CN103893577B - 一种复方乌天麻片剂、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种复方乌天麻片剂，所述复方的活性成分由乌天麻（铁干天麻）、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿组成。该复方在增强免疫力方面的活性明显优于乌天麻单独给药，并且复方乌天麻组合的醇提物的作用优于水提物，和复方乌天麻全药给药基本相同。另外，通过对比实验也发现，在组方中以乌天麻为君药的活性优于以天麻为君药的活性。

Description

一种复方乌天麻片剂、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种食药两用药物组合，根据的说涉及一种在增强免疫力方面具有良好活性的复方乌天麻片剂、制备方法及其应用。

技术背景

在国内，有学者通过对2006–2010年国家食品药品监督管理局公布的保健食品进行统计，结果发现，2006年全年国家食品药品监督管理局批准的保健食品初次注册申请829件，其中中药保健食品（纯中药、含中药或含中药提取物）458件，约占55.2%；2007年全年批准的保健食品初次注册申请407件，中药保健食品195件，约占48.2%；2008年批准的保健食品初次注册申请642件，中药保健食品303件，约占47.2%；2009年批准的保健食品初次注册申请613件，中药保健食品292件，约占47.6%；2010年，批准的保健食品注册申请650件，经统计中药保健食品333件，约占51.2%。目前，虽然中医药健康食品的发展都具有广阔的市场和良好的前景，但市场上销售的保健品琳琅满目，水平参差不齐，产品的销售额主要靠广告效应和明星效应带动，违规添加西药的问题严重，而缺乏传统中药和现在营养学的带动作用。2012年02月16日，“中国保健协会食物营养与安全专业委员会”会长孙树侠称保健品存在四大问题：假冒伪劣、虚假宣传（夸大）、说明书标志混乱（夸大或扩大“保健功能”）、辅料的问题。同时中国消费者协会统计的2009年受理投诉情况显示，保健食品投诉量同比上升22.6%，居投诉增幅第四位，保健品已成全国消费投诉的七大热点之一。

保健品市场的混乱还与我国当前保健品行业集中程度低、恶性竞争问题严重有关。据统计，我国现在的保健品厂家约有1000多家，其中，排名前十的厂家的产值还不到行业总产值的25%，产值在10万元以下的厂家占38%，产值在10万元到100万元的厂家占41%。正是由于我国目前保健品厂家规模普遍较小，研发能力不强，所以只能跟风模仿国内外大厂家的产品。这就导致保健品厂家往往是一窝蜂地去做某类产品，靠打价格战来占领市场，而当这类产品利润空间缩小，被做“烂”了时，厂家们又会一窝蜂地转战到下一个产品中。靠价格低来占领市场，不免会影响保健品品质。从欧美植物药保健品市场看，虽然这些国家的药典中的植物药非常有限，但严格质量控制规范下制备出的标准化提取物产品，市场分额巨大。Bashar Saad等（eCAM,2005;2(4),pp475–479）在《Tradition and Perspectives ofArab Herbal Medicine:A Review》一文中称，曾经受到主流西医学长期排斥的补充和替代医学（Complementary and Alternative Medicine，简称CAM），包括草本药物，逐渐受到西方国家民众的广泛欢迎，而且被主流医学界逐步接受；草本药物在西方国家广泛的民众基础为补充和替代医学在西方国家的进一步发展营造了一个良好的环境，也为传统中国草本药物进一步走向世界尊定了良好的基础。Stephen Bent等（Journal of General InternalMedicine,2008,23(6),pp854-859）认为，近年来，作为膳食补充的草本植物，逐渐受到重视，大约被20%的人群所长期食用。

传统医学认为体内“正气”旺盛，可以抵御各种“邪气”（致病因素）的侵袭，传统医学非常强调“正气”的作用，认为疾病的发生、发展及转化取决于正邪斗争的消长，从而提出了“扶正祛邪”的基本治疗思路，即强调从整体出发，增强机体的免疫力以与疾病抗争。西医认为免疫力是人体免疫系统进行自我保护的一种能力，主要的作用之一是身体抵抗细菌或病毒等感染的能力。

总之，天麻属于药食两用品，开发天麻保健食品需要按新保健食品申报程序申报。截至目前，通过国家药品监督管理局批准的含有天麻的保健品共有28个，分别是免疫调节、延缓衰老、改善睡眠、调节血脂、辅助降血压等功能。天麻具有多种有效成分，但是传统的乌天麻或天麻单独给药，往往存在活性不理想的问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种复方乌天麻片剂，所述复方的活性成分由乌天麻（铁干天麻）、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿组成。

所述复方乌天麻片剂乌天麻、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿混合物的乙醇提取物。

所述乌天麻、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿组成的重量比8-15:3-5:3-5:1-2。

所述乌天麻、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿组成的重量比24:8:8:3。

一种复方乌天麻片剂的制备方法，包括以下步骤：

1）根据权利要求4、5所述配方称取药材，粉碎混合，分别用5倍重量的70%的乙醇回流提取3次，混合，得到提取液；

2）将提取液调温到50℃，回收至无醇味，稀释到每升提取液含0.6kg的原药材；

3）冷却提取液至5±3℃，静置，取上清液，浓缩，收密度1.4的浸膏；

4）将浸膏加辅料制备得到复方乌天麻片剂。

步骤4）所述为：所述配方由上述所述浸膏和辅料组成；所述辅料的配方为：乳糖、交联羧甲基纤维素钠、PVPK90的水溶液和硬脂酸镁。

上述所述PVPk90水溶液的浓度为4%；所述交联羧甲基纤维素钠全部为内加，添加量为总重量的5%；硬脂酸镁的添加量为总重量的1%。

根据上述所述配方称取处方量原辅料，混合均匀，加入适量4%的粘合剂制成适宜的软材，过30目筛制粒，在50±5℃干燥至水分<3.0％，用30目筛整粒，加硬脂酸镁，混合压片，得到复方乌天麻片剂。

上述所述的复方乌天麻片剂在制备治疗增强免疫力药物中应用。

本发明的有益技术效果是：本发明提供了一种复方乌天麻提取物及复方乌天麻片剂，该复方在增强免疫力方面的活性明显优于乌天麻单独给药，并且复方乌天麻组合的醇提物的作用优于水提物，和复方乌天麻全药给药基本相同。另外，通过对比实验也发现，在组方中以乌天麻为君药的活性优于以天麻为君药的活性。

具体实施例方式

实施例1复方乌天麻提取物提取方法的考察

1、复方乌天麻提取物的制备

根据乌天麻、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿重量比24:8:8:3的配方称取混合药材粉末9份样品，每份样品4.0g，加提取溶媒40ml按表1条件提取，过滤，提取液调温到50℃，回收至无醇味，稀释到每升提取液含0.6kg的原药材；冷却提取液至5±3℃，静置，取上清液，浓缩，收密度1.4的浸膏；用甲醇溶解浸膏，并定容至20ml，摇匀，进行HPLC检测，按外标法以峰面积计算天麻素的含量。结果表明：以70%乙醇作溶媒的提取率明显高于以水作溶媒的提取率，故提取溶媒采用一定浓度的乙醇；超声与回流对天麻素的提取影响不大，故生产中用70%乙醇回流提取，而实验中两者皆可。

表1双因素方法考察

根据乌天麻、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿重量比24:8:8:3称取药材3份，其中1份采用上述70%乙醇回流提取法制备提取物，得到70%提取组，1份采用上述水回流提取法，得到水提取组，1份药材采用超微粉碎得到全药给药组。称取乌天麻原药材超微粉碎，制备得到乌天麻对照组。

2、复方乌天麻提取物的活性考察

ICR小鼠，雌性，体重17-21g，实验动物按体重随机分成25组，每组6只，每5组为一实验组，每实验组分别为给药70%乙醇提取组、水提取组、全药给药组乌天麻对照组和蒸馏水空白对照组，其中70%乙醇提取组、水提取组、全药给药组和乌天麻对照组给药的剂量为原药材2.0g·kg^-1。将上述药物稀释每天按20mL·kg^-1体重连续灌胃30d后，测定免疫指标。分别为免疫一组：小鼠碳廓清试验；免疫二组：迟发型变态反应(DTH)检测；免疫三组：抗体生成细胞检测(Jeme改良载片法)和小鼠血清溶血素(HC₅₀)的测定；免疫四组：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)和脏器/体重比值；免疫五组：ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)。均按文献方法进行操作。

实验数据以SPSS17.0软件进行单因素方差分析。经方差齐性检验，方差齐的实验数据采用LSD法进行统计，方差不齐的实验数据采用Tambane法进行统计分析。

复方乌天麻提取物对小鼠的体重增长值与对照组比较差异均无显著性(P>0.05)，即该样品对小鼠的体重增长无影。各剂量组脾指数与对照组比较差异均无显著性(P>0.05)，70%乙醇提取组和全药给药组胸腺指数与对照组比较差异有显著性(P<0.05)，提示70%乙醇提取组和全药给药组有增加胸腺重量趋势(见表2)。

表2复方乌天麻提取物对胸腺、脾指数的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05

乙醇提取组和全药给药组与对照组相比，能明显增加左右耳肿胀度差，脾淋巴细胞转化活性并有显著性差异(P<0.05)(见表3)，提示本实验条件下复方乌天麻提取物的70%乙醇提取组和全药给药组对小鼠脾淋巴细胞转化和迟发型变态反应能力有明显促进作用。

表3复方乌天麻提取物对细胞免疫力的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05

复方乌天麻提取物的3组HC50值和高剂量组溶血空斑数(×lO³个/全脾)与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)(见表4)。提示本实验条件下对血清溶血素有升高作用，对抗体生成细胞有促进作用。

表4复方乌天麻提取物对体液免疫功能的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05

复方乌天麻提取物对单核.巨噬细胞吞噬功能的影响乙醇提取组和全药给药组碳廓清能力吞噬指数a明显高于对照组，并有显著性差异(P<0.05)(见表5)。提示本实验条件下复方乌天麻提取物对小鼠碳廓清能力有提高作用。样品70%乙醇提取组和全药给药组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数均高于对照组，且有统计学意义(P<0.05)，提示本实验条件下复方乌天麻提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力有增强作用。

表5复方乌天麻提取物对单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05

复方乌天麻提取物对NK细胞功能的影响与对照组相比，样复方乌天麻提取物各组均能提高NK细胞活性，且有显著性差异(P<0.05)。提示在本实验条件下70%乙醇提取组和全药给药组对NK细胞嚣性有促进作用(见表6)。

表6复方乌天麻提取物对NK细胞功能的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05

实施例2乌天麻片剂制备条件的筛选

1、崩解剂种类的筛选

以颗粒的粒型、水分，素片的硬度、溶出曲线为考察指标，固定崩解剂用量为5%，对崩解剂羧甲基淀粉钠和交联羧甲基纤维素钠进行考察。配方见表7，检测结果见表8。

表7崩解剂种类的筛选（配方量50片）

制备方法：分别称取配方量原辅料，混合均匀，加入适量粘合剂制成适宜的软材，过30目筛制粒，在(50±5)℃干燥至水分﹤3.0%，用30目筛整粒，加硬脂酸镁，混合压片，即得。

表8崩解剂加入种类的筛选实验结果

由检测结果对比可知配方2的溶出数据高于配方1，且配方2在溶出过程中无絮状颗粒产生，故更换崩解剂种类，把羧甲基淀粉钠更换成交联羧甲基纤维素钠。

2、正交试验优化配方

采用正交试验法优化粘合剂的浓度、交联羧甲基纤维素钠加入量、交联羧甲基纤维素钠内外加比例、硬脂酸镁加入量，以颗粒的成型性、素片的溶出度作为考察指标。试验方案如表9，试验结果如表10所示。

表9因素-水平表

表10正交实验结果

由表4中数据结果可知，6、8、9号配方溶出度较高，且其他各项指标都符合规定。但是9号配方硬脂酸镁加入量较多，不利于复方乌天麻提取物的溶出，故舍弃10号配方。将6号和9号配方进行试验重现，以确定最终配方。

根据正交优化试验结果对配方6和配方9进行重现，制备量为100片/配方，检测结果见表11。

表11配方验证实验

由检测结果对比可知配方6和配方9的溶出结果相似，但配方9需要外加交联羧甲基纤维素钠，生产工艺较配方6稍复杂，所以保留配方6。

3、复方乌天麻片剂的制备

采用是上述优选的配方结论，根据表12所述配方称取处方量原辅料，混合均匀，加入适量4%的粘合剂制成适宜的软材，过30目筛制粒，在(50±5)℃干燥至水分<3.0％，用30目筛整粒，加硬脂酸镁，混合压片，即得药物实验组Ⅰ。

表12复方乌天麻片剂的配方1

根据表13配方称取原料，采用上述方法，制备得到药物实验组Ⅱ。

表13复方乌天麻片剂的配方2

根据表14配方称取原料，采用上述方法，制备得到药物实验组Ⅲ。

表14复方乌天麻片剂的配方3

根据表15配方称取原料，以天麻（赤箭）替代乌天麻（铁干天麻），采用上述方法，制备得到药物实验组Ⅳ。

表15复方天麻片剂对照组的配方3

4、复方乌天麻片剂的活性考察

ICR小鼠，雌性，体重17-21g，实验动物按体重随机分成25组，每组6只，每5组为一实验组，每实验组分别为药物实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，复方天麻片剂对照组和蒸馏水空白对照组，其药物实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和复方天麻片剂对照组给药的剂量为原药材2.0g·kg^-1。将上述药物片剂稀释每天按20mL·kg^-1体重连续灌胃30d后，测定免疫指标。分别为免疫一组：小鼠碳廓清试验；免疫二组：迟发型变态反应(DTH)检测；免疫三组：抗体生成细胞检测(Jeme改良载片法)和小鼠血清溶血素(HC50)的测定；免疫四组：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)和脏器/体重比值；免疫五组：ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)。均按文献方法进行操作。

实验数据以SPSS17.0软件进行单因素方差分析。经方差齐性检验，方差齐的实验数据采用LSD法进行统计，方差不齐的实验数据采用Tambane法进行统计分析。

药物实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和复方天麻片剂小鼠的体重增长值与对照组比较差异均无显著性(P>0.05)，即该样品对小鼠的体重增长无影。各剂量组脾指数与对照组比较差异均无显著性(P>0.05)，70%乙醇提取组和全药给药组胸腺指数与对照组比较差异有显著性(P<0.05)，提示药物实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和复方天麻片剂对照组有增加胸腺重量趋势(见表16)。

表16复方乌天麻片剂对胸腺、脾指数的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05

药物实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和复方天麻片剂与对照组相比，能明显增加左右耳肿胀度差，脾淋巴细胞转化活性并有显著性差异(P<0.05)(见表17)，提示本实验条件下药物实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和复方天麻片剂对小鼠脾淋巴细胞转化和迟发型变态反应能力有明显促进作用。

表17复方乌天麻片剂对细胞免疫力的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05，＃与复方天麻片剂对照组相比P﹤0.05

复方乌天麻提取物的3组HC50值和高剂量组溶血空斑数(×lO³个/全脾)与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)(见表18)。提示本实验条件下对血清溶血素有升高作用，对抗体生成细胞有促进作用。

表18复方乌天麻片剂对体液免疫功能的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05

复方乌天麻提取物对单核巨噬细胞吞噬功能的影响乙醇提取组和全药给药组碳廓清能力吞噬指数a明显高于对照组，并有显著性差异(P<0.05)(见表19)。提示本实验条件下复方乌天麻提取物对小鼠碳廓清能力有提高作用。样品70%乙醇提取组和全药给药组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数均高于对照组，且有统计学意义(P<0.05)，提示本实验条件下复方乌天麻提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力有增强作用。

表19复方乌天麻片剂对单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05，^＃与复方天麻片剂对照组相比P﹤0.05

复方乌天麻提取物对NK细胞功能的影响与对照组相比，各组组均能提高NK细胞活性，且有显著性差异(P<0.05)。提示在本实验条件下70%乙醇提取组和全药给药组对NK细胞嚣性有促进作用(见表20)。

表20复方乌天麻片剂对NK细胞功能的影响

注：^*与对照组相比P﹤0.05，^＃与复方天麻片剂对照组相比P﹤0.05

免疫是机体免疫系统对异物或抗原性物质进行特异性或非特异性识别和清理的一种生理学功能。人体的免疫系统由免疫细胞、免疫分子和免疫器官构成，它们相互配合完成特异性免疫和非特异性免疫。细胞免疫和体液免疫属于特异性免疫，腹腔巨噬细胞吞噬能力和NK细胞功能属于非特异性免疫。本实验中DTH试验和小鼠脾淋巴细胞转化试验代表细胞免疫功能，抗体生成细胞试验和血清溶血素试验代表体液免疫功能，小鼠碳廓清能力和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验代表单核-巨噬细胞吞噬功能。

实施例1、2结果表明复方乌天麻提取物和复方乌天麻片剂能提高迟发型变态反应和淋巴细胞分化，促进小鼠脾淋巴细胞增殖能力；增强抗体细胞生成，增加血清溶血素；提高碳廓清能力和腹腔巨噬细胞吞噬能力；增强NK细胞活性。结果提示复方乌天麻片剂对小鼠的细胞免疫，体液免疫和非特异性免疫均有增强作用。另外，根据各组实验数据显示，复方乌天麻片剂的增强免疫力的活性明显由于用天麻代替乌天麻的复方天麻片剂。

Claims (7)

1.一种复方乌天麻片剂，其特征在于：所述复方的活性成分由乌天麻、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿的乙醇提取物组成；

所述乌天麻、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿的重量比8-15:3-5:3-5:1-2。

2.根据权利要求1所述的一种复方乌天麻片剂，其特征在于：所述乌天麻、肉苁蓉、枸杞和淫羊藿的重量比24:8:8:3。

3.一种复方乌天麻片剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）根据权利要求2所述配方称取药材，粉碎混合，分别用5倍重量的70%的乙醇回流提取3次，混合，得到提取液；

2）将提取液调温到50℃，回收至无醇味，稀释到每升提取液含0.6kg的原药材；

3）冷却提取液至5±3℃，静置，取上清液，浓缩，收密度1.4的浸膏；

4）将浸膏加辅料制备得到复方乌天麻片剂。

4.权利要求3所述的复方乌天麻片剂的制备方法，其特征在于：步骤4）所述辅料的配方为：乳糖、交联羧甲基纤维素钠、PVPK90的水溶液和硬脂酸镁。

5.根据权利要求4所述的复方乌天麻片剂的制备方法，其特征在于：所述PVPk90水溶液的浓度为4%；所述交联羧甲基纤维素钠全部为内加，添加量为总重量的5%；硬脂酸镁的添加量为总重量的1%。

6.根据权利要求5所述的复方乌天麻片剂的制备方法，其特征在于：根据权利要求5所述配方称取处方量原辅料，混合均匀，加入适量4%的粘合剂制成适宜的软材，过30目筛制粒，在50±5℃干燥至水分<3.0％ ，用30目筛整粒，加硬脂酸镁，混合压片，得到复方乌天麻片剂。

7.权利要求1或2所述的复方乌天麻片剂在制备增强免疫力药物中应用。