CN103932180A

CN103932180A - 一种缓解压力及抗疲劳的保健食品及其二步发酵制备方法

Info

Publication number: CN103932180A
Application number: CN201410135837.7A
Authority: CN
Inventors: 徐娟; 吴学谦; 许海顺; 俞盈; 党亚丽; 李青青
Original assignee: Zhejiang Academy of Medical Sciences
Current assignee: Sanmenxia lerenjia Food Co.,Ltd.
Priority date: 2014-04-04
Filing date: 2014-04-04
Publication date: 2014-07-23
Anticipated expiration: 2034-04-04
Also published as: CN103932180B

Abstract

本发明公开了一种缓解压力及抗疲劳的保健食品及其制备方法，采用二步发酵法制备，包括：虫草固体发酵：以具有抗疲劳功能的天然组分为药性培养基质，接种虫草液体菌种进行双向固体发酵制备具有抗疲劳功能的药性菌质；乳酸菌液体深层发酵，以药性菌质为原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸钠、水制成发酵培养基，接种乳酸菌进行液体深层发酵生产缓解压力的γ-氨基丁酸，制备同时具有缓解压力和抗疲劳功能的发酵液；采用发酵液，制备成不同剂型的缓解压力及抗疲劳的保健食品。本发明以虫草菌质和γ-氨基丁酸配伍使得该保健食品同时具有缓解压力和抗疲劳功能，该制备方法稳定，适合大规模生产，市场前景广阔。

Description

一种缓解压力及抗疲劳的保健食品及其二步发酵制备方法

技术领域

本发明涉及生物保健食品及其制备领域，具体涉及一种缓解压力及抗疲劳的生物保健食品及采用虫草、乳酸菌固液二步发酵制备该保健食品的方法。

背景技术

由于工作的繁忙和应酬的频繁，疲劳综合症已作为一种都市疾病快速蔓延，加上竞争的加剧，压力大也是导致人们特别是都市人群身心疲惫的重要诱因。目前尚无同时缓解压力和抗疲劳的保健食品，因此研发一种能缓解压力和抗疲劳的保健食品，通过日常保健来减轻压力和抗疲劳符合“治未病”的现代养生理念，具有广阔的市场前景。

虫草味甘性温，是一种中外闻名的滋补保健珍品，有补虚健体、抗疲劳之效。《中国藏药》中有对虫草抗疲劳的记载：“冬虫夏草有影响机体代谢功能、人体内分泌系统功能和抑制平滑肌的作用”。药理学研究表明虫草含有虫草多糖、虫草酸等活性成分，具有调节人体内分泌、促进人体新陈代谢、改善人体微循环等作用，可促进体内新陈代谢活动趋于正常，并迅速清除乳酸和新陈代谢的产物，从而达到迅速恢复机体抗疲劳的效果。

近年来随着对虫草需求的增长，虫草野生资源日渐稀少。人工栽培虫草和发酵虫草菌丝体的活性成分在结构、生理作用上与野生资源一致，可替代野生虫草。相比人工栽培虫草，发酵虫草菌丝体具有培养周期短，生产易控制，活性物质含量高、提取率高等优点，因此更受青睐。目前虫草菌丝体的生产以传统的固体和液体发酵法制备，如专利201010526060.9《蛹虫草的固态发酵方法》和专利201210111512.6《一种利用蛹虫草液体发酵生产虫草酸的方法》采用蛹虫草的固、液体发酵制备虫草菌丝体，专利201310392235.5《一种混合菌株的固体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法》和专利201310396176.9《一种混合菌株的液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法》采用中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌混菌液体发酵制备虫草菌丝体，但利用虫草和中药进行双向发酵的报道较少。

庄毅等首次提出双向发酵的概念，指出食药用真菌与含有活性成分的中药材进行发酵具有双向性，能产生1+1>2的生理效果，如专利201110271923.7《一种具有降血糖功效的真菌药性菌质及其制备方法》选用具有降血糖功效的药性基质和真菌菌种作为双向发酵获得具有明显的降低血糖又不增加胰岛素浓度的作用的药性菌质，专利200910058889.8《含有灵芝的发酵菌质混合物、制备方法及其应用》以灵芝和含有丹参的药性基质进行双向发酵，得到兼具丹参药材和灵芝真菌功效的菌质发酵终产物。研究表明焦三仙、黄芪、当归、海马、柴胡等中药的可明显促进虫草的发酵，因此，可利用虫草和具有抗疲劳功能的药性基质和进行固体双向发酵，通过药性基质对虫草菌丝体生长代谢过程的影响和虫草真菌酶系对药性基质改造在内的双向性固体发酵，得到兼具药性基质和虫草抗疲劳功能的药性菌质，可作为保健食品原料，对易疲劳者能够产生1+1>2的效果。

γ-氨基丁酸是一种抑制性神经递质，现代医学研究证明γ-氨基丁酸具有镇静神经、缓解压力的功效，卫生部已批准乳酸菌发酵法制备的γ-氨基丁酸为新资源食品。从传统发酵食品中筛选的乳酸菌安全性高，可用于γ-氨基丁酸的生产，如专利200780006225.6《能够生产γ-氨基丁酸的乳酸菌》从未精制的酱油中分离到能够生产γ-氨基丁酸的乳酸杆菌，专利200910183478.1《一株高效转化L-谷氨酸为γ-氨基丁酸乳酸菌的选育》从酸菜中筛选出产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌。但是乳酸菌只能利用单糖、二糖等小分子碳源，不能直接利用含淀粉以及纤维质的天然基质，而虫草具有降解淀粉和纤维质的酶系，可将淀粉质、纤维质分解为可供乳酸菌利用的小分子碳源，将虫草与乳酸菌发酵结合进行分步发酵不仅可解决这一问题，乳酸菌还可对虫草菌质进行进一步分解和转化，更易吸收和利用。

发明内容

针对目前并无同时缓解压力及抗疲劳的保健食品，本发明提供一种同时缓解压力及抗疲劳的保健食品，同时提供该保健食品利用虫草、乳酸菌二步发酵的制备方法。

一种缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，包括如下步骤：

（1）虫草固体发酵：以具有抗疲劳功能的天然组分为药性培养基质，接种虫草液体菌种进行双向固体发酵制备具有抗疲劳功能的药性菌质；

（2）乳酸菌液体深层发酵：以步骤（1）的药性菌质为原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸钠、水制成发酵培养基，接种乳酸菌进行液体深层发酵生产缓解压力的γ-氨基丁酸，制备同时具有缓解压力和抗疲劳功能的发酵液；

（3）采用步骤（2）的发酵液，制备成不同剂型的缓解压力及抗疲劳的保健食品。

本发明第一步以具有抗疲劳功能的天然组分作为药性培养基质，接种虫草进行双向固体发酵，通过药性培养基质对虫草菌丝体生长代谢过程的影响和虫草真菌酶系对药性培养基质改造在内的双向性固体发酵后，得到兼具药性基质和虫草抗疲劳功能的药性菌质；第二步以虫草降解后含有小分子碳源等营养物质的药性菌质为原料，添加酵母粉以及谷氨酸钠制作发酵培养基，接种可产生γ-氨基丁酸的乳酸菌进行发酵，制备具有缓解压力和抗疲劳的发酵液；最后，发酵液经过过滤、浓缩、喷雾干燥、制剂等工艺制备成保健食品。

步骤（1）中，所述的虫草菌种可采用现有技术，虫草液体菌种采用现有的常规工艺制得，虫草菌种为冬虫夏草菌种或蛹虫草菌种，优选的为蝙蝠蛾拟青霉ACCC50930或蛹虫草ACCC52027，或二者混合菌种，即中国农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）保藏的菌种。

步骤（1）中，所述的虫草液体菌种的接种量为2%-10%，即所述的虫草液体菌种的加入的体积量（mL）为药性培养基质的质量（g）的2%-10%（mL/g），以100g药性培养基质为基准，加入2-10mL的虫草液体菌种。

步骤（1）中，所述的药性培养基质的制备：先称取以下重量百分含量的原料：全粒大麦70%-80%、蝉蛹10%-20%、何首乌1%-3%、红景天1%-3%、黄精1%-2%、绞股蓝1%-2%、石膏粉0.5%-1.5%，将各组分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量为60%-65%，116℃-126℃灭菌0.5h-1.5h。优选的，所述的药性培养基质的制备：先称取以下重量百分含量的原料：全粒大麦75%、蝉蛹15%、何首乌3%、红景天2%、黄精2%、绞股蓝2%、石膏粉1%；将各组分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量为60%-65%，121℃灭菌1h。

步骤（1）中，所述的双向固体发酵的条件为：发酵温度在18-28℃，发酵时间在20-30天，以该虫草固体发酵条件为宜。

步骤（2）中，所述的乳酸菌为植物乳酸菌，优选的为从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106（保藏编号为：CGMCC NO.5655），即采用中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC保藏的菌种，植物乳酸菌液体菌种采用MRS培养基28℃静置培养48h获得。

步骤（2）中，所述的发酵培养基采用以下重量份的原料：水1000重量份、药性菌质40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸钠15-20重量份，将药性菌质、酵母粉和谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成pH为5-6的缓冲液，116℃-126℃灭菌20min-40min。作为优选，所述的发酵培养基采用以下重量份的原料：水1000重量份、药性菌质50重量份、酵母粉7.5重量份、谷氨酸钠20重量份，将药性菌质、酵母粉和谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成pH为5.5的缓冲液，121℃灭菌30min。

步骤（2）中，所述的乳酸菌的接种量为1%-5%，即所述的乳酸菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%-5%。

步骤（2）中，所述的液体深层发酵的条件为：发酵温度在28-32℃，发酵时间在48-72h，以该发酵条件为宜。

步骤（2）中，所述的发酵液中γ-氨基丁酸的含量为9-12g/L。

步骤（3）中，所述的发酵液，通过过滤、浓缩、喷雾干燥、制粒、压片等工艺制备成不同剂型的保健食品。

所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的剂型为口服剂型，优选为胶囊或片剂，发酵液经过滤、浓缩、喷雾干燥、制粒、装囊后得到胶囊，发酵液经过滤、浓缩、喷雾干燥、制粒、压片后得到片剂。发酵液首先经过过滤、浓缩、喷雾干燥成粉末，粉末过筛后经沸腾制粒得干燥颗粒，颗粒用颗粒整粒机以20目筛进行整粒，整粒所得颗粒加入相对于整粒所得颗粒的重量0.5%崩解剂羧甲淀粉钠和相对于整粒所得颗粒的重量0.1%润滑剂硬脂酸镁在多维运动混合机中充分混匀5分钟灌胶囊或压成片剂。

通过上述二步发酵制备方法制备的缓解压力及抗疲劳的保健食品，具有同时缓解压力及抗疲劳的保健功效。

虫草与抗疲劳的药性培养基质双向发酵可制备抗疲劳功能显著的药性菌质，而药性培养基质通过虫草的降解作用，可为乳酸菌发酵产γ-氨基丁酸提供营养和碳源，同时通过乳酸菌的降解转化，药性菌质更易吸收和利用，因此采用虫草和乳酸菌二步发酵可制备可同时缓解压力和抗疲劳的保健食品。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

（1）本发明根据虫草具有抗疲劳功能，γ-氨基丁酸具有缓解压力功能，二者配伍具有显著缓解压力和抗疲劳的功能，提供了一种以功能强化的虫草药性菌质和γ-氨基丁酸配伍的可同时缓解压力和抗疲劳的保健食品及其制备方法，该方法采用二步发酵法将食用菌发酵与乳酸菌发酵有机结合，其中第一步利用虫草和具备抗疲劳功能药性培养基质的双向固体发酵制备兼具虫草和药性培养基质抗疲劳功能的药性菌质，不仅能对易疲劳者产生1+1＞2的生理功效，还可将药性培养基质中的大分子碳源降解为乳酸菌易于利用的小分子碳源，为第二步乳酸菌液体深层发酵产生具备缓解压力作用的γ-氨基丁酸提供必要的营养和碳源，同时通过乳酸菌的降解和转化药性菌质也更易吸收、利用。

（2）本发明制备的保健食品经实验证明具有缓解压力和抗疲劳功能。

（3）本发明采用的制备方法，不仅原料成本低，整个生产过程都采用低温发酵，条件温和，没有毒害物质的摄入，产品安全性、附加值高，可实现规模化生产，市场前景广阔。

（4）本发明制备的保健食品采用片剂、胶囊等剂型，方便携带及服用。

附图说明

图1为本发明缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法的流程图；

图2为试验例2中受试者唾液皮质醇的变化率（起始点100%）。

具体实施方式

以下按照图1工艺流程对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。以下没有特别说明的情况下，百分数均是指重量百分数。

实施例1

1、虫草固体发酵：

①药性培养基质的制作

配方：全粒大麦80%、蝉蛹13.5%、何首乌2%、红景天2%、黄精1%、绞股蓝1%、石膏粉0.5%；

配制方法：按配方比例将各组分混合、粉碎，加水至水分重量含量为65%，121℃灭菌1h，得到药性培养基质；

②接种发酵

将蛹虫草ACCC52027的液体菌种（常规工艺制备）按3%体积质量比接种到①中药性培养基质，即蛹虫草ACCC52027液体菌种的加入的体积量（mL）为药性培养基质的质量（g）的3%（mL/g），18℃培养28天制备具有抗疲劳功能的药性菌质；

2、乳酸菌液体深层发酵：

①发酵培养基制作

配方：药性菌质40g、酵母粉5g，谷氨酸钠15g，自来水1L（即1000g）；

配制方法：按配方比例将药性菌质、酵母粉、谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成pH为5.5的缓冲液，121℃灭菌30min，得到发酵培养基；

②接种发酵

将从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106（保藏编号为：CGMCCNO.5655）液体菌种（MRS培养基28℃静置培养48h）按1%比例接种到①中发酵培养基，即植物乳杆菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%，28℃静置培养72h制备具有缓解压力和抗疲劳功能的发酵液；

3、第2步制备的发酵液首先经过过滤、浓缩、喷雾干燥成粉末，粉末过筛后经沸腾制粒得干燥颗粒，颗粒用颗粒整粒机以20目筛进行整粒，整粒所得颗粒加入相对于整粒所得颗粒重量的0.5%崩解剂羧甲淀粉钠和相对于整粒所得颗粒重量的0.1%润滑剂硬脂酸镁在多维运动混合机中充分混匀5分钟压成片剂，每片0.35g。

实施例2

1、虫草固体发酵：

①药性培养基质的制作

配制方法：按配方比例将各组分混合、粉碎，加水至水分重量含量为60%；121℃灭菌1h，得到药性培养基质；

②接种发酵

将蝙蝠蛾拟青霉ACCC50930的液体菌种（常规工艺制备）按3%体积质量比接种到①中药性培养基质，即蝙蝠蛾拟青霉ACCC50930液体菌种加入的体积量（mL）为药性培养基质的质量（g）的3%（mL/g），18℃培养28天制备具有抗疲劳功能的药性菌质；

2、乳酸菌液体深层发酵：

①培养基制作

②接种发酵

将从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106（保藏编号为：CGMCCNO.5655）液体菌种（MRS培养基28℃静置培养48h）按1%比例接种到①中培养基，即植物乳杆菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%，28℃静置培养72h制备具有缓解压力和抗疲劳功能的发酵液；

3、第2步制备的发酵液首先经过过滤、浓缩、喷雾干燥成粉末，粉末经沸腾造粒机造粒后用颗粒整粒机以20目筛进行整粒，整粒所得颗粒加入相对于整粒所得颗粒重量的0.5%崩解剂羧甲淀粉钠和相对于整粒所得颗粒重量的0.1%润滑剂硬脂酸镁在多维运动混合机中充分混匀5分钟装胶囊，0.5g/粒。

实施例3

1、虫草固体发酵：

①药性培养基质的制作

配方：全粒大麦75%、蝉蛹15%、何首乌3%、红景天2%、黄精2%、绞股蓝2%、石膏粉1%；

配制方法：按配方比例将各组分混合、粉碎，加水至水分重量含量为63%；121℃灭菌1h，得到药性培养基质；

②接种发酵

将蛹虫草ACCC52027的液体菌种（常规工艺制备）按5%体积质量比接种到①中药性培养基质，即蛹虫草ACCC52027液体菌种的加入的体积量（mL）为药性培养基质的质量（g）的5%（mL/g），23℃培养25天制备具有抗疲劳功能的药性菌质；

2、乳酸菌液体深层发酵：

①发酵培养基制作

配方：药性菌质50g、酵母粉7.5g，谷氨酸钠20g，自来水1L（即1000g）；

②接种发酵

将从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106（保藏编号为：CGMCC NO.5655）液体菌种（MRS培养基28℃静置培养48h）按1%比例接种到①中发酵培养基，即植物乳杆菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%，32℃静置培养48h制备具有缓解压力和抗疲劳功效的发酵液；

实施例4

1、虫草固体发酵：

①药性培养基质的制作

配制方法：按配方比例将各组分混合、粉碎，加水至水分重量含量为62%；121℃灭菌1h，得到药性培养基质；

②接种发酵

将蝙蝠蛾拟青霉ACCC50930的液体菌种（常规工艺制备）按5%体积质量比接种到①中药性培养基质，即蝙蝠蛾拟青霉ACCC50930液体菌种的加入的体积量（mL）为药性培养基质的质量（g）的5%（mL/g），28℃培养20天制备具有抗疲劳功能的药性菌质；

2、乳酸菌液体深层发酵：

①发酵培养基制作

②接种发酵

将从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106（保藏编号为：CGMCCNO.5655）液体菌种（MRS培养基28℃静置培养48h）按1%比例接种到①中发酵培养基，即植物乳杆菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%，32℃静置培养48h制备具有缓解压力和抗疲劳功能的发酵液；

以下通过毒理及功能试验来进一步说明本发明。由于本发明的片剂胶囊除剂型、辅料不同外，两者的主要原料、每日服用量、功效成分都相同，不影响产品的安全和功能。故以下针对胶囊进行毒理和功能试验。

试验例1

毒理试验：

试验目的：检验产品是否具有毒性

试验材料：实施例4制得的胶囊。

样品：人体口服推荐摄入量为每日两次，每次两粒，0.5g/粒，（体重按60kg计），折合剂量0.03g/kg·bw。

实验动物：清洁级ICR小鼠、SD大鼠及饲料。

饲养条件：温度20-25℃、相对湿度40%-70%的屏障系统。

试验方法：

小鼠急性经口毒性试验：取实施例4制得的胶囊，用无菌水配制成0.500g/mL，按最大灌胃量20mL/kg·bw一日内二次性灌胃给养，受试物给予剂量为20.0g/kg·bw。

Ames试验：取实施例4制得的胶囊，用无菌水配制成0.500g/mL，为5000ug/皿的剂量，试验设5个剂量，1000、200、40、8ug/皿4个剂量用无菌水按一定倍比逐级稀释配制成10、2、0.4、0.08mg/mL，加样量均为0.1mL/皿，加入0.1mL/皿，同时设阳性、阴性及溶剂对照，计数每皿回变菌落数。

小鼠骨髓细胞微核试验：以40mg/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，无菌水为阴性对照，试验组3个剂量分别为10.0g/kg·bw、5.0g/kg·bw、2.5g/kg·bw，取实施例4制得的胶囊用无菌水配制成0.5、0.25、0.125g/mL，以20mL/kg·bw灌胃2次，采用30h给受试物法，两次给样间隔24h，第二次给样6h后处死动物，取胸骨常规制片、镜检、每鼠计数1000个骨髓嗜多染红细胞，观察含微核的嗜多染红细胞并观察微核发生率。

小鼠精子畸形试验：以40mg/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，无菌水为阴性对照，试验组3个剂量分别为10.0g/kg·bw、5.0g/kg·bw、2.5g/kg·bw，取实施例4制得的胶囊用无菌水配制成0.5、0.25、0.125g/mL，以20mL/kg·bw灌胃，每天1次，连续5d。于首次给样后的第35天处死动物，取两侧附睾精子滤液按常规制片、镜检，每鼠计数1000个完整的精子，计算精子畸形发生率。

30天喂养试验：实施例4制得的胶囊人体推荐量1.4g/人/天，按人体推荐量的30、65、100倍设0.70g/kg·bw/d、1.52g/kg·bw/d、2.33g/kg·bw/d设三个剂量组，另设一个空白对照组0g/kg·bw，受试样品掺入基础饲料中饲喂大鼠，连续喂养30天，每周称1次体重和2次食物摄入量，计算每周及总的食物利用率，每天观察有无中毒变现和死亡，试验结束观察血液学、血液生化、脏器系数指标，并进行病理学检查。

试验结果：

1、急性经口毒性试验结果：受试样品对雌雄性小鼠急性经口的最大耐受量（MTD）均大于20.0g/kg·bw，属无毒级。

2、三项遗传毒性试验结果：Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性。

3、30天喂养试验结果：实验期间，动物生长发育良好，各剂量组体重、食物利用率、脏器重量、脏器系数均无异常改变，血液学指标与生化各项指标均在正常范围，各脏器病理学检查均未见与受试品相关的病理改变、给予人体推荐量100倍的受试物未观察到有害作用。

试验例2

缓解压力功能试验：

试验目的：检验产品对人体是否具有缓解压力的功能

试验材料：实施例4制得的胶囊。

样品：人体口服推荐量为每日2次，每次2粒，样品1号、2号二者的包装、外观基本相同，但其中一个为实施例4制得的胶囊，另一个为安慰剂。

受试者选择：受试者为工作压力大的白领，年龄在25-45岁，性别不限，凡符合上述条件而自愿参加并保证配合者均可纳入试验。排除以下人员：对保健食品过敏者；短期内服用与受试功能相关的物品，影响到对结果的判断。

试验方法：当人体处在压力的状态下，唾液中就会分泌皮质醇，因此可以通过以唾液皮质醇为压力指标评价受试物缓解压力的作用。受试者随机分为试食组和安慰剂对照组，每天按推荐剂量服用，连续服用4周。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。结果如图2所示。图2为受试者唾液皮质醇的变化率（起始点100%）。由图2可知，与对照组相比，试食组受试者唾液皮质醇增加显著减少（p<0.01），说明实施例4制得的胶囊具有缓解压力的功能。

试验例3

抗疲劳功能试验：

试验目的：检验产品是否具有抗疲劳的功能

试验材料：实施例4制得的胶囊。

样品：人体口服推荐摄入量为每日两次，每次两粒，每粒0.5g/粒（体重按60kg计），0.03g/kg·bw，取胶囊内容物进行试验。

实验动物：清洁级ICR小鼠及饲料。

饲养条件：温度20-25℃、相对湿度40%-70%的屏障系统。

实验动物：清洁级ICR小鼠、SD大鼠及饲料。

饲养条件：温度20-25℃、相对湿度40%-70%的屏障系统。

试验方法：按照《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）评价标准进行动物实验，设低、中、高3个剂量和阴性对照组（无菌水），低、中、高3个剂量组分别相当于人用最大推荐剂量的5倍、10倍、30倍，即0.15g/kg·bw/d，0.30g/kg·bw/d，0.90g/kg·bw/d，低、中、高3个剂量配制浓度分别为15、30、90mg/mL。经口每日一次给予小鼠相应剂量的受试物，小鼠灌胃量为10mL/kg·bw，连续灌胃一个月后观测游泳实验结果，以及血乳酸以及肝糖原值。

试验结果：经口给小鼠0.15g/kg·bw/d，0.30g/kg·bw/d，0.90g/kg·bw/d低、中、高3个剂量的受试样品，中、高剂量组小鼠负重游泳时间明显长于对照组（P<0.05,P<0.0l）；游泳后0min高、中，低剂量组小鼠血乳酸明显低于对照组（P<0.01），游泳后30min中、高组小鼠血乳酸明显低于对照组（P<0.05,P<0.0l）；游泳后高、中剂量组小鼠肝糖原明显高于对照组（P<0.05）说明该样品具有抗疲劳的功能。

具体实验结果数据如下：

表1实施例4制得胶囊对小鼠游泳时间的影响

组别	游泳时间/min	P值
			阴性对照组	6.67±3.77
低剂量组	13.05±9.24	0.13
			中剂量组	16.19±11.56*	0.039*
高剂量组	19.26±11.34**	0.005**

注：与阴性对照组比较，*P<0.05,**P<0.01

表2实施例4制得胶囊对游泳前后小鼠血乳酸值的影响

注：与阴性对照组比较，*P<0.05,**P<0.01

表3实施例4制得胶囊对小鼠游泳后肝糖原时间的影响

组别	肝糖原/mg/g肝组织	P值
			阴性对照组	2.24±0.31
低剂量组	2.53±0.92	0.92
			中剂量组	3.93±0.65	0.036*
高剂量组	3.78±0.52	0.045*

注：与阴性对照组比较，*P<0.05,**P<0.01 。

Claims

1.一种缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的虫草液体菌种的接种量为2%-10%。

3.根据权利要求1所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的药性培养基质的制备：先称取以下重量百分含量的原料：全粒大麦70%-80%、蝉蛹10%-20%、何首乌1%-3%、红景天1%-3%、黄精1%-2%、绞股蓝1%-2%、石膏粉0.5%-1.5%，将各组分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量为60%-65%，116℃-126℃灭菌0.5h-1.5h。

4.根据权利要求3所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的药性培养基质的制备：先称取以下重量百分含量的原料：全粒大麦75%、蝉蛹15%、何首乌3%、红景天2%、黄精2%、绞股蓝2%、石膏粉1%；将各组分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量为60%-65%，121℃灭菌1h。

5.根据权利要求1所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的双向固体发酵的条件为：发酵温度在18-28℃，发酵时间在20-30天。

6.根据权利要求1所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的发酵培养基采用以下重量份的原料：水1000重量份、药性菌质40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸钠15-20重量份，将药性菌质、酵母粉和谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成pH为5-6的缓冲液，116℃-126℃灭菌20min-40min。

7.根据权利要求1所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的乳酸菌的接种量为1%-5%。

8.根据权利要求1所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的液体深层发酵的条件为：发酵温度在28-32℃，发酵时间在48-72h。

9.根据权利要求1所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述的缓解压力及抗疲劳的保健食品的剂型为胶囊或片剂。

10.根据权利要求1～9任一项所述的制备方法制备的缓解压力及抗疲劳的保健食品。