CN103804451A - 一种由葫芦素b水解制备葫芦素d的方法 - Google Patents
一种由葫芦素b水解制备葫芦素d的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103804451A CN103804451A CN201210456038.0A CN201210456038A CN103804451A CN 103804451 A CN103804451 A CN 103804451A CN 201210456038 A CN201210456038 A CN 201210456038A CN 103804451 A CN103804451 A CN 103804451A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cucurbitacin
- reaction
- organic phase
- solution
- hydrolysis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明是一种由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法,该方法简便易行,只需(1)良溶剂将葫芦素B溶解,得有机相;(2)配置pH值大于9的碱液和/或缓冲液,得水相;(3)将水相加入到有机相中,搅拌均匀,得具有有机相水相比例的反应液;(4)将反应液在大于20℃温度下反应,之后,冰浴停止反应;(5)向停止反应的反应液加入等体积的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,即得所需水解产物。本发明解决了葫芦素D来源单一的问题。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体地说是一种由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法。
背景技术
葫芦素类(Cucurbitacins)成分是从植物中提取的一类高度氧化的四环三萜类化合物,至今已发现40多种。我国古代就采用中药甜瓜蒂,治疗黄疸病,又能催吐、祛痰,用于痰涎宿食,神农本草曾记载瓜蒂能消除水湿,消灭蛊毒,使涌吐、泻下,用来治疗严重的水邪,四肢浮肿,咳嗽气喘,以及误食毒物,停于胃脘尚未吸收者,由此可见葫芦素类药物在我国、治病救人的历史之悠久。该类成分多数存在于葫芦科植物中,部分存在了其它植物中。目前,我国批准生产的葫芦素又叫葫芦素BE,为中药甜瓜蒂(别名:苦丁香)提取物,主要含葫芦素B、E等成分,现有的提取物中葫芦素B含量为60%以上,其质量标准收载于我国部颁标准中。具有抗肿瘤、抗化学致癌、保肝、提高免疫力等多种生物活性。
葫芦素D(cucurbitacin D,CuD),葫芦素族化合物之一,其药理作用广泛,除具有与其它葫芦素族化合物类似的药理作用(如:细胞毒、对人结肠(HCT-116)、乳腺(MCF-7)、肺(NCI-H460)和中枢神经系统(CNS)(SF-268)癌细胞生长的抑制作用、抗炎作用等[1,2])外,还能诱导激活胎儿血红蛋白基因而作为治疗镰刀型细胞贫血的候选药物,也有报道CuD对地中海贫血治疗也有一定效果 [3-5],近年来其被关注度越来越高。
我国从甜瓜蒂中提取的葫芦素,通常为葫芦素B、E,未见从甜瓜蒂中提取CuD的报道。而CuD的来源,除了直接从葫芦科植物中提取得到以外,还可以由CuB水解法制得,由它们的结构式可以看出,CuD是CuB酯键断裂后所得产物(见附图1),由CuB水解后的HPLC色谱图(见附图2)中的新色谱峰保留时间可知,水解产物的极性大于CuB。
发明内容
针对葫芦素D存在的来源单一,纯度低等不足,本发明的目的是提供一种由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法。
为实现本发明的目的,发明人提供如下技术方案:
一种由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法,其特征在于:
1、良溶剂将葫芦素B溶解,得有机相,
2、配置pH值大于9的碱液和(或)缓冲液,得水相,
3、将水相加入到有机相中,搅拌均匀,得具有一定有机相水相比例的反应液,
4、将反应液于一定温度下反应适宜的时间,之后,冰浴停止反应,
5、向停止反应的反应液加入等体积的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
本发明所述用于溶解葫芦素B的良溶剂,可以是乙醇、乙腈、甲醇、氯仿、二氯甲烷、甲苯、DMF、二甲基亚砜等中的一种或几种的混合物。作为优选,定为乙醇、乙腈、甲醇中的一种或几种的混合物。
本发明所述的pH值大于9的水相,可以是pH值大于9的NaOH溶液、KOH溶液、Ba(OH)2溶液、Ca(OH)2溶液、磷酸盐缓冲液等中的一种或几种的混合物。作为优选,定为NaOH溶液、KOH溶液、磷酸盐缓冲液中的一种或几种的混合物。
发明人研究发现,当水相pH值大于14时,随着反应的进行,葫芦素D会被进一步碱化成其他物质,故本发明所述水相的pH值应为9~14之间。
本发明所述的有机相与水相体积比,可以是1:99~99:1。作为优选,定为30:70~70:30。作为更优选,定为40:60~60:40。
本发明所述的反应温度,大于20℃。作为优选,定为60℃。
本发明所述的反应时间,大于10 min;作为优选,定为90 min。
本发明的优点是:
首次通过葫芦素B水解法制备得到了葫芦素D,该方法简单易行,反应易于控制而且产率高。
弥补了现有葫芦素D来源单一,工艺复杂的不足。
附图说明
图1是CuB的水解机理;
图2是水解后CuB的色谱图 ;
图中 1-水解产物(CuD) 2-CuB。
具体实施方式
为了更清除的理解本发明,以下结合发明人给出的依本发明的技术方案所完成的实施例对本发明做进一步的详细说明。
以下是本发明人给出的实施例,本发明并不局限于这些实施例,对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
实施例1:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | NaOH溶液 | 12 | 50:50 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例2:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | NaOH溶液 | 10 | 50:50 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值10的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例3:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | NaOH溶液 | 14 | 50:50 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值14的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例4:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | NaOH溶液 | 13 | 50:50 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值13的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例5:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | KOH溶液 | 12 | 50:50 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的KOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例6:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 甲醇 | NaOH溶液 | 12 | 50:50 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 甲醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例7:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 甲醇 | KOH溶液 | 12 | 50:50 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 甲醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的KOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例8:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | NaOH溶液 | 12 | 76:24 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例9:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | KOH溶液 | 12 | 76:24 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的KOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例10:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 甲醇 | NaOH溶液 | 12 | 76:24 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 甲醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例11:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 乙腈 | NaOH溶液 | 12 | 76:24 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 乙腈完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例12:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | NaOH溶液 | 12 | 24:76 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例13:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | KOH溶液 | 12 | 24:76 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的KOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例14:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 甲醇 | NaOH溶液 | 12 | 24:76 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml甲醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例15:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 乙腈 | NaOH溶液 | 12 | 24:76 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml乙腈完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例16:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | NaOH溶液 | 12 | 68:32 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例17:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | NaOH溶液 | 10 | 68:32 | 60℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值10的NaOH溶液,60℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例18:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 甲醇 | NaOH溶液 | 10 | 68:32 | 40℃ | 6 h |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 甲醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值10的NaOH溶液,40℃下反应6h,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例19:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | KOH溶液 | 10 | 68:32 | 60℃ | 12 h |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值10的KOH溶液,60℃下反应12h,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
实施例20:葫芦素B水解法制备葫芦素D
反应条件:
葫芦素B | 有机相 | 水相 | 水相pH | 有机相水相体积比 | 反应温度 | 反应时间 |
100 mg | 95%乙醇 | NaOH溶液 | 12 | 32:68 | 30℃ | 120 min |
称取葫芦素B 200 mg,用20 ml 95%乙醇完全溶解后,向其中加入20 mlpH值12的NaOH溶液,30℃下反应120 min,之后冰浴停止反应,向停止反应的反应液加入40ml的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
Claims (6)
1.一种由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法,其特征在于:
(1)良溶剂将葫芦素B溶解,得有机相;
(2)配置pH值大于9的碱液和/或缓冲液,得水相;
(3)将水相加入到有机相中,搅拌均匀,得具有有机相水相比例的反应液;
(4)将反应液在大于20℃温度下反应,之后,冰浴停止反应;
(5)向停止反应的反应液加入等体积的乙酸乙酯萃取水解产物,40℃旋转蒸发挥去乙酸乙酯,得所需水解产物。
2.如权利要求1所述的由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法,其特征在于:用于溶解葫芦素B的良溶剂,是乙醇、乙腈、甲醇、氯仿、二氯甲烷、甲苯、DMF、二甲基亚砜中的一种或几种的混合物。
3.如权利要求1所述的由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法,其特征在于:pH值大于9的水相,可以是pH值大于9的NaOH溶液、KOH溶液、Ba(OH)2溶液、Ca(OH)2溶液、磷酸盐缓冲液中的一种或几种的混合物。
4. 如权利要求1所述的由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法,其特征在于:有机相与水相体积比,是1:99~99:1。
5.如权利要求1所述的由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法其特征在于:反应液的反应温度定为60℃。
6.如权利要求1所述的由葫芦素B水解制备葫芦素D的方法,其特征在于:反应液的反应时间,大于10 min。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210456038.0A CN103804451A (zh) | 2012-11-14 | 2012-11-14 | 一种由葫芦素b水解制备葫芦素d的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210456038.0A CN103804451A (zh) | 2012-11-14 | 2012-11-14 | 一种由葫芦素b水解制备葫芦素d的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103804451A true CN103804451A (zh) | 2014-05-21 |
Family
ID=50701880
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201210456038.0A Pending CN103804451A (zh) | 2012-11-14 | 2012-11-14 | 一种由葫芦素b水解制备葫芦素d的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103804451A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110041392A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-07-23 | 浙江工业大学 | 一种葫芦素d的制备方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090247459A1 (en) * | 2007-11-09 | 2009-10-01 | Baxter International Inc. | Modified recombinant factor viii and von willebrand factor and methods of use |
CN102659888A (zh) * | 2012-03-02 | 2012-09-12 | 张南 | 葫芦素衍生物及制备方法 |
-
2012
- 2012-11-14 CN CN201210456038.0A patent/CN103804451A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090247459A1 (en) * | 2007-11-09 | 2009-10-01 | Baxter International Inc. | Modified recombinant factor viii and von willebrand factor and methods of use |
CN102659888A (zh) * | 2012-03-02 | 2012-09-12 | 张南 | 葫芦素衍生物及制备方法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110041392A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-07-23 | 浙江工业大学 | 一种葫芦素d的制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101732417B (zh) | 博落回总生物碱离子对混合物的制备方法和用途 | |
Schrader et al. | Ungeremine and its hemisynthesized analogues as bactericides against Flavobacterium columnare | |
CN101948430A (zh) | 青藤碱衍生物及其制备方法和应用 | |
CN109575024A (zh) | 一种苦参碱酚酸盐及其制备方法与应用 | |
CN102731301B (zh) | 麝香草酚酯类衍生物、制备方法和用途 | |
CN102659777A (zh) | 一种抗肿瘤药物 | |
CN103193854B (zh) | 桦木醇的分离纯化及桦木酸的生物和化学转化方法 | |
CN103694247A (zh) | 化合物Chaetomugilide A及其制备方法和应用 | |
CN103804451A (zh) | 一种由葫芦素b水解制备葫芦素d的方法 | |
CN104031109A (zh) | 一种微生物发酵纯化茶皂素的方法 | |
CN103435622B (zh) | 一种螺环吲哚二酮哌嗪类生物碱及其合成方法和应用 | |
CN102127016B (zh) | 一种海替生型二萜生物碱及其制备方法 | |
CN104593443A (zh) | 一种沉香色酮类成分的制备方法 | |
CN105503984B (zh) | 一种Hedgehog信号通路抑制剂及其制备方法和应用 | |
CN103421852B (zh) | 一种从褐藻中提取均苯三酚的方法 | |
CN103980217B (zh) | 一类蒎烷基异噁唑类化合物及其合成方法和应用 | |
CN103585166A (zh) | 黄醇酮衍生物的医药用途 | |
CN102627625A (zh) | 五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物及其用途 | |
CN102119953A (zh) | 地锦草提取物的应用 | |
CN103159612B (zh) | 从银杏外种皮中提取银杏酸的工业化生产技术 | |
TW201718868A (zh) | 藉由酶法從人蔘的皂苷選擇性地製備化合物k及化合物y的方法 | |
CN108743538A (zh) | 可提高药物生物利用度的姜黄素液晶 | |
CN104016959B (zh) | 一种原苏木素a及其衍生物化学全合成方法 | |
CN105418725B (zh) | 五环三萜类化合物及其应用 | |
CN102357092B (zh) | 一种黄烷酮天然产物ddif的用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20140521 |