CN103900885A - 绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法 - Google Patents
绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103900885A CN103900885A CN201410146816.5A CN201410146816A CN103900885A CN 103900885 A CN103900885 A CN 103900885A CN 201410146816 A CN201410146816 A CN 201410146816A CN 103900885 A CN103900885 A CN 103900885A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- alcohol
- skin
- paraffin
- time
- 10min
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
本发明涉及动物组织学技术领域蛋白定位的辅助研究，具体涉及到在显微观察石蜡切片的制备及染色方法。一种绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，其主要特点在于包括有步骤为：取皮样；样品的固定：皮肤样品的软化；皮肤样品的脱水：石蜡处理：皮肤样品常规包埋；皮肤样品切片。本发明的优点是本发明流程简单，操作方便，获得的切片完整，图片结构清晰。适用于实验室科研工作者对绒山羊皮肤形态结构的研究。在光镜下进行观察，本发明能够完整的呈现皮肤的表皮和真皮结构，切片没有褶皱和破碎，且在切片过程中不容易发生碎片现象。
Description
技术领域
本发明涉及动物组织学技术领域蛋白定位的辅助研究，具体涉及到在显微观察石蜡切片的制备及染色方法。
背景技术
陇东绒山羊是辽宁绒山羊和内蒙绒山羊与当地山羊杂交培育的一个新类群，正准备申请国家鉴定验收。据测定统计，成年公羊的平均产绒量为578g；成年母羊平均产绒量为451g；屠宰率为47.08%。主要分布于甘肃省环县、华池县和庆城县。绒山羊业是当地支柱产业,山羊绒是绒山羊的主要产品。故对绒山羊皮肤的研究一度成为研究的热点。从结构的角度进行研究，皮肤石蜡切片的制作是必不可少的一步。由于皮肤缺乏实质的组织，角化程度又较高，相对比较脆，这在切片过程中会带来很大的挑战。而相关文献中对皮肤石蜡切片制作过程并无详细的描述。这使得研究者在实验过程中屡屡受挫。拥有一套最佳的样品处理方法，为毛囊组织学的研究提供技术指导和理论依据，对实现人工调控绒生长和加快绒山羊育种进展具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于避免现有技术的不足之处而提供一种绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法。以解决切片完整，没有碎裂，在光镜下观察结构清晰，组织结构完整，用于绒山羊皮肤显微结构的研究。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，其主要特点在于包括有步骤为：
（1）取皮样；选取成年绒山羊，从体侧部用剪刀剪取0.8-1.2cm2的皮样；
（2）样品的固定：剪取的皮样展平在事先准备好的玻璃片上，并置入放有4%多聚甲醛的固定液的容器内固定，2-4℃，12-24h；
（3）皮肤样品的软化：将固定好的皮样置入软化液软化，室温，48h；
（4）皮肤样品的脱水：在18-22℃下依次进行，70%酒精5-6h，80%酒精12h，第一次95%酒精2h，第二次95%酒精1h50min，第一次100%酒精2h,第二次100%酒精1h50min，1:1的酒精二甲苯10min，二甲苯6min30s；
（5）石蜡处理：在65-70℃的烘箱中依次进行，置入1:1石蜡二甲苯10min，然后第一次置入石蜡2h30min，第二次置入石蜡2h，第三次置入石蜡1h50min；皮肤样品常规包埋；
（7）皮肤样品切片：Leica石蜡切片机室温下切2-5um厚。
所述的绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，还包括有步骤：
（8）皮肤样品HE染色：依次进行使用二甲苯脱蜡两次，每次10min；然后第一次用100%酒精10min；第二次用100%酒精5min；95%酒精脱水两次，每次5min；80%酒精5min；70%酒精5min;蒸馏水3min；苏木素(Delafield）10min；蒸馏水洗1min；1%盐酸酒精5S；自来水返蓝17min;蒸馏水洗1min；1%伊红40s；蒸馏水洗1min；70%酒精5s；80%酒精5s；95%酒精两次，每次5min；100%酒精2次，每次10min；二甲苯两次，每次10min，最后常规封片。
所使用的Delafield苏木素配制方法：苏木精4g；无水乙醇25ml；10%铵矾水溶液400ml；甘油100ml；甲醇100ml。
所使用的1%水溶性伊红配制方法（一般一次配制500ml）伊红1g；蒸馏水99ml；冰醋酸2-3滴。
所使用的1%盐酸酒精配制方法（一般一次配制500ml）70%酒精99ml；浓盐酸1ml。
所述的绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，所述的软化液为：
软化液的配制：60ml甘油与40ml60%酒精，60%酒精为60ml蒸馏水加入35ml95%酒精。
本发明的有益效果：本发明流程简单，操作方便，获得的切片完整，图片结构清晰。适用于实验室科研工作者对绒山羊皮肤形态结构的研究。
在光镜下进行观察，本发明能够完整的呈现皮肤的表皮和真皮结构，切片没有褶皱和破碎，且在切片过程中不容易发生碎片现象。
附图说明：
图1：为本发明制备的绒山羊皮肤石蜡切片显微图；
图2：为绒山羊皮肤毛囊的横切石蜡切片显微图；
图3：为绒山羊皮肤毛囊的纵切石蜡切片显微图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1：一种绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，其主要特点在于包括有步骤为：
（1）取皮样；选取成年绒山羊，从体侧部用剪刀剪取0.8cm2的皮样；
（2）样品的固定：剪取的皮样展平在事先准备好的玻璃片上，并置入放有4%多聚甲醛的固定液的容器内固定，2℃，12h；
（3）皮肤样品的软化：将固定好的皮样置入软化液软化，室温，48h；
（4）皮肤样品的脱水：在18℃下依次进行，70%酒精5h，80%酒精12h，第一次95%酒精2h，第二次95%酒精1h50min，第一次100%酒精2h,第二次100%酒精1h50min，1:1的酒精二甲苯10min，二甲苯6min30s；
（5）石蜡处理：在65-70℃的烘箱中依次进行，置入1:1石蜡二甲苯10min，然后第一次置入石蜡2h30min，第二次置入石蜡2h，第三次置入石蜡1h50min；
（6）皮肤样品常规包埋；
（7）皮肤样品切片：Leica石蜡切片机室温下切5um厚。
所述的软化液为：软化液的配制：60ml甘油与40ml60%酒精，60%酒精为60ml蒸馏水加入35ml95%酒精。
实施例2：一种绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，包括有步骤为：
（1）取皮样；选取成年绒山羊，从体侧部用剪刀剪取1.2cm2的皮样；
（2）样品的固定：剪取的皮样展平在事先准备好的玻璃片上，并置入放有4%多聚甲醛的固定液的容器内固定，4℃，24h；
（3）皮肤样品的软化：将固定好的皮样置入软化液软化，室温，48h；
（4）皮肤样品的脱水：在22℃下依次进行，70%酒精6h，80%酒精12h，第一次95%酒精2h，第二次95%酒精1h50min，第一次100%酒精2h,第二次100%酒精1h50min，1:1的酒精二甲苯10min，二甲苯6min30s；
（5）石蜡处理：在70℃的烘箱中依次进行，置入1:1石蜡二甲苯10min，然后第一次置入石蜡2h30min，第二次置入石蜡2h，第三次置入石蜡1h50min；
（6）皮肤样品常规包埋；
（7）皮肤样品切片：Leica石蜡切片机室温下切5um厚。
所述的软化液为：软化液的配制：60ml甘油与40ml60%酒精，60%酒精为60ml蒸馏水加入35ml95%酒精。
实施例3：一种绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，包括有步骤为：
步骤（1）至步骤（7）与实施例1或实施例2相同。
（8）皮肤样品HE染色：依次进行使用二甲苯脱蜡两次，每次10min；然后第一次用100%酒精10min；第二次用100%酒精5min；95%酒精脱水两次，每次5min；80%酒精5min；70%酒精5min;蒸馏水3min；苏木素(Delafield）10min；蒸馏水洗1min；1%盐酸酒精5S；自来水返蓝17min;蒸馏水洗1min；1%伊红40s；蒸馏水洗1min；70%酒精5s；80%酒精5s；95%酒精两次，每次5min；100%酒精2次，每次10min；二甲苯两次，每次10min，最后常规封片。
所使用的Delafield苏木素配制方法：苏木精4g；无水乙醇25ml；10%铵矾水溶液400ml；甘油100ml；甲醇100ml。
所使用的1%水溶性伊红配制方法（一般一次配制500ml）伊红1g；蒸馏水99ml；冰醋酸2-3滴。
所使用的1%盐酸酒精配制方法（一般一次配制500ml）70%酒精99ml；浓盐酸1ml。实验例：一种绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法：
材料和方法
1.皮肤样品的固定：剪取皮样展平在事先准备好的玻璃片上，并置入放有4%多聚甲醛的固定液的容器内固定，2-4℃，12-24h；
2.皮肤样品的软化：将固定好的皮样置入软化液软化，室温，48h；软化液的配制：60ml甘油+40ml60%酒精（60ml蒸馏水+35ml95%酒精）
3.皮肤样品的脱水：在18-22℃下进行：
70%酒精5-6h，80%酒精12h，第一次95%酒精2h，第二次95%酒精1h50min，第一次100%酒精2h,第二次100%酒精1h50min，酒精二甲苯(1:1)10min，二甲苯6min30s；
4.石蜡处理：在65-70℃的烘箱中进行：石蜡二甲苯（1:1）10min，第一次蜡2h30min，第二次蜡2h，第三次蜡1h50min。
5.皮肤样品常规包埋
6.皮肤样品切片：Leica石蜡切片机室温下切2-5um厚。
7.皮肤样品HE染色：第一次使用二甲苯脱蜡两次，每次10min（此处不能为范围，时间要求很严格）；再100%酒精I10min；100%酒精II5min；95%酒精脱水两次，每次5min；80%酒精5min；70%酒精5min;蒸馏水3min；苏木素(Delafield）10min；蒸馏水洗1min；1%盐酸酒精5S；自来水返蓝17min;蒸馏水洗1min；1%伊红40s；蒸馏水洗1min；70%酒精5s；80%酒精5s；95%酒精两次，每次5min；100%酒精2次，每次10min；二甲苯两次，每次10min，最后常规封片。
所使用的Delafield苏木素配制方法：苏木精4g；无水乙醇25ml；10%铵矾水溶液400ml；甘油100ml；甲醇100ml。
所使用的1%水溶性伊红配制方法（一般一次配制500ml）伊红1g；蒸馏水99ml；冰醋酸2-3滴。
所使用的1%盐酸酒精配制方法（一般一次配制500ml）70%酒精99ml；浓盐酸1ml。
见图1，为使用本发明制备的绒山羊皮肤石蜡切片显微图，图中能够完整的呈现皮肤的表皮和真皮结构，切片没有褶皱，破碎。
见图2，为使用本发明制备的绒山羊皮肤毛囊的横切石蜡切片显微图，能够清晰的看到毛囊所处的时期，汗腺结构清晰。
见图3，为使用本发明制备的绒山羊皮肤毛囊的纵切石蜡切片显微图，能够清晰的反应毛囊的结缔组织鞘、外根鞘和内根鞘。
上述三个切片均符合实验要求。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，其特征在于包括有步骤为：
（1）取皮样；选取成年绒山羊，从体侧部用剪刀剪取0.8-1.2cm2的皮样；
（2）样品的固定：剪取的皮样展平在事先准备好的玻璃片上，并置入放有4%多聚甲醛的固定液的容器内固定，2-4℃，12-24h；
（3）皮肤样品的软化：将固定好的皮样置入软化液软化，室温，48h；
（4）皮肤样品的脱水：在18-22℃下依次进行，70%酒精5-6h，80%酒精12h，第一次95%酒精2h，第二次95%酒精1h50min，第一次100%酒精2h,第二次100%酒精1h50min，1:1的酒精二甲苯10min，二甲苯6min30s；
（5）石蜡处理：在65-70℃的烘箱中依次进行，置入1:1石蜡二甲苯10min，然后第一次置入石蜡2h30min，第二次置入石蜡2h，第三次置入石蜡1h50min；
（6）皮肤样品常规包埋；
（7）皮肤样品切片：Leica石蜡切片机室温下切2-5um厚。
2.如权利要求1所述的绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，其特征在于还包括有步骤：
（8）皮肤样品HE染色：依次进行使用二甲苯脱蜡两次，每次10min；然后第一次用100%酒精10min；第二次用100%酒精5min；95%酒精脱水两次，每次5min；80%酒精5min；70%酒精5min;蒸馏水3min；苏木素(Delafield）10min；蒸馏水洗1min；1%盐酸酒精5S；自来水返蓝17min;蒸馏水洗1min；1%伊红40s；蒸馏水洗1min；70%酒精5s；80%酒精5s；95%酒精两次，每次5min；100%酒精2次，每次10min；二甲苯两次，每次10min，最后常规封片。
3.如权利要求1所述的绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法，其特征在于所述的软化液为：
软化液的配制：60ml甘油与40ml60%酒精，60%酒精为60ml蒸馏水加入35ml95%酒精。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410146816.5A CN103900885A (zh) | 2014-04-10 | 2014-04-10 | 绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410146816.5A CN103900885A (zh) | 2014-04-10 | 2014-04-10 | 绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103900885A true CN103900885A (zh) | 2014-07-02 |
Family
ID=50992348
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410146816.5A Pending CN103900885A (zh) | 2014-04-10 | 2014-04-10 | 绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103900885A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106525530A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-03-22 | 河南科技大学 | 一种树木茎干组织的石蜡切片方法 |
| CN107843470A (zh) * | 2017-10-13 | 2018-03-27 | 济南金域医学检验中心有限公司 | 一种皮肤组织切片的制作方法 |
| CN111238900A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-06-05 | 青海民族大学 | 一种高原林蛙皮肤石蜡切片的制备方法 |
| CN111982647A (zh) * | 2020-08-21 | 2020-11-24 | 西南医科大学附属中医医院 | 一种微小组织石蜡包埋前处理试剂盒及其使用方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1083212A (zh) * | 1993-06-08 | 1994-03-02 | 山西大学 | 人体及动物组织简便快速石蜡切片法 |
| US5482676A (en) * | 1992-11-10 | 1996-01-09 | Camiener; Gerald W. | Visualization system for retrieval, identification, and positioning of biological samples for subsequent microscopic examination |
| CN102116711A (zh) * | 2011-01-31 | 2011-07-06 | 山东东方海洋科技股份有限公司 | 一种大叶藻胚石蜡切片的制作方法 |
| CN102279121A (zh) * | 2011-06-28 | 2011-12-14 | 黑龙江八一农垦大学 | 动物组织石蜡切片的绿色环保制作技术 |
| CN103234797A (zh) * | 2013-04-28 | 2013-08-07 | 中南大学湘雅三医院 | 人体或动物组织的脱水包埋改良方法 |
| KR20130136344A (ko) * | 2012-06-04 | 2013-12-12 | 국립암센터 | 수용성 고분자를 포함하는 검체 시료의 응집용 조성물 |
| CN103630421A (zh) * | 2013-12-03 | 2014-03-12 | 沈阳农业大学 | 一种芍药成熟种胚的石蜡切片制作方法 |
-
2014
- 2014-04-10 CN CN201410146816.5A patent/CN103900885A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5482676A (en) * | 1992-11-10 | 1996-01-09 | Camiener; Gerald W. | Visualization system for retrieval, identification, and positioning of biological samples for subsequent microscopic examination |
| CN1083212A (zh) * | 1993-06-08 | 1994-03-02 | 山西大学 | 人体及动物组织简便快速石蜡切片法 |
| CN102116711A (zh) * | 2011-01-31 | 2011-07-06 | 山东东方海洋科技股份有限公司 | 一种大叶藻胚石蜡切片的制作方法 |
| CN102279121A (zh) * | 2011-06-28 | 2011-12-14 | 黑龙江八一农垦大学 | 动物组织石蜡切片的绿色环保制作技术 |
| KR20130136344A (ko) * | 2012-06-04 | 2013-12-12 | 국립암센터 | 수용성 고분자를 포함하는 검체 시료의 응집용 조성물 |
| CN103234797A (zh) * | 2013-04-28 | 2013-08-07 | 中南大学湘雅三医院 | 人体或动物组织的脱水包埋改良方法 |
| CN103630421A (zh) * | 2013-12-03 | 2014-03-12 | 沈阳农业大学 | 一种芍药成熟种胚的石蜡切片制作方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 孟晓萍等: "法医病理学皮肤切片制作的方法与探讨", 《数理医药学杂志》 * |
| 席海燕: "绒山羊皮肤干细胞定位、迁移及次级毛囊生长期差异表达基因文库的构建与筛选", 《中国博士学位论文全文数据库 农业科技辑》 * |
| 席海燕: "绒山羊皮肤干细胞定位、迁移及次级毛囊生长期差异表达基因文库的构建与筛选", 《中国博士学位论文全文数据库 农业科技辑》, no. 9, 15 September 2009 (2009-09-15) * |
| 杨建平: "皮革样化皮肤复原切片技术", 《法医学杂质》 * |
| 林吉茂: "山羊皮肤发育形态学和免疫组织化学研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106525530A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-03-22 | 河南科技大学 | 一种树木茎干组织的石蜡切片方法 |
| CN106525530B (zh) * | 2016-11-04 | 2019-07-12 | 河南科技大学 | 一种树木茎干组织的石蜡切片方法 |
| CN107843470A (zh) * | 2017-10-13 | 2018-03-27 | 济南金域医学检验中心有限公司 | 一种皮肤组织切片的制作方法 |
| CN111238900A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-06-05 | 青海民族大学 | 一种高原林蛙皮肤石蜡切片的制备方法 |
| CN111982647A (zh) * | 2020-08-21 | 2020-11-24 | 西南医科大学附属中医医院 | 一种微小组织石蜡包埋前处理试剂盒及其使用方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103900885A (zh) | 绒山羊皮肤用于显微观察石蜡切片的制备方法 | |
| CN103900883A (zh) | 绒山羊皮肤用于透射电镜观察的超薄切片的制备方法 | |
| CN102183394A (zh) | 一种洋水仙根尖染色体制片的方法 | |
| CN103630421A (zh) | 一种芍药成熟种胚的石蜡切片制作方法 | |
| CN107952117A (zh) | 3d打印人工皮肤的方法 | |
| CN103553847A (zh) | 一种利用制革废弃牛毛制备缓释肥外包膜的方法 | |
| CN103695557A (zh) | 一种基于茎尖的银杏染色体核型分析方法 | |
| CN103976908A (zh) | 一种富含植物多肽的植物提取物组合物及其在化妆品中的应用 | |
| CN105241698A (zh) | 一种黄石爬鮡皮肤石蜡切片的制作方法 | |
| CN105326863B (zh) | 一种利用自体毛囊黑色素细胞制备用于治疗白癜风复合膜的方法 | |
| CN105928752B (zh) | 一种昆虫成虫石蜡切片染色方法 | |
| CN106474547B (zh) | 一种适合细胞生长的生物支架材料及其制备方法 | |
| CN104483178A (zh) | 赤点石斑鱼成鱼染色体的制备方法 | |
| CN108324989A (zh) | 一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用 | |
| CN102564821A (zh) | 一种梅花茎尖染色体制片方法 | |
| CN108187142A (zh) | 一种干细胞在生物组织修复中的应用 | |
| CN107631921A (zh) | 一种大花红山茶花丝染色体制片方法 | |
| CN105241686B (zh) | 小鲵科动物视网膜显微组织切片的制备方法 | |
| CN110408585A (zh) | 一种利用耳后皮肤培养成纤维细胞的方法 | |
| CN106568632A (zh) | 一种石蜡切片样品转换成扫描电镜样品的方法 | |
| CN103993095A (zh) | 一种新麦草属植物细胞染色体中期分裂相标本制备方法 | |
| CN104006997B (zh) | 一种赖草属植物根尖染色体制片方法 | |
| CN103091140A (zh) | 一种虾类生殖细胞染色体的制备方法 | |
| CN105806680A (zh) | 一种植物组织快速石蜡制片的方法 | |
| CN102579735A (zh) | 男性型头皮舒缓育发露及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20140702 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |