CN103880975B - 一种岩藻聚糖硫酸酯及其制备方法和在制备抗流感病毒药物中的应用 - Google Patents
一种岩藻聚糖硫酸酯及其制备方法和在制备抗流感病毒药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于海洋药物领域，涉及一种岩藻聚糖硫酸酯及其制备方法和在制备抗甲型流感病毒药物中的应用，通过热水提取、氯化钙沉淀和DEAE-Cellulose色谱柱纯化，获得主链以α-1,2-D-甘露糖和β-1,4-D-葡萄糖醛酸为重复单元，支链为α-1,3-L-岩藻寡糖硫酸酯的多糖。本发明制备的岩藻聚糖硫酸酯，不仅对甲型H1N1且对H5N1及H3N2流感病毒神经氨酸酶活性有较强的抑制作用，尤其对甲型H1N1感染的狗肾上皮细胞具有明显保护作用。本发明提供的岩藻聚糖硫酸酯具有原料来源丰富、制备工艺简单、容易产业化及产品水溶性强、稳定性高和无毒副作用等优点，有开发成抗流感病毒药物的前景。
Description
技术领域
本发明属于海洋药物领域，涉及一种从褐藻的笼目海带(Kjellmaniellacrassifolia)、糖海带（Laminaria saccharina）或海蕴(Nemacystus decipiens)中提取的岩藻聚糖硫酸酯及其制备方法和在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。
背景技术
甲型流感病毒(Influenza A Virus,IAV)属正粘菌科(Orthomyxoviridae)具有包膜的负链RNA病毒，能引起急性呼吸道传染病，具有传染性强、致病力高等特点，严重危害人类健康。由于甲型流感病毒表面血凝素蛋白(HA)和神经氨酸酶蛋白(NA)的结构和抗原性不同，可分为不同亚型，如H1N1、H3N2和H5N1等。自2009年4月发源于墨西哥的甲型H1N1流感病毒爆发以来，相继爆发了H3N2、H5N1、H7N9和H10N8等不同亚型的流感病毒，全球每年有大量的人口被感染，造成了大量人口死亡和经济损失。
目前，应用于抗流感的药物主要有针对跨膜蛋白的离子通道阻断剂和作用于神经氨酸酶的抑制剂。其中，上世纪60年代开始应用的金刚烷胺及其衍生物金刚乙胺成为离子通道阻断类药物的代表，其靶点为流感病毒基质蛋白M2，通过阻断或者是防止通道打开等方式抑制流感病毒复制。而神经氨酸酶是病毒侵染细胞必须的酶，以此为靶点开发了扎那米韦(Zanamivir)和奥司他韦(Oseltamivir)两种抗流感病毒药物。但是，随着金刚烷胺和奥司他韦耐药性IAV病毒株的出现，尤其是离子通道阻断剂类药物容易产生抗药性、对消化器官和中枢神经的副作用等问题，寻找安全低毒、无耐药性抗病毒药物显得尤为迫切。
来源于海洋的硫酸多糖化合物成为本世纪生化药物开发的热点之一。岩藻聚糖硫酸酯是一类来源于海藻或海洋动物的酸性多糖，由于来源不同，其结构差异很大，但分子中一般均含有α-1,3或α-1,4或者α-1,3/1,4-连接-L-岩藻聚糖硫酸酯，具有免疫调节、抗病毒等活性。在岩藻聚糖硫酸酯提取分离和制备方面的文献和专利较多，如：中国专利申请（公开号CN101993501A）和中国专利申请（公开号CN102936293A）公开了胶体磨处理微波或超声波辅助提取岩藻聚糖硫酸酯的方法，中国专利申请（公开号CN101962415A）公开了自由基降解超滤膜分离纯化制备低分子量岩藻聚糖硫酸酯的方法，中国专利申请（公开号CN1560086）公开了一种高硫酸化岩藻聚糖的制备方法，这些方法步骤复杂、设备要求高，或者提取率低、生产成本高，同时不同程度对多糖结构造成破坏，产物结构不稳定和成分复杂。另外，中国专利申请（专利号CN200910013017.X、专利号CN200510047582.X、公开号CN1560086）公开了酶解提取制备岩藻聚糖硫酸酯的方法，但是酶解法制备反应条件苛刻，生产成本高而不利于推广。
海洋多糖特别是海洋酸性多糖的抗病毒活性也备受关注。中国专利申请（公开号CN102488697A、公告号CN102743409B和公开号CN102516323A）分别公开了寡聚甘露糖醛酸、聚甘露糖醛酸丙酯硫酸盐和低分子量卡拉胶寡糖在制备抗甲型H1N1流感病毒药物中的应用。国内外近期研究表明，来源于海蕴的岩藻聚糖硫酸酯具有很好的抗登革热病毒活性(Hidari et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.,2008,376(1):91-95)、来源于裙带菜的岩藻聚糖硫酸酯具有很好的抗甲型流感病毒和单纯胞疹病毒的活性(Hayashi et al.,Microbes.Infect.,2013,15(4):302-309;Hayashi et al.,Int Immunopharmacol.,2008,8(1):109-116)。国内外专利已经报道了一些关于岩藻聚糖硫酸酯在制备及其应用方面的专利(公开号CN103288978A)，但是来源于褐藻的笼目海带(Kjellmaniella crassifolia)、糖海带（Laminaria saccharina）或海蕴(Nemacystus decipiens)的岩藻聚糖硫酸酯的制备及其在抗甲型H1N1、H5N1和H3N2流感病毒方面的研究和应用还未见相关报道。
发明内容
针对现有技术制备岩藻聚糖硫酸酯中存在的问题及治疗甲型流感病毒药物容易产生耐药性且具有毒副作用的缺点，本发明的目的在于提供了一种岩藻聚糖硫酸酯及其制备方法和在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。本发明所用褐藻具有来源丰富，岩藻聚糖硫酸酯的制备方法无污染、结构明确及生产成本低廉的水提和稀酸沉淀、氯化钙沉淀和DEAE-Cellulose阴离子交换树脂纯化等步骤，并且该岩藻聚糖硫酸酯显示出良好的抗甲型H1N1、H5N1和H3N2流感病毒的活性。
为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：
一种岩藻聚糖硫酸酯，该岩藻聚糖硫酸酯从褐藻笼目海带（Kjellmaniellacrassifolia）、糖海带（Laminaria saccharina）或海蕴(Nemacystus decipiens)中提取，它是以α-1,2-D-甘露糖和β-1,4-D-葡萄糖醛酸为重复单元组成的主链、并以α-1,3-L-岩藻寡糖硫酸酯为支链的多糖。
该岩藻聚糖硫酸酯中包括，岩藻糖含量为32.2wt%～60.2wt%，甘露糖含量为6.3wt%～7.3wt%，葡萄糖醛酸含量为5.8wt%～7.0wt%，以及少量半乳糖0.1wt%～1.0wt%和氨基葡萄糖0.1wt%～1.0wt%，硫酸基含量为15.3wt%～35.7wt%。
该岩藻聚糖硫酸酯的重均分子量为212kD～607kD。
所述的岩藻聚糖硫酸酯的制备方法，包括以下步骤：
(1)热水提取与稀酸沉淀：将脱脂后褐藻粉末搅拌下用热水提取，合并提取液，稀盐酸沉淀，离心；
(2)氯化钙沉淀：搅拌下向(1)离心后上清液中加入1～3mol/L氯化钙水溶液，离心取上清液，经浓缩、透析，乙醇沉淀、干燥后得岩藻聚糖硫酸酯；
(3)DEAE-Cellulose纯化：将(2)所得岩藻聚糖硫酸酯溶于水中，以氯化钠水溶液为流动相，经过DEAE-Cellulose阴离子交换树脂分离，硫酸-苯酚法检测，得纯化岩藻聚糖硫酸酯。
所述的岩藻聚糖硫酸酯的制备方法，热水提取温度为70～100℃，稀盐酸沉淀时溶液pH=1～3。
所述的岩藻聚糖硫酸酯的制备方法，DEAE-Cellulose纯化所用流动相为0～2mol/L的氯化钠水溶液。
所述的岩藻聚糖硫酸酯在制备抗流感病毒药物中的应用，该岩藻聚糖硫酸酯用于制备抗甲型流感病毒药物中。
所述的岩藻聚糖硫酸酯在制备抗流感病毒药物中的应用，在抗甲型流感病毒药物中，岩藻聚糖硫酸酯在浓度为250μg/mL时，对甲型H1N1、H5N1和H3N2流感病毒神经氨酸酶活性的抑制率分别达97.3%、81.6%和56.8%。
所述的岩藻聚糖硫酸酯在制备抗流感病毒药物中的应用，在抗甲型流感病毒药物中，岩藻聚糖硫酸酯在浓度为9μg/mL以上时，即可显著抑制甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶的活性，半数抑制浓度(IC50)为8.8μg/mL。
所述的岩藻聚糖硫酸酯在制备抗流感病毒药物中的应用，在抗甲型流感病毒药物中，岩藻聚糖硫酸酯在浓度为39μg/mL以上时，可显著抑制甲型H1N1流感病毒在狗肾上皮细胞中的感染和增殖，半数抑制浓度(IC50)为38.7μg/mL。
本发明的设计思想是：
本发明从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法和其在制备抗甲型流感病毒药物中的应用，通过热水提取、氯化钙沉淀和DEAE-Cellulose色谱柱分离纯化，获得以α-1,2-D-甘露糖和β-1,4-D-葡萄糖醛酸为重复单元的主链，并以α-1,3-L-岩藻寡糖硫酸酯为支链的多糖，其岩藻糖含量为32.2wt%～60.2wt%，甘露糖含量为6.3wt%～7.3wt%，葡萄糖醛酸含量为5.8wt%～7.0wt%，以及少量半乳糖0.1wt%～1.0wt%和氨基葡萄糖0.1wt%～1.0wt%，硫酸基含量为15.3wt%～35.7wt%，重均分子量为212kD～607kD。本发明证实所述岩藻聚糖硫酸酯制备方法简单，成本低廉，且在细胞水平具有显著抑制甲型H1N1流感病毒的感染和增殖活性，分子水平揭示其作用机理主要是通过抑制神经氨酸酶活性而达到抗甲型H1N1、H5N1及H3N2流感病毒的作用。
本发明的优点及有益效果是：
1、本发明的岩藻聚糖硫酸酯产品来源于笼目海带、糖海带或者海蕴，具有来源丰富、成本低廉、安全性高等诸多优点，并且在体外分子和细胞水平都具有较好的抗甲型H1N1流感病毒的作用，为该类药物的开发提供了新的途径。
2、本发明制备的岩藻聚糖硫酸酯不仅对甲型H1N1且对H5N1及H3N2流感病毒神经氨酸酶活性有较强的抑制作用，尤其对甲型H1N1感染的狗肾上皮细胞具有明显的保护活性，在250μg/mL浓度下，其抗病毒作用效果与阳性对照利巴韦林相当。
3、本发明提供的岩藻聚糖硫酸酯具有制备工艺简单、容易产业化以及具有水溶性强、稳定性高和无毒副作用等优点，有开发成抗流感病毒药物的前景。
结合附图阅读本发明的具体实施方式后，本发明的其他优点和特点将变得更加清晰。
附图说明
图1为本发明中岩藻聚糖硫酸酯的红外光谱图。
图2为本发明中岩藻聚糖硫酸酯的核磁共振氢谱图。
图3为本发明中不同浓度岩藻聚糖硫酸酯对甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶抑制率图。
图4为本发明中不同浓度岩藻聚糖硫酸酯对甲型H1N1流感病毒感染狗肾上皮细胞的细胞保护率图。
具体实施方式
本发明采用氯化钙沉淀和DEAE-Cellulose阴离子交换树脂分离纯化获得所述岩藻聚糖硫酸酯，并试验其在抗甲型H1N1流感病毒药物制备中的应用，其中：
本发明岩藻聚糖硫酸酯主要包括L-岩藻糖、D-甘露糖和D-葡萄糖醛酸，包括：岩藻糖含量为32.2wt%～60.2wt%（优选为48.2wt%～60.2wt%），甘露糖为6.3wt%～7.3wt%，葡萄糖醛酸为5.8wt%～7.0wt%，以及少量半乳糖0.1wt%～1.0wt%和氨基葡萄糖0.1wt%～1.0wt%，岩藻聚糖硫酸酯的硫酸基含量为15.3wt%～35.7wt%（优选为23.5wt%～35.7wt%），重均分子量为212kD～607kD。
该岩藻聚糖硫酸酯的结构式如下：
上述结构式中，Fuc24S代表2,4-二硫酸-L-岩藻糖；Fuc23S代表2,3-二硫酸-L-岩藻糖；Fuc2S代表2-硫酸-L-岩藻糖；Fuc4S代表4-硫酸-L-岩藻糖；Man代表D-甘露糖；GlcA代表D-葡萄糖醛酸；n=0～3（优选1～3）。
本发明所提供岩藻聚糖硫酸酯的制备方法，它包括以下步骤：
(1)热水提取与稀酸沉淀：将脱脂处理后褐藻粉末热水提取，合并提取液，稀盐酸沉淀，离心。所述热水提取温度为70～90℃，稀酸沉淀溶液pH=1～3。
(2)氯化钙沉淀：向(1)离心后上清液中加入1～3mol/L氯化钙水溶液，离心后取上清浓缩、透析，乙醇沉淀，干燥后得岩藻聚糖硫酸酯。
(3)DEAE-Cellulose纯化：将(2)所得岩藻聚糖硫酸酯溶于水中，以氯化钠水溶液为流动相（0<氯化钠浓度≤2mol/L），经过DEAE-Cellulose阴离子交换树脂分离，硫酸-苯酚法检测收集，得纯化岩藻聚糖硫酸酯。
本发明所提供岩藻聚糖硫酸酯在制备抗甲型H1N1流感病毒药物中的应用：当岩藻聚糖硫酸酯在浓度为250μg/mL时，对甲型H1N1、H5N1或H3N2流感病毒神经氨酸酶有显著的抑制活性。当岩藻聚糖硫酸酯在浓度大于9μg/mL时，即可显著抑制甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶的活性，其作用效果与阳性对照扎纳米为相当。当岩藻聚糖硫酸酯在浓度大于39μg/mL时，可显著抑制甲型H1N1流感病毒在狗肾上皮细胞中的感染和增值，其作用效果与阳性对照利巴韦林相当。
下面结合附图和实施例对本发明的技术方案进一步的详细说明。
实施例1：岩藻聚糖硫酸酯的制备
1、将笼目海带脱脂后的粉末于80℃水浴中提取3～5次，合并提取液，冷却至室温后，用稀盐酸调节提取液pH=1～3，离心，收集上清液。
2、向步骤1所制备上清液中搅拌加入3mol/L的CaCl2水溶液，至沉淀不再产生，离心取上清液，上清液转移至截留分子量为7000D的透析袋，透析至透析外液电导率不再变化为止，减压浓缩透析袋内液，真空冷冻干燥得岩藻聚糖硫酸酯（KCP）。
3、将步骤2制备岩藻聚糖硫酸酯用蒸馏水溶解后，过DEAE-Cellulose阴离子交换树脂进一步纯化，以NaCl水溶液（0<氯化钠浓度≤2mol/L）为洗脱剂，进行线性洗脱，采用硫酸-苯酚法检测，出现一个单一对称洗脱峰，表明所制备岩藻聚糖硫酸酯组分均一。
本实施例中制备的岩藻聚糖硫酸酯糖，主链由α-1,2-D-甘露糖与β-1,4-D-葡萄糖醛酸重复单元组成，支链由α-1,3-L-岩藻寡糖硫酸酯组成。所述的岩藻聚糖硫酸酯主要含有L-岩藻糖(Fuc)56.2wt%，其次是D-甘露糖(Man)6.8wt%和D-葡萄糖醛酸(GlcA)6.2wt%，含有少量D-半乳糖(Gal)0.5wt%和D-氨基葡萄糖0.3wt%，岩藻糖残基之间主要是由α-1,3-连接的L-岩藻糖组成，岩藻聚糖硫酸酯的硫酸基含量为30wt%，重均分子量为536kD。
如图1所示，本发明中岩藻寡糖硫酸酯的红外光谱图。其中，3405cm-1为羟基O-H伸缩振动峰，2951cm-1是糖环中C-H伸缩振动峰，1639cm-1是糖醛酸中-COO-非对称伸缩振动峰，1259cm-1是硫酸酯基中O=S=O对称伸缩振动峰，1034cm-1是吡喃糖环C-O-H中C-O伸缩振动峰，965cm-1为α-甘露糖残基糖环非对称伸缩振动峰，917cm-1为β-葡萄糖醛酸残基糖环非对称伸缩振动峰；854cm-1是岩藻糖C2和C4位C-O-S伸缩振动峰。
如图2所示，本发明中岩藻寡糖硫酸酯的核磁共振氢谱（1H-NMR）图。从1H-NMR谱图中可见清晰的岩藻糖异头氢信号，5.30ppm附近的一组信号为硫酸化岩藻糖异头氢信号，其相对于非硫酸化取代岩藻糖残基异头氢信号(5.11ppm)大幅向低场移动，表明了硫酸根主要位于岩藻糖残基的C2和C4位。此外，高场区（1.0～1.6ppm）大量的甲基氢信号也证明了岩藻糖残基的存在。
实施例2：岩藻聚糖硫酸酯抗甲型H1N1流感病毒作用
1、岩藻聚糖硫酸酯抑制甲型H1N1、H5N1和H3N2流感病毒NA活性作用
所述岩藻聚糖硫酸酯（KCP）、H1N1、H5N1和H3N2神经氨酸酶NA和NA特异性底物MUNANA(4-methylumbelliferyl-N-acetyl-α-neuralminic acid)在MES缓冲液中共孵育，利用NA与MUNANA作用产物4MU(7-hydroxy-4-methylcoumarin)在355nm入射波长激发下,可以产生460nm荧光,通过检测荧光强度的变化，计算岩藻聚糖硫酸酯（KCP）对NA活性的抑制率(在文献李寒冰，等.药学学报,2009,44(2):162-166.中记载有该测试方法)，以扎那米韦为阳性对照药。
实验结果表明，岩藻寡糖硫酸酯浓度为250μg/mL时，对甲型H1N1、H5N1和H3N2流感病毒NA活性均有明显的抑制活性，抑制率分别为97.3%、81.6%和56.8%，其中对H1N1的抑制率与阳性对照扎那米韦相近(98.0%)。
2、岩藻聚糖硫酸酯对甲型H1N1流感病毒NA活性半数抑制浓度(IC50)的测定
配置不同浓度岩藻聚糖硫酸酯（KCP），按照1所述方法测定不同浓度下岩藻聚糖硫酸酯（KCP）对NA活性的抑制率，并计算半数抑制浓度IC50，以扎那米韦为阳性对照药。
如图3所示，实验结果表明，岩藻聚糖硫酸酯（KCP）对甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶NA活性抑制作用非常显著(IC50=8.8μg/mL)，在浓度为125μg/mL时抑制率即达到了96.4%，说明岩藻聚糖硫酸酯KCP在分子水平有十分显著的抑制甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶NA活性的作用。
3、岩藻聚糖硫酸酯抑制甲型H1N1流感病毒复制和增殖作用
利用甲型流感病毒小鼠适应株H1N1(A/PR/8/34，中科院武汉病毒所提供)感染狗肾上皮细胞建立细胞模型，并利用此细胞模型结合细胞病变(CPE)抑制试验和噻唑兰(MTT)比色法分别检测所述岩藻聚糖硫酸酯（KCP）对甲型流感病毒的抑制活性及细胞毒性的大小，并计算半数抑制浓度IC50和半数细胞毒性浓度CC50(在专利公开号CN102488697A和专利公开号CN102743409B中记载有测定方法)，选用利巴韦林为阳性对照药。
如图4所示，实验结果表明，岩藻聚糖硫酸酯KCP对甲型H1N1流感病毒抑制活性非常显著(IC50=38.7μg/mL)，在250μg/mL浓度条件下抑制率达到了74.4%，与阳性对照利巴韦林相当(73.0%)，并且细胞毒性很小(CC50=1364.8μg/mL)，治疗指数SI(CC50/IC50)达到了35.3，远大于10.0。说明岩藻聚糖硫酸酯（KCP）在细胞水平有很好的抑制甲型H1N1流感病毒增殖的活性。
综上所述，实施例结果表明，本发明岩藻聚糖硫酸酯具有明显抑制甲型H1N1、H5N1和H3N2神经氨酸酶活性的作用，对H1N1神经氨酸酶抑制效果最为突出，并且在低浓度条件下可显著抑制甲型H1N1流感病毒对在狗肾上皮细胞的增殖和复制，具有很好的抗甲型H1N1流感病毒的作用。
以上实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (9)
1.一种岩藻聚糖硫酸酯，其特征在于，该岩藻聚糖硫酸酯从褐藻笼目海带（Kjellmaniella crassifolia）、糖海带（Laminaria saccharina）或海蕴(Nemacystus decipiens)中提取，它是以α-1,2-D-甘露糖和β-1,4-D-葡萄糖醛酸为重复单元组成的主链、并以α-1,3-L-岩藻寡糖硫酸酯为支链的多糖；
该岩藻聚糖硫酸酯中包括，岩藻糖含量为32.2wt%～60.2wt%，甘露糖含量为6.3wt%～7.3wt%，葡萄糖醛酸含量为5.8wt%～7.0wt%，以及少量半乳糖0.1wt%～1.0wt%和氨基葡萄糖0.1wt%～1.0wt%，硫酸基含量为15.3wt%～35.7wt%。
2.根据权利要求1所述的岩藻聚糖硫酸酯，其特征在于，该岩藻聚糖硫酸酯的重均分子量为212kD～607kD。
3.一种权利要求1～2之一所述的岩藻聚糖硫酸酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1) 热水提取与稀酸沉淀：将脱脂后褐藻粉末搅拌下用热水提取，合并提取液，稀盐酸沉淀，离心；
(2) 氯化钙沉淀：搅拌下向(1)离心后上清液中加入1～3mol/L 氯化钙水溶液，离心取上清液，经浓缩、透析，乙醇沉淀、干燥后得岩藻聚糖硫酸酯；
(3) DEAE-Cellulose纯化：将(2)所得岩藻聚糖硫酸酯溶于水中，以氯化钠水溶液为流动相，经过DEAE-Cellulose阴离子交换树脂分离，硫酸-苯酚法检测，得纯化岩藻聚糖硫酸酯。
4.根据权利要求3所述的岩藻聚糖硫酸酯的制备方法，其特征在于，热水提取温度为70～100℃，稀盐酸沉淀时溶液pH=1～3。
5.根据权利要求3所述的岩藻聚糖硫酸酯的制备方法，其特征在于：DEAE-Cellulose纯化所用流动相为0～2mol/L的氯化钠水溶液。
6.一种权利要求1～2之一所述的岩藻聚糖硫酸酯在制备抗流感病毒药物中的应用，其特征在于，该岩藻聚糖硫酸酯用于制备抗甲型流感病毒药物中。
7.根据权利要求6所述的岩藻聚糖硫酸酯在制备抗流感病毒药物中的应用，其特征在于，在抗甲型流感病毒药物中，岩藻聚糖硫酸酯在浓度为250μg/mL时，对甲型H1N1、H5N1和H3N2流感病毒神经氨酸酶活性的抑制率分别达97.3%、81.6%和56.8%。
8.根据权利要求6所述的岩藻聚糖硫酸酯在制备抗流感病毒药物中的应用，其特征在于，在抗甲型流感病毒药物中，岩藻聚糖硫酸酯在浓度为9μg/mL以上时，即可显著抑制甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶的活性，半数抑制浓度(IC50)为8.8μg/mL。
9.根据权利要求6所述的岩藻聚糖硫酸酯在制备抗流感病毒药物中的应用，其特征在于，在抗甲型流感病毒药物中，岩藻聚糖硫酸酯在浓度为39μg/mL以上时，可显著抑制甲型H1N1流感病毒在狗肾上皮细胞中的感染和增殖，半数抑制浓度(IC50)为38.7μg/mL。
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