CN103849610A - 纳豆激酶的制造方法 - Google Patents

纳豆激酶的制造方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103849610A
CN103849610A CN201210512373.8A CN201210512373A CN103849610A CN 103849610 A CN103849610 A CN 103849610A CN 201210512373 A CN201210512373 A CN 201210512373A CN 103849610 A CN103849610 A CN 103849610A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nattokinase
solid
substratum
raw material
culture medium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201210512373.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103849610B (zh
Inventor
李宝恒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TIANJIN BAOHENG BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
TIANJIN BAOHENG BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TIANJIN BAOHENG BIOTECHNOLOGY Co Ltd filed Critical TIANJIN BAOHENG BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201210512373.8A priority Critical patent/CN103849610B/zh
Publication of CN103849610A publication Critical patent/CN103849610A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103849610B publication Critical patent/CN103849610B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明的纳豆激酶的制造方法中，采用鹰嘴豆粉作为原料组成培养基的固态原料，通过加水定容、高温灭菌、降温、纳豆芽孢杆菌接种、菌种培养、浓缩、干燥等步骤生产出纳豆激酶及纳豆粉。利用经典深层发酵技术，通过引入鹰嘴豆粉作为原料组成混合培养基，改善原有纳豆激酶生产工艺流程，使纳豆激酶结合鹰嘴豆微量元素的功效，使制得产品在溶解血栓的基础上能够有效降低血糖。另外由于产品不具氨臭味，所以在产品形式上更容易被广大消费者所接受。

Description

纳豆激酶的制造方法
技术领域
本发明涉及保健品生产的技术领域，具体说是一种具有溶解血栓，减少血栓形成并有效降低血糖功效的纳豆激酶的制造方法。 
背景技术
纳豆激酶(NarroKunase，NK)由食品纳豆中提取或纳豆菌发酵生产，是一种分子量远远小于UK、SK、tPA的蛋白质，并可由肠道，吸收，纳豆激酶的体外、体内溶栓性质通过实验也已得到确定，同时得出纳豆激酶的体内溶栓活性为纤溶酶的四倍，在体内作用迅速、持续时间长，还能激活体内的tPA，使之温和、持续地提高血液的纤溶活性。患心肌梗塞的危险患者，一次需投入尿激酶30万单位，而50克的纳豆中含有80万单位尿激酶的血栓溶解作用。每克湿重纳豆约相当于1600尿激酶单位。 
日本生物科学研究所最近发现，纳豆激酶有抑制血小板凝固的作用，有助于预防高血压和动脉硬化。 
因而，纳豆激酶成为一种新型的口服性溶血栓药物，在预防、治疗心脑血管栓塞症及栓塞性老年痴呆症等方面起到积极作用。 
鹰嘴豆含有微量元素铬，铬在机体的糖代谢和脂肪代谢中发挥着重要作用。糖尿病患者正是因为胰岛素相对或绝对不足引起糖代谢，脂肪代谢，蛋白质代谢紊乱。铬是葡萄糖耐量因子(GTF)的组成部分，鹰嘴豆对糖尿病具有控制、降低血糖，预防和减缓糖尿病并发症的作用，世界各地都有关于糖尿病患者铬含量低于健康人的报道，人体血糖代谢的调节取决于3个因素的水平和协调作用，这3个因素是胰岛素、葡萄糖耐量受体和胰岛受体。人体含铬量减少，就会导致胰岛素活性降低，受体数量减少，糖耐量受损，从而引发糖尿病。食用鹰嘴豆产品就可以使体内胰岛素活性和胰岛素受体数量增加，达到控制血糖、改善糖尿病症状的目的。 
鹰嘴豆中含有的铬元素和多不饱和脂肪酸可促进胆固醇代谢防止脂质在肝脏和动脉壁沉积、降低血小板凝结能力，防止血栓形成。防止血管损伤面的炎症反应，对血管有良好的保护作用，可有效的预防和减缓糖尿病并发症。很多血糖高居不下，波动较大，不稳定的糖尿病患者，在食用了鹰嘴豆产品3个月之内血糖都得到了有效的控制，其并发症也得到了有效的预防和减缓。 
现有技术的工业化纳豆激酶的制备方法中仍然沿用了原始的纳 豆发酵方法，所产出的纳豆产品内有效活性物的浓度较低，且最终产品多为湿体纳豆，其本身带有浓重的氨臭味，无法被广大消费者所接受。 
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种具有溶解血栓，减少血栓形成并有效降低血糖功效的纳豆激酶的制造方法。 
本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是： 
本发明的纳豆激酶的制造方法，包括以下步骤： 
A、配制培养基中的固态原料，将研磨后的麸皮与鹰嘴豆粉按质量比1∶2的比例进行配比，形成固态混合原料； 
B、向上述固态混合原料中加水定容，加水至固态混合原料占总质量的18％-24％，形成固液混合培养基，固液混合培养基定容值700-800升； 
C、将固液混合培养基投入发酵罐，密封发酵罐并加热至121℃，进行高温灭菌20-30分钟； 
D、高温灭菌后，将发酵罐自然冷却； 
E、当发酵罐中的培养基冷却至36-38℃时，向培养基中接入一株纳豆芽孢杆菌； 
F、将接入纳豆芽孢杆菌的培养基在保持温度37℃、ph值6-7、通气量10升/分钟的发酵罐中培养27-30小时； 
G、当培养基中ph值超出6-7的范围即标志发酵过程结束，产生纳豆激酶； 
H、将上述发酵液浓缩至400升，发酵液中纳豆激酶活力达到1500-2000u/ml，在浓缩的发酵液中添加相当于发酵液总质量4-10％的糊精作为保护剂，进行负压离心喷雾干燥。 
本发明具有的优点和积极效果是： 
本发明的纳豆激酶的制造方法，利用经典深层发酵技术，通过引入鹰嘴豆粉作为原料组成混合培养基，改善原有纳豆激酶生产工艺流程，使纳豆激酶结合鹰嘴豆微量元素的功效，使制得产品在溶解血栓的基础上能够有效降低血糖。另外由于产品不具氨臭味，所以在产品形式上更容易被广大消费者所接受。 
具体实施方式
以下参照实施例对本发明进行详细的说明。 
实施例1：本发明的纳豆激酶的制造方法，包括以下步骤： 
A、配制培养基中的固态原料，将研磨后的麸皮与鹰嘴豆粉按质量比1∶2的比例进行配比，形成固态混合原料； 
B、向上述固态混合原料中加水定容，加水至固态混合原料占总质量的18％，其中麸皮占总质量的6％，鹰嘴豆粉占总质量的12％，最终定容为700升固液混合培养基； 
C、将固液混合培养基投入发酵罐，密封发酵罐并加热至121℃，进行高温灭菌20分钟； 
D、高温灭菌后，将发酵罐自然冷却； 
E、当发酵罐中的培养基冷却至36℃时，向培养基中接入一株纳豆芽孢杆菌； 
F、将接入纳豆芽孢杆菌的培养基在保持温度37℃、ph值6-7、通气量10升/分钟的发酵罐中培养27小时； 
G、当培养基中ph值超出6-7的范围即标志发酵过程结束，产生纳豆激酶； 
H、将上述发酵液浓缩至400升，发酵液中纳豆激酶活力达到1500u/ml，在浓缩的发酵液中添加相当于发酵液总质量4％的糊精作为保护剂，进行负压离心喷雾干燥。干燥后纳豆激酶活力为13800u/g，菌种活力可达到10(8次方)cfu/ml，氨基态氮浓度为0.6--0.8g/100g。 
实施例2：本发明的纳豆激酶的制造方法，包括以下步骤： 
A、配制培养基中的固态原料，将研磨后的麸皮与鹰嘴豆粉按质量比1∶2的比例进行配比，形成固态混合原料； 
B、向上述固态混合原料中加水定容，加水至固态混合原料占总质量的24％，其中麸皮占总质量的8％，鹰嘴豆粉占总质量的16％，最终定容为800升固液混合培养基； 
C、将固液混合培养基投入发酵罐，密封发酵罐并加热至121℃，进行高温灭菌30分钟； 
D、高温灭菌后，将发酵罐自然冷却； 
E、当发酵罐中的培养基冷却至38℃时，向培养基中接入一株纳豆芽孢杆菌； 
F、将接入纳豆芽孢杆菌的培养基在保持温度37℃、ph值6-7、通气量10升/分钟的发酵罐中培养30小时； 
G、当培养基中ph值超出6-7的范围即标志发酵过程结束，产生纳豆激酶； 
H、将上述发酵液浓缩至400升，发酵液中纳豆激酶活力达到2000u/ml，在浓缩的发酵液中添加相当于发酵液总质量10％的糊精作为保护剂，进行负压离心喷雾干燥。干燥后纳豆激酶活力为15934u/g，菌种活力可达到10(9次方)cfu/ml，氨基态氮浓度为 0.6--0.8g/100g。 
实施例3：本发明的纳豆激酶的制造方法，包括以下步骤： 
A、配制培养基中的固态原料，将研磨后的麸皮与鹰嘴豆粉按质量比1∶2的比例进行配比，形成固态混合原料； 
B、向上述固态混合原料中加水定容，加水至固态混合原料占总质量的21％，其中麸皮占总质量的7％，鹰嘴豆粉占总质量的14％，最终定容为750升固液混合培养基； 
C、将固液混合培养基投入发酵罐，密封发酵罐并加热至121℃，进行高温灭菌28分钟； 
D、高温灭菌后，将发酵罐自然冷却； 
E、当发酵罐中的培养基冷却至37℃时，向培养基中接入一株纳豆芽孢杆菌； 
F、将接入纳豆芽孢杆菌的培养基在保持温度37℃、ph值6-7、通气量10升/分钟的发酵罐中培养28小时； 
G、当培养基中ph值超出6-7的范围即标志发酵过程结束，产生纳豆激酶； 
H、将上述发酵液浓缩至400升，发酵液中纳豆激酶活力达到1800u/ml，在浓缩的发酵液中添加相当于发酵液总质量6％的糊精作为保护剂，进行负压离心喷雾干燥。干燥后纳豆激酶活力为18750u/g，菌种活力可达到10(9次方)cfu/ml，氨基态氮浓度为0.6--0.8g/100g。 
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例公开如上，然而，并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当然会利用揭示的技术内容作出些许更动或修饰，成为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。 

Claims (1)

1.一种纳豆激酶的制造方法，包括以下步骤：
A、配制培养基中的固态原料，将研磨后的麸皮与鹰嘴豆粉按质量比1∶2的比例进行配比，形成固态混合原料；
B、向上述固态混合原料中加水定容，加水至固态混合原料占总质量的18％-24％，形成固液混合培养基，固液混合培养基定容值700-800升；
C、将固液混合培养基投入发酵罐，密封发酵罐并加热至121℃，进行高温灭菌20-30分钟；
D、高温灭菌后，将发酵罐自然冷却；
E、当发酵罐中的培养基冷却至36-38℃时，向培养基中接入一株纳豆芽孢杆菌；
F、将接入纳豆芽孢杆菌的培养基在保持温度37℃、ph值6-7、通气量10升/分钟的发酵罐中培养27-30小时；
G、当培养基中ph值超出6-7的范围即标志发酵过程结束，产生纳豆激酶；
H、将上述发酵液浓缩至400升，发酵液中纳豆激酶活力达到1500-2000u/ml，在浓缩的发酵液中添加相当于发酵液总质量4-10％的糊精作为保护剂，进行负压离心喷雾干燥。
CN201210512373.8A 2012-12-04 2012-12-04 纳豆激酶的制造方法 Active CN103849610B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210512373.8A CN103849610B (zh) 2012-12-04 2012-12-04 纳豆激酶的制造方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210512373.8A CN103849610B (zh) 2012-12-04 2012-12-04 纳豆激酶的制造方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103849610A true CN103849610A (zh) 2014-06-11
CN103849610B CN103849610B (zh) 2018-03-02

Family

ID=50857734

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210512373.8A Active CN103849610B (zh) 2012-12-04 2012-12-04 纳豆激酶的制造方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103849610B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106085991A (zh) * 2016-07-15 2016-11-09 青岛大学 一种固态发酵制备纳豆激酶的方法
CN106722201A (zh) * 2016-12-27 2017-05-31 江汉大学 豇豆种子纳豆粉的生产工艺
CN108949728A (zh) * 2018-07-17 2018-12-07 吉林农业大学 一种纳豆激酶干燥保护剂
CN108998437A (zh) * 2018-07-17 2018-12-14 吉林农业大学 一种纳豆激酶液态发酵方法
CN109652355A (zh) * 2019-02-12 2019-04-19 西安培华学院 一种降糖纳豆芽孢杆菌及制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102008052A (zh) * 2010-12-14 2011-04-13 深圳技师学院 一种纳豆的制备方法
CN102524531A (zh) * 2010-12-13 2012-07-04 青岛中仁药业有限公司 一种纳豆芽孢杆菌固态微生态制剂的制备方法
CN102599436A (zh) * 2011-01-25 2012-07-25 舒威 高活性纳豆激酶及纳豆粉的制造方法
CN102618522A (zh) * 2011-01-28 2012-08-01 湖北国力生物技术开发有限公司 一种采用鹰嘴豆工业化生产纳豆激酶的方法
CN102763815A (zh) * 2012-07-13 2012-11-07 上海诺金科生物科技有限公司 一种鹰嘴豆纳豆及其制备方法和应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102524531A (zh) * 2010-12-13 2012-07-04 青岛中仁药业有限公司 一种纳豆芽孢杆菌固态微生态制剂的制备方法
CN102008052A (zh) * 2010-12-14 2011-04-13 深圳技师学院 一种纳豆的制备方法
CN102599436A (zh) * 2011-01-25 2012-07-25 舒威 高活性纳豆激酶及纳豆粉的制造方法
CN102618522A (zh) * 2011-01-28 2012-08-01 湖北国力生物技术开发有限公司 一种采用鹰嘴豆工业化生产纳豆激酶的方法
CN102763815A (zh) * 2012-07-13 2012-11-07 上海诺金科生物科技有限公司 一种鹰嘴豆纳豆及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CAI YONGJUN 等: "Directed evolution improves the fibrinolytic activity of nattokinase from Bacillus natto", 《FEMS MICROBIOL LETT》 *
王萍: "纳豆激酶的深层发酵工艺及分离纯化的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库电子期刊》 *
钟青萍 等: "纳豆菌活菌干燥制剂的研制", 《食品工业科技》 *
陶珍东 等主编: "《粉体工程与设备》", 31 August 2003, 化学工业出版社 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106085991A (zh) * 2016-07-15 2016-11-09 青岛大学 一种固态发酵制备纳豆激酶的方法
CN106085991B (zh) * 2016-07-15 2019-11-19 青岛大学 一种固态发酵制备纳豆激酶的方法
CN106722201A (zh) * 2016-12-27 2017-05-31 江汉大学 豇豆种子纳豆粉的生产工艺
CN106722201B (zh) * 2016-12-27 2020-08-04 江汉大学 豇豆种子纳豆粉的生产工艺
CN108949728A (zh) * 2018-07-17 2018-12-07 吉林农业大学 一种纳豆激酶干燥保护剂
CN108998437A (zh) * 2018-07-17 2018-12-14 吉林农业大学 一种纳豆激酶液态发酵方法
CN108998437B (zh) * 2018-07-17 2022-03-08 吉林农业大学 一种纳豆激酶液态发酵方法
CN109652355A (zh) * 2019-02-12 2019-04-19 西安培华学院 一种降糖纳豆芽孢杆菌及制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN103849610B (zh) 2018-03-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103849610A (zh) 纳豆激酶的制造方法
CN101124970A (zh) 大豆肽乳酸菌饮料及其制备方法
CN103431314A (zh) 纳豆菌发酵制备营养黑豆粉及其方法
CN104480150B (zh) 一种共轭亚麻酸异构体的生物富集方法
CN101218338B (zh) 生产液体曲的方法
ES2451648T3 (es) Procedimiento de producción de koji liquido que tiene enzima digestiva de fibra vegetal potenciada, koji líquido producido por el procedimiento y uso del koji líquido
CN105249117A (zh) 一种酵素饮料的制造方法
CN110367038A (zh) 一种高效抗癌蛹虫草及其生产方法
CN102816012B (zh) 一种真姬菇母种保藏培养基及其制备方法
CN103653168A (zh) 混合乳酸菌发酵制备荞麦饮料的方法
CN102599436B (zh) 高活性纳豆激酶及纳豆粉的制造方法
JP2015530109A (ja) 耐熱性アミラーゼを利用した銀杏発酵酒の製造方法
CN104432341B (zh) 黄瓜汁发酵饮料的制作方法
CN103431281A (zh) 一种保健型荞麦冲剂的制作方法
CN104247791A (zh) 生物酶发酵茶叶的方法
CN104171155A (zh) 一种乌龙茶饮料的制作方法
KR101136571B1 (ko) 말태반 발효물의 제조방법
CN101225418A (zh) 一种以稻米为原料制取γ-氨基丁酸的方法
CN103734852B (zh) 一种基于麦麸豆粕的米曲霉发酵饮料的制备方法
CN107794160B (zh) 一种谷物蛋白液及其制备方法
KR100769643B1 (ko) 청국장과 두유를 이용한 요구르트 제조방법 및 그에 의해제조된 요구르트
CN103549435A (zh) 乳清蛋白肽口服液的制作方法
CN108523117A (zh) 一种复合食用菌固体酵素保健食品及其制备方法
CN1292673C (zh) 玉米蛋白活性肽的制作方法
KR102061608B1 (ko) 가바 함유량이 향상된 백미 누룽지의 제조방법 및 이로 제조된 누룽지

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
DD01 Delivery of document by public notice

Addressee: Yang Dongju

Document name: Notification of Passing Examination on Formalities

SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant