CN1083212A - 人体及动物组织简便快速石蜡切片法 - Google Patents

Abstract

本发明属生物学显微切片技术领域，其特征：配 制的固定染色液，使操作步骤固定和染色一步完成， 染色中媒染、染色一步完成，不需要分色，染色后直接 用无水酒精脱水；配制的兰化溶液只需10分钟就能 完成兰化；配制的伊红滴染液，只需2—3秒完成复 染。本切片法操作简便，制片速度快，节省药物消耗， 染色均匀清晰，制片质量容易保证。特别适用于要求 快速完成的病理切片，为各级医院简便，快速确诊提 供了条件。

Description

本发明人体及动物组织简便快速石蜡切片法，属于生物学显微切片技术领域，特别适用于要求快速完成的病理切片。

背景技术，在“实用生物学制片技术”高等教育出版社1989年5月出版及“实用生物学制片手册”湖南教育出版社1987年4月出版的书籍中介绍及目前生物、医院部门主要采用常规石蜡切片法、组织块整块石蜡切片法及冰冻切片法等，其中应用最广泛的是石蜡切片法，其染色又以HE（苏木精、伊红）染色最为普遍。经过国内外专利文献检索，尚没有发现其他新方法。

常规石蜡切片法，其操作流程是组织块固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、粘片、烤片、脱蜡、复水、染色、脱水、透明、封片。其方法特点是先切片后染色。其不足之处是操作步骤多而繁杂，所用器皿多，消耗药物也多，不能快速完成病理切片。

另外用于动物材料的组织块整块染色石蜡切片法，其操作流程是组织块固定、整块染色、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、粘片、烤片、脱蜡、封片。其方法特点：组织块整块染色后再切片。它在操作程序上比常规石蜡切片简化，其不足之处，固定和染色不能同时进行，染色全过程时间长，约需要5天以上（包括染色前后处理）。所以该法用于一般组织细胞学观察或标本片的工厂化生产尚可，但不适用于要求快速完成的病理切片。

此外，目前对人体病理切片常采用冰冻切片法，这种方法常用于手术扎出物的急速诊断。能快速，但不简便，冰冻程度不易保持恒定，一次切片数量很有限，故成批处理很不方便。从上可见，现有技术均存在一些不足之处，列表如下：

	方法特征	不足之处	适用范围
				常规石蜡切片法	先切片后染色不简便不快速	（1）操作步骤多，操作繁锁；（2）所需器皿多，消耗药物多；（3）制片清晰度靠入经验控制。	不能快速完成病理切片
组织块整块染色石蜡切片法	先染色后切片较常规切片法简便而不快速	（1）固定和染色不能同时进行；（2）染色处理全过程长；（3）脱水需按若干级别进行；（4）制片清晰度靠人经验控制。	用于一般组织细胞学观察或工厂化生产标本片，不适于要求快速生成的病理切片
				冰冻切片法	先冷冻后切片再染色。快而不简便	（1）冰冻程度不易保持恒定；（2）制片清晰度靠人经验控制。	供医院临时切片诊断时用不便成批处理

本发明目的，为了克服现有技术不足之处，为人体及动物组织切片发明一种操作简便，制片速度快、制片清晰度易保证的石蜡切片法，为医院等部门简便、快速确诊提供条件。

本发明人体及动物组织简便，快速石蜡切片法，其操作全过程的步骤是：取材→固定并染色→无级脱水→透明→渗蜡→包埋→切片→粘片→烤片→脱蜡→兰化→复染→封片。其特征在于：配制的固定染色液，使操作步骤固定和染色一步完成，染色中媒染、染色一步完成，染色后直接用无水酒精脱水;配制的兰化溶液，使兰化时间短;配制的伊红滴染液，使复染迅速均匀。从而使制片操作步骤简化，操作工艺简便，节省时间，节约药物，提高了制片质量，保证了制片清晰度，是人体及动物组织的简便、快速、质优的石蜡切片法。

下面详细描述本发明的技术特征：

1、固定染色液是本发明切片法的根本和核心。固定染色液的配制是用甲液和乙液按等量混合而成固定染色使用液。

甲液是用90%的冰醋酸配成0.5%的硫酸铁铵溶液，常温下保存备用。

甲液的配制工艺为：制10ml蒸馏水+10ml冰醋酸+0.5g硫酸铁铵，待硫酸铁铵溶解后，再加80ml冰醋酸。

乙液是用甲醇配成1%的苏木精溶液。常温下保存，令其自然熟化备用。

乙液的配制工艺为：100ml甲醇+1g苏木精。

固定染色使用液是在临使用前将甲液和乙液按1∶1混合后就用。若乙液配成时间较短（一个月内），使用时加入0.2%浓度占使用液容积为2%的碘酸钠溶液，可使苏木精迅速熟化。

甲液和乙液混合后的固定染色使用液，既是固定剂，又是染色剂，使组织块在固定的同时就进行苏木精染色。

固定染色使用液作为固定剂来说，甲醇和冰醋酸配合使用，渗透快、固定彻底。

固定染色使用液作为染色剂来说，苏木精为核染料，硫酸铁铵为媒染剂，在它们共同作用下，使细胞核良好着色，而其中的冰醋酸又可防止细胞质（胞浆）着色，故用本发明使用液不需分色，从而使固定、媒染、染色一步完成。

这种固定染色液，将组织块细胞核内的染色质、核仁被苏木精染成褐黑色，而细胞质不着色或着色极浅，这是制片质量的关键。本发明通过对固定染色液的适当配制，使制片清晰度得到理想的效果。也就是说依靠固定染色液的技术本身使染色质量得到了保证，而不是依靠工作者的经验来实现，这使操作简便、省心。而其他苏木精杂色法，主要是靠工作者的经验和技巧来保证染色的质量。

本发明的固定染色液，还可用于已经过固定的保存材料，作染色用。例如对保存于10%甲醛中的人体或动物组织的染色，效果也很好。

2、兰化溶液的配制：用纯酒精或纯甲醇中滴入氨水，使其PH为7-8，即成兰化溶液。

切片兰化步骤是在切片脱蜡之后进行，主要为习惯观察的要求（切片不经兰化已很清楚），通过兰化将细胞核染成的褐黑色变成兰黑色。将脱蜡后的切片放入本发明的兰化溶液中7-10分钟就完成兰化，兰化时间短而效果好。

3、伊红滴染液的配制：用复制伊药红液原液与冰醋酸按3∶1混合而成，其中复制伊红液原液是用现有技术配制的。

复制伊红液原液配制：将伊红（Y或B）0.5g溶入3ml蒸馏水中，一滴一滴的加冰醋酸于其中，边加边搅动，有沉淀生成至浆糊状，再加入蒸馏水数ml，继续滴入冰醋酸至沉淀不再增加。过滤，将沉淀物连同滤纸一起置50-60℃烘箱中烘干，然后将沉淀物溶于100ml甲醇中，即为复制伊红液原液，保存备用。

复染步骤是在切片兰化后进行。复染主要是染细胞质用的。复染时将兰化后的切片用伊红滴染液滴液2-3秒钟，复染完毕。本伊红滴染液，扩散渗透快，染色快而均匀。常规法是用95%酒精溶于伊红液原液中，复染不均匀。

本发明人体及动物组织简便快速质优石蜡切片法，使用固定染色液固定并染色，再通过兰化和伊红滴染液复染，提高了制片质量的清晰度，最后染色结果：核内染色质和核仁呈兰黑色，胞浆呈桔红色，对比明显，染色清晰，达到了标准的HE染色效果。

4、下面简要说明一下，用本发明的固定染色液，使操作步骤固定和染色一步完成的具体操作方法。将新鲜组织块切成约1cm左右厚，临时固定于甲醇∶冰醋酸为3∶1的溶液中，变硬后取出切成2-3mm厚，再置于固定染色液中约12-24小时。根据材料的致密度确定时间。如致密的肝切成2-3mm厚度，置于固定染色液约需24小时。如疏松的肺可切成5mm左右厚度，置于固定染色液约需12小时。从上可见，用本发明的固定染色液，将固定和染色一步完成，省去了专门的染色过程，并使媒染和染色一完成，不需要分色。使操作步骤简化，操作简便、加快了制片速度，并提高和保证了制片质量。

5、本发明石蜡切片法，为无级脱水，将染色后的材料直接置于无水酒精中脱水二次，每次2小时为宜。因本发明的固定染色液中，甲液中含水10%、乙液中不含水，其等量混合液中所含水份仅为5%，所以染色后可以直接用无水酒精脱水（即所谓无级脱水），使脱水过程既省时间、又节约酒精。并在脱水过程中逸出组织中的余色。

常规石蜡切片法脱水是用70%、80%、90%、95%、100%酒精从低浓度酒精开始逐级脱水。不然就会使组织收缩。

根据实践经验，用甲醇脱水亦可，它比酒精逸出余色更快。

本发明简便、快速、质优石蜡切片法，已作过人体子宫基瘤切片、直肠切片、肺切片、平滑肌切片、甲状腺切片，染色清晰均匀。还制作过兔子、大白鼠等动物的肝、肾、睾丸、胃和肠等内脏的切片，达到了标准的HE染色效果都很好。

本发明石蜡切片法的主要优点概括为六个字：简便、快速、质优。具体说主要有如下优点：

1、步骤简化，操作简便。如采用本发明的固定染色液，既是固定剂，又是染色剂，使组织块在固定同时就进行苏木精染色，从而使固定和染色步骤合一、媒染和染色一步完成、不需分色、脱水可采用无级脱水等，所以固定染色液是本发明石蜡切片法的根本和核心。

2、加快了染色和制片的速度。本发明切片法从固定开始至制片结束约用二天左右时间。比常规石蜡切片法省了一个未门固定时间，比组织块整块石蜡切片法，不仅省了一个未门固定时间，而且节省了3-4天染色等处理时间。

3、制片质量容易保证，染色均匀清晰，最后染色结果核内染色质和核仁呈兰黑色，胞浆呈桔红色、对比明显，达到了标准的HE染色效果。克服了其他切片法染色中染色质量依靠工作者的经验和技巧来保证的困难。

4、所用器皿少，节省酒精等药物消耗。

5、应用范围广。适用于要求快速完成的人体和动物病理切片，特别适用于各级医院采用，为简便、快速确诊提供了条件。

Claims (4)

1、人体及动物组织简便快速石蜡切片法，其主要操作步骤是：取材→固定并染色→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→粘片→烤片→脱蜡→兰化→复染→封片，其特征在于：配制的固定染色液，使操作步骤固定和染色一步完成，染色中媒染、染色一步完成，染色后直接用无水酒精脱水；配制的兰化溶液，使兰化时间短；配制的伊红滴染液，使复染迅速均匀。

2、根据权利要求1所述的人体及动物组织简便快速石蜡切片法，其特征在于：固定染色液的配制是用甲液和乙液按等量混合而成，甲液是用90%的冰醋酸配成0.5%的硫酸铁铵溶液，乙液是用甲醇配成1%的苏木精溶液。

3、根据权利要求1所述的人体及动物组织简便快速石蜡切片法，其特征在于兰化溶液的配制：用纯酒精或纯甲醇中滴入氨水，使其PH为7-8，即成兰化溶液。

4、根据权利要求1所述的人体及动物组织简便快速石蜡切片法，其特征在于伊红滴染液的配制：用复制伊红液原液与冰醋酸按3∶1混合而成。