CN103932976A - 一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶及制备方法 - Google Patents

Abstract

一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶及制备方法，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水按照一定的比例和步骤制备而成。本发明通过将丹皮酚在40℃下快速溶于水基溶液，形成可注射的混合溶液，将该混合溶液注射入37℃的环境下，其会固化成凝胶，药物在溶解状态下被均匀分散于凝胶基体，可实现缓慢地释放药物，不仅有利于实现微创填充缺损组织，并定向缓释丹皮酚药物抗菌消炎镇痛，使得药效更加的持久。

Description

一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶及制备方法

技术领域

本发明涉及到一种丹皮酚类药物及其制备方法，具体的说是一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶及制备方法。

背景技术

丹皮酚为白色或微黄色有光泽的结晶，熔点49°C-51°C，易溶于乙醇和甲醇中，稍溶于水，在热水中溶解，不溶于冷水。主要从萝蘑科植物徐长卿的干草根或全草或者从芍药科植物牡丹的根皮或茎皮中提取而得。

丹皮酚具有祛风镇痛，解毒消肿，镇静中枢、抗炎抗过敏和调节免疫力等作用，可用于各种痛症，也可用于瘙痒症。丹皮酚的剂型有口服的丹皮酚片、软胶囊、滴丸，外用的丹皮酚软膏、帖膏、贴膜，注射的丹皮酚注射液等。其中丹皮酚注射剂是临床主要剂型。如上海第一生化药业有限公司、宁波天真制药有限公司、北京双鹤药业股份有限公司生产的丹皮酚注射液，主要成分为丹皮酚，可用于解热镇痛类/创伤性疼痛（手术-外伤-烧伤），用于肌肉痛、关节痛、风湿痛、神经痛、腹痛等，也可用于瘙痒症，肌内注射，主要作用于中枢神经系统，从而达到明显的镇痛、镇静作用、抗菌消炎，能阻止炎症细胞的浸润，对大肠杆菌、枯草杆菌、金葡菌有明显的抑制作用。

由于丹皮酚具有水溶性小的特点，在制备注射剂型时增加其溶解度是工艺关键。丹皮酚易溶于乙醇，因此丹皮酚注射剂的液相常为乙醇，同时辅以大量表面活性剂吐温-80以达到增溶目的。但乙醇有刺激性，特别对中枢神经系统的刺激性很强。而大量吐温-80的使用可能使制剂在使用过程中出现一些副作用。后以注射用花生油为液相溶解丹皮酚，解决了需要大量吐温-80以助溶的制剂问题，但需要耗费大量的油，使用也不方便。

目前市场上的丹皮酚注射剂型都主要为液体，注射后随着体液代谢于人体全身，不能保证患病部位长期而有效的药物作用浓度。

发明内容

为解决现有技术中的丹皮酚注射剂不能保证病患部位长期有效的药物作用浓度的问题，本发明提供了一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶及制备方法，将丹皮酚在40℃下快速溶于水基溶液，形成可注射的混合溶液，将该混合溶液注射入37℃的环境下，其会固化成凝胶，药物在溶解状态下被均匀分散于凝胶基体，可实现缓慢地释放药物，不仅有利于实现微创填充缺损组织，并定向缓释丹皮酚药物抗菌消炎镇痛。

本发明为解决上述技术问题采用的技术方案为：一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水制备而成，其中壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液和去离子水的比例为85~95mg：0.45~0.55ml：450~550mg：0.45~0.55ml。

所述丹皮酚和水基溶液的质量比例为1:99~2:98，即丹皮酚在固化后的复合水凝胶中的质量百分含量为1%~2%。

所述盐酸溶液和氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L。

上述注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶的制备方法，包括以下步骤：

1）按上述的比例称取壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水，备用；

2）将称量好的壳聚糖溶解在盐酸溶液中，搅拌1h使壳聚糖完全溶解，静置30min除去气泡，备用；

3）将称量好的β-甘油磷酸钠和去离子水混合，放入超声清洗机中震荡5min，使β-甘油磷酸二钠完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氢氧化钠溶液调节其pH值至7.2，备用；

4）将步骤3）制备的溶液逐滴滴加到步骤2）制备的溶液中，边滴加边搅拌，直至得到澄清溶液，将该澄清溶液放入40℃的水浴中搅拌加热使其升温至40℃，备用；

5）将丹皮酚粉末过100-300目筛后加入到步骤4）所配40℃溶液中，搅拌2-3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37℃的模具内，冷却后即固化为凝胶。

有益效果：本发明与现有技术相比，具有以下优点：

1）本发明通过利用丹皮酚不溶于冷水，但是溶于热水的特点，采用加热到40℃的水基溶液为介质，使丹皮酚溶解，而40℃提取丹皮酚的常用温度，不会对丹皮酚的活性造成影响，改变了目前大部分丹皮酚注射剂都采用乙醇或油作为溶解介质的状况；

2）加入丹皮酚到壳聚糖/β-甘油磷酸钠溶液体系后，体系形成凝胶的时间缩短，由原来的40min左右缩短到20-10min，有利于防止药物在固化前游走；

3）本发明中，丹皮酚水基溶液在注射到37℃，也就是人体体温环境下会凝固为凝胶，由于丹皮酚溶解到了介质中，因而可以均匀地被固化分散于凝胶基体内，实现缓慢而稳定地在注射部位释放药物，使得药效更加的持久；而目前的丹皮酚注射剂在注射后不会固化于注射部位，快速地参与血液循环，而不能实现持续作用于注射部位。

附图说明

    图1为本发明药物/水基溶液体积比与成胶时间关系图；

图2为本发明产品丹皮酚的缓释曲线；

图3为本发明产品24h对金黄色葡萄球菌的抑菌环照片。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的阐述，本发明各实施例中所用材料均为市售，所使用的盐酸溶液为溶剂，而氢氧化钠溶液作为调节pH值的试剂，因此，选用浓度均为0.1mol/L。

实施例1

一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水制备而成，其中壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液和去离子水的比例为85mg：0.45ml：450mg：0.45ml；

所述丹皮酚和水基溶液的比例为每99g水基溶液中加入1g的丹皮酚，即丹皮酚在固化后的复合水凝胶中的质量百分含量为1%。

上述注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶的制备方法，包括以下步骤：

1）按上述的比例称取壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水，备用；

2）将称量好的壳聚糖溶解在盐酸溶液中，搅拌1h使壳聚糖完全溶解，静置30min除去气泡，备用；

3）将称量好的β-甘油磷酸钠和去离子水混合，放入超声清洗机中震荡5min，使β-甘油磷酸二钠完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氢氧化钠溶液调节其pH值至7.2，备用；

4）将步骤3）制备的溶液逐滴滴加到步骤2）制备的溶液中，边滴加边搅拌，直至得到澄清溶液，将该澄清溶液放入40℃的水浴中搅拌加热使其升温至40℃，备用；

5）将丹皮酚粉末过100-300目筛后加入到步骤4）所配40℃溶液中，搅拌2-3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37℃的模具内，冷却后即固化为凝胶。

所生产的产品各性能的检测：

1、采用倒置模具，模具内的物质不流动的方法确定材料成胶时间。

2、成胶后的材料取出，采用转篮法测定材料的药物96h缓释曲线：

a按体积分数乙醇30%+去离子水70%配制缓释介质溶液备用；

b按固液比为1g/50ml的比例，将固化后的载药水凝胶材料浸泡入缓释介质中。为模拟人体内环境，把样品放入37℃恒温水浴锅中振荡；

c不同时间间隔内取出5ml浸泡溶出液，同时加入5ml新鲜介质溶液；

d将取出的浸泡溶出液按照文献[中国药房，2006,17(10):747-749]的方法，采用紫外风光光度计检测丹皮酚浓度，其中的丹皮酚溶解介质均为30%乙醇加70%去离子水。

3、将材料制成直径5mm、厚4mm的小圆片，采用贴片法测定材料对金色葡萄球菌的抑菌能力：

a试验菌接种：用无菌棉拭子蘸取浓度为5×105cfu/ml～5×106cfu/ml试验菌悬液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次，每涂抹1次，平板应转动 60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周，盖好平皿，置室温干燥 5min；

b试样贴放：每个平板贴放4片试验样片，各样片中心之间相距 25mm以上，与平板的周缘相距 15mm 以上，盖好平皿，置37℃温箱，培养24h 观察结果，用游标卡尺测量抑菌环的直径 (包括贴片) 并记录，试验重复3次。

4、根据GBT 16886.5-2003采用浸提液法进行细胞毒性实验：

浸提介质为以 GM培养液，材料与浸提液比为1：200 (mg／mL)的质量体积比，在37℃温度下浸提24h。将上述悬浊液高速离心，上清液以 0.22 um的滤纸过滤消毒，得到的浸提液，加入 10％ FBS作为初始浸提液。初始浸提液被GM培养液稀释2倍后用于之后的细胞实验。选用细胞为hella细胞。取复苏后的生长最为旺盛的第三代细胞hella细胞接种（密度为5×104个/ml）24孔培养板内，24 h细胞贴壁后吸出原来的培养液。加入对应稀释数的浸提液200 uL代替。以 GM培养液作为对照组。细胞培养 l d、3 d和 5 d后 ，各取一培养板加入MTT溶液（5mg/ml）40μl，37℃下继续培养4h，终止培养，小心吸去孔内培养上清液，然后在每孔中加入420μl DMSO，振荡10min，使结晶物充分溶解。吸取每孔中液体200μl到96孔平底板内，然后选择570nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔吸光度值，记录结果。做3个平行样 (P<0.05)。

实验结果：不加入丹皮酚的凝胶成胶时间约为40min，而加入丹皮酚1%时，体系成胶时间缩短约20min（如附图1所示）。在浸泡后5.5h，药物缓释浓度达到60ug/ml，并且能维持较高的药物浓度（如附图2所示），24小时抑菌环达到约10mm（如附图3所示），且细胞毒性为0级。

实施例2

一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水制备而成，其中壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液和去离子水的比例为90mg：0.5ml：500mg：0.5ml；

所述丹皮酚和水基溶液的比例为每98.5g水基溶液中加入1.5g的丹皮酚，即丹皮酚在固化后的复合水凝胶中的质量百分含量为1.5%。

上述注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶的制备方法，包括以下步骤：

1）按上述的比例称取壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水，备用；

2）将称量好的壳聚糖溶解在盐酸溶液中，搅拌1h使壳聚糖完全溶解，静置30min除去气泡，备用；

3）将称量好的β-甘油磷酸钠和去离子水混合，放入超声清洗机中震荡5min，使β-甘油磷酸二钠完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氢氧化钠溶液调节其pH值至7.2，备用；

4）将步骤3）制备的溶液逐滴滴加到步骤2）制备的溶液中，边滴加边搅拌，直至得到澄清溶液，将该澄清溶液放入40℃的水浴中搅拌加热使其升温至40℃，备用；

5）将丹皮酚粉末过100-300目筛后加入到步骤4）所配40℃溶液中，搅拌2-3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37℃的模具内，冷却后即固化为凝胶。

选取本实施例制备的产品进行实验，实验内容和方法与实施例1中相同，实验结果如下：

成胶时间约10min（如附图1所示），在浸泡后7.5h，药物缓释浓度达到102ug/ml，并且能维持较高的药物浓度（如附图2所示），24小时抑菌环达到约13mm（如附图3所示），且细胞毒性为0级。

实施例3

一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水制备而成，其中壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液和去离子水的比例为95mg：0.55ml：550mg：0.55ml；

所述丹皮酚和水基溶液的比例为每98g水基溶液中加入2g的丹皮酚，即丹皮酚在固化后的复合水凝胶中的质量百分含量为2%。

上述注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶的制备方法，包括以下步骤：

1）按上述的比例称取壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水，备用；

2）将称量好的壳聚糖溶解在盐酸溶液中，搅拌1h使壳聚糖完全溶解，静置30min除去气泡，备用；

3）将称量好的β-甘油磷酸钠和去离子水混合，放入超声清洗机中震荡5min，使β-甘油磷酸二钠完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氢氧化钠溶液调节其pH值至7.2，备用；

4）将步骤3）制备的溶液逐滴滴加到步骤2）制备的溶液中，边滴加边搅拌，直至得到澄清溶液，将该澄清溶液放入40℃的水浴中搅拌加热使其升温至40℃，备用；

5）将丹皮酚粉末过100-300目筛后加入到步骤4）所配40℃溶液中，搅拌2-3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37℃的模具内，冷却后即固化为凝胶。

选取本实施例制备的产品进行实验，实验内容和方法与实施例1中相同，实验结果如下：

成胶时间约8min（如附图1所示）；在浸泡后7.5h，药物缓释浓度达到180ug/ml，并且能维持较高的药物浓度（如附图2所示）；24小时抑菌环达到约15mm（如附图3所示），且细胞毒性为0级。

Claims (4)

1.一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶，其特征在于：由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水制备而成，其中壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液和去离子水的比例为85~95mg：0.45~0.55ml：450~550mg：0.45~0.55ml。

2.根据权利要求1所述的一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶，其特征在于：所述丹皮酚和水基溶液的质量比例为1:99~2:98，即丹皮酚在固化后的复合水凝胶中的质量百分含量为1%~2%。

3.根据权利要求1所述的一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶，其特征在于：所述盐酸溶液和氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L。

4.根据权利要求1、2或3所述的一种注射型定向缓释丹皮酚温敏凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）按权利要求1中的比例称取壳聚糖、β-甘油磷酸钠、盐酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水，备用；

2）将称量好的壳聚糖溶解在盐酸溶液中，搅拌1h使壳聚糖完全溶解，静置30min除去气泡，备用；

3）将称量好的β-甘油磷酸钠和去离子水混合，放入超声清洗机中震荡5min，使β-甘油磷酸二钠完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氢氧化钠溶液调节其pH值至7.2，备用；

4）将步骤3）制备的溶液逐滴滴加到步骤2）制备的溶液中，边滴加边搅拌，直至得到澄清溶液，将该澄清溶液放入40℃的水浴中搅拌加热使其升温至40℃，备用；

5）将丹皮酚粉末过100-300目筛后加入到步骤4）所配40℃溶液中，搅拌2-3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37℃的模具内，冷却后即固化为凝胶。