合看起来增强了对某些抗原，例如乙型肝炎和Hib的反应。这种DTPa(HBV)IPV-Hib组合看起来不受到CRM197共同施用对Hib反应的影响。这些观察结果强调了需要小心地评估即将出现的儿科缀合物疫苗对共同施用的DTPa、HBV、IPV和Hib抗原的可能的干扰效应，特别注意乙型肝炎和Hib-TT。
关键词：流感嗜血杆菌b型、Hib、疫苗、免疫性、干扰、缀合物疫苗、组合疫苗、强化、灭活的脊髓灰质炎疫苗(IPV)
关键点
·基于DTPa的Hib组合疫苗在预防Hib疾病方面是免疫原性的和有效的。保护与1)在初次免疫后诱导高比例的、达到0.15μg的保护性抗体水平的个体的能力；2)在学步儿童强化后抗体的滴度和质量的提高；和3)在学步儿童强化之后主要见到的群体免疫效力。就在初次免疫接种后达到0.15μg截断值的主题的比例而言，在各种商业上可获得的基于DTPa的Hib-TT组合之间没有观察到差异。
·在1990年代晚期期间，在英国起初的赶超战役的效果减小，对Hib的群体免疫性下降。无力的免疫性没有通过生命的第二年的强化剂量得到补偿，Hib缀合物疫苗失效自1999年以来提高。强化的缺乏一般被认为是解释了英国降低的Hib控制的关键因素。在降低的Hib控制期间，英国从DTPw-Hib变换到DTPa3-Hib，在大约同期，引入了MenC-CRM197儿科免疫。
·与含有CRM197的疫苗共同施用的基于DTPa的Hib组合疫苗的临床试验表明了与对PRP抗体反应的旁观者干扰一致的效果。在降低的群体免疫性以及基线群体反应一致地处在观察到的抗PRP抗体谱系的低端的情况下，由与MenC-CRM197共同施用的DTPa3-Hib诱导的异常低的抗体浓度不足以提供对某些接种的儿童的充分保护，当使用DTPa3-Hib时可能促使了观察到的Hib疫苗失效数量的提高。
·使用与MenC-CRM197或7vPCV-CRM197缀合物疫苗共同施用的DTPa3(HBV)IPV-Hib组合疫苗的临床试验不显示共同施用旁观者干扰，其表明了IPV的最可能的保护效果。比较有和没有IPV的含Hib组合疫苗的少数的头接头研究展现了当IPV是组合的一部分时更高的抗PRP和抗HBs。另外，发现的是，DTPa3-Hib组合而不是DTPa3-HBV-IPV-Hib组合诱导了与单独给与的Hib缀合物相比具有更低亲合力的抗PRP抗体。这可以解释DTPa3-Hib对CRM197缀合物旁观者干扰的易感性，而DTPa3(HBV)IPV-Hib没有，或对这较低敏感。
·提高数量的缀合物疫苗，例如Hib-MenCY-TT、ACWY-DT、ACWY-CRM197、ACWY-TT、10vPCV-蛋白质D和13vPCV-CRM197被评估组合到婴儿DTPa、HBV、IPV、Hib疫苗接种计划中，必需的是，在公众健康环境中实现之前进行适当地对照的实验来评估特异性免疫反应。
背景：
流感嗜血杆菌b型
据估计每年流感嗜血杆菌b型(Hib)引起三百万严重疾病，在世界范围内产生400,000和700,000之间的死亡[1]。在有效的缀合物疫苗可用之前，0到4岁儿童中Hib脑膜炎的发生率在每100,000人32到60人之间变动，在发展中国家观察到最高的发生率和疾病死亡率(高达30％)[2]。在引入使用Hib缀合物疫苗的婴儿疫苗接种之后，许多国家现在记录了每100,000人＜2人的低脑膜炎发生率。
Hib在多达15％的个体中在上呼吸道中无症状地携带[3]，但是仅少数定殖的个体发生严重的侵入性疾病。疾病由细菌经由呼吸上皮向血流的侵入引起，传播到中枢神经系统和其他位点。脑膜炎和败血症是最经常观察到的临床综合征，也可能发生会厌炎、关节炎、蜂窝组织炎和骨髓炎。
荚膜多糖(CP)被认为是Hib的最重要的毒力决定簇，因为它与补体的相互作用容许它绕过宿主的抗细菌防御系统[4]。宿主针对CP产生特异性抗体的能力在针对最为密封的细菌的防御中起到关键的作用[5]。然而，针对多糖(PS)的免疫反应的特征是个体发生方面的晚期发展。多糖一般在直到18-21个月的婴儿中是低度免疫原性的，而某些多糖能够较早的诱导免疫反应。相信的是，在人类婴儿中缺少的脾脏的边缘区域，在多糖的T-独立性抗体反应的起始和发展中起到重要作用[6]。边缘区域树突状细胞将CP抗原呈递给成熟的非循环的边缘区域B细胞[7]。脾脏的边缘区域含有相对成熟的B细胞(IL-2受体阳性)、表面IgM、IgD和更重要地高密度的CD21抗原，介导B细胞活化的补体成分C3d的受体[8]。这与观察结果相符，即，密封的细菌的免疫原性与它们的PS囊壳的补体活化性质相关，通过将C3的产物分裂成C3b和C3d，以及通过活化B细胞影响对PS的抗体产生[9，10]。一般认为的是，通过特异性或交叉反应性细菌的携带的天然引发也是响应于简单多糖的能力的关键部分。一旦婴儿响应于天然的引发，使用简单多糖的免疫成为可能。
Hib多糖疫苗
Hib CP疫苗的开发始于1970年代期间，展现了针对侵入性疾病的年龄依赖性效力，在低于18月龄接种的儿童中没有观察到保护[11]。婴儿偶尔地响应于Hib CP疫苗，具有低抗体水平，以及没有免疫记忆发生的证据[12]。免疫反应在18月龄后改善，而18-23月龄的儿童以及≥2岁的儿童不应答。在大约6岁的年龄达到在疫苗接种之后的成年人抗体水平。
Hib CP疫苗的基本局限性是它们不能在＜2岁的婴儿中诱导免疫反应，这是侵入性Hib疾病最常发生的群体。像其他的PS疫苗一样，HibCP疫苗不能提供长期的保护、生物体的鼻咽部携带的降低，也不能提供群体免疫。为了克服Hib CP疫苗的缺点，通过Hib CP多核糖-核糖醇-磷酸盐(PRP)到T细胞依赖性载体蛋白的化学结合，开发了改进的疫苗。
Hib缀合物疫苗
PRP结合到蛋白质载体容许PRP刺激的B细胞变得被T辅助细胞活化，引起随着时间过去的早期婴儿抗体反应成熟，以及对PRP的B细胞记忆的并行诱导。已经批准了具有不同的蛋白质载体的四种Hib缀合物疫苗：缀合到白喉类毒素的PRP(PRP-D)、缀合到破伤风类毒素的PRP(PRP-T)、缀合到CRM197的低聚糖Hib(突变的无毒的白喉毒素[该疫苗也称为HbOC])，以及缀合到脑膜炎奈瑟氏球菌外膜蛋白复合物的PRP(PRP-OMP)。不仅在蛋白质的性质方面不同，这些疫苗在多糖的长度、糖类-蛋白质连键的方法以及糖类-蛋白质比例方面也不同。
对所有Hib缀合物疫苗的免疫反应与对天然CP的免疫反应深刻地不同。所有缀合物疫苗在成年人中是高度免疫原性的，被证明在幼小儿童中比简单的Hib CP更具免疫原性[14，15，16，17，18，19]。使用缀合物疫苗或天然CP的重新疫苗接种诱导了强化反应[20]，其独立于再接种之时的抗体水平[15，18，19]。
成年人中的抗体反应和抗体子类分布在Hib CP缀合物或Hib CP免疫之后没有不同[21]。＜2岁的儿童显示了对Hib CP和Hib缀合物疫苗的主要的IgG1反应，而IgG1和IgG2抗体都在成年人中被诱导[21]。这种年龄差异是由于IgG2子类抗体反应的延迟的成熟，其仅在8-12岁达到成年人水平[22]。对于IgG1和IgG2抗PRP反应的分布在成年人中观察到的大的差异与先存的天然抗体的水平相关，表明天然的引发偏爱后者的IgG2反应[23]。与使用Hib CP的疫苗接种相比，使用Hib缀合物疫苗的婴儿疫苗接种提高了产生的IgG抗体的数量，降低了重复疫苗接种时IgG比IgM的比例。IgG1子类的优势在强化免疫时进一步提高[24]。
批准的Hib缀合物疫苗
当所有的缀合物疫苗在幼小儿童中是免疫原性的时，就实现的抗体水平、独特型表达、婴儿中引发的抗体反应的时机、以及随着时间过去的亲合力熟化速率而言，在批准的Hib缀合物疫苗之间观察到差异[25]。
Hib缀合物疫苗的临床研究显示了，就所实现的疫苗接种后抗体几何平均浓度(GMC)的量而言[26]，在疫苗之间的相当的差异，在2-6月龄的婴儿中用PRP-D三次免疫之后最低GMC(0.28-0.73ng/ml)[13，27，28]。保护性抗体水平的维持也是变化的，一项研究显示了与PRP-OMP相比在PRP-T之后更高的持续性抗体水平[29]。与其他缀合物疫苗相比，PRP-OMP的特征在于第一次引发免疫之后的更高抗体反应，而引发后和强化反应与PRP-T和Hib-CRM197相比显著更低[28]。这种早期反应表明除了T辅助细胞活化能力之外，PRP-OMP缀合物的固有的B细胞促有丝分裂性质[20]。
在三项批准的Hib缀合物疫苗的研究中，与PRP-D和PRP-OMP相比，Hib-CRM197产生了最高的IgG1水平和IgG1/IgG2比例[30]，反映了由Hib-CRM197诱导的更高的总抗体水平[31]。就Hib缀合物疫苗诱导的抗PRP抗体的功能活性而言，与PRP-OMP相比，PRP-TT诱导了提高质量的抗PRP抗体[32，33]。所有四种Hib缀合物疫苗已经在保护效力的研究中评估了(表1)，尽管在它们的免疫原性分布方面有十分显著的区别，当以至少两剂向婴儿施用时，除了PRP-D之外，所有的疫苗都展现了针对侵入性Hib疾病的效力。虽然在芬兰是高度有效的，PRP-D未能保护当地的阿拉斯加的儿童[34]，在很大程度上是这个群体中Hib疾病的独特流行性的结果，其特征在于在生命的及早期高比例的疾病发生。由于在PRP-OMP的单剂量之后实现的早期的和高度的抗体反应，PRP-OMP已经成功地用于阿拉斯加，以及具有类似的流行病学的其他主要的土著居民，例如澳大利亚的土人。
携带(carriage)和群体免疫
在引入常规Hib缀合物疫苗接种后第一年，观察到与接种的群体不成比例的疾病负担方面的降低。在美国对＞18个月龄的儿童引入PRP-D之后，Hib疾病的发生率在没有被包括在常规疫苗接种中的＜18个月儿童中降低[39]。这些数据表明，Hib缀合物疫苗接种不仅赋予了对接种的学步儿童和较大的儿童的保护，还降低了Hib对未免疫的婴儿的传播[40，41]。
与未免疫的儿童相比，用Hib缀合物疫苗而不是简单的Hib CP疫苗免疫的儿童处于更低的Hib鼻咽部定植的风险中[40，41，42，43]。负责的机制被表明是在鼻咽粘膜中Hib CP抗体的存在[44]。与预防侵入性疾病相比，更高的血清抗PRP抗体浓度(3-7μg/ml)看起来是预防定殖所需的[20]，这表明大多数群体免疫是由学步儿童强化所诱导的。在接种的成年人中，在鼻咽分泌物和唾液中检出的抗PRP IgG抗体可能来自于高血清抗体浓度[44]。在接种2-4次但未强化的的婴儿中的较低抗体浓度已经与携带的较低完整性的预防相关联[42，45，46]。由于抗体在免疫之后立即是高度的，免疫记忆也可能在定殖的预防或缩短方面起到作用。
保护的血清学相关性
被动免疫接种研究估计了保护性的抗Hib CP抗体浓度在0.05到0.15μg/mL之间[5]。利用Hib CP疫苗的效力试验的分析表明，在18-23月龄免疫的婴儿的90％在免疫后一年半仍然具有Hib CP抗体≥0.15μg/mL，其与观察到的保护效力相关[11，12]。这些研究确定了在暴露于定殖时预防疾病必需的抗体浓度为0.05-0.15μg/mL[47，48]，这产生了将Hib CP血清保护表示为≥0.15μg/mL的百分比的标准方法。在芬兰的简单PRP效力试验中，免疫之后三周的免疫后抗体水平≥1μg/mL的大于18月龄儿童的百分比反映了在该年龄组中观察到的效力。由于抗体浓度在免疫后减小，1μg/mL的疫苗接种后浓度估计是确保随后一年中至少0.1μg/mL的最小浓度所必需的。
来自Hib PS研究的推定的长期保护性抗PRP抗体水平可能过高估计了在Hib缀合物疫苗接种后的长期保护所需的抗PRP抗体浓度，由于在重复的免疫接种时抗体的改善的功能活性(同种型和亲合力成熟)以及记忆B细胞的产生[47，49]。由于抗Hib CP抗体的功能活性取决于浓度、Ig同种型和亲和力，尽管足够赋予对Hib疾病的保护的血清抗体的确切浓度难以确定，来自使用Hib缀合物疫苗的现场实验的观察结果支持了这种假说。
表1概述了缀合物Hib疫苗效力试验，其中关于保护效力和免疫原性的数据是可获得的。在许多研究中，在初次免疫系列之后超过1μg/mL推定的防护阈值的儿童的比例实质上低估了所展现的保护效力。相比之下，达到抗PRP抗体浓度≥0.15μg/mL的婴儿的比例更紧密地反映了观察到的疫苗效力估计值[13，49，50]。由于抗PRP抗体的质量在初次疫苗接种后随着时间提高[51]，成熟的抗体的保护水平实际上可能低于0.15μg/mL：在0.05μg/mL的范围内[20，52]。
Eskola等人(1990)[35]假设在存在记忆的情况下任何可测量的抗体水平足以保护。在芬兰，与≥0.15μg/mL(70％)相比，90％的观察到的保护效力更紧密地接近具有初次后抗PRP抗体浓度≥0.06μg/mL(85％)的个体的比例。
总体上，虽然用Hib缀合物疫苗免疫的5％到68％的儿童在初次免疫后不能实现≥1μg/mL的抗体水平(表1)，他们中几乎所有的都引发了对Hib CP的抗原反应，证据是疫苗接种后可检测的抗体的存在，并且对Hib疾病得以保护。
抗PRP抗体的功能活性
在体外的调理吞噬作用和杀菌测试中，以及在体内的通过婴儿大鼠的被动免疫随后Hib攻击中，Hib缀合物疫苗产生的抗PRP抗体是有效的[52，53]。当暴露于Hib时，健康成年人之后IgG1和IgG2部分的补体活性是可变的，而IgG1在大多数的人中是更具活性的[54]。其他研究展现了，与更高亲合力的IgG1相比，更高剂量的低亲合力IgG2抗PRP抗体是婴儿大鼠模型中赋予保护所需的[33，55]。
在缀合物免疫之后，从引发之后到强化前抗PRP抗体的亲合力提高[51，52]，但在生命的第二年的强化剂量之后没有进一步提高很多。提高的亲合力和诱导的记忆可能解释了为什么针对Hib疾病的保护保持很高，即使当在强化前的时期相当数量的儿童展现了抗PRP抗体浓度＜0.15μg/mL。亲合力的提高反映了Ig基因的身体超突变的过程，以及产生的高亲和力B细胞的随后的选择，其在T细胞依赖性反应之后在发生细胞中心发生。在某些研究中，显示了提高的抗体亲合力和更有效的抗体功能之间的关系[32，57]。抗体亲合力看起来与杀菌活性相关[32]，已经提出作为对免疫记忆的替代性标志物[56]。
虽然PRP-OMP缀合物疫苗诱导了与其他疫苗相比具有更低亲合力的不同的抗体组分和抗细菌活性[32]，PRP-OMP已经被证明是有效的。这表明对于Hib CP抗体的抗菌活性存在着阈值水平。人类的抗Hib防御机制中直接的杀菌或调理吞噬活性的相对重要性仍然是有争议的。仅仅非常偶尔地是个体中遭遇的Hib疾病具有末期补体成分缺乏，而这种缺乏通常与脑膜炎球菌疾病相关[58]。C5缺陷小鼠中Hib脑膜炎的研究展现了正常的Hib清除能力，而在C3耗尽的情况下，观察到受损清除，表明调理吞噬作用是非常重要的。实际上所有的正常成年人看起来具有调理吞噬能力，取决于Hib CP抗体，而约一半的成年人展现杀菌活性[59]。
基于DTPa的Hib组合疫苗
在成功的引入批准的Hib缀合物疫苗之后，其产生了Hib携带和侵入性Hib疾病方面快速和印象深刻的降低，生产了基于DTPw和DTPa的Hib组合疫苗并引入大量的国家中。将基于DTPa的疫苗与PRP-T或Hib-CRM197混合引起了与当在独立的位点施用疫苗时相比更低百分比的婴儿具有抗PRP抗体浓度≥1μg/mL和更低的抗体GMC[60，61，62]。
然而重要地，达到峰值抗PRP抗体浓度≥0.15μg/mL的婴儿的比例没有不同。
已经开发了四种不同的基于DTPa的Hib组合疫苗：一种使用Hib-CPvM197(不再可获得)，三种基于Hib-TT，与作为基础的DTPa配体的DTPa2(2-成分的Pa[百日咳类毒素-PT+丝状血球凝集素-FHA])、DTPa3(3-成分的Pa[PT，FHA+pertactin-PRN])或者DTPa5(5-成分的Pa[PT，FHA，PRN，菌毛-FIM2+FIM3])组合，有时与另外的HBV和/或IPV成分组合。近来综述了两种最广泛使用的组合DTPa3(HB)IPV-Hib(IPV+Hib)和DTPa5-IPV-Hib(PentacelTM或PediacelTM)[63]。由DTPa3和DTPa5组合诱导了可比较的抗PRP抗体水平(附图1和2)，其与单独施用的Hib疫苗相比更低。一项使用PentacelTM的公开的研究[70]显示了PentacelTM和独立的Hib之间没有差异。然而当考虑所有可获得的数据时，与单独施用的Hib相比，在用组合的PediacelTM和PentacelTM疫苗初次疫苗接种之后抗PRP反应被降低[71，72，73]：如同对其他DTPa-Hib组合所观察到的。
尽管实现了较低的抗PRP抗体浓度，基于DTPa的Hib组合疫苗已经广泛地采用，显示了在预防疾病方面是高度有效的。对基于DTPa的Hib组合的保护有效性有贡献的因子由Eskola和其他人在1999年综述了[13]。简要地，用基于DTPa的Hib组合疫苗或与Hib单独地施用的基于DTPa的疫苗免疫引起了在初次免疫之后＞95％的个体具有指示保护和免疫记忆的抗体水平(≥0.15μg/mL)。当Hib被单独施用或与基于DTPa的疫苗混合施用时，由强化之后相似的抗体水平给出证据的类似的免疫记忆反应产生，与芬兰的效力研究期间的观察结果一致，即，在初次疫苗接种后可检测的抗体反应是成功的引发的证据[35，74]。与Hib疫苗一起施用的基于DTPa的疫苗的功能活性已经就抗体亲合力、杀菌活性、大鼠模型中的体内被动保护和调理吞噬作用而言展现了[52，53]。
基于DTPa的Hib组合在预防Hib疾病方面的临床有效性已经在具有全面的监测机制的国家例如德国确切地展现。在德国，基于DTPa的Hib(PRP-T)疫苗在2、3、4月龄给与，在生命第二年期间强化。自1996年来基于DTPa的Hib组合疫苗已经排他地使用(1996：DTPa-Hib，1998；DTPa-IPV-Hib，2000；DTPa-HBV-IPV-Hib)，在初次免疫后估计的持续疫苗有效性96.7％[62，75]。
使用基于DTPw的Hib组合疫苗的研究显示了与基于DTPa的Hib组合相比更高的初次免疫后抗PRP抗体浓度，但两种方法都显示了高的强化后抗体浓度[76]。近年来，已经引入了DTPa-(HBV)-IPV-Hib组合和它们与脑膜炎球菌和肺炎球菌的缀合物疫苗的共同施用。这影响了对单独成分的免疫反应的复杂度，并提高了各种的成分之间可能的干扰的风险。
在基于DTPa的Hib组合疫苗中灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗(IPV)的增强效果
虽然已经重复地表明了组合的DTPa-Hib疫苗显示了与Hib缀合物疫苗的分开施用可比较的功能活性[13，52]，有证据表明，在某些基于DTPa的Hib组合疫苗中IPV的存在调节了由Hib缀合物成分诱导的免疫反应。
在瑞典进行的试验中，注意到的是，与同单独的DT混合时相比，在与DT-IPV混合的PRP-T的两次肌内注射之后，抗PRP抗体浓度统计学上显著地更高[77](表2)。在德国进行的临床研究期间(1996-1998)，使用各种基于DTPa3的Hib组合疫苗，个体在3、4和5月龄随机接受初次疫苗接种。在表2中呈现了接受仅在存在或缺少IPV方面不同的疫苗的个体中的抗PRP抗体浓度。(早先未公开的结果)虽然就达到0.15μg/mL筛截值的儿童的比例方面，在含IPV和不含IPV的疫苗之间没有差异，在接受含IPV的基于DTPa3的Hib组合的个体中抗PRP抗体水平更高(对于DTPa3-HBV-Hib对比DTPa3-HBV-IPV-Hib统计学上显著的)。还观察的是，与没有IPV的DTPa的组合相比，对乙型肝炎的抗体反应在具有DTPa-IPV的组合中更高(表3)[80，81]。
IPV对PRP反应的增强的效力不总是被观察到：在美国的研究中，同与OPV的共同施用相比，DTPa2-Hib(PRP-T)与IPV作为独立注射的共同施用与降低的抗PRP反应相关[78]。这表明了当IPV是DT(Pa)Hib组合的部分、以及如果IPV被单独给与则其将是缺乏的时的免疫刺激剂/佐剂效力。
与独立的DTPa3和Hib相比，在使用DTPa3-Hib的初次疫苗接种之后，抗体亲合力被发现降低[53，76]，这是使用含有IPV的更大的基于DTPa3的Hib组合未见到的现象[52，53]。来自参与三次临床试验的婴儿的亲合力结果显示了，在混合的和单独施用的DTPa3-HBV-IPV与Hib疫苗之间，或在DTPa3-HBV-IPV-Hib与基于DTPw的Hib疫苗之间，在抗PRP抗体亲合力成熟方面没有显示差异(表4)。相比之下，与DTPa3-HBV-IPV-Hib相比使用DTPa3-Hib的初次疫苗接种之后的亲合力的成熟，以及与单独施用的DTPa3和Hib疫苗相比在DTPa3-Hib的强化剂量之前和之后的更低亲合力指数之间，存在着明显的差异。在被动的婴儿大鼠保护分析中在Hib攻击之后，在针对疾病的保护能力方面没有观察到差异[53]。在新近的报告中，Johnson等人[76]也注意到与施用DTPw-Hib的相比，在施用DTPa3-Hib的初次疫苗接种之后，用Hib缀合物疫苗的强化疫苗接种之后降低的抗体亲合力。总的说来，可获得的数据表明，与含有IPV的疫苗相比，没有IPV的疫苗例如DTPa3-Hib可能具有诱导抗PRP抗体和亲合力成熟的降低的能力，而达到指示保护的抗PRP抗体水平的个体的比例没有改变。新近的澳大利亚的报道表明，与DTPa3相比，DTPa3-IPV导致了更为Th1偏向化的反应，包括提高的IgG反应，确认了IPV的潜在的佐剂活性[79]。
Hib缀合物疫苗失效
由于Hib缀合物疫苗诱导免疫记忆、功能性抗体，并显示了群体免疫效力，疫苗失效仅在初次疫苗接种后被偶尔地描述。几项研究展现了，具有低的或不可检测的抗体浓度的某些缀合物接种的婴儿仍然受到对疾病的保护[35，39]。这种大于预期的保护程度部分地归因于群体免疫。然而，某些作用还归因于引发和记忆的保护效果，一种在英国采用的根据早期和加速的日程例如2、3、4个月日程接种的非常幼小的婴儿中明显的效果[13，82]。另一方面，在疫苗前阶段具有侵入性Hib感染的儿童、或接受了Hib缀合物疫苗的儿童中抗体反应的分析明显地指出，单独的记忆不足以保护某些个体免于侵入性疾病[83，84]。在英国在MenC缀合物疫苗接种之后也是这种情况[85]。在英国新近在Hib失效方面的提高引起了对日程、疫苗类型、群体和潜在的载体特异性或旁观者干扰对由Hib缀合物疫苗赋予的免疫反应和保护机制的影响方面的新的兴趣。
对Hib缀合物疫苗免疫反应的干扰
载体特异性干扰或增强可以由T-辅助细胞特异性效果来解释，在下文中进一步描述了。旁观者干扰是更容易理解的。由淋巴结中T细胞局部地产生的细胞因子和细胞因子抑制物不是抗原特异性的，因而对一种抗原的主动免疫反应可能干扰对相同位点给与的疫苗组合中同时施用的另一种抗原的免疫反应[120]。旁观者效力还可以当含有类似成分的共同施用的疫苗在一系列免疫中应用时发生，例如，在用DTPa和伴随的采用白喉和/或破伤风类毒素(DT/TT)作为载体的缀合物的儿科日程中。在后者的情况下，特异于DT和/或TT的T细胞可能影响免疫反应，因为T细胞可能已经移动，到达注射共同施用的疫苗所在的局部淋巴结[121]。
英国的Hib缀合物疫苗失效
在英国，没有强化剂量的、使用DTPw-Hib在2、3和4月龄针对Hib的常规疫苗接种起初与赶超战役组合来达到高达5岁的儿童。战役是高度成功的，在1989和1992年间DTPw-Hib(Hib-CRM197或PRP-T)的总体疫苗有效性是87.1％(95％CI65.5％；95.2％)，[86])。在历史的病例对照研究中，在一岁以后97.3％的DTPw-Hib疫苗有效性被认为是在英国继续采用非强化政策的支持[87]。然而，使用更敏感的筛选方法，后来变得明显的是，在赶超战役期间在两年后DTPw-Hib的疫苗有效性在1998-1999年从71.7％(3.4％；91.7％)跌至-17.0％(-272％；63.2％)[86]。＞1岁的儿童中Hib疫苗失效自1999年起越来越多地报道[88]，在用DTPa3-Hib替换DTPw-Hib疫苗之后在2000和2002年间加重，DTPa3-Hib与血清群C.脑膜炎奈瑟氏球菌缀合物疫苗MenC-CRM197的引入和共同施用重叠[89]。响应于Hib疫苗失效中观察到的升高，第二次赶超战役在2003年开始，6个月和4岁间的所有儿童接受缀合物Hib强化剂量。Hib缀合物疫苗的强化剂量现在被建议在12月龄作为常规日程的一部分[90]。
存在着许多沉淀事件，其最后成为英国Hib疫苗失效方面观察到的升高。虽然试图保持缺少强化剂量以及采用的DTPa3-Hib疫苗是完全可应付的，Hib缀合物疫苗的英国的经验说明了，在某些情况下，高度有效的组合疫苗是如何成为较不有效的。
日程和强化对于针对Hib缀合物疫苗的免疫反应的影响
Hib缀合物疫苗维持最小的抗体水平的能力以及记忆的诱导支持了这一观点，强化剂量不是长期保护所必需的，随后在英国采用了没有第二年强化的免疫日程[91]。现在许多研究已经确立了在初次疫苗接种系列之后的Hib强化在产生长期的感染保护、携带方面和在强化免疫记忆方面的重要性[20，92，93，94]。缺少强化剂量与德国Hib疾病的增加相关联[94]，以及与防止Hib定殖的降低相关联[20]。在德国，基于DTPa3的Hib(PRP-T)疫苗在与英国使用的相同的早期和加速的2、3和4个月日程中给与，但自1996年起在生命的第二年期间给与强化剂量。尽管专门使用基于DTPa的Hib组合疫苗，没有报道Hib疫苗失效方面的提高[62，75]。在Hib缀合物和MenC缀合物疫苗之间可以区别出许多相似性，在英国很早就变得明显的是，在初期施用的MenC疫苗的疫苗有效性在缺少强化剂量的情况下在第一年后快速降低[85]。
在德国强化剂量的效力的评估被一事实潜在地混淆，所述事实是虽然DTPa3-Hib在1996到1998年间广泛地使用，使用的疫苗自1999年开始含有IPV[62]。在典型的情况中，IPV对Hib反应的增强效果可能在群体水平下是最小的：保护的指标(≥0.15μg/mL的比例[附图1]和婴儿大鼠Hib攻击模型中的保护[53])在DTPa3-Hib和含有IPV的DTPa-Hib组合之后是类似的。相比之下，强化剂量对于降低携带、提高抗体浓度、改善群体免疫和改善不适当地引发的儿童中的免疫反应方面的影响在群体水平上是实在的。在DTPa3-Hib的免疫原性由于某些理由受损，以及没有给与强化剂量的情况下，如下文描述的在英国，IPV的作用对于群体免疫性可能是更重要的。
DTPa3-Hib疫苗
在英国，对于Hib和MenC缀合物疫苗，偶尔的保护失效已经与群体相关联，在所述群体中血清抗-CP抗体的基线水平相对于被认为是保护性的水平可能是低的[85，95，96]。特异性抗体的这种低的或甚至不可检测的水平可能使个体在引发反应生效之前对急速侵入敏感。虽然在英国没有观察到，更低的Hib抗体浓度可能引起更高的Hib定殖率和降低的群体免疫，从而提高对免疫的、部分免疫的和免疫受损的儿童的暴露风险。
已经展现了基于DTPa3的Hib疫苗的保护有效性，在用DTPa3-Hib的初次疫苗接种之后实现的抗PRP抗体浓度，包括在英国没有MenC-CRM197共同施用的时候，与其他的基于DTPa3和DTPa5的Hib组合疫苗处在相同的范围内[63](附图1和2)。因而，在英国使用的可证明的免疫原性DTPa3-Hib疫苗为什么加重Hib缀合物疫苗失效的基础的提高趋势，需要小心地评估。在1996-1997在英国进行的临床试验中，在使用DTPa3-Hib的初次疫苗接种之后的抗PRP反应是满意的(GMC)，96.0％的儿童实现了抗PRP抗体浓度≥0.15μg/mL(表5)。关键地，实际上在英国在1999-2000期间DTPa3-Hib疫苗是与MenC-CRM197疫苗共同施用的，这种共同施用迄今为止没有在受控的临床试验中评估。
在英国进行的随后的研究强烈地暗示MenC-CRM197(MeningitecTMWyeth Lederle Vaccines，Pearl River NY)对抗PRP抗体浓度的免疫干扰(表5)，与单独施用DTPa3-Hib的研究相比，用与MenC-CRM197共同施用的DTPa3-Hib免疫的英国个体中具有显著更低的抗PRP抗体GMC，以及更低比例的个体达到0.15μg筛截值[65，96]。当来自Slack等人[96]进行的研究的样品在GlaxoSmithKline Biologicals测试时，抗PRP抗体GMC是0.54μg/ml(95％CI0.34；0.59)，相比较在1996年也在同一实验室中使用批准的测试进行的DTPa3-Hib的研究中是1.56(1.19；2.04)(早先未公开的数据)。在DTPa3-Hib与MeningitecTM(MenC-CRM197)、以及也使用CRM197作为蛋白质缀合物的实验性9价肺炎球菌疫苗(9vPCV)共同施用的研究中[65]，抗PRP抗体GMC和浓度≥0.15μg/mL的个体的比例(在英国实验室测试的)也发现是特别低的(附图1和2)。
与使用含有IPV的组合疫苗相比，在用DTPa3-Hib引发之后，抗PRP抗体浓度和亲合力成熟是稍微更低的[53]。DTPa3-HBV-Hib对比DTPa3-HBV-IPV-Hib的头对头研究展现了在使用含有IPV的疫苗的初次疫苗接种之后显著更高的抗PRP抗体浓度(表2)。在临床试验中，在德国[67]和英国[89，97]与MenC-CRM197(MeningitecTM)共同施用的DTPa3-HBV-IPV-Hib或DTPa5-IPV-Hib组合疫苗产生了与使用单独的DTPa-Hib观察到的相类似的抗PRP抗体浓度。特别是，在2-3-4日程中DTPa3-HBV-IPV-Hib+MenC-CRM197的两项德国人研究的结果(，Chiron Emeryville，CA[68]和MeningitecTM[67])清晰地与按照相同日程施用的DTPa3-Hib+MenC-CRM197的英国研究相对比(抗PRP抗体GMC2.60μg/mL[68])或分别2.78μg/mL[67]对比0.54μg/mL(表5)。这些数据表明，IPV的存在足以屏蔽CRM197对Hib反应的干扰。与在存在IPV的情况下抗PRP反应可以被增强的观察结果(表2)相符，在西班牙和德国的其他对照的研究显示了在Hib反应方面对于具有抗PRP抗体≥0.15μg/mL的个体的比例在各组之间没有差异，在所述研究中婴儿在2、4和6个月接受有或者没有MenC-CRM197的六价的DTPa3-HBV-IPV-Hib疫苗(MeningitecTM)(西班牙[98])或在2、3和4个月接受7vPCV-CRM197(德国[99，100])。在一项研究[100]中，发现更低比例的个体达到1.0μg/mL的筛截值。
在加拿大的研究中，DTPa5-IPV-Hib和7vPCV-CRM197疫苗以一个月间隔的交错方式施用，抗PRP抗体反应被显著地降低[102](附图1，附图2)。另外，已经发现的是，当在德国DTPa2-HBV-IPV-Hib与7vPCV-CRM197共同施用时，乙型肝炎反应被显著地降低[103](p＜0.052-sided t-测验)：当DTPa3-HBV-IPV-Hib与7vPCV-CRM197共同施用时没有遭遇这一点[99]。
总而言之，存在着强的、但是间接的证据表明，在组合的五价和六价疫苗中IPV的存在基本上避免了在DTPa3-Hib和含CRM197的疫苗之间观察到的干扰。当CRM197缀合物与基于DTPa的Hib(PRP-TT)疫苗共同施用时，这种佐剂效力(77)看起来基本上补偿了与CRM197缀合物相关的旁观者干扰。尽管如此，看起来明显的的是，IPV的免疫增强效力可能在某些情况中被压制，例如含有CRM197的疫苗和含有Hib的疫苗的交错施用。此外，CRM197的效力可能是剂量相关的，当MenC-CRM197和7vPNC疫苗两者共同地与Hib共同施用时具有更大的干扰(附图1)。尽管IPV的存在，当与7vPCV-CRM197共同施用时，DTPa2-HBV-IPV-Hib展现了降低的乙型肝炎反应。
载体特异性干扰或增强可以由T-辅助细胞特异性效果来解释，在下文中进一步描述了。旁观者干扰是更容易理解的。由淋巴结中T细胞局部地产生的细胞因子和细胞因子抑制物不是抗原特异性的，因而对一种抗原的主动免疫反应可能干扰对相同位点施用的疫苗组合中同时施用的另一种抗原的免疫反应(Insel，1995，Ann.NY Acad.Sci754，35)。旁观者效力还可以当含有类似成分的共同施用的疫苗在一系列免疫中应用时发生，例如，在用DTPa和伴随的采用白喉类毒素(DT)或(TT)作为载体的缀合物的儿科日程中。在后者的情况下，特异于DT和/或TT的T细胞可能影响免疫反应，因为T细胞可能已经移动，到达注射共同施用的疫苗所在的局部淋巴结(Insel，1995，Ann.NY Acad.Sci754，35)。
多个缀合物疫苗的共同施用早先产生了预料之外的效力：当PRP-T与MenC-TT共同施用时观察到更高的抗PRP和抗TT免疫反应，但是对MenC的降低的反应[97]。反之，当4vPCV-TT与DTPw-PRP-T共同施用时，对TT和Hib两者的免疫反应以与接受的TT剂量成反比的方式被抑制[104]。TT的抗原特异性增强或干扰的机制可能是T-辅助细胞活性、以及施用的载体蛋白和多糖的数量的函数[105]。当与DTPa-Hib组合共同施用时，与DTPw-Hib组合的共同施用相比，含有七种TT缀合物的十一价肺炎球菌缀合物展现了对其中TT缀合物的不良的反应，这表明与DTPwIPVHib相比在DTPa5IPVHib中的TT T细胞反应是不同的[105]。这种效果对于被包括在11vPCV中的四种DT缀合物没有发现。
因而对特定抗原的免疫反应的增强或干扰可以由T细胞特异性效应以及非特异性的“旁观者”效应介导，显示了多个缀合物疫苗的共同施用对免疫反应的结果是复杂的和难以预测的。相对于与CRM197缀合物的共同施用的旁观者干扰可能涉及T细胞调节机制，所述调节机制特异于也在DTPa(HBV)(IPV)Hib-TT组合中存在的白喉类毒素。
环境和群体因素
环境因素对免疫反应的影响是贫乏地了解的，但是是公认的现象。在回顾用ActHibTM(PRP-T)进行的146项临床试验的出版物[107]中，在初次疫苗接种之后达到抗PRP抗体浓度≥0.15μg/mL的英国个体的比例是69％(单独的PRP-T)和73％(DTPw-PRP-T)，与另一项研究中呈现的超过90％的比率相比。在DTPa2-Hib(ActHibTM)的研究中，82％的英国个体达到0.15μg/ml筛截值，这一数字处在其它地方对基于DTPa3和DTPa5的Hib组合报道的范围的下端。对疫苗接种的受损的或更低的免疫反应的可能的原因可能是降低的天然引发，其是由于作为免疫程序的群体效力的结果的降低的鼻咽定殖[42，95，108，109]。
早先报道的是，经历了Hib缀合物疫苗失效的英国儿童的30％显示了免疫球蛋白或子类的较小的缺陷，其可能与对多糖的B细胞反应性的延迟的成熟相关[95]。人乳哺育对于针对Hib缀合物疫苗的免疫反应具有积极的效果[110]。在英国对于来自母乳喂养操作的免疫性的可能的群体效应是未知的。
在疾病和用Hib缀合物疫苗疫苗接种之后的抗体动力学研究表明，血清IgG抗体反应在抗原暴露后3-4天之前是不可检测的，甚至在被引发的个体中[111，112，113]。如果抗体由于受损的亲合力成熟是不良功能的，这可能是特别重要的。因而不令人惊讶的的是，对于某些个体，他们的免疫记忆未能保护他们[114]。在使用缀合物疫苗的早产儿疫苗接种之后的几项研究观察到降低的初级抗体反应[96]和降低的存留[115]。然而，在12个月时缀合物疫苗的强化剂量之后，早产和足月婴儿达到了相同的抗体水平。
Hib菌株效力
单独的Hib菌株的侵入性与CP的产生相关，并且已经与capb基因序列的多拷贝的产生相关；capb基因是涉及Hib荚膜表达的基因[116]。在Cerquetti等人[117]的研究中，与未免疫的儿童相比，具有多拷贝的capb基因序列(＞2个重复)的菌株的显著更大的比例从具有真实的疫苗失效的英国患者中分离，表明荚膜多糖表达的水平在菌株的毒力方面起到作用。
自2002年起，Hib疫苗失效的两到三倍的增加在荷兰观察到，其不同于英国，影响所有年龄[108]。在荷兰的儿童在2、3和4个月接受DTPw-IPV+Hib(独立的)的初次疫苗接种，以及在11个月的强化。迄今为止没有显现对于这种提高的充分的解释，然而它暗示的是，Hib的提高的遗传学多样性可能起作用。临床的Hib菌株的基因分型的研究提供了证据，即，带有各种Hib菌株的成年人成为儿童的Hib感染的来源[118]。在英国没有记录遗传学多样性方面的这样的改变[119]。这些数据表明，在荷兰，传播方式改变了，在疫苗接种时期是成年人到儿童传播，对比免疫前时期的儿童到儿童的传播。
专家观点
Hib缀合物疫苗已经深刻地影响了广泛使用它们的国家中的Hib疾病的流行病学。所有当前现有的Hib缀合物疫苗的效力已经被广泛地展现，就抗PRP抗体反应的量级以及抗体亲合力而言在疫苗之间的差异没有影响它们的效力，除了在某些群体中，例如在早期年龄患有疾病的、以及依靠单剂量后实现高抗体浓度的土著居民。组合的基于DTPa的Hib(PRP-T)疫苗被广泛使用，诱导抗体浓度与那些通过具有展现的效力的独立的PRP-OMP所产生是可比较的。组合的基于DTPa的Hib疫苗诱导了抗PRP，其具有与单独施用的Hib疫苗的那些相类似的功能特征。在文献的全面回顾之后[63]，加拿大的国家顾问委员会近来断定，“相比疫苗的种类，抗PRP反应似乎与疫苗施用的年龄和日程更为相关。”[120，p11]。
共同施用缀合物疫苗可以产生增强或干扰，由于良好记载的载体特异性相互作用、或较少记载的旁观者增强或干扰，其机制仍然是很少了解的。DTPa-Hib和含CRM-197的缀合物之间的旁观者干扰似乎是剂量相关的，以及受到疫苗接种方法的影响。CRM197/白喉类毒素反应的T细胞调节是合理原因；然而确切机制仍然需要搞清楚。当基于DTPa3和DTPa5的(HBV)-IPV-Hib组合与CRM197缀合物同时地共同施用时(即，不交错地)，没有观察到干扰(表5)。MenC-CRM197和PCV-CRM197缀合物与DTPa-(HBV)-IPV-Hib组合的联合共同施用仍然需要阐明。在英国与DTPw和PRP-T共同施用的新组合的9vPCV-MenC疫苗(全部缀合到CRM197)的近期研究中，对Hib、白喉和MenC的反应被降低[106]，尽管有DTPw的已知的佐剂效力。在共同施用的缀合物疫苗之间免疫干扰的不可预见性强调了在公知健康计划中实施之前缀合物疫苗共同施用的充分评估的重要性。
虽然在Hib疾病的次优控制阶段期间强化剂量的缺乏和DTPa3-Hib的实施无可置疑地与英国的Hib缀合物疫苗失效提高相联系，存在着强迫性的证据表明，当DTPa3-Hib与MenC-CRM197共同施用时发生的免疫干扰被增加到所观察到的Hib缀合物疫苗失效的已经升高的数量中。
有趣地，当IPV存在于施用的DTPa3-Hib组合中时，含有CRM197和Hib的缀合物疫苗之间的免疫干扰看起来被调节。更大的组合的这种特征需要另外的研究，对于官方希望在单次疫苗接种就诊中共同施用几种缀合的抗原的期望可能具有非常实际的重要性。除了Hib-TT之外，当IPV存在于DTPa-HBV-Hib组合中时，对乙型肝炎的抗体反应看起来也被增强了。然而，当DTPa2-HBV-IPV-Hib与7vPCV-CRM197共同施用时，IPV佐剂效力似乎不足以防止乙型肝炎干扰。
在对多糖-蛋白质接种的人类的细胞和体液抗体反应、以及对组合疫苗的免疫学反应的复杂度的理解方面仍然存留着许多问题。进行中的Hib缀合物疫苗的许可后测试和监测因而对于可能影响所施用疫苗的有效性的改变环境的早期检测仍然是关键的。
五年展望
在接下来的五年，对当前可获得的和高效的Hib-TT缀合物和乙型肝炎疫苗不一定有重大改变，然而含有更少抗原的、以及在新的组合中Hib缀合物疫苗的提高的使用是可以预期的。DTPw-HBV-Hib组合在发展中国家的进一步的引入将有希望地和很可能地发生。决定共同施用缀合物疫苗将需要得到来自适当地进行的临床试验的证据的支持，以避免广泛的负面公众健康后果。儿科的共同施用和潜在干扰的领域将被更好地描述。将会发生儿科的Hib-MenCY-TT、ACWY-DT、ACWY-CRM197、ACWY-TT、10vPCV-蛋白D和13vPCV-CRM197缀合物的可能的许可。特定的DTPa组合与特定的缀合物疫苗的共同施用可能被建议，以避免干扰或强化对DTPa(HBV)IPV-Hib组合中的疫苗成分的免疫反应。
InfanrixTM是GlaxoSmithKline公司集团的商标。ActHibTM、PediacelTM和PentacelTM是Sanofi Aventis的商标。PrevenarTM和MeningitecTM是Wyeth Lederle Vaccines的商标是Chiron的商标。
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**显示了抗体亲合力和杀菌活性在单独施用的或混合的含IPV的基于DTPa的Hib疫苗之间没有不同的关键论文
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**说明了就体外参数而言在含IPV和不含IPV的疫苗之间的差异
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*显示了CRM197的旁观者干扰的证据的临床试验
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*说明了在德国(2-3-4月日程)预防Hib疾病方面基于DTPa的/Hib组合疫苗的进行有效性的论文
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附图1：来自使用组合的基于DTPa3和DTPa5的Hib-TT疫苗的个体临床试验的结果在3剂初次疫苗接种之后抗PRP抗体浓度≥0.15μg/mL的个体的比例
*没有可用的数据
附图2：来自使用组合的基于DTPa3和DTPa5的Hib-TT疫苗的个体临床试验的结果在3剂初次疫苗接种之后抗PRP抗体GMC(μg/mL)
[69]呈现了最低和最高的GMC值
附图1和2的数据编撰自[60，63，64，65，66，68，69，70，72，73]。
表4在三项临床试验中抗PRP IgG抗体的几何平均亲合力指数(GMAI)(改编自[53])
在3剂初次系列之后一个月和在强化剂量之前以及之后4-6周采集的血液样品N：测试的个体的数量；NS：没有统计学的差异；95％CI：95％置信区间；GMAI：几何平均亲合力指数；*OmniHIBTM；HBV-乙型肝炎疫苗DTPw-HBV/Hib2.5：含有缀合到TT的2.5μgPRP的Hib疫苗。研究1：德国20-08-1993到28-08-1995。研究2，美国24-07-1996到28-04-1998。研究3：缅甸16-01-1998到11-10-1999。使用单向ANOVA测试的双侧p-值来显示组之间的差异
实施例2
进行了研究来探查在与含有不同数量的TT的不同肺炎球菌缀合物疫苗共同施用Infanrix-Hexa时，如以下表6详述的，对Hib中的PRP的免疫反应。
·实验设计：使用11个平行组的单盲的、随机的、多中心的研究(每个组60位个体)；所有的组接受三剂量的初次疫苗接种过程。
·九个组各自接受不同制剂的候选的11Pn-PD-DiT疫苗，每种多糖的剂量在表6中示出。此外，一个组接受第一代11Pn-PD疫苗(作为比较)，一个组接受(作为对照)。
·所有的组也接受DTPa-HBV-IPV/Hib疫苗的伴随注射。
·盲的：单盲的，然而九个11Pn-PD-DiT组是双盲的。
·比较物：11Pn-PD+DTPa-HBV-IPV/Hib
·对照：Prevenar+DTPa-HBV-IPV/Hib
·疫苗接种日程：根据2-3-4月日程将三剂初次疫苗接种过程给与婴儿。三剂疫苗接种过程的第一剂在8到16周龄之间给与(56-118天)，在28-42天的初次疫苗接种剂量之间可容许的间隔。
·在每个疫苗剂量之后，局部的一般的恳求的症状的八天跟踪，以及未恳求的有害事件的31天跟踪。在整个研究期间记录严重的有害事件。
·两个血液样品：
-在第一次剂量之后立即地(采集4mL)。
-第三次剂量之后1个月(采集4mL)。
·研究的持续时间：大约6个月，3个月的登记周期。对每个个体，研究的持续时间是大约3个月。
表6：在11Pn-PD-DiT制剂中每种血清型的多糖和蛋白质载体的剂量和批次号
注：TTah：具有AH间隔区的破伤风类毒素，DTah：具有AH间隔区的白喉类毒素，PD：流感嗜血杆菌蛋白质D；AH：己二酸二酰胼
表7显示了剂量III疫苗接种后一个月针对Hib多糖PRP抗原的抗体的血清保护率和GMC。在第三剂疫苗之后一个月，所有组中的所有个体，除了(Wyeth)组中的1个个体以外，都达到了血清保护抗体浓度≥0.15μg/mL，接受11Pn-PD-DiT制剂的至少83.9％的个体达到血清保护抗体浓度≥1μg/mL。对11Pn-PD-DiT制剂观察到的抗PRPGMC比对11Pn-PD(所有11种多糖缀合到蛋白质D)和组观察到的更高。
表7抗PRP抗体的血清保护率和GMC(全部接种的群组)
GMC＝对所有个体计算几何平均抗体浓度
N＝具有可用的结果的个体的数量
n/％＝浓度在特定范围内的个体的数量/百分比
95％CI＝95％置信区间；LL＝下限，UL＝上限
MIN/MAX＝最小值/最大值
PIII(M3)＝第三次疫苗剂量之后一个月
早先，其中7种糖类缀合到TT的、在EP983087中描述的11价疫苗，当与DTPa同时给与时，表现是使人失望的(GAVI ImmunisationFocus，March2002，第4页)。
本发明显示了，在直到3-4种缀合物处在TT上的肺炎球菌缀合物疫苗中为止，此时GMC开始降低，提高的抗PRP GMC和提高的TT之间存在相关性。因而清楚的是，共同施用的小数量的TT的掺入导致改善的Hib PRP-TT免疫反应。
实施例3
随机的、II期双盲的对照的研究，来评估在出生后不久施用的GlaxoSmithKline(GSK)Biologicals′非细胞百日咳疫苗(Pa)的出生剂量、随后用GSK Biologicals′ Infanrix hexaTM的三剂初次疫苗接种，在加速针对百日咳的免疫反应发生方面的可行性。初次疫苗接种之后是生命第二年的强化剂量的Infanrix hexaTM。
研究设计：在德国用两个平行组进行的双盲的，随机的(1∶1)，自足的单中心研究：
-出生时Pa的组在出生时接受一剂三成分的非细胞百日咳(Pa)疫苗(包含25μg百日咳类毒素(PT)、25μg丝状血细胞凝集素(FHA)和8μg pertactin(PRN))
-出生时Hep B的组接受一剂乙型肝炎疫苗。在2、4和6月龄，两个组都接受GSK Biologicals′ Infanrix hexaTM(DTPa-HBV-IPV/Hib)疫苗。
在研究中在以下时点抽取总共四份血液样品：在Pa或HBV的出生剂量之前(剂量1之前)，在第一剂量之后一个月，在第二剂量之后一个月，在第三剂量的DTPa-HBV-IPV/Hib疫苗之后一个月(分别为，hexa剂量1之后、hexa剂量2之后和hexa剂量3之后)。注：在这项研究中，总共施用四份研究疫苗剂量(出生剂量+3剂Infanrix hexaTM)。为了疫苗剂量的清楚性，出生将被称为剂量1，用Infanrix hexaTM疫苗接种之后的疫苗接种后时点被称为hexa剂量1之后、hexa剂量2之后和hexa剂量3之后。
这项探索性研究的目标是评估在出生立刻施用的一剂Pa疫苗的免疫原性和安全性，其包括探索与常规的在2月龄开始的Infanrix hexaTM三剂日程相比，Pa的出生剂量和后续三剂Infanrix hexaTM的免疫原性，关于在可获得血清学结果的每个时点的所有抗原。
免疫原性结果
针对Hib多糖PRP的总抗体通过ELISA来测量。测试的筛截值是0.15μg/mL。
抗PRP抗体反应
抗PRP抗体的血清保护率和GMC在表8中呈现。hexa剂量3之后一个月，
血清保护水平(≥0.15μg/mL)的抗PRP抗体在出生时Pa的组中88.7％的个体、和出生时HepB的组中98.2％的个体中观察到。
每个组中至少49.1％的个体具有抗PRP抗体浓度≥1μg/mL。
表8抗PRP抗体的血清保护率和GMC(免疫原性的ATP群组)
出生时Pa的组：在出生时接受无细胞Pa疫苗，在2、4、6月龄接受Infanrix hexa TM
出生时HepB的组：在出生时接受乙型肝炎疫苗，在2、4、6月龄接受Infanrix hexaTM
GMC＝对所有个体计算的几何平均抗体浓度。为了计算GMC的目的，该分析的低于筛截值的抗体浓度按照筛截值的一半的任意值。
N＝具有可用的结果的个体的数量
n/％＝浓度在特定范围内的个体的数量/百分比
95％CI＝95％置信区间；LL＝下限，UL＝上限
PIV(M7)＝在第三剂Infanrix hexaTM之后一个月采集的血液样品
在第一和第二剂Infanrix hexaTM之后一个月，具有标准化的渐近的95％CI的出生时Pa的组和出生时HepB的组之间抗PRP血清保护率(≥0.15μg/mL和≥1μg/mL)方面的差异，对于≥0.15μg/mL的筛截值呈现在表9中，对于≥1μg/mL筛截值呈现在表10中。
就抗PRP抗体的血清保护率而言(≥0.15μg/mL)，在hexa剂量1或2之后的时点，出生时Pa的组和出生时HepB的组之间没有观察到显著差异(表9)。在hexa剂量2之后，与出生时HBV的组相比，出生时Pa的组中抗PRP抗体≥1μg/mL的个体的百分比在出生时Pa的组中显著更低(表10)。
表9在第一和第二剂Infanrix hexa之后一个月，具有标准化的渐近的95％CI的出生时Pa的组和出生时HepB的组之间抗PRP血清保护率(≥0.15μg/mL)方面的差异(免疫原性的ATP群组)
出生时Pa的组：在出生时接受非细胞Pa疫苗，在2、4、6月龄接受Ifanrix hexaTM
出生时HepB的组：在出生时接受乙型肝炎疫苗，在2、4、6月龄接受Infanrix hexaTM
PII(M3)＝在第一剂Infanrix hexaTM之后一个月采集的血液样品
PIII(M5)＝在第二剂Infanrix hexaTM之后一个月采集的血液样品
N＝具有可用的结果的个体的数量
％＝抗PRP抗体浓度≥0.15μg/mL的个体的百分比
95％CI＝95％标准化的渐近置信区间；LL＝下限，UL＝上限
p-值＝基于双侧Fisher′s Exact Test
表10在第一和第二剂Infanrix hexa之后一个月，具有标准化的渐近的95％CI的出生时Pa的组和出生时HepB的组之间抗PRP血清保护率(≥1μg/mL)方面的差异(免疫原性的ATP群组)
出生时Pa的组：在出生时接受非细胞Pa疫苗，在2、4、6月龄接受Infanrix hexaTM
出生时HepB的组：在出生时接受乙型肝炎疫苗，在2、4、6月龄接受Infanrix hexaTM
PII(M3)＝在第一剂Infanrix hexaTM之后一个月采集的血液样品
PIII(M5)＝在第二剂Infanrix hexaTM之后一个月采集的血液样品
N＝具有可用的结果的个体的数量
％＝抗PRP抗体浓度≥1μg/mL的个体的百分比
95％CI＝95％标准化的渐近置信区间；LL＝下限，UL＝上限
p-值＝基于双侧的Fisher′s Exact Test
第一和第二剂Infanrix hexaTM之后具有95％CI的出生时Pa的组和出生时HepB的组的GMC比例在表11中示出。对于在hexa剂量1之后抗PRP抗体的GMC，出生时Pa的组和出生时HepB的组之间没有观察到显著差异。
在hexa剂量2之后，与出生时HBV的组相比，针对PRP的抗体的GMC在出生时Pa的组中显著地更低。
表11第一和第二剂Infanrix hexaTM之后具有95％CI的出生时Pa的组和出生时HepB的组的抗PRP GMC比例(免疫原性的ATP群组)
出生时Pa的组：在出生时接受非细胞Pa疫苗，在2、4、6月龄接受Infanrix hexaTM
出生时HepB的组：在出生时接受乙型肝炎疫苗，在2、4、6月龄接受InfanrixhexaTM
PII(M3)＝在第一剂Infanrix hexaTM之后一个月采集的血液样品
PIII(M5)＝在第二剂Infanrix hexaTM之后一个月采集的血液样品
N＝具有可用的结果的个体的数量
GMC＝对所有个体计算几何平均抗体浓度
95％CI＝95％GMC比例的置信区间(ANOVA模型-合并方差)；LL＝下限，UL＝上限
对初次疫苗的Hib成分(与破伤风类毒素缀合的PRP)的免疫反应在出生时Pa疫苗的接受者中显著地降低。并且，在出生时Pa的组中抗破伤风抗体GMC显著地更低，而在两个组中血清保护率是相同的(100％)。这种效应之下的机制是未知的，而这可能是由于在与Pa组合的初次免疫期间出生时的Pa引起的对PRP-TT的旁观者干扰。Pa疫苗的出生剂量和DTPa-HBV-IPV/Hib疫苗在同时施用的事实可能起到一部分作用。
第三剂Infanrix hexaTM之后一个月抗PRP抗体浓度的RCC在附图3中呈现。
来自强化研究的免疫原性结果
表12抗PRP抗体的血清保护率和GMC(免疫原性的ATP群组)
1.Pa＝出生时Pa和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
2.HepB＝出生时HBV和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
3.血清保护＝抗PRP抗体浓度≥0.15UG/ML
4.GMC＝对所有个体计算几何平均抗体浓度
5.N＝具有可用的结果的个体的数量
6.n/％＝浓度在特定范围内的个体的数量/百分比
7.95％CI＝95％置信区间；LL＝下限，UL＝上限
8.PIV(MO)＝强化之前
9.PV(M1)＝强化之后一个月
表13在强化之前各组之间在抗PRP血清保护率方面的差异(免疫原性的ATP群组)
1.Pa＝出生时Pa和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
2.HepB＝出生时HBV和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
3.N＝具有可用的结果的个体的数量
4.％＝抗PRP浓度≥0.15UG/ML的个体的百分比
5.95％CI＝95％标准化的渐近置信区间；LL＝下限，UL＝上限
6.P-值＝2-侧的Fisher Exact Test
表14在强化之前抗PRP抗体浓度≥1UG/ML的组之间的差异(免疫原性的ATP群组)
1.Pa＝出生时Pa和在2-4-6个月的DTPa-HBV-PV/Hib和强化
2.HepB＝出生时HBV和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
3.N＝具有可用的结果的个体的数量
4.％＝抗PRP浓度≥1UG/ML的个体的百分比
5.95％CI＝95％标准化的渐近置信区间；LL＝下限，UL＝上限
6.P-值＝2-侧的Fisher Exact Test
表15在强化后一个月各组之间在抗PRP血清保护率方面的差异(免疫原性的ATP群组)
1.Pa＝出生时Pa和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
2.HepB＝出生时HBV和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
3.N＝具有可用的结果的个体的数量
4.％＝抗PRP浓度≥0.15UG/ML的个体的百分比
595％CI＝95％标准化的渐近置信区间；LL＝下限，UL＝上限
6.P-值＝2-侧的Fisher Exact Test
表16在强化后一个月抗PRP抗体浓度≥1.0UG/ML的组之间的差异(免疫原性的ATP群组)
1.Pa＝出生时Pa和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
2.HepB＝出生时HBV和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
3N＝具有可用的结果的个体的数量
4.％＝抗PRP浓度≥1UG/ML的个体的百分比
5.95％CI＝95％标准化的渐近置信区间；LL＝下限，UL＝上限
6.P-值＝2-侧的Fisher Exact Test
表17在强化后一个月抗PRP GMC的比例(免疫原性的ATP群组)
1.Pa＝出生时Pa和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
2.HepB＝出生时HBV和在2-4-6个月的DTPa-HBV-IPV/Hib和强化
3.GMC＝几何平均抗体浓度
4.N＝疫苗接种后结果可获得的个体的数量
5.95％CI＝95％GMC比例的置信区间(ANOVA模型-合并方差)；LL＝1下限，UL＝上限

Claims (28)

1.一种降低由出生时施用Pa引起的、在初次免疫日程中施用的包含敏感抗原的疫苗的旁观者干扰的方法，所述方法包括一个或多个以下步骤：
a）降低所述出生时Pa剂量或Pa成分的数量；
b）在包含所述敏感抗原的疫苗中包括IPV；
c）在包含所述敏感抗原的疫苗中包括Pw；
d）降低包含所述敏感抗原的疫苗中的DT剂量；
e）提高所述敏感抗原的剂量；
f）如果存在CRM，降低CRM的数量和/或CRM上的糖类缀合物的数量。
2.权利要求1中的方法，其中所述敏感抗原是缀合到载体蛋白的Hib、HB和/或肺炎球菌荚膜糖类PS6B。
3.权利要求1的方法，其中所述敏感抗原是Hib并包含缀合到TT的PRP，其中降低旁观者干扰的方法包括在所述疫苗中包括进一步的TT的另外的步骤，任选地其中所述进一步的TT在独立的容器中提供。
4.权利要求3的方法，其中所述进一步的TT缀合到不超过三种其他的糖类。
5.Hib或HB在制备药物中的用途，所述药物为疫苗，所述疫苗用于初次免疫日程中向患者施用，根据所述初次免疫日程，Pa在出生时施用，其中所述疫苗不包含DTPa。
6.权利要求5中的Hib的用途，其中所述Hib与MenC和/或MenY荚膜糖类缀合物组合地施用。
7.权利要求1-6中任一项的方法或用途，其中，
在出生时施用的所述Pa包含PT；
在出生时施用的所述Pa包含FHA；和/或
在出生时施用的所述Pa包含PRN。
8.权利要求1-7中任一项的方法或用途，其中，
PT（或PT衍生物）在出生时施用的所述Pa中存在，并且是不超过10 μg、1-9、1.5-8、2-6、2.5-5μg每0.5 mL药剂的剂量；
FHA在出生时施用的所述Pa中存在，并且是不超过10 μg、1-9、1.5-8、2-6、2.5-5μg每0.5 mL药剂的剂量；和/或
PRN在出生时施用的所述Pa中存在，并且是不超过6 μg、0.5-6、0.8-5、1-4、2-3 μg每0.5 mL药剂的剂量。
9.权利要求1-8中任一项的方法或用途，其中，
PT在出生时施用的所述Pa中以大约2.5μg每0.5mL药剂的剂量存在，FHA以大约2.5 μg每0.5mL药剂的剂量存在，以及PRN以大约0.8μg每0.5mL药剂的剂量存在；或
PT在出生时施用的所述Pa中以大约5μg每0.5mL药剂的剂量存在，FHA以大约5 μg每0.5mL药剂的剂量存在，以及PRN以大约2.5μg每0.5mL药剂的剂量存在。
10.权利要求1-9中任一项的方法或用途，其中在出生时施用的所述Pa中的PT是重组的。
11.权利要求1-8中任一项的方法或用途，其中，
在出生时施用的所述Pa不包含PT；
在出生时施用的所述Pa不包含FHA；和/或
在出生时施用的所述Pa不包含PRN。
12.Pa-HB在制备药物中的用途，所述药物为疫苗，其中所述疫苗用于在出生时施用来降低对由出生时施用Pa引起的、在初次免疫日程中施用的HB的旁观者干扰。
13.一种降低疫苗的初次免疫日程中CRM对敏感抗原的旁观者干扰的方法，所述方法包括一个或多个以下步骤：
a) 降低所述疫苗中CRM的量和/或CRM上的缀合物的数量；
b) 在包含所述敏感抗原的疫苗中包括IPV；
c) 在包含所述敏感抗原的疫苗中包括Pw；
d) 降低包含所述敏感抗原的疫苗中的DT剂量；
e) 提高所述敏感抗原的剂量；
f) 如果Pa存在于包含敏感抗原的疫苗中，降低所述Pa剂量或Pa成分的数量；
g) 从包含所述敏感抗原的疫苗中除去CRM，或从试剂盒中完全除去CRM，或从包含所述敏感抗原的疫苗中除去CRM、DT和DT衍生物。
14.权利要求13的方法，其中所述敏感抗原是未缀合到CRM、DT或任何其他DT衍生物的Hib，或HB。
15.权利要求13或14的方法，如果Hib糖类缀合物存在并缀合到TT，包含在所述疫苗中包括另外的TT的另外的步骤。
16.权利要求15的方法，其中另外的TT在与所述Hib糖类缀合物独立的容器中提供，用于共同施用。
17.权利要求15或16的方法，其中另外TT缀合到不超过三种其他的糖类。
18.权利要求13-17中任一项的方法，其中如果存在Pa，PT（或PT衍生物）在Pa中存在，并且是不超过10 μg、1-9、1.5-8、2-6、2.5-5μg每0.5 mL药剂的剂量。
19.权利要求13-18中任一项的方法，其中如果存在Pa，FHA在Pa中存在，并且是不超过10 μg、1-9、1.5-8、2-6、2.5-5μg每0.5 mL药剂的剂量。
20.权利要求13-19中任一项的方法，其中如果存在Pa，PRN在Pa中存在，并且是不超过6 μg、0.5-6、0.8-5、1-4、2-3μg每0.5 mL药剂的剂量。
21.权利要求13-20中任一项的方法，其中如果存在Pa，PT以大约2.5μg每0.5mL药剂的剂量存在，FHA以大约2.5 μg每0.5mL药剂的剂量存在，PRN以大约0.8μg每0.5mL药剂的剂量存在。
22.权利要求13-20中任一项的方法，其中如果存在Pa，PT以大约5μg每0.5mL药剂的剂量存在，FHA以大约5 μg每0.5mL药剂的剂量存在，PRN以大约2.5μg每0.5mL药剂的剂量存在。
23.权利要求13-22中任一项的方法，其中PT是重组的。
24.权利要求23的方法，其中所述PT的剂量被降低。
25.权利要求13-24中任一项的方法，其中另外的TT由共同施用的Synflorix提供。
26.权利要求13-25中任一项的方法，其中另外TT由共同施用的MenC-TT和Infanrix-hexa提供。
27.权利要求13-26中任一项的方法，其中IPV由Infanrix-hexa提供。
28.权利要求13-27中任一项的方法，其中Hib糖类缀合物与DTP-IPV-HB疫苗单独地施用。
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