CN103191204B - 一种治疗慢性肾脏疾病的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗慢性肾脏疾病的药物组合物，它是由下述重量配比的原料中药制备而成的制剂：黄芪25-75份、三七5-15份、当归5-15份、牛膝15-45份、昆布15-45份、牡蛎5-15份、大黄3-9份。本发明还提供了该药物组合物的制备方法和用途。本发明药物用于治疗慢性肾脏疾病，如原发性肾病综合征、肾小管间质纤维化等各种慢性肾脏病，药效明确，为临床提供了一种新的选择。

Description

一种治疗慢性肾脏疾病的药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种治疗慢性肾脏疾病的药物组合物，属药物领域。

背景技术

随着人们对慢性肾脏病的认识发展，2002年美国肾脏病基金会肾脏病/透析临床实践指南提出各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍（肾脏损伤史＞3个月）和/或不明原因的GRF下降（GRF＜60ml/min）超过3个月，均称为慢性肾脏病（chronic kidney diseases,CKD），改变了对慢性肾脏病防治的新思路。慢性肾脏病是一个进行性发展的过程，是各种肾脏疾病和/（或）累及肾脏的系统性疾病引起进行性肾小球纤维化、小管间质纤维化、血管硬化，导致肾脏组织萎缩，功能丧失，代谢产物和毒物潴留，水、电解质紊乱和酸碱平衡失调以及某些内分泌功能异常，终至慢性肾衰竭（chronic renalfailure，CRF）和终末期肾脏病（end-stage renal disease，ESRD）。

根据CKD的新概念，流行病学研究发现CKD的患病率显著上升，是全球面临的重大公共健康问题。美国第3次健康营养调查（NHANESⅢ）发现，20岁以上人群慢性肾脏病患病率达11%。美国NIH统计表明，CKD的患病人数占总患病人数的7%，医疗预算高达总额的24%，ESRD年均需要透析的费用为65000美元。尽管花费巨额医疗费用，在美国每年透析患者的死亡率仍高达21%～23%。中国研究发现，北京市石景山地区中老年人群中CKD的患病率为9.4%，在2008年北京成年人CKD流行病学调查显示CKD患病率为13.0%。广州市针对常住居民调查显示我国南方的大城市中，人群CKD的患病率为10.1%。CKD高发病率和昂贵的治疗费用，在中国同样是严重威胁大众健康的公共卫生问题。

肾间质纤维化(Renal interistetal Fibrosis,RIF)是ESRD的共同特征，也是决定肾脏疾病进展的主要因素。细胞外基质(ECM)在肾间质中过度沉积是肾间质纤维化的一个主要特征。1998年发明人国内外首次证明肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化，在一定的病理条件下肾小管上皮细胞可发生表型改变，表达肌纤维母细胞的标记物，如：α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等。肾小管上皮细胞一旦转变为肌纤维母细胞就获得了分泌ECM的能力，产生大量胶原如胶原I（collagen I）和纤维黏连蛋白（fibronection），从而导致肾间质纤维化的发生发展。越来越多的研究提示肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化(TEMT)在肾间质纤维化发病机制中起了重要作用。探索治疗或逆转转分化的发生是当前研究的热点和难点。

根据ESRD现代医学的临床表现，中医学认为其隶属于“关格”、“水肿”、“虚劳”等范畴。但尚无统一的理论认识，特别是中西医结合的理论认识。由此阻碍了中医药对肾小管间质纤维化和延缓CKD治疗方案的选择和研究。发明人自2006年开始通过古代文献资料的理论循证，从中医“脏痿”理论出发，结合CKD中西医现代研究成果，于2009年在中华中医药学会第三届(22次)全国肾病学术会议中首先提出了慢性肾脏病从“肾痿”论治的概念，将“肾痿”与西医的慢性肾功能不全相结合来诠释CKD的定义。认为“肾痿”就是肾组织枯萎、萎缩或功能上衰退，甚至废弃不用的一组疾病，也就是现代所指的肾脏的排泄功能严重受损，致使氮质及其他代谢废物潴留体内，同时引起水、电解质及酸碱平衡失调，临床以机体自身中毒为特点的危重综合征。随着中医的现代化研究，自然医学越来越受到重视，研究表明中医中药对治疗慢性肾脏病，控制疾病相关危险因素，延缓疾病的迁延发展，降低并发症发生率、改善患者生活质量等方面有着不可替代的作用，发明一种安全有效的中药制剂，有着重大的意义。

目前国内外均尚无根据“脏痿”中医理论治疗“肾痿”的中药制剂。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种治疗慢性肾脏疾病的药物组合物，本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法和用途。

本发明提供了一种治疗慢性肾脏疾病的药物组合物，它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：

黄芪25-75份、三七5-15份、当归5-15份、牛膝15-45份、昆布15-45份、牡蛎5-15份、大黄3-9份。

进一步优选地，它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：

黄芪50份、三七10份、当归10份、牛膝30份、昆布30份、牡蛎10份、大黄6份。

本发明药物组合物是由黄芪、三七、当归、牛膝、昆布、牡蛎、大黄的原生药粉，或水或有机溶剂提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

其中，所述的制剂是片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、丸剂。

本发明还提供了一种制备所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤：

a、称取原料药：

b、将原料药直接打粉、加水或有机溶剂提取，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

本发明还提供了所述的药物组合物的制备具有治疗慢性肾功能衰竭的药物用途。

本发明还提供了所述的药物组合物的制备具有治疗或辅助治疗原发性肾病综合征的药物用途。

本发明还提供了所述的药物组合物的制备具有抗肾间质纤维化的药物用途。

本发明还提供了所述的药物组合物的制备具有治疗“肾痿”的药物用途。

本发明药物组合物原料药组方以活血化瘀、补肾益脾、软坚散结、泻浊排毒为治疗原则，其中黄芪，甘、微温，归脾、肺经，补气升阳、益卫固表，利水消肿为君药；三七止血不留瘀，行血不伤新，当归滋阴养血生血，二者同用生血而使瘀血不留，同为臣药，黄芪、三七、当归以补养气血。佐以牛膝引血下行，滋阴养血，补益肝肾，活血补血，壮筋骨利关节。昆布益气活血，软件散结；牡蛎敛阴，潜阳，软坚；大黄破瘕消积，通利三焦水道，安和五脏。

发明人根据中医“肾痿”理论，应用了中医学的“归经”和“引经”理论。从现代医学观点来看中医的“引经”理论与西医的载体学说有着相似之处。“引经”药作为药物的“定向载体”，把药物送到或介导至作用点或靶器官，既充分发挥了对作用点或靶器官的治疗作用，又避免了对其他器官的毒副作用。本发明药物组方中，牛膝、昆布同归肾经，消痰软坚，利水消肿，活血通经，引诸药下行直达病所，是为引经药。本发明药物用于治疗慢性肾脏疾病，如原发性肾病综合征、肾小管间质纤维化等慢性肾脏病，药效明确，为临床提供了一种新的选择。

附图说明

图1各组大鼠肾脏Masson染色（UUO术后14d）400×

图2各组大鼠肾脏HO-1染色（UUO术后7d）200×

图3Western杂交检测A&R对大鼠HO-1的表达（UUO术后7d）

具体实施方式

实施例1本发明药物的制备

取黄芪50g、三七粉10g（兑服）、当归10g、牛膝30g、昆布30g、牡蛎10g、大黄6g

制作和服用的方法：上方加水浸泡30分钟，分三次熬30分钟，三次药汁混合，为成人2日服用量。一日三次。

实施例2本发明药物合剂的制备

取黄芪50g、三七粉10g（兑服）、当归10g、牛膝30g、昆布30g、牡蛎10g、大黄6g，水煎煮，浓缩，得合剂。

实施例3本发明药物颗粒剂的制备

取黄芪75g、三七粉15g、当归15g、牛膝45g、昆布45g、牡蛎15g、大黄9g，加水煎煮浓缩，加入淀粉制粒，整粒，得颗粒剂。

实施例4本发明药物口服液的制备

取黄芪25g、三七粉5g（兑服）、当归5g、牛膝15g、昆布15g、牡蛎5g、大黄3g，除三七粉外，加水煎煮，制备成口服液。

以下通过临床试验或具体药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明药物合剂对原发性肾病综合征临床疗效观察

原发性肾病综合征(PNS)是一种常见的肾脏疾病，常有的高凝状态高脂血症以及免疫指标的异常，影响了激素及细胞毒类药物的疗效，可进一步加重肾脏损害。此研究在一般治疗对症、治疗免疫抑制剂治疗的基础上配合本发明药物合剂，临床疗效明显提高，具体研究如下。

资料与方法：

1诊断标准国际标准并参考文献方法（聂跃华，叶任高．中西医结合治疗原发性膜性肾炎肾病综合征的临床观察．中国中西医结合肾病杂志，2002，3(1):18－22.）。

2病例排除标准(1)经检查证实由糖尿病性肾病、狼疮性肾病及高血压性肾病等继发性因素所致者;(2)妊娠或哺乳期妇女;(3)合并有心脑肝和造血系统等严重原发性疾病者

3研究对象本研究病例来自川北医学院第二临床学院肾内科2009年1月～2011年12月门诊及住院部，共入组受试病例60例。研究通过南充市中心医院医学伦理委员会批准，并征得病人同意，签署知情同意书。全部患者按就诊号进行随机分组:治疗组和对照组各30例.治疗组男18例，女12例;年龄19岁～64岁，平均(35.6±14.2)岁;病程2～38个月，平均(19.5±9.8)月。对照组男17例，女13例;年龄20岁～61岁，平均(37.1±13.8)岁;病程1.5～39个月，平均(18.6±8.4)月.两组患者在性别年龄病程临床表现等方面差异均无统计学意义((P﹤0.05)。

4治疗方法两组患者均给予优质蛋白饮食(1.0g·kg^-1·d^-1)，标准剂量泼尼松、抗凝(潘生丁、肝素等)、降脂(他汀类等)、利尿消肿(双氢克尿噻氨体舒通等)、保护胃黏膜应用ACEI、ARB制剂等治疗。治疗组在上述治疗基础上给予本发明药物组合物合剂，水浓煎为300ml，分早晚各1次口服，4周为1个疗程。对照组除中药治疗外余治疗同对照组。激素依赖型或激素抵抗型的难治性肾病综合征患者，加用细胞毒药物环磷酰胺(CTX)1g/月静脉滴注，累积量达6-8g后停药。两组治疗3个月后评定疗效。

5检测指标观察两组治疗前及治疗3个月后临床症状体征的改善情况及治疗期间感染情况。治疗前后分别测24h尿蛋白定量(24h up)、血清白蛋白(Aab)、血脂、IgA、IgG、IgM、C₃、C₄、凝血等指标。

6疗效评定标准(1)完全缓解：水肿等症状与体征完全消失；24h尿蛋白定量持续小于0.2g；血清白蛋白≥35g/L；血浆总胆固醇(TC)、TC、TG基本正常。(2)基本缓解：水肿等症状与体征基本消失；24h持续0.21～0.5g之间；Alb在30～35g/L之间；TC、TG接近正常。(3)有效：水肿等症状与体征明显好转；24h尿蛋白定量持续在0.51～2g之间；TC、TG与治疗前相比有所改善。(4)无效：水肿等症状与体征无明显好转；24h up＞2g。

7病例脱落标准(1)发生严重不良事件并发症和特殊生理变化，不宜继续接受试验者；(2)治疗过程中自行退出者；(3)因其他各种原因疗程未结束退出研究、失访或死亡的病例；(4)资料不全，影响有效性和安全性判断者。

脱落病例均应如实记录脱落原因。服药过程中出现不良反应者，均列入不良反应统计。

8统计学方法采用医学统计学软SPSS11.5件进行分析，计量资料方差齐者采用t检验，方差不齐者采用非参数检验。计数资料中分类资料采用Ｘ²检验，等级资料采用非参数检验。

结果

1病例脱落情况治疗组脱落2例(入组后经检查证实为继发性肾病综合征者1例，入组后无随访记录者1例)。对照组无脱落病例。

2两组疗效比较治疗组完全缓解16例，基本缓解4例，有效1例，无效7例；对照组完全缓10例，基本缓解8例，有效3例，无效9例。治疗组疗效高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1两组临床治疗效果比较[例(％)]

3两组sAlb、24h up、TC、TG、Scr比较从表2来看，经治疗，两组在sAlb、24h up、TC、TG、Scr指标方面较未治疗前均有明显好转，差异有统计学意义(P＜0．05)。治疗组在升高sAlb、降低TC、TG、Scr方面疗效优于对照组(P＜0．05)，在降低蛋白尿方面疗效亦较对照组明显，但两组差异无统计学意义。

表2两组sAlb、24 h up、TC、TG、Scr比较

注:与治疗前比较，△△P＜0.01;与对照组比较，^#P＜0·05

4两组凝血指标比较从表3来看，经治疗，两组在凝血指标方面较未治疗前均有明显好转，差异有统计学意义(P＜0．05)，且治疗组疗效优于对照组(P＜0．05)。

表3两组凝血指标比较

注：与治疗前比较，△△P＜0.01;与对照组比较，^#P＜0.O5

5两组IgA、IgG、IgM、C3、C4及感染情况比较从表4来看，经治疗，两组的IgG、C3

较未治疗前均有明显好转，差异有统计学意义(P＜0.05)，对IgG的改善治疗组疗效优于对照组(P＜0.05)。

6感染情况治疗组上感6例，频次8次;皮肤感染2例次。对照组上感7例，频次15次;对照组另有泌尿道感染2例次、皮肤感染1例次、肺炎1例次、阴道感染1例次。从表5来看，治疗组感染率明显低于对照组(P＜0.05)。说明治疗组有一定的改善NS患者免疫功能的作用。

表4两组IgA、IgG、IgM、C₃、C₄比较况

注:与治疗前比较，△△P<0.01；与对照组比较，^#P＜0.05

表5两组感染情况比较

注：与对照组比较，^#P＜0.05

7两组副作用比较治疗组除出现临床常见的使用激素及CTX的临床表现(满月脸、皮肤紫纹、失眠、胃部不适、恶心、月经不调、脱发)，1例患者并发感冒中途有5d伴有厌食、恶心加重和厌服中药现象，其余均未见其他异常反应;对照组出现的副作用临床表现基本同治疗组，未发现其他明显不适。两组肝功能酶学、血常规未见明显异常。

本发明药物对NS患者在应用激素及环磷酰胺的基础上加用本发明药物辅助治疗，能更有效改善NS患者的高凝状态，调节其免疫力，减少血栓、栓塞及感染等并发症的发生，改善患者预后。同时在治疗过程中未出现明显的不良反应，临床证实是安全有效的辅助治疗措施。

试验例2本发明药物合剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用研究

本实验以单侧输尿管结扎（Unilateral ureteral obstruction，UUO）大鼠为肾间质纤维化模型观察本发明药物对UUO大鼠肾间质纤维化的作用并对其可能的机制进行初步探讨。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物SD大鼠，雄性，体重180～200g，购于四川大学实验动物中心。

1.1.2药物及试剂由实施例1制备。药物的购买、质检和制备由南充市中心医院中药制剂室协助完成。本发明药物制备成浓缩剂备用，由专人负责一次性制备完成。经煮沸、过滤、浓缩至浓度为每毫升药液含生药2.5g。真空包装，4℃冰箱保存。灌胃前微波炉加热10min使用。红蛋白氧化酶(HemeOxygenase1，HO-1)多克隆抗体(武汉博士德)；ElivisionTM plus第二代即用型非生物素法广谱试剂盒(福建迈新生物技术开发有限公司)；比色法羟脯氨酸(Hyp)测试盒(南京建成生物工程研究所)；羟自由基(OH·)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)测试剂盒购自南京建成生物公司。主要设备：Western印迹设备(美国BioRAD)。

1.2实验方法

1.2.1UUO模型的建立用5%水合氯醛，以6ml/kg腹腔注射麻醉大鼠。将大鼠右侧卧位固定于手术台上，剪毛后用碘酒、75%酒精消毒手术区。行左侧腹切口，逐层切开皮肤、肌肉及腹壁各层，暴露并分离左侧输尿管。将左侧输尿管用组织钳托起中段部位，止血钳夹住，在两端用4～0丝线两次结扎左侧输尿管近肾盂段，剪断输尿管，然后连续缝合皮肤，制成UUO动物模型。1.2.2动物的分组及处理将雄性SD大鼠60只随机分为3组：UUO组(n=20)、假手术组(SOR，n=20)、本发明药物合剂组(n=20)。从术后24小时开始，本发明药物治疗组每天予本发明药物(3ml/d)灌胃；UUO组和SOR组予以同等体积生理盐水灌胃，连续14天。所有大鼠按清洁级动物分笼喂养，自由饮水、进食，温度(23±2)℃，相对湿度为(55±2)%。于术后3，7，14天分别随机处死各组6只大鼠。用5%水合氯醛麻醉各组大鼠，股动脉采血后放血处死大鼠。取左肾组织，打开腹腔后从距肾门1mm处切取肾脏，取部分肾组织保存于4%多聚甲醛液中，用于MASSON染色和免疫组织化学检测；部分肾组织分装，用液氮快速冷却后保存于-80℃冰箱以提取蛋白。

1.2.3Masson染色和肾间质胶原沉积Masson染色操作按照常规方法。取Masson染色组织切片，参考文献方法每例切片选取10个不重复的400倍视野，以蓝色胶原沉积为阳性信号，用Image Pro plus多媒体彩色病理图像分析软件进行分析。计算肾间质胶原沉积面积与视野内肾小管间质总面积(去除肾小管管腔)的比值并取平均值。

1.2.4化学比色法测定肾组织匀浆中Hyp的含量称取湿重80mg新鲜肾组织，按Hyp测试盒说明书操作。测定前制备Hyp标准液及空白对照。加水解液1ml，沸水浴水解20min，调整pH值至6.5。准确吸取1ml待测液，依次加入检测试剂，60℃水浴15min，冷却后，3500r/min离心10min，取上清，用722分光光度仪，选择波长550nm，用蒸馏水调零，标准管对照，计算各组Hyp含量。

1.2.5OH·、MDA、SOD测定应用考马斯亮蓝法测定匀浆液蛋白质浓度，依照南京建成生物公司试剂盒提供的方法操作，测定大鼠左肾皮质匀浆液OH·、MDA、SOD含量。

1.2.6免疫组织化学染色检测采用Elivision法检测大鼠肾组织HO-1的表达。取各组大鼠肾组织石蜡包埋，3μm切片，烤片2h，常规脱蜡至水，pH6.0柠檬酸缓冲液微波修复，体积分数3%H2O2阻断内源性过氧化物酶。加兔抗大鼠HO-1多克隆抗体(1：200)孵育，以PBS代替一抗作替代对照，并按抗体说明设相应的阳性组织对照，一抗4℃过夜，滴加ElivisionTMplus二抗聚合物增强剂，室温孵育20min，滴加二抗，室温孵育30min，每步都用pH7.2的磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)反复冲洗，DAB显色，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。组织呈黄褐色为HO-1阳性染色。采用Image Pro plus多媒体彩色病理图像分析软件进行分析。计算每例切片20个不重叠的200倍视野中，阳性染色面积与视野内肾小管间质总面积(去除肾小管管腔)的比值并取平均值。

1.2.7Western杂交方法检测HO-1蛋白水平按分子克隆实验指南的方法进行裂解、抽提组织总蛋白，采用BCA法定量蛋白浓度。所得蛋白于100g/L的SDS-聚丙烯酰胺凝胶中电泳，电转至PVDF膜。5%脱脂牛奶封闭4℃过夜，加兔抗大鼠HO-1多克隆抗体(1∶500)37℃2h；洗膜3次，每次10min；加HRP标记羊抗兔IgG(1∶10000)，37℃1h，洗膜；ECL放射自显影。显影结果使用Quantity one软件进行OD值分析，结果用β-actin校正。

1.3统计学处理采用SPSS13.0统计软件，计量资料用

表示，两组以上均数比较采用单因素方差分析，P<0.05被认为有显著性差异。

2结果

2.1动物存活和纳入统计情况UUO组死亡2只，死于感染。本发明药物组死亡1只，原因为麻醉后。最后每组各纳入18只大鼠进行统计分析。

2.2病理学改变Masson三色染色结果显示，SOR组胶原染色主要位于小管基底膜及管周围，而肾小管间质染色较少。与SOR组比较，UUO组肾小管扩张，肾间质增宽，胶原成分明显增加，并随着梗阻时间延长病变进行性加重(P<0.05)。本发明药物组出现了肾间质纤维化的不同表现，但与UUO模型组比较在不同时间点均不同程度地改善了炎细胞浸润、肾小管扩张、肾小管萎缩、肾间质增宽、胶原沉积增加等病理改变(P<0.05)，UUO组各时间点肾组织Hyp含量均明显高于SOR组(P<0.05)，本发明药物组在不同程度上抑制了UUO引起的肾组织Hyp的增加(P<0.05)，见图1和表6。表6各组大鼠细胞外基质(ECM)的改变

注UUO versus SOR,①P<0.05;A&R versus UUO，②P<0.05

2.3对OH·和MDA的作用肾组织匀浆OH·和MDA含量测定显示：UUO组3d时大鼠梗阻侧肾皮质OH·和MDA含量显著升高，与SOR组有明显统计学差异(P<0.01)，提示UUO早期有大量反应氧代谢产物生成。随着UUO持续时间的延长，梗阻侧皮质OH·和MDA含量有所下降。术后3、7、14d本发明药物治疗组大鼠OH·和MDA水平均不同程度低于UUO组(P<0.05)，见表7。

2.4对SOD的作用UUO组术后梗阻侧皮质抗氧化酶SOD的含量随UUO损伤时间延长而显著减少，与SOR组相比有明显统计学差异(P<0.01)；本发明药物治疗组大鼠SOD水平均不同程度高于UUO组(P<0.05)，见表8。

2.5对HO-1的作用HO-1是细胞氧化应激最敏感的指标之一，本实验利用HO-1免疫组化观察了HO-1在UUO肾脏的表达。SOR组未见明显HO-1的阳性着色。UUO组3d在肾小管和间质即可见明显的HO-1表达，7d仍有较高的表达，14d回落。本发明药物治疗组在各时间点对HO-1的表达与UUO组比较没有统计学差异。其结果与HO-1Western杂交分析结果相一致。结果分别见表8和图2、3。

表7各组大鼠OH·和MDA的改变

注UUO versus SOR，①P＜0.05；A&R versus UUO，②P＜0.05

表8各组大鼠SOD和HO-1的改变

注UUO versus SOR，①P＜0.05；A&R versus UUO，②P＜0.05

3讨论

肾小管间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展至终末期肾衰的共同通路。已有研究表明，氧化应激参与了肾间质纤维化的发生发展，抗氧化应激治疗能有效减轻肾间质纤维化。

UUO模型中由于输尿管结扎后肾组织缺血、缺氧，张力应激所致的肾血浆流量的下降，巨噬细胞和肾小管上皮细胞受活化激发的炎症反应等，均能产生大量的反应氧代谢产物(reactive oxygen species，ROS)，包括超氧阴离子(O2-)、羟自由基(OH·)和过氧化氢(H2O2)等。其中OH·是体内最具损伤性的自由基。丙二醛(MDA)是在氧自由基作用下发生脂质过氧化反应的一种产物，其本身也能破坏细胞膜的结构与功能，对细胞具有毒性，并能刺激间质细胞胶原基因表达。MDA量的变化提示体内脂质过氧化，间接反映细胞损伤的程度。超氧化物歧化酶(SOD)能清除超氧化物阴离子，可拮抗脂质过氧化，其活力的高低可间接反映机体清除氧自由基的能力。

本研究发现，单侧输尿管结扎后，与SOR组相比，UUO组大鼠OH·和MDA高于SOR组，SOD低于SOR组。同时，梗阻肾脏呈进行性肾间质纤维化改变，包括小管的扩张、炎细胞浸润、小管的萎缩、肾间质胶原的沉积。与既往研究一致。说明单侧输尿管结扎后不仅导致了氧化应激的产生也导致了典型的肾间质纤维化病变。本发明药物组与UU0组比较在不同程度上减轻了胶原在肾间质的沉积和肾脏病理损害，也改善了上述氧化应激的各项指标。

试验例3本发明药物合剂对慢性肾脏疾病效果分析

1.对象与方法

1.1研究对象

纳入2007年1月年至2013年1月四川大学华西医院肾脏内科门诊治疗的慢性肾脏疾病患者。入选病例均参照2006年美国肾脏病基金会（NKF）组织撰写的肾脏病/透析的临床实践指南（Kidney Foundation Disease OutcomesQuality Initiative,K/DOQI）CKD诊断标准：1.肾脏损伤（肾脏结构或功能异常）≥3个月，可有或无肾小球滤过虑（GFR）下降，可表现为下面任何一条：病理学检查异常，肾损伤的指标：包括血、尿成分异常或影像学检查异常。2.GFR＜60ml/min/1.73m²≥3个月,有或无肾脏损伤证据。排除标准：肾结石患者、肾原发或继发肿瘤患者、已进行透析治疗的患者、严重脑、心、肝的脏器病变、危急重症病、严重精神障碍病、癔症、孕妇、哺乳妇女及未成年患者。入选病例进一步按照K/DOQI指南分期标准进行分期：1期：GFR正常或增加，GFR≥90ml/min/1.73m²；2期：肾损伤，GFR轻度下降，GFR60-89ml/min/1.73m²；3期：GFR中度下降，GFR30-59ml/min/1.73m²；4期：GFR严重下降，GFR15-29ml/min/1.73m²；5期：GFR＜15ml/min/1.73m²或透析。

1.2方法

纳入门诊治疗的慢性肾脏疾病患者，其中采用西药配合中成药治疗的患者作为对照组，采取西药配合“肾痿方”治疗的患者作为治疗组。

1.3观察指标

（1）血肌酐、血尿素氮、胱抑素、血尿酸，谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白、球蛋白、红细胞、血红蛋白、血小板、白细胞、尿蛋白、尿红细胞、尿白细胞。（2）估算肾小球滤过率（Estimated Glomerular Filtration Rate，eGFR）计算公式如下。简化MDRD（Modification of Diet in Renal Disease）公式：

GFR(ml/min1.73m²)=175×(SCr/88.4)^-1.234×Age^-0.179×（0.79，如果为女性）。

1.4统计学方法

数据采用SPSS17.0统计软件进行统计分析，服从正态分布计量资料计算均数与标准差,并作t检验，非正态分布计量资料计算中位数与四分位间距，并做秩和检验，分类资料采用卡方检验做单因素分析，并以eGFR改变量为结局指标采用多重线性回归筛选影响因素。

2.结果

2.1患者一般情况

共纳入符合标准的CKD患者225例，男170例,女55例，平均年龄47.64士14.27岁，平均治疗时间1.51±1.17年，肾功能分期1期25例占11.3%、2期22例10.0%、3期61例占27.6%、4期66例29.9%、5期47例21.3%。对照组170例，平均年龄49.88±14.36岁,平均治疗时间1.55±1.21年，肾功能分期1期15例占9%、2期12例7.2%、3期47例占28.3%、4期58例34.9%、5期34例20.5%。治疗组55例，平均年龄40.71±11.63岁,平均治疗时间1.31±0.95年，肾功能分期1期10例占18.2%、2期10例18.2%、3期14例占25.5%、4期8例14.5%、5期13例23.6%。资料进行比较分析,两组患者的年龄（P<0.01）（见表9）和蛋白尿程度（P<0.01）（见表10）以及按肾功分期的构成比（P=0.007）（见表11）有差异。

表9CKD患者的一般情况

*P<0.01

表10CKD患者尿检情况[中位数（四分位间距）]

*P<0.01

表11CKD患者肾功分期构成[例数（%）]

P=0.007

2.2效果分析

治疗组对肌酐尿素的降低优于对照组（P<0.001），两组对尿酸的影响差异无统计学意义（P=0.475）。（见表12）

表12各治疗方案的对肾功能的疗效[中位数（四分位间距）]

治疗组和对照组对尿蛋白（P=0.058），尿红细胞(P=0.577)的影响无差别,对尿白细胞的影响可能有差别（P=0.01）（见表13）

表13各治疗方案的对尿常规的疗效[中位数（四分位间距）]

使用多元线性回归依次纳入分组、年龄、性别、蛋白尿程度、肾功能分期因素，分类资料变量赋值为：分组0为对照组，1为试验组，肾功分期依次赋值为1为1期、2为2期、3为3期、4为4期、5为5期。性别男为0、女为1，尿蛋白0为<0.1g/L、1为0.2～1.0g/L、2为1.0～2.0g/L、3为2.0～4.0g/L、4为>4.0g/L。定量资料纳入原始值。

表14影响肾功进展因素多元线性回归分析

经过多重线性回归，尚不认为性别、年龄、蛋白尿程度对治疗结局产生影响，确定了对治疗结局有统计学意义的影响因素为分组（P<0.001）和肾功能分（P=0.008），在控制其他影响因素情况下，相比于对照组，治疗组eGFR平均提高15.67（偏回归系数15.67）。相比于1期肾功能患者，肾功能分期较高者更易显现较好的治疗效果。相比于肾功分期（标准化回归系数0.165），分组（标准化回归系数0.395）对治疗结局的影响更大。（见表14）

经过治疗后试验组eGFR发生提高的患者达43人占78.18%，而对照组eGFR发生提高的患者仅有59人占34.71%，进一步通过卡方检验认为这种差异有统计学意χ²=31.6947,P<0.001。（见表15）

表15各治疗方案的eGFR的提高情况[频数（百分数）]

χ²=31.6947,P<0.001

综上所述，本发明药物用于治疗慢性肾脏疾病，如原发性肾病综合征、肾小管间质纤维化等慢性肾脏病，药效明确，为临床提供了一种新的选择。

Claims (7)

1.一种治疗慢性肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：

黄芪25-75份、三七5-15份、当归5-15份、牛膝15-45份、昆布15-45份、牡蛎5-15份、大黄3-9份。

2.    根据权利要求1所述的治疗慢性肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：

黄芪50份、三七10份、当归10份、牛膝30份、昆布30份、牡蛎10份、大黄6份。

3.根据权利要求1或2所述的治疗慢性肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：它是由黄芪、三七、当归、牛膝、昆布、牡蛎、大黄的原生药粉，或水或有机溶剂提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

4.根据权利要求3所述的治疗慢性肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、丸剂。

5.一种制备权利要求1-4任意一项所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤：

a、称取原料药：

b、将原料药直接打粉、加水或有机溶剂提取，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

6.权利要求1-4任意一项所述的药物组合物在制备治疗或辅助治疗原发性肾病综合征的药物中的用途。

7.权利要求1-4任意一项所述的药物组合物在制备抗肾间质纤维化的药物中的用途。

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