CN103813782A - 皮肤美白剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种安全性高的皮肤美白剂、黑色素生成抑制剂以及多巴氧化酶活性抑制剂。本发明还涉及爵床或者其有机溶剂提取物用于多巴氧化酶活性抑制的用途。

Description

皮肤美白剂

技术领域

本发明涉及皮肤美白剂、黑色素生成抑制剂或者多巴氧化酶活性抑制剂。

背景技术

由于在美容上倾向于喜欢色素沉淀或斑点、雀斑少的白皮肤，因此希望即便长期使用也具有安全性高的美白作用的物质。色素沉淀或斑点、雀斑等被认为通常是由于皮肤暴露于紫外线中产生的刺激或者激素的异常或遗传因素等而造成存在于皮肤内的色素细胞（黑素细胞）被活化，黑色素生成亢进的结果产生的。该黑色素生成亢进的机理很复杂，但是已知黑色素是由于酶酪氨酸酶的作用生物合成的，酪氨酸酶的多巴氧化酶活性与黑色素生成的机理密切相关（非专利文献1）。开发有以该黑色素生成的机理为目标的美白剂。例如，作为具有通过抑制酶酪氨酸酶的活性来抑制黑色素产生的作用的皮肤美白剂，报告有抗坏血酸、熊果苷、曲酸等（非专利文献2）。

报告有抑制多巴氧化酶活性，具有美白作用的植物提取物。例如，已知有川楝（Melia toosendan Sieb.et Zucc.）、草果（Amomum tsao-kaCrevost et Lemaire）、Senecio gracilis和藜芦（Veratrum nigrum L.）（专利文献1）、欧白芷（Angelica archangelica）、花水木（Benthamidiaflorida）、甘遂（Euphorbia kansui Liou）、盐肤木（Rhus chinensis Mill.）、蛇床（Cnidium monnieri(L.)Cuss.）、龙芽草（Agrimonia pilosa Ledeb.）、小鹭鸶草（Diuranthera minor(C.H.Wright)Hemsl.）和印度小檗（Berberis aristata）（专利文献2）、金钱松、木蓝（Indigofera tinctoria）和洋金花（Datura metel）（专利文献3）、石榴（Punica granatum）花（专利文献4）、莲心（a bud of a Nelumbo nucifera Gaertn）（专利文献5）、以及腋生醉鱼草（Buddleja axillaris）（专利文献6）。

爵床科植物的爵床（Justicia procumbens）在中医中作为爵床而为人所知，适用于关节痛或者退热等。作为相同的爵床科的同属植物的小驳骨（Justicia gendarussa）作为皮肤外用镇痛剂或者皮肤外用抗痒剂的成分而为人所知（专利文献7），另外，已知同为爵床科的不同属的植物的桂叶山牵牛（Thunbergia laurifolia）、白鹤灵芝（Rhinacanthusnasuta(L.)Kurz）、穿心莲（Andrographis paniculata）具有酪氨酸酶活性阻碍、黑色素生成抑制或者美白作用（专利文献8～10）。

但是，至今还没有确认爵床科爵床（Justicia）属、尤其是爵床（Justicia procumbens）具有黑色素生成抑制作用或皮肤美白作用。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2010-195732号公报

专利文献2：日本特开2010-195731号公报

专利文献3：日本特开2010-159221号公报

专利文献4：日本特开2006-225286号公报

专利文献5：日本特开2011-37851号公报

专利文献6：日本特表2009-529499号公报

专利文献7：日本特开2005-281206号公报

专利文献8：日本特开2009-298711号公报

专利文献9：日本特开2003-089630号公报

专利文献10：日本特开2010-013400号公报

非专利文献

非专利文献1：Biochimica et Biophysica Acta1247,1-11(1995)

非专利文献2：美白战略（南江堂）IV.，美白剂的药理和临床，p95-116

发明内容

本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物用于多巴氧化酶活性抑制的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物用于黑色素生成抑制的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物用于皮肤美白的用途。

进一步，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造多巴氧化酶活性抑制剂中的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造黑色素生成抑制剂中的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造皮肤美白剂中的用途。

进一步，本发明提供一种多巴氧化酶活性抑制方法，其包括以有效量将爵床或者其有机溶剂提取物对对象进行给药的工序。

另外，本发明提供一种黑色素生成抑制方法，其包括以有效量将爵床或者其有机溶剂提取物对对象进行给药的工序。

另外，本发明提供一种皮肤美白方法，其包括以有效量将爵床或者其有机溶剂提取物对对象进行给药的工序。

附图说明

图1是由爵床的乙醇提取物产生的多巴氧化酶活性抑制。

图2是由爵床的丁二醇提取物产生的多巴氧化酶活性抑制。

图3是由爵床提取物产生的黑色素产生抑制。

具体实施方式

本发明涉及提供安全性高，能够抑制多巴氧化酶活性，并且作为化妆品或者医药等有用的皮肤美白剂、黑色素生成抑制剂以及多巴氧化酶活性抑制剂。

本发明者探索了具有皮肤美白作用或黑色素生成抑制作用等的来自天然的物质，结果发现，爵床科植物爵床具有多巴氧化酶活性抑制作用，作为发挥伴随黑色素过量生成的皮肤的褐化或者斑点·雀斑等的预防、改善、治疗等效果的医药、化妆品、皮肤外用剂以及皮肤美白用组合物等的原材料有用，从而完成了本发明。

如果使用本发明的多巴氧化酶活性抑制剂、黑色素生成抑制剂、或者皮肤美白剂，则可以抑制皮肤中的黑色素的过量产生，能够预防、改善或者治疗由于日晒等导致的皮肤的色素沉淀、斑点、雀斑。

在本说明书中，“非治疗性”是不包括通过医疗行为，即治疗对人体的处置行为的概念。

在本说明书中，“改善”是指疾病、症状或者状态的好转；疾病、症状或者状态的恶化的防止或者延迟；或者疾病、症状或者状态的进行的逆转、防止或者延迟。

在本说明书中，“预防”是指个体中疾病或者症状的发病的防止或者延迟；或者降低个体的疾病或者症状的发病的危险性。

本发明中的爵床是指爵床科植物的爵床（Justicia procumbens）或者六角英（Rostellularia procumbens）。

在本发明中，爵床可以将该植物的全草、叶（叶片、叶柄等）、果实（成熟、未熟等）、种子、花（花瓣、子房等）、茎、根茎、根、块根等直接或者切断、破碎、粉碎、榨取来使用，或者将它们干燥或者粉末化来使用。作为使用的部位，优选使用全草。作为爵床的提取物，只要不特别地限定，可以是来自上述部位的任意处的提取物，优选为全草提取物。提取物可以是从上述植物的部位中直接提取得到的提取物，也可以是将该植物的部位切断、破碎、粉碎或者榨取，和/或干燥或者粉末化再提取得到的提取物。

作为用于调制爵床提取物的提取溶剂，优选为有机溶剂，可以使用极性有机溶剂、非极性有机溶剂的任意种。作为该有机溶剂，可以列举1元、2元或者多元的醇类；丙酮、甲乙酮等酮类；乙酸甲酯、乙酸乙酯等的酯类；四氢呋喃、二乙基醚等的链状或者环状的醚类；聚乙二醇等的聚醚类；饱和或者不饱和的烃类；苯、甲苯等的芳香族烃类；二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等的卤化烃类；吡啶类；二甲亚砜；乙腈；二氧化碳、超临界二氧化碳；油脂、蜡、其他油类等，其中，从药理活性方面出发，优选醇类和饱和烃类。

作为上述醇类，不特别限定，例如可以列举甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、庚醇、辛醇等的1元醇类；1,3-丁二醇、乙二醇、丙二醇、1,4-丁二醇、1,5-戊二醇、1,6-己二醇等的2元醇类；甘油等的3元以上的醇类等，其中，从药理活性的观点出发，优选1元醇类和2元醇类。

作为上述醇类，优选碳原子数为1～10，进一步优选碳原子数为1～4的醇类。具体而言，可以列举甲醇、乙醇、1,3-丁二醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、叔丁醇等，从操作容易的观点出发，优选乙醇和1,3-丁二醇。

另外，作为上述饱和烃类，可以列举直链、支链或者环状的饱和烃，例如可以列举甲烷、乙烷、丙烷、正丁烷、正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷、正壬烷、正癸烷等的直链饱和烃；2-甲基丁烷、2,2-二甲基丙烷、2-甲基戊烷、3-甲基戊烷、2,2-二甲基丁烷、2,3-二甲基丁烷、2-甲基己烷、3-甲基己烷、2,2,4-三甲基戊烷等的支链饱和烃；环戊烷、环己烷、环庚烷等的环状饱和烃等，其中，从药理活性的观点出发，优选直链饱和烃。

作为上述饱和烃类，优选碳原子数为1～10，进一步优选碳原子数为5～10，更加优选碳原子数为5～8的饱和烃类。具体而言，可以列举正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷、2-甲基丁烷、2,2-二甲基丙烷、2-甲基戊烷、3-甲基戊烷、2,2-二甲基丁烷、2,3-二甲基丁烷、2-甲基己烷、3-甲基己烷、环己烷等，从操作容易的观点出发，优选正己烷。

上述有机溶剂可以单独使用或者混合2种以上作为混合液使用。

本发明中使用的有机溶剂包括含水有机溶剂。作为该含水有机溶剂，优选含水的亲水性有机溶剂。作为亲水性有机溶剂，不特别地限定，可以列举上述的醇类、乙酸、吡啶类等的质子性亲水性有机溶剂以及酮类、乙腈、二甲基亚砜等的非质子性亲水性有机溶剂，其中，优选质子性亲水性有机溶剂。在该质子性亲水性有机溶剂中，从操作容易的观点出发，优选上述醇类、进一步优选上述1元和2元的醇类、进一步优选碳原子数为1～4的醇类、更进一步优选乙醇和1,3-丁二醇。另外，可以将它们单独使用或者混合2种以上作为混合液使用。

上述含水有机溶剂中的含水量不特别限定，从药理活性的观点出发，为70容量%以下，优选为50容量%以下，进一步优选为25容量%以下。例如，作为含水有机溶剂中的亲水性有机溶剂的浓度，至少为亲水性有机溶剂的30容量%以上，进一步优选为50～100容量%，更加优选为75～100容量%，另外，从药理活性的观点出，优选为75～99.9容量%。

作为本发明中的提取手段，不特别限定，例如可以列举液液提取、固液提取、浸渍、浸出、煎出、回流提取、超声波提取、微波提取、离心提取等，可以单独或者组合2种以上来使用。此时，也可以使用分批式提取器或者索氏提取器等。

作为提取条件，不特别限定，提取温度优选为0～100℃，进一步优选为4～80℃，更加优选为4～40℃，提取时间优选为1分钟～50天，进一步优选为1小时～50天，更加优选为1～30天。另外，上述溶剂的使用量，相对于1质量份的植物（干燥物换算）为1～100质量份，进一步优选为1～50质量份，更加优选为5～40质量份。

作为提取的一个例子，优选相对于1质量份的植物（干燥物换算），使用含有上述溶剂浓度为50～95容量%的1元或者2元醇水溶液（优选为碳原子数为1～3的1元醇类或者碳原子数为3～5的2元醇类）和/或饱和烃类（优选碳原子数为5～10的饱和烃）1～50质量份，在10～40℃（优选为20～40℃）下提取1小时～30天（优选为5～20天）。另外，也可以煮沸脱气或者通入氮气等惰性气体除去溶解氧，并且在非氧化的气氛下进行提取。

按照上述方式得到的爵床提取物可以直接使用，也可以进一步稀释、浓缩或者冷冻干燥等，和/或调制成液状、粉末状或者膏状来使用。

另外，在将爵床用上述溶剂，优选为上述亲水性有机溶剂提取之后，如果进一步使用水洗或者液液分液、固液提取等的提取手段，则可以除去水溶性的夹杂物等，在药理活性方面有利。具体而言，在向爵床的提取物，优选为亲水性有机溶剂提取物中添加水和/或疏水性有机溶剂等的溶剂，进行混合、搅拌、振荡、离心分离等的物理手段之后，进行主要含有药理活性成分的组分（层）的回收。也可以适当重复进行该操作1～3次。回收之后也可以浓缩，将得到的固体物溶解于醇水溶液等中。

作为向上述有机溶剂提取物中添加的溶剂（以下，称为“添加溶剂”。），可以使用水、疏水性有机溶剂或者水-疏水性有机溶剂混合液。

在此，作为疏水性有机溶剂，不特别限定，例如可以列举上述的饱和或者不饱和烃类；芳香族烃类；卤化烃类；链状或者环状的醚类或者聚醚类；油等。其中，从药理活性的观点出发，优选饱和或者不饱和烃类，进一步优选饱和烃类。在饱和烃类中，优选碳原子数为5～10的饱和烃，进一步优选碳原子数为5～8的直链或者支链饱和烃，更加优选正己烷。另外，可以将这些各疏水性有机溶剂单独使用或者混合2种以上使用。

作为上述添加溶剂，从同时进行水洗和疏水性有机溶剂提取，操作效率好的观点出发，使用水-疏水性有机溶剂混合液有利。另外，也可以同时或者分别将水和疏水性有机溶剂添加于上述溶剂提取物中。在使用水-疏水性有机溶剂混合液进行提取、特别是进行液液分液（分配）的情况下，为了改善分层性，或者以除去在提取物中混有的酸性成分或者碱性成分为目的，也可以进一步添加醇类或者无机盐类。上述水-疏水性有机溶剂混合液中的水和疏水性有机溶剂的混合比例不特别限定，优选水（v）:疏水性有机溶剂（v）=1:0.1～1:10，进一步优选为1:0.1～1:5。

为了容易除去水溶性夹杂物，可以在上述添加溶剂中含有上述醇类，在这种情况下，该溶剂中醇类的含量优选为1～50容量%。

为了容易除去水溶性夹杂物，可以在上述添加溶剂中适当含有水溶性无机盐类，作为该水溶性无机盐类，可以列举氯化钠、氯化钾等的氯化物；碳酸钠等的碳酸盐；碳酸氢钠等的碳酸氢盐；硫酸钠等的硫酸盐等；磷酸钠等的磷酸盐等。另外，水中的水溶性无机盐类的含量优选为0.5～10%（m/v）。

上述添加溶剂的使用量不特别限定，优选相对于1g干燥固体物为10～100mL。另外，提取温度优选为4～80℃，进一步优选为10～40℃，更加优选为10～30℃。

按照上述方式得到的爵床的有机溶剂提取物可以直接使用，也可以将该提取物稀释、浓缩或者冷冻干燥等，调制成液状、粉末状或者膏状来使用。另外，还可以根据需要，将上述爵床的有机溶剂提取物提供给活性炭处理、液相色谱、液液分配、凝胶过滤、精密蒸馏等的分离精制技术，除去惰性的夹杂物等，进一步进行精制。

如后述实施例所示，爵床的有机溶剂提取物具有强烈抑制多巴氧化酶活性的优异的多巴氧化酶活性抑制作用。由于多巴氧化酶活性与黑色素生成的机理密切相关（非专利文献1），因此，如果抑制多巴氧化酶活性，就可以得到黑色素生成抑制效果、以及皮肤美白作用或者预防、改善或者治疗由于暴露于紫外线中等引起的皮肤的色素沉淀、斑点、雀斑等的症状的效果。后述实施例中还显示了通过爵床的有机溶剂提取物产生的黑色素产生抑制作用。

即，爵床或者其有机溶剂提取物可以用于多巴氧化酶活性抑制、用于黑色素生成抑制、用于皮肤美白、或者用于预防、改善或者治疗皮肤的色素沉淀、斑点、雀斑等的症状。这些用途可以是人或者非人动物、或者来自它们的组织、器官、细胞中的用途，另外，可以为治疗性用途，也可以为非治疗性用途。

因此，在一个实施方式中，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物用于多巴氧化酶活性抑制的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物用于黑色素生成抑制的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物用于皮肤美白的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物用于预防或者改善皮肤的色素沉淀、斑点或者雀斑的用途。

另外，本发明提供用于预防或者改善皮肤的色素沉淀、斑点或者雀斑的爵床或者其有机溶剂提取物。

在一个实施方式中，上述有机溶剂提取物可以是醇提取物。

上述的用途可以是治疗性用途，也可以是非治疗性用途。在一个实施方式中，上述非治疗性用途可以是在美容目的中的用途。

在其它实施方式中，本发明提供以爵床或者其有机溶剂提取物作为有效成分的多巴氧化酶活性抑制剂。

另外，本发明提供以爵床或者其有机溶剂提取物作为有效成分的黑色素生成抑制剂。

另外，本发明提供以爵床或者其有机溶剂提取物作为有效成分的皮肤美白剂。

在一个实施方式中，上述有机溶剂提取物可以是醇提取物。

在一个实施方式中，上述制剂本质上可以由爵床或者其有机溶剂提取物构成。

另外，在其它实施方式中，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造多巴氧化酶活性抑制剂中的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造黑色素生成抑制剂中的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造皮肤美白剂中的用途。

另外，本发明提供爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造皮肤的色素沉淀、色斑或者雀斑的预防、改善或者治疗剂中的用途。

在本实施方式的一个实施方式中，由上述制剂产生的黑色素生成抑制作用或者皮肤美白作用可以由多巴氧化酶活性抑制作用产生。

在一个实施方式中，上述有机溶剂提取物可以为醇提取物。

上述爵床或者其有机溶剂提取物可以作为原材料配合于用于多巴氧化酶活性抑制、用于黑色素生成抑制、用于皮肤美白、或者用于预防、改善或者治疗皮肤的色素沉淀、色斑、雀斑等的症状的组合物、医药、准医药、外用剂、化妆品、饮食品、饲料、或者饮食品或饲料的原料等中，或者可以用于它们的制造中。该组合物、医药、准医药、外用剂、化妆品、饮食品、饲料、或者饮食品或饲料的原料等也在本发明的范围内。

上述组合物、医药、准医药、外用剂、化妆品、饮食品、饲料、或者饮食品或饲料的原料等可以作为人用或者非人动物用来制造或者使用。上述爵床或者其提取物可以配合于该组合物、医药、准医药、外用剂、化妆品、饮食品、饲料、或者饮食品或饲料的原料等中，可以是用于多巴氧化酶活性抑制、用于黑色素生成抑制、用于皮肤美白或者预防、改善或者治疗皮肤的色素沉淀、色斑、雀斑等的症状的有效成分。

上述医药或者准医药含有上述爵床或者其提取物作为有效成分。该医药或者准医药可以以任意的给药方式给药。给药可以是经口，也可以是非经口。作为用于经口给药的剂型，例如可以列举如片剂、包覆片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂这样的固体给药形态、以及如酏剂、糖浆和悬浊液这样的液体给药形态；作为用于非经口给药的剂型，可以列举注射、输液、局部、外用剂、经皮、经粘膜、经鼻、经肠、吸入、栓剂、丸剂、贴附剂等。优选该医药或者准医药是皮肤外用剂的形态。

上述化妆品含有上述爵床或者其提取物作为有效成分。作为制成化妆品的情况下的形态，可以列举能够用于乳霜、乳液、化妆水（lotion）、悬浊液、凝胶、粉、面膜、薄片（sheet）、贴片（patch）、膏棒、粉饼等化妆品中的任意的形态。优选上述化妆品为皮肤美白用化妆品，另外，优选为皮肤外用化妆品。进一步优选上述化妆品为皮肤美白用的皮肤外用化妆品。

上述医药、准医药或者化妆品可以单独或者组合含有上述爵床或者其提取物，或者也可以与药学上或者作为化妆品允许的载体组合含有。作为所述载体，例如可以列举赋形剂、被膜剂、结合剂、增量剂、崩解剂、润滑剂、稀释剂、渗透压调节剂、pH调节剂、分散剂、乳化剂、防腐剂、稳定剂、防止氧化剂、着色剂、紫外线吸收剂、保湿剂、增粘剂、活性增强剂、抗炎症剂、杀菌剂、香料、矫味剂、矫臭剂等。另外，该医药或者准医药只要不失去上述爵床或其提取物的多巴氧化酶活性抑制作用，也可以含有其它有效成分或者药理成分。另外，该化妆品只要不失去上述爵床或其提取物的多巴氧化酶活性抑制作用，也可以含有其它有效成分或者化妆成分，例如保湿剂、美白剂、紫外线保护剂、细胞赋活剂、清洗剂、角质溶解剂、彩妆成分（例如，底妆、粉底、白粉、香粉、腮红、口红、眼部彩妆、眉笔、睫毛膏、其它）等。

上述医药、准医药或者化妆品可以由上述爵床或者其提取物，或者根据需要组合上述载体和/或其它有效成分、或者化妆成分、药理成分，按照常用方法来制造。例如，作为上述皮肤外用剂的医药或者准医药或者皮肤外用化妆品可以通过将上述爵床或者其提取物单独或者与通常配合于外用剂、外用医药品、准医药品或者皮肤化妆品中的油或者油状物质（例如，油脂类、蜡类、高级脂肪酸类、精油类、硅油类等）、保湿剂（例如，甘油、山梨糖醇、明胶、聚乙二醇等）、粉体（例如，粉笔、滑石、漂白土（fuller's earth）、高岭土、淀粉、树胶等）、色素、乳化剂、增溶剂、清洗剂、紫外线吸收剂、增粘剂、药效成分、香料、树脂、防菌防霉剂、其它植物提取物（例如，生药、中药、草药类）、醇类、多元醇类、无机酸（例如，碳酸氢盐、碳酸盐、氯化钠、氯化钾、硫酸钠等）、有机酸（例如，琥珀酸、戊二酸、富马酸、谷氨酸、苹果酸、柠檬酸、抗坏血酸等）、维生素类（例如，维生素A类、维生素E类、维生素B类、维生素C、叶酸等）、水溶性高分子、阴离子型表面活性剂（例如，烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐等）、阳离子型表面活性剂（例如，烷基季铵盐、烷基二甲基苄基铵盐等）、非离子型表面活性剂（例如，聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚等）、两性表面活性剂（例如，具有烷基的咪唑啉类、羰基甜菜碱类等）等组合来调制。

该医药、准医药或者化妆品中的爵床或者其提取物的含量，在作为皮肤外用剂的医药或者准医药的情况下，作为干燥重量优选为0.00001～20质量%，进一步优选为0.0001～10质量%，另外，在制成化妆品的情况下，作为干燥重量优选为0.0001～20质量%，进一步优选为0.0001～10质量%。

上述饮食品或者饲料可以是企图得到多巴氧化酶活性抑制、黑色素生成抑制、皮肤美白、或者皮肤的色素沉淀、色斑、雀斑等的症状的预防、改善或者治疗等的功能，根据需要标识该功能的饮食品、功能性饮食品、病患用饮食品、特定保健用饮食品、宠物食品等。

上述饮食品的种类不特别限定。作为饮料，例如可以列举果汁饮料、碳酸饮料、茶类饮料、咖啡饮料、乳饮料、酒精饮料、清凉饮料等所有的饮料。食品的形态可以为固体、半固体、液体等的任意的形态，另外，也可以为片剂形态、丸剂形态、药片、胶囊形态、液剂形态、糖浆形态、粉末形态、颗粒形态等。例如，作为食品，可以列举面包类、面类、糊、胶状食品、各种小吃类、蛋糕类、点心类、冰淇淋类、汤类、乳制品、冷冻食品、方便食品、其它加工食品、调味料、营养补充食品等。上述饲料的种类不特别限定，可以是任意的动物用饲料，其形态也与上述食品的情况同样可以是任意的形态。

上述饮食品、饲料、或者它们的原料可以单独含有上述爵床或者其提取物，或者组合其它食材或者溶剂、软化剂、油、乳化剂、防腐剂、香料、稳定剂、着色剂、防止氧化剂、保湿剂、增粘剂等添加剂含有上述爵床或者其提取物。该饮食品或者饲料中的上述爵床或者其提取物的含量，作为干燥重量优选为0.0001～10质量%，进一步优选为0.0001～5质量%，更加优选为0.001～1质量%。

另外，本发明提供抑制细胞的多巴氧化酶活性的方法。该方法包括向具有酪氨酸酶表达能力并且想要抑制多巴氧化酶活性的细胞中添加上述爵床或者其提取物的工序。

另外，本发明提供抑制细胞的黑色素生成的方法。该方法包括向具有黑色素生成能力并且想要抑制黑色素生成的细胞中添加上述爵床或者其提取物的工序。

本发明中的抑制多巴氧化酶活性或者黑色素生成的“细胞”只要是天然或者通过基因工程学改变的具有酪氨酸酶表达能力或者黑色素生成能力的细胞就不特别限定。作为细胞，优选可以列举色素细胞（黑素细胞、视网膜色素上皮细胞等），进一步优选可以列举黑素细胞。或者，该“细胞”可以是上述列举的细胞的细胞片或者细胞分离物，或者也可以是包含上述列举的细胞的组织或者来自上述列举的细胞的培养物。在细胞是细胞培养物的情况下，优选该细胞是在上述爵床或者其提取物的存在下培养的。添加的上述爵床或者其提取物的浓度，在细胞为细胞培养物的情况下，作为培养物中的最终浓度，以干燥重量换算，为0.00001～2%（w/v），优选为0.00005～0.5%（w/v），进一步优选为0.0001～0.1%（w/v）。

另外，在本发明中，上述爵床或者其提取物可以为了多巴氧化酶活性抑制，为了黑色素生成抑制，为了皮肤美白或者为了预防、改善或者治疗皮肤的色素沉淀、色斑、雀斑等的症状，对需要这些的对象以有效量进行给药或者使之摄取。该给药或者摄取可以以增进健康或者美容目的而非治疗地进行。作为给药或者摄取的对象，可以列举需要多巴氧化酶活性的抑制的动物。或者，作为给药或者摄取的对象，可以列举希望抑制黑色素生成或者皮肤美白的动物或者希望预防、改善或者治疗皮肤的色素沉淀、色斑、雀斑等的症状的动物。动物优选为人或者非人哺乳动物，进一步优选为人。

给药或者摄取的有效量，只要是能够抑制对象细胞的多巴氧化酶活性或者黑色素生成的量即可。优选给药或者摄取量可以根据对象的种类、体重、性别、年龄、状态或者其它要素而变动。给药或者摄取的用量、途径、间隔以及摄取的量或间隔可以由本领域技术人员适当确定。例如，在对人的皮肤局部给药的情况下，给药量以上述爵床或者其提取物的干燥重量换算优选为每1个成人（60kg）为0.001～1mg/天，进一步优选为0.01～0.1mg/天。

实施例

以下，基于实施例来进一步详细地说明本发明，但是本发明不限定于这些实施例。

制造例爵床提取物的调制

（制造例1）爵床50%乙醇提取物的调制

向80g爵床（新和物产公司制造）中加入800mL的50%乙醇，在室温下提取7天之后，过滤得到粗提取液，然后，浓缩干燥得到6.6g提取固体成分。将该提取固体成分溶解于50%乙醇中以使蒸发残留成分为1.0w/v%，调制爵床50%乙醇提取物。

（制造例2）爵床95%乙醇提取物的调制

向50g爵床（新和物产公司制造）中加入500mL的95%乙醇，在室温下提取7天之后，过滤得到粗提取液，然后，浓缩干燥得到897mg提取固体成分。将该提取固体成分溶解于95%乙醇中使蒸发残留成分为1.0w/v%，调制爵床95%乙醇提取物。

（制造例3）爵床50%丁二醇提取物的调制

向10g爵床（Nakanoshima Technos.Co.,Ltd.制造）中加入100mL50%的丁二醇（BG），在室温下提取7天之后，过滤得到蒸发残留成分为1.3w/v%的爵床50%BG提取物。

（制造例4）爵床80%丁二醇提取物的调制

向10g爵床（Nakanoshima Technos.Co.,Ltd.制造）中加入100mL80%的BG，在室温下提取7天之后，过滤得到蒸发残留成分为0.38w/v%的爵床80%BG提取物。

（制造例5）爵床100%丁二醇提取物的调制

向10g爵床（Nakanoshima Technos.Co.,Ltd.制造）中加入100mL100%的BG，在室温下提取7天之后，加入25mL水，然后，过滤得到蒸发残留成分为0.06w/v%的爵床100%BG提取物。

实施例1由爵床提取物产生的多巴氧化酶活性抑制

（1）细胞培养

将来自正常新生儿表皮的黑素细胞（NHEMs；KURABOINDUSTRIES LTD.）在96孔盘中以1×10⁴细胞/孔（100μL/孔）的细胞密度播种，在37℃、5%CO₂下培养。对于培养基，使用含有PMA（-）的繁殖用添加剂（HMGS）的Medium254。

培养了3天之后，以调节各培养基中最终浓度达到1nM的方式添加内皮素-1（Endothelin-1（ET-1））、SCF、α-MSH、组胺（Histamine）、PGE₂，并且以成为表1中记载的最终浓度的方式添加按照上述制造例1～5调制的爵床提取物，在37℃、5%CO₂的条件下进行培养3天。作为对照例，添加等量的乙醇水溶液（50%或者95%）或者丁二醇（BG）水溶液（50%、80%或者100%）。

（2）多巴氧化酶活性的测定

培养结束之后，以20μL/孔添加阿尔玛蓝（Alamar-Blue）（InvitrogenCorporation）试剂，进行2～3小时培养之后，测定培养基的荧光强度测定细胞呼吸活性。之后，用PBS清洗细胞，以20μL/孔的量添加提取缓冲液（0.1M Tris-HCl（pH7.2）、1%NP-40、0.01%SDS、100μM PMSF、1μg/m抑肽酶（aprotinin）），以20μL/孔的量添加分析缓冲液（AssayBuffer）（4%二甲基甲酰胺、100mM磷酸钠-缓冲液（pH7.1）），在4℃下将细胞进行增溶3小时，测定多巴氧化酶活性。多巴氧化酶活性测定参考MBTH法（Winder A.et al.,1991,Eur.J.Biochem.198:317-326），用以下的方法进行。

向增溶后的细胞溶液的各孔中分别添加80μL的上述分析缓冲液、60μL的20.7mM MBTH（3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙）溶液，作为底物的40μL5mM的L-多巴（L-二羟基苯丙氨酸）溶液，在37℃下使之反应30～60分钟之后，以490nm的吸光度测定该显色反应（N=3）。测定值以相对于对照的结果的相对值表示。

（3）结果

将结果示于表1以及图1和图2中。通过爵床的50%乙醇提取物、95%乙醇提取物、50%BG提取物、80%BG提取物、以及100%BG提取物使得多巴氧化酶活性被提取物添加浓度依赖性地抑制了。由通过阿尔玛蓝法进行的细胞呼吸活性的测定确认了表1所示浓度的爵床提取物添加对细胞繁殖不产生影响。

[表1]

实施例2由爵床提取物产生的黑色素产生抑制

使用以最终浓度为10nM添加了ET-1和SCF的EPI-100-NMM113培养基，在37℃、5%CO₂的条件下培养三维培养皮肤模型（MEL300A）。自培养第一天开始，将按照上述制造例1调制的蒸发残留成分为1.0w/v%的爵床50%乙醇提取物，以最终浓度为0.05v/v%和0.1v/v%（提取成分最终浓度为0.0005w/v%和0.001w/v%）的方式添加。作为对照样，添加等量的50%乙醇。3天进行一次培养基交换。14天之后，使用阿尔玛蓝试剂，用与实施例1同样的方法测定细胞呼吸活性。接下来，连同作为培养支撑体的杯一起用PBS清洗三维培养皮肤，用小镊子剥离皮肤薄片转移至管中，进一步用PBS清洗3次。用50%乙醇清洗3次，用100%乙醇清洗2次之后，在室温下放置一晚使之完全干燥。最终加入200μL2M的NaOH之后，在100℃下使之溶解，通过离心分离对得到的上清液用405nm的测定波长测定吸光度，算出黑色素量。将测定值相对于对照的结果的相对值表示。

将培养14天之后的三维培养皮肤模型的照片和黑色素量测定结果示于图3中。通过添加爵床提取物，视觉上确认有细胞的黑化抑制效果（图3A），细胞的黑色素量减少了80%以上（图3B）。另外，通过阿尔玛蓝法的细胞呼吸活性测定的结果，确认了该浓度的提取物不显示细胞毒性。

Claims (13)

1.爵床或者其有机溶剂提取物用于多巴氧化酶活性抑制的用途。

2.爵床或者其有机溶剂提取物用于黑色素生成抑制的用途。

3.爵床或者其有机溶剂提取物用于皮肤美白的用途。

4.如权利要求1～3中任一项所述的用途，其中，

所述有机溶剂提取物为醇提取物。

5.爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造多巴氧化酶活性抑制剂中的用途。

6.爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造黑色素生成抑制剂中的用途。

7.爵床或者其有机溶剂提取物在用于制造皮肤美白剂中的用途。

8.如权利要求5～7中任一项所述的用途，其中，

所述有机溶剂提取物为醇提取物。

9.如权利要求6～8中任一项所述的用途，其中，

由所述制剂产生的黑色素生成抑制作用或者皮肤美白作用由多巴氧化酶活性抑制作用产生。

10.一种多巴氧化酶活性抑制方法，其中，

包括以有效量将爵床或者其有机溶剂提取物对对象进行给药的工序。

11.一种黑色素生成抑制方法，其中，

包括以有效量将爵床或者其有机溶剂提取物对对象进行给药的工序。

12.一种皮肤美白方法，其中，

包括以有效量将爵床或者其有机溶剂提取物对对象进行给药的工序。

13.如权利要求10～12中任一项所述的方法，其中，

所述有机溶剂提取物为醇提取物。

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