CN103933334B - 一种治疗肺纤维化的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种治疗肺纤维化的药物组合物,它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂:红景天30‑40份,三七15‑20份,丹参25‑35份,麦冬35‑35份。本发明还提供了该类药物组合物的制备方法和用途。本发明药物组合物能有效治疗肺纤维化,改善其相关指标,降低肺组织中TGF‑β和TGF‑β1含量,从而达到缓解其症状以提高其生存质量的治疗效果,且避免了西医化学药物的严重毒副作用,为临床用药提供了一种新的选择。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗肺纤维化的药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术
肺纤维化(Pulmonary fibrosis/PF)疾病是多种原因引起肺部炎症和肺泡持续性损伤及细胞外基质的反复破坏、修复、重建和过度沉积从而导致正常的肺组织结构改变和功能丧失的一类疾病谱,是多种原因引起慢性肺疾病的共同结局,是呼吸衰竭的主要病理基础,其病因和发病机制复杂,其确切的发病机制虽然目前尚未彻底阐明,但多种细胞因子及其网络的调控是其发生发展病理机制的极重要因素。
肺纤维化属于国际关注度极高的一类难治性重大病种,国内外研究认为:纤维化是慢性病久治不愈的根本原因,也是其致残、致死的主因,有近50%的死亡与纤维化有关,而各种慢性肺病久治不愈的根本原因即在于其有纤维化病变。肺纤维化(PF)是器官纤维化中最具代表性、最典型最常发者,其病因复杂,除非典型肺炎可致PF外,很多肺系疾病均可导致PF,至少有150种以上病因与之相关。治疗上,目前尚仅限于非特异性抗炎、免疫抑制剂及糖皮质激素等方法,其共同特点是缺少特异性治疗,且大量使用抗生素和激素,这本身就是导致纤维化和加重纤维化的重要原因。随着其发病率、死亡率的不断上升,PF研究已成为世界关注热点,故寻求中医药等其他疗法已成当务之急。
过去认为器官的纤维化一旦形成,就不能逆转。然而,上世纪九十年代以来,大量实验研究结果表明,包括肺纤维化在内的器官纤维化是可以逆转的。各种器官纤维化之所以都可以经过正确的治疗和调理发生过程相似的逆转,是因为在细胞水平和分子水平上各种纤维化形成的过程就非常相似,具有殊途同归的特点。这些相似的发生过程提示,一种器官纤维化发生机制的研究结果,也适用于其他各种器官纤维化;对一种器官纤维化的有效治疗方法,对阻止、减轻其他各种组织器官纤维化也是有益的(Border WA.Evidence thatTGF-βshould be a therapeutic target in diabetic nephropathy.Kidney Int,1998,54:1390-1391.)。有鉴于此,国内外许多学者集中力量从一种器官纤维化的逆转开始,逐渐扩展到多种器官纤维化逆转的研究,获得了器官纤维化可以逆转的大量证据,其中包括肺纤维化。
虽然肺纤维化具有治疗可逆性,但目前尚缺乏满意的西医药防治手段,这可能与肺纤维化发病的多因素、病变的多靶点、病理进程的多样性等相关。 作为一种典型的复杂性疾病,以单靶点为主的西医化学药物经常显得无能为力,中医药等传统医学在器官纤维化的治疗方面拥有很大的潜力和优势,基于疗效确切的中医药开发抗器官纤维化的药物,特别是开发抗肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化的药物,前景日益广阔。
中医认为肺纤维化属于典型的“本虚标实”病证,其病机为“病已久→本已虚”、“虚、阻相夹”,可归属中医络病范畴(李戎.论艾灸肺俞膏肓俞治疗肺纤维化的中医理论基础与施治依据.辽宁中医杂志,2004,31(4):291-293.)。杨珂等报道了一种扶正化瘀方,主要成分为绞股蓝、丹参、冬虫夏草,用于抗大鼠肺纤维化,效果明显;常继亭报道了一种抗纤汤,主要成分为太子参、黄芪、沙参、麦冬、丹参、当归、蛤蚧等10味中药组成,临床上用于治疗特发性肺纤维化,疗效显著。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗肺纤维化的药物组合物及其制备方法和用途。
本发明提供了一种治疗肺纤维化的药物组合物,它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂:
红景天30-40份,三七15-20份,丹参25-35份,麦冬35-35份。
进一步地,它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂:
红景天36份,三七18份,丹参30份,麦冬30份。
其中,所述药物组合物是由所述重量配比的原料药的水或有机溶剂提取物为活性成分,加上药学上常用的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
进一步地,所述制剂为经胃肠道吸收制剂。
所述制剂包括口服给药途径所用制剂,如胶囊剂、颗粒剂、散剂、片剂、口服液、丸剂等剂型。
本发明还提供了上述药物组合物的制备方法,它包括如下步骤:
(1)按所述重量配比称取原料药;
(2)取红景天、丹参和麦冬,加水提取,合并水提液,再加上三七粉和药学上常用的辅料或者辅助性成分制备成制剂。
本发明还提供了上述药物组合物在制备治疗肺纤维化的药物中的用途。
进一步地,所述药物是降低肺组织中TGF-β含量的药物。
进一步地,所述药物是降低肺组织中TGF-β1含量的药物。
进一步地,所述药物是治疗血瘀络滞、正气已虚证型的肺纤维化的药物。
目前已公认“整体观念”、“辨证施治”、“复方使用”、“复方配伍用药如用兵”是中医最科学最有效的几大优势,其中“复方配伍用药如用兵”是非常科学的中医药原创理论。中医组方中各药如行兵布阵那样环环相扣的严密 配伍,是其优于西医化学药配方的有效手段。中医方剂理论认为,每一方剂,不仅需要根据病因病机选择合适的药物妥善配伍,同时也应符合组方的基本结构,即“君、臣、佐、使”的组方配伍理论,所谓“君、臣、佐、使”的组方配伍,就是其建立在对疾病病机的全方位判断基础上的科学配比。中医用方通过多环节、多靶点整合调节的生物学机制,对肺纤维化这样具有发病多因素、病变多靶点、病理进程多样性(“三多”)等复杂特点、治疗困难的疾病或其症状进行调控,可以取得比西医化学药更好、更持久的治疗效果,且避免了西医化学药的毒副作用,而这种疗效是建立在上述中医传统原创理论的正确指导之上的,本发明组方正遵循了这一原则。
本发明药物组合物中,以具有多种药效作用,长于活血化瘀、抗氧化、消炎且提高免疫功能的红景天为君药。而三七富含人参皂苷成分,所以如人参同样能补养正气,但三七最大特长也是活血化瘀,故最适充任臣药,以辅助君药增强疗效。中医素有“一味丹参代四物”的医谚,是说丹参一味药就可以代替补血活血的著名古方“四物汤”,可见丹参可从“补血”的角度以补充和加强君药、臣药“补气”,共同形成“扶正”的气场;同时丹参的“活血”药效,又可加强君药、臣药的“活血化瘀通络”作用,因而遣为佐药十分合宜。麦冬乃养阴要品,又能清热,在君药、臣药补气,佐药养血的基础上,再益以麦冬滋阴清热,即形成了气、血、阴均补的完整“扶正”态势,因此,以之为使药,既可养阴清热助红景天、三七、丹参发挥扶正药效并防其燥弊,又可引导诸药归经,协调全方,堪为允当。
以上君臣佐使各组药味职司分明,相辅相成,充分发挥了中医学所独有的复方配伍用药如排军布阵般的思辨性科学研究方法论精髓,各药配伍产生了协同增效作用,能够更好地治疗肺纤维化,改善其相关指标,降低肺组织中TGF-β和TGF-β1含量,从而达到缓解其症状以提高其生存质量的治疗效果,且避免了西医化学药物的严重毒副作用,为临床用药提供了一种新的选择。
具体实施方式
实施例1本发明药物组合物的制备
取红景天36克,三七粉18克,丹参30克,麦冬30克。各药味按量称取,三七研为极细末备用,其余三药掺以足量的净水,武火煎沸后改文火再煎煮10分钟至15分钟,煎煮3次,收集水煎液后,加入三七粉,即得汤剂。
实施例2本发明药物组合物的制备
取红景天40克,三七粉15克,丹参25克,麦冬35克。先以70%v/v 乙醇提取2次后,合并醇提液,药渣再以水煎煮2次,合并水煎液。分别将醇提液、水煎液浓缩后,混合,再加入适当糊精、可溶性淀粉,制粒,即得颗粒剂。
实施例3本发明药物组合物的制备
取红景天30克,三七粉20克,丹参35克,麦冬35克。先以70%v/v乙醇提取2次后,合并醇提液,药渣再以水煎煮2次,合并水煎液。分别将醇提液、水煎液浓缩后,混合,再加入适量糊精、可溶性淀粉,制粒,压片,即得片剂。
实施例4本发明药物组合物的制备
取红景天36克,三七粉18克,丹参30克,麦冬30克。各药味按量称取,掺以足量的净水,武火煎沸后改文火再煎煮10分钟至15分钟,收集水煎液,再加水煎煮2次,合并滤液,浓缩,加入适量微晶纤维素,混匀后,装胶囊,即得胶囊剂。
实施例5本发明药物组合物的制备
取实施例1制备的汤剂,静置,取上清液,浓缩后,干燥,粉碎,备用;取适量聚乙二醇4000,熔融后,将上述药粉加入熔融基质中,75-85℃下保温;采用各型滴丸机,滴口内/外径及滴速适度,将其滴入二甲基硅油中,收集滴丸,即得滴丸剂。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
试验例1本发明药物对大鼠实验性肺纤维化的治疗作用
1.实验动物与材料
1.1实验动物
3月龄健康SD大鼠42只,体重190±20g,雌雄各半。动物在实验前适应性驯养1周,动物房温度和湿度分别维持在20℃和70%左右,动物饲料也由该中心提供。
1.2主要药品与试剂
本发明组方药物:实施例1制备的汤剂,临用前配成1.5g生药/ml的药液;
博莱霉素A5:8mg/支,天津太河制药有限公司,批号950902,用时以无菌生理盐水稀释成4mg/ml的溶液。
泼尼松:5mg×100片,南通制药厂生产,批号951101,用时研成粉末,以蒸馏水溶解配成50%的混悬液。
乙醚:天津市博迪化工有限公司,标准号:12951-2002
TGF-β单抗体、免疫组化、原位杂交试剂盒:博士德生物工程有限公司。1.3主要试验仪器
BX50光学显微镜:日本OLYMPUS公司
Leica DM4000B图像采集系统:德国LEICA公司
2.实验方法
2.1动物分组
将42只SD大鼠按照随机排列表分为空白对照组(10只)、模型组(11只)、本发明组方药物治疗组(10只)、泼尼松组(11只)4个组。
2.2动物处理
2.2.1模型建立
采用国际上通用的博莱霉素A5(BLMA5)制作的大鼠肺纤维化模型,将模型组、本发明组方药物治疗组(以下简称“本方组”)、泼尼松(激素)对照组大鼠用乙醚麻醉后仰卧固定于大鼠实验台上,消毒后切开颈部皮肤,逐层分离,充分暴露气管,其32只大鼠用1ml注射器抽取定量的博莱霉素A5(BLMA5)稀释液(5mg/kg),于气管软骨环之间穿刺,一次性缓慢注入气管内,立即将动物直立旋转,尽量使药液在肺内分布均匀,消毒,缝合。其余10只空白对照组的大鼠手术过程相同,而气管内滴注生理盐水(0.2ml/只),缝合皮肤,动物清醒后随意进食。在手术造模过程中有3只大鼠死于麻醉意外,其中空白对照组1只,模型组1只,泼尼松组1只。
2.2.2治疗方法
①本方组:造模后第7d开始每只每天以本发明药物中剂量组按人剂量的10倍,即5g生药/kg给大鼠灌胃,每日1次,连续治疗4周。
②泼尼松组:造模后第7天开始每只每天胃内灌入泼尼松(5mg/kg),连续治疗4周。
③模型组和空白对照组:模型组、空白对照组大鼠不给予任何药物治疗,仅每天在同一时间内以相同的方式进行抓取、固定,并按等容量生理盐水灌胃作为对照。
3.检测指标与方法
3.1一般情况观察
于造模后进行一般情况观察,包括自主活动、动作、对外界刺激的反应和被毛的色泽,体重等。
3.2标本的采集与处理
3.2.1动物处死
称取大鼠体重后,采用颈椎脱臼法处死。
3.2.2标本的选取和固定
处死大鼠后,开胸取肺,肉眼观察组织大小、形状、色泽、表面状态、病灶特征。根据检测指标不同,对左右肺分别取标本和固定。左肺的下部2/5(用于光镜),右下肺的2/3(免疫组化和原位杂交),分别放入10%的甲醛溶液固定,常温下保存。
3.3肺组织病理学改变
对肺组织进行HE染色,采用光镜观察肺泡炎及肺纤维化程度。HE染色主要步骤如下:(1)将取出的肺组织石蜡包埋、切片;(2)梯度酒精脱蜡至水;(3)苏木素染色15min;(4)蒸馏水冲洗10min;(5)70%盐酸酒精分化5s;(6)蒸馏水冲洗5min;(7)伊红复染1min;(8)梯度酒精脱水;(9)二甲苯透明;(10)中性树胶封片;(11)光镜下观察。
根据Szapiel等的方法确定肺泡炎和肺纤维化的程度。利用HE染色的病理切片将肺泡炎分为四级:无肺泡炎(-);轻度肺泡炎(+):肺泡隔因细胞浸润增宽,病变范围局限在全肺的20%以下;中度肺泡炎(++):病变范围占全肺的20%~50%;重度肺泡炎(+++):呈弥漫性分布,病变范围大于50%。将肺间质纤维化分为四级:无纤维化(-);轻度纤维化(+):受累范围小于20%;中度纤维化(++):受累范围占全肺的20%~50%,肺泡结构紊乱;重度肺纤维化(+++):受累范围大于50%,肺泡融合,肺实质结构紊乱。
3.4肺组织中TGF-β蛋白表达检测
原理:利用抗原和抗体反应后,加入酶的相应底物,在酶的催化作用下,发生水解氧化,生成有色产物的显色反应,以揭示组织切片存在的微量抗原,供显微镜结合图像分析进行观察。
采用链霉卵白素-生物素-酶复合物(SABC)法。主要步骤如下:(1)常规脱蜡、水化;(2)加3%过氧化氢去除内源性过氧化物酶;(3)蒸馏水洗涤,微波修复抗原;(4)滴加正常山羊血清封闭液,每张切片滴加20μl,室温 20min,甩去多余液体,不洗;(5)加滴加适当比例稀释的一抗,37℃孵育1~2小时或4℃过夜;(6)加入生物素化山羊抗小鼠IgG(二抗),PBS洗3次;(7)滴加试剂SABC,20-37℃20分钟,PBS洗4次;(8)DAB显色,镜下控制显色时间5~30分钟;(9)苏木素洗涤、复染、脱水、透明、封片。阴性对照除用PBS代替一抗外,其它步骤相同。
3.5肺组织中TGF-βmRNA表达检测
原理:原位杂交是一种核酸杂交技术,以标记已知序列的DNA或RNA为探针与组织切片细胞中的DNA和RNA在原位杂交,检测组织和细胞内特定基因的有无及表达情况,从而对组织细胞内特定的基因进行定性、定位和相对定量分析。
主要步骤如下:(1)常规脱蜡至水;(2)加3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶;(3)暴露mRNA核酸片段,在切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶消化10min;(4)加预杂交液37℃3h;(5)加杂交液40℃过夜;(6)次日,加封闭液37℃30min;(7)加入生物素化地高辛37℃1h;(8)滴加试剂SABC,20-37℃20分钟,PBS洗涤;(9)滴加生物素化过氧化物酶37℃20min;(10)DAB显色,镜下控制显色时间20-30分钟;(11)苏木素复染、脱水、透明、封片。阴性对照除不加含探针的杂交液外,其它步骤相同。
TGF-β蛋白表达和mRNA表达结果判定采用leica Qwin V3图像分析软件,各片在高倍视野(400×)下随机取5个视野,测定各自阳性细胞中阳性颗粒的灰度值总和,然后计算各均值,作为该片的平均灰度值。灰度值与染色强度呈反比,即染色越浅,灰度值越大;染色越深,灰度值越小。平均灰度在图像分析中用来表示图像的透光率,分为256级,最黑为0级,最亮为256级。平均灰度值越小,说明其免疫组化染色越深,阳性表达越强,即细胞内被测物质的量越高。
3.6统计学处理
所有数据均采用美国社会科学统计软件SPSS11.0for Windows进行单因素方差分析、Q检验。等级资料采用非参数秩和检验。
4.结果
4.1一般情况(见表1、2)
表1一般情况观察结果
从表1可知:除了空白组,其它三组大鼠都有不同程度的死亡,其中模型组和泼尼松组均死亡3只,本方组死亡2只。一般情况比较空白组最佳,而泼尼松组纳食最差,体重增长也最少。
表2各组大鼠体重的比较单位:g
注:与空白组比较:◎有显著差异(P<0.05),◎◎有极显著差异(P<0.01);
与模型组比较:※※有显著性差异(P<0.05)
从表2可知:各组大鼠在造模前体重比较均无显著性差异,P>0.05;而治疗4周后,模型组体重明显低于空白对照组,两者之间比较有显著性差异(P<0.05);泼尼松组体重也明显低于空白对照组,有极显著差异(P<0.01);本方组体重高于模型组,有显著性差异(P<0.05)。
4.2肺组织病理学观察
4.2.1肉眼观察
经过4周治疗后,肉眼观察空白对照组双肺色泽正常,表面光滑,呈粉红色,弹性好;模型组两肺呈暗红色,部分肺叶呈灰白色,弹性明显降低,大部分动物肺脏体积缩小,硬度增加;本方组和泼尼松组两肺外观明显好于模型组,颜色略暗红,表面稍粗糙,触之弹性尚可,体积无明显缩小。
4.2.2HE染色镜下观察
大鼠肺组织的HE染色光镜观察,空白对照组肺组织学正常,无炎性细胞,无间质纤维组织增生;模型组大鼠发生肺间质纤维化,且多为中重度,肺泡壁显著增厚,肺泡结构紊乱,肺泡腔由胶原纤维、成纤维细胞及淋巴细胞占据;本方组、泼尼松组在治疗4周后,其肺泡炎及肺纤维化程度均较模型组明显减轻,多数大鼠只有轻度纤维化形成,肺泡间隔轻度增宽,部分有少量炎性细胞浸润。各组大鼠肺泡炎及肺纤维化程度分级结果的比较见表3。
表3各组大鼠肺泡炎及肺纤维化程度分级结果的比较
注:与模型组比较:※※有显著性差异(P<0.05);
与模型组比较:◎◎有极显著性差异(P<0.01)
从表3显示:本方组和泼尼松组分别与模型组比较,在肺泡炎程度上均减轻,具有显著性差异(P<0.05),在肺纤维化程度上也明显减轻,有极显著性差异(P<0.01),但两组之间比较,无统计学差异(P>0.05)。
4.3肺组织TGF-β蛋白表达和mRNA表达
光镜观察,各组肺组织中TGF-β蛋白和mRNA阳性表达呈棕黄色细颗粒状,或呈棕黄色丝网状。正常对照组大鼠肺组织切片肺泡巨噬细胞、肺间质结缔组织、血管内皮及平滑肌细胞可见少许阳性棕黄色产物分布;模型组大鼠以上部位可见蛋白表达和mRNA的表达明显增强,在支气管上皮细胞也出现明显的棕黄色反应产物;本方组和泼尼松组的肺组织中TGF-β蛋白表达和mRNA的表达较模型组明显减弱。经过图像分析,各组大鼠肺组织TGF-β蛋白表达和mRNA表达的比较结果见表4、5。
表4各组大鼠肺组织TGF-β蛋白表达的比较
注:与空白组比较:◎◎有极显著差异(P<0.01);
与模型组比较:※※有显著性差异(P<0.05)
从表4显示:模型组肺组织TGF-β的平均灰度值明显低于空白组,有极显著性差异(P<0.01);本方组与泼尼松组的平均灰度值高于模型组,分别与其比较有显著性差异(P<0.05),具有统计学意义;本方组与泼尼松组比较(P>0.05),无统计学意义。
表5各组大鼠肺组织TGF-βmRNA表达的比较
注:与空白组比较:◎◎有显著性差异(P<0.05);
与模型组比较:※※有显著性差异(P<0.05)
从表5显示:模型组肺组织TGF-βmRNA的平均灰度值低于空白组,有显著性差异(P<0.05);本方组与泼尼松组TGF-βmRNA的平均灰度值均高于模型组,有显著性差异(P<0.05),具有统计学意义;本方组与泼尼松组比较(P>0.05),两者之间无统计学意义。
5.讨论
器官纤维化的病因和发病机制比较复杂,但各种器官纤维化的发病机制和病理转归基本相同,故以较多发的肺纤维化作为研究对象,即可基本推知其他各种纤维化的病理转归。随着对纤维化研究的不断深入,已经认识到各种细胞释放的细胞因子在纤维化的发生发展中具有非常重要的意义。在这些 细胞因子中,转化生长因子-β(transforminggrowth factor-β,TGF-β)是作用最重要、研究最深入的细胞因子,并被认为是迄今发现的最强的细胞外基质沉积促进剂。
TGF-β根据靶细胞不同发挥促进或抑制增殖的调节作用。在肺纤维化过程中,存在着明显的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)代谢异常,进而导致肺纤维化形成。而TGF-β则能作用于多个环节,不仅可以刺激细胞外基质产生细胞(ECM-producing cells)合成大量ECM,还可通过抑制ECM降解酶(如基质金属蛋白酶,matrix metalloproteinases,MMPs)的活性,增强这些降解酶抑制物(如金属蛋白酶组织抑制物,tissue inhibitor ofmet alloproteinases,TIMPs)的活性,从而减少ECM的降解,还增加基质受体的表达和促进基质与细胞的粘附,改变成纤维细胞表型使其能合成和分泌大量的胶原等细胞外基质成份。另外,近来研究表明,TGF-β与其他促纤维化细胞因子也存在密切的联系。TGF-β可以趋化单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等,从而促使白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、血小板源生长因子(platelet-derivedgrowth factor,PDGF)等细胞因子的合成增加,并认为,它们可能存在级联反应,协同促进纤维化的进行性进展。
由于TGF-β被大多数学者公认为是肺纤维化形成与发展的关键性细胞因子,因此抗TGF-β或对其信号传导途径的干预策略已经成为肺纤维化治疗研究新的趋势。虽然目前还没有用抗TGF-β方法治疗人类肺纤维化的临床试验报道,但动物实验研究发现,应用TGF-β抗血清或抗体治疗肺纤维化大鼠模型,大鼠肺纤维化程度明显减轻。另外,TGF-β的天然抑制物核心蛋白聚糖可以通过核心蛋白与TGF-β结合,抑制TGF-β的生物学活性,减轻博来霉素诱导的大鼠肺纤维化程度。由此可见,本发明实验通过干预TGF-β具有充分的科学依据;本发明组方从影响其蛋白及基因表达的视角切入,可充分提示发明组方的疗效作用;并可推知,本发明药物组合物对其他器官的纤维化也有治疗作用。
试验例2本发明药物组合物与相关单味药物的疗效比较研究
本试验中药品、试剂、仪器、方法、步骤等,与试验例1相同处已省略。
试验药物:红景天;丹参;三七;麦冬;本发明配伍组方(见试验例1);此5种均临用前分别进行水煎,分别制成1.5g生药/ml的药液。Invitrogen公司博莱霉素原液zeocin125mg/支,用时以无菌生理盐水稀释成4mg/ml的溶液。四川科伦公司0.9%生理盐水(250ml/瓶)。AccuPower GreenStar qPCRPreMix(荧光定量PCR试剂盒)。
主要试验仪器:Bio-Rad公司实时荧光定量PCR仪,型号CFX96(此与前述试验所用仪器有别)。
试验动物:雌雄各半SD大鼠体重为200g±20g,造模成功后随机分为6组,即空白组、模型组、单味三七组、单味红景天组、单味麦冬组、本方组,每组6只。各组给药方法和剂量同试验例1。
检测指标:TGF-β1。
统计学处理:采用SPSS13.0软件进行分析,计量资料以均数±标准差 表示。组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用SD-t法检验。
结果:见表6:
表6各组大鼠肺组织TGF-β1mRNA表达比较
注:与空白组比较:◎◎为有极显著差异(P<0.01)。与模型组比较:※※为有显著性差异(P<0.05),为有极显著差异(P<0.01)。与本发明方组比较:▼为有显著性差异(P<0.05)。
从表6可知:模型组肺组织TGF-β1的mRNA值较之空白组有极显著性差异(P<0.01);本方组TGF-β1mRNA值较之模型组有极显著性差异(P<0.01)。单味三七组、单味红景天组TGF-β1mRNA值较之模型组有显著性差异(P<0.05)。单味三七组、单味红景天组、单味麦冬组TGF-β1mRNA值较之本方组有显著性差异(P<0.05),具有统计学意义,即本发明药物组合物在相同剂量下的药效活性明显优于各单味药材,表明本发明将各位药材合理配伍后,发挥了协同增效作用。
讨论:前已述及,国内外众多研究已经公认,转化生长因子-beta(TGF-β)是肺纤维化最重要的、最关键的一个病理环节[1]。哺乳动物主要有TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3三种形式,它们的生物学特性基本相同,其中以TGF-β1最为重要。TGF-β促进肺纤维化的形成需要信号传导系统的参与[2]。其首要的步骤是与TGF-β受体结合。TGF-β有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种类型受体(即TβRⅠ、TβRⅡ、TβRⅢ),广泛分布于细胞表面。TGF-β激活后,与细胞表面TβRⅠ、TβRⅡ结合,通过Smads转录因子启动细胞外信息传递。TGF-β在细胞外与TβRⅢ结合后,把TGF-β传递给TβRⅡ或者TGF-β直接 与TβRⅡ结合,TGF-βⅡ型受体一旦与TGF-β结合,则导致TβRⅠ聚集,形成异侧复合物,同时使TβRⅠ蛋白激酶磷酸化,激活TβRⅠ。活性TGF-β1直接与Smads2、3发生短暂相互作用,使Smads2、3磷酸化,然后与Smads4结合成复合物,并由胞浆移向胞核,在胞核内以细胞特异方式和其他转录因子一起调节TGF-β应答基因的转录,并在细胞水平介导TGF-β的生物学效应 [3],促使纤维化发生。由此可见,本试验通过检测、研究TGF-β1具有充分的科学依据,可以测知本发明组方在疗效上优于单味中药的效应机制;进而,本试验再次从干预TGF-β超家族成员TGF-β1基因表达的视角切入,可更加充分地表明本发明组方的疗效作用;并可推知,本发明药物组合物可能对其他器官的纤维化也有一定治疗作用。
综上,本发明药物组合物能有效治疗肺纤维化,改善其相关指标,降低肺组织中TGF-β和TGF-β1含量,从而达到缓解其症状以提高其生存质量的治疗效果,且避免了西医化学药物的严重毒副作用,为临床用药提供了一种新的选择。
[1]刘庆华.转化生长因子-β与肺纤维化.国外医学内科学分册,2002,29(8):933
[2]魏路清,董彦,陈萍.肺纤维化发病机制及治疗策略的新观念.国外医学呼吸系统分册,2003,23(1):83
[3]Blobe GC,SchiemannWP,Lodish HF.J N Engl J Med,2000,342(18):1350-1358 。
Claims (8)
1.一种治疗肺纤维化的药物组合物,其特征在于:它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂:
红景天36份,三七18份,丹参30份,麦冬30份。
2.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于:所述药物组合物是由所述重量配比的原料药的水或有机溶剂提取物为活性成分,加上药学上常用的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
3.根据权利要求2所述的药物组合物,其特征在于:所述制剂为经胃肠道吸收制剂。
4.权利要求1~3任意一项所述药物组合物的制备方法,其特征在于:它包括如下步骤:
(1)按所述重量配比称取原料药;
(2)取红景天、丹参和麦冬,加水提取,合并水提液,再加上三七粉和药学上常用的辅料或者辅助性成分制备成制剂。
5.权利要求1~4任意一项所述药物组合物在制备治疗肺纤维化的药物中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途,其特征在于:所述药物是降低肺组织中TGF-β含量的药物。
7.根据权利要求5所述的用途,其特征在于:所述药物是降低肺组织中TGF-β1含量的药物。
8.根据权利要求5所述的用途,其特征在于:所述药物是治疗血瘀络滞、正气已虚证型的肺纤维化的药物。
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