CN102627625A - 五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物及其在制备治疗肝细胞损伤的药物中的用途，与现有技术相比，本发明将五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素进行结构修饰和改造，在4取代位和/或11取代位分贝进行卤代和/或氧化，生成具有通式（一）结构的衍生物，该衍生物对由CCl₄致人肝HL-7702细胞损伤具有显著的保护作用，可作为筛选价格低廉、疗效确切不反弹的新型抗肝损伤药物特别是抗化学损伤药物的候选化合物。

Description

五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物及其用途

技术领域

本发明涉及药物化学技术领域，特别是涉及五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物及其用途。

背景技术

肝细胞损伤是各型肝病共同的病理基础，包括病毒、酒精和化学物质三大因素所引起的肝损伤。其中由化学肝毒性物质所造成的肝损伤，即化学性肝损伤，是引发多种肝脏疾病的重要始动环节，已成为继病毒性肝损伤之后的第二大肝病诱因，目前临床应用的500-1000余种中西药物以及多种化学药品，均可引起不同程度的肝病。据国内外资料报道，有20%的暴发性肝衰竭由化学药物引起。近年来，化学性肝损伤呈增加趋势，严重威胁着人们的生命健康。但目前临床上仍缺乏有效的防治药物，因而加强肝脏损伤保护研究、开展对化学性肝病的防护工作，对于提高人类健康水平具有重要意义。

目前保肝抗肝损伤的药物众多，按其作用类型可分为几大类：（1）护肝药物：肌苷、益肝灵（水飞蓟素）、VitB、VitC等；（2）缓解炎症药物：复方甘草甜素、甘力欣、强力新（强力宁）等；（3）降酶药物：联苯双酯、五味子、垂盆草等；（4）退黄药物：门冬氨酸钾镁、腺甘蛋氨酸、苯巴比妥等；（5）中草药：山豆根（肝炎灵）、苦参素等；（6）抗纤维化药物：干扰素、秋水仙碱等。有人估计目前世界上用于治疗肝炎的药物有500种之多，新药不断涌现，疗效却始终不十分确切，事实上至今尚无一种药物能真正根治肝炎。而且诸多保肝药物因其毒副作用、价格比较昂贵等问题，限制了其临床应用。因此，开发和筛选对肝脏有确切保护作用的新药，仍是一项艰巨的工作。

现代医学对各种诱因引起的肝损伤都进行了比较深入的研究，已从多方面探讨了肝损伤的发生机制，并研制开发出了膜保护剂、抗脂质过氧化剂、抗免疫反应剂等保肝药物。在我国上世纪70年代和90年代，由中国医学科学院北京药物所的刘耕陶院士等一大批科学家经过不懈的努力成功地从中药五味子中研制出了保肝降酶的慢性肝炎新药联苯双酯（DDB）和双环醇，在当今临床上为广大肝病患者带来了福音，但美中不足的就是停药会出现反弹等现象。目前，从传统中药中研发新药，仍是现代药物研发的重要途径之一。我国具有丰富的中草药资源，对其中的天然产物进行深入的化学与生理活性的研究，从而发现具有开发前景的新类型结构化合物作为先导化合物，经结构修饰和改造，寻找疗效更高、结构更为简单，并且便于大生产的、安全有效的候选化合物作为临床上有用的原型药物，存在着极大的机遇。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是对从传统中药五味子中提取得到的五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素进行结构修饰和改造，提供一系列五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素衍生物及其在制备抗肝细胞损伤的药物中的应用，为筛选价格低廉、疗效确切不反弹的抗肝损伤药物提供候选化合物。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物，具有如下通式（一）的结构：

通式（一）

其中，在4取代位和/或11取代位分别卤代和/或氧化。

上述五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物，4取代位取代基R₁₁代表氢、氯、溴、碘、甲氧基或羰基；11取代位取代基R₄代表氢、氯、溴、碘或乙酰基。

其它取代基所代表的基团分别为：所述R₁和R₂代表甲氧基，R₃代表羰基，R₈代表氢、羟基或甲氧基，R₁₂和R₁₃代表甲氧基或亚甲二氧基，R₁₄代表羟基、甲氧基或羰基。

前述五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素衍生物在制备治疗肝细胞损伤的药物中的应用。所述衍生物包括结构中的任何立体异构体或其消旋体或旋光异构体或其混合物。

上述技术方案中，通式（一）化合物的取代位如下：

与现有技术相比，本发明将五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素进行结构修饰和改造，在4取代位和/或11取代位分贝进行卤代和/或氧化，生成具有通式（一）结构的衍生物，该衍生物对由CCl₄致人肝HL-7702细胞损伤具有显著的保护作用，可作为筛选价格低廉、疗效确切不反弹的新型抗肝损伤药物特别是抗化学损伤药物的候选化合物。

具体实施方式

实施例1：五味子酚和五味子乙素C₄、C₁₁位的双氯化反应

分别称取0.25 mmol五味子酚（或五味子乙素）和0.52 mmol的N-氯代丁二酰亚胺（NCS） 于干燥的25 mL 圆底瓶中，然后向圆底烧瓶内加入5 mL的甲醇（分析纯），室温下搅拌反应1 h 后，加水终止反应，用氯仿萃取三次，氯仿层用 Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩有机层，并通过制备薄层层析（展开剂为石油醚-乙酸乙酯=（20-8）：1），制得化合物1（收率为44.4%）和化合物2（收率为98.4%）。

EI-MS：m/z 468 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.06（2H，m），3.94（6H，s），3.76（3H，s），3.56（3H，s），2.48（1H，m），2.27（2H，m），2.01（1H，m），1.77（1H，m），1.62（1H，m），1.04（3H，d，J = 7.2 Hz），0.84（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：150.4（s），149.4（s），145.6（s），144.7（s），139.5（s），135.0（s），135.0（s），133.0（s），127.1（s），124.6（s），122.2（s），107.5（s），101.6（q），61.2（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），60.8（OCH₃，q），59.7（OCH₃，q），39.1（d），34.3（t），34.3（d），30.9（t），20.8（q），10.2（q）。

EI-MS：m/z 470 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：5.75（1H，brs），3.99（12H，s），3.60（3H，s），2.54（1H，d，J = 13.2 Hz），2.25（2H，m），2.05（2H，m）2.02（1H，m），1.06（3H，d，J = 7.2 Hz），0.83（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：149.8（s），149.5（s），147.7（s），145.2（s），144.3（s），138.1（s），137.1（s），132.8（s），124.5（s），122.6（s），120.3（s），119.7（s），60.9（OCH₃，q），60.8（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），60.4（OCH₃，q），60.1（OCH₃，q），38.9（d），34.1（d），33.9（t），31.4（t），20.7（q），9.7（q）。

实施例2：五味子酚和五味子乙素C₄、C₁₁位的双溴化反应

称取0.12 mmol五味子酚（或五味子乙素）于干燥的25 mL 圆底烧瓶中，再加入适量水饱和的CCl₄ 溶液，待样品溶解后，向圆底烧瓶内滴加4滴溴素（Br₂），混合体系在室温下避光搅拌反应1 h 后，向反应体系中逐滴滴加10 % Na₂S₂O₃，充分搅拌，直至无溴水颜色，反应液用氯仿萃取三次，氯仿层用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩有机层，并通过制备薄层层析（展开剂为石油醚-乙酸乙酯=（5-3）：1），可制备得到化合物3（收率为98%）和化合物4（收率为97.6%）。

EI-MS：m/z 560 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.05（2H，m），3.90（6H，s），3.73（3H，s），3.54（3H，s），2.46（2H，m），2.35（2H，m），1.97（1H，m），1.75（1H，m），1.03（3H，d，J=7.2 Hz），0.84（3H，d，J=4.4 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：151.1（s），150.4（s），147.2（s），144.6（s），140.1（s），135.9（s），134.7（s），134.6（s），127.5（s），122.8（s），116.6（s），101.2（d），96.1（s），61.1（OCH₃，q），60.9（OCH₃，q），60.8（OCH₃，q），59.7（OCH₃，q），38.9（d），36.9（t），34.3（d），33.4（t），20.5（q），10.8（q）。

EI-MS：m/z 558 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：5.72（1H，brs），4.00（3H，s），3.98（3H，s），3.95（3H，s）3.93（3H，s），3.59（3H，s），2.57（1H，d，J=13.2 Hz），2.36（2H，m），2.00（1H，m），1.80（1H，m），1.59（1H，m），1.07（3H，d，J=7.2 Hz），0.85（3H，d，J=7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：151.1（s），150.6（s），148.9（s），146.2（s），144.5（s），138.7（s），138.3（s），134.7（s），125.3（s），120.4（s），114.5（s），112.4（s），61.2（OCH₃，q），61.1（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），60.9（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），39.1（d），36.9（t），34.4（t），34.4（d），20.7（q），10.7（q）。

实施例3：五味子醇甲C₄、C₁₁位的双溴化反应

分别称取0.25 mmol 五味子醇甲和0.62 mmol N-氯代丁二酰亚胺（NBS） 于干燥的25 mL 圆底瓶中，向圆底烧瓶内加入5 mL 的甲醇（分析纯），室温下搅拌反应1 h，水-氯仿萃取三次，氯仿层用Na₂SO₄ 干燥，过滤，浓缩有机层，并通过制备薄层层析（展开剂为石油醚-乙酸乙酯=6：1），制得化合物5（收率为95.9%）。

    EI-MS：m/z 590 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：3.88（12H，s），3.52（3H，s），3.39（3H，s），3.08（1H，m），2.95（1H，d，J = 14.0 Hz），2.64（2H，m），1.88（1H，m），1.26（3H，s），0.82（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：177.9（s），150.8（s），150.5（s），150.3（s），144.8（s），144.4（s），134.7（s），133.3（s），127.6（s），126.7（s），116.1（d），72.9（s），60.9（OCH₃，q），60.9（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），60.4（OCH₃，q），41.4（d），38.5（t），31.1（t），30.7（q），12.6（q）。

实施例4：五味子乙素和五味子醇甲C₄、C₁₁位的双碘化反应

分别称取0.13 mmol五味子乙素（或五味子醇甲）和0.12 mmol碘单质和0.17 mmol碘酸于干燥的25 mL 圆底烧瓶中，再向瓶内分别加入1 mL CCl₄、0.5 mL 30 %的H₂SO₄、1 mL冰醋酸，60 ℃下搅拌反应过夜，待薄层层析检测反应完全后，向反应体系中滴加10 % Na₂S₂O₃，充分搅拌，直至无碘颜色，加水终止反应后，用乙酸乙酯萃取 3 次，乙酸乙酯层用Na₂SO₄ 干燥，过滤，浓缩有机层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯=（15-12）：1），可制备得到化合物6（收率为61.3%）和化合物7（收率为53%）。

EI-MS：m/z 652 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.05（2H，m），3.92（6H，s），3.75（3H，s），3.57（3H，s），2.54（1H，m），2.41（2H，m），1.94（1H，m），1.75（1H，m），1.61（1H，m），1.07（3H，d，J = 7.2 Hz），0.91（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：152.6（s），152.0（s），150.5（s），143.4（s），140.9（s），137.9（2C，s），137.8（s），133.2（s），127.2（s），122.9（s），100.4（s），96.6（s），61.0（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），60.0（OCH₃，q），41.9（t），38.5（d），37.8（t），34.2（d），20.1（q），12.3（q）。

EI-MS：m/z 684 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：3.95（6H，s），3.91（6H，s），3.60（3H，s），3.46（3H，s），3.10（1H，m），3.00（2H，m），2.90（1H，m），1.82（1H，m），1.38（3H，s），0.91（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：153.0（s），152.8（s），152.0（2C，s），144.0（s），143.4（s），138.0（s），136.6（s），127.8（s），126.6（s），96.1（s），96.0（d），61.0（OCH₃，q），60.9（OCH₃，q），60.8（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），60.4（OCH₃，q），43.1（t），41.9（d），36.2（t），30.8（q），13.3（q）。

实施例5：五味子酚C₄、C₁₁位的双碘化反应

步骤（1）：于100 mL圆底烧瓶内分别加入1.99 mmol五味子酚，30 mmol醋酸酐，60 mmol吡啶，室温下搅拌反应4 h。待薄层层析检测完全反应，终止反应，向瓶内加入足量的水，置于冰水浴中即有白色沉淀析出，过滤，干燥，可制备得到化合物8（收率为97.4%）。

EI-MS：m/z 444 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.70（1H，s），6.51（1H，s），3.91（6H，s），3.86（6H，s），3.63（3H，s），2.62（1H，m），2.55（1H，m），2.04（1H，m），1.91（1H，m），1.72（1H，m），1.95（3H，s），1.00（3H，d，J = 7.2 Hz），0.79（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：168.4（s），152.9（s），151.3（s），151.0（s），142.1（s），140.1（s），139.3（s），139.1（s），133.8（s），123.2（s），120.6（s），112.8（d），107.1（d），60.8（2OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），55.9（OCH₃，q），55.7（OCH₃，q），40.4（d），40.0（t），35.3（t），33.6（d），21.6（q），20.4（q），12.8（q）。

    步骤（2）：分别称取0.23 mmol反应一的产物（化合物8），0.15 mmol碘单质和0.31 mmol碘酸于干燥的15 mL 圆底瓶中，再向瓶内分别加入1 mL CCl₄、0.5 mL 30 % H₂SO₄和1 mL 冰醋酸，于60 ℃下搅拌反应过夜，待薄层层析（TLC） 检测反应完全后，向反应体系中滴加10% Na₂S₂O₃，充分搅拌，直至无碘颜色，加水终止反应后，用乙酸乙酯萃取3 次，乙酸乙酯层用Na₂SO₄ 干燥，过滤，浓缩有机层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯=10：1），可制备得到产物4，11-双碘化-14-乙酰化五味子酚。

步骤（3）：向反应二产物中加入4 mL 甲醇，再加入1mL 4 % 硫酸，室温下搅拌反应3 h 后，加水终止反应，用氯仿萃取3 次，浓缩氯仿层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯=4：1），可制备得到化合物9（收率为56.7%）。

    EI-MS：m/z 652 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：3.93（9H，s），3.84（3H，s），3.59（3H，s），2.64（1H，m），2.52（1H，m），2.41（2H，m），1.96（1H，m），1.8（1H，m），1.12（3H，d，J=7.2 Hz），0.79（3H，d，J=6.4 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：168.2（s），153.1（s），151.6（s），151.6（s），143.0（s），142.2（s），141.8（s），139.3（s），133.8（s），125.0（s），123.5（s），92.9（s），61.0（OCH₃，q），60.8（2OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），55.9（OCH₃，q），38.8（t），38.1（t），37.9（d），33.2（d），21.0（q），13.4（q）。

实施例6：五味子酚C₁₁位的单氯化反应

于50 mL 干燥的圆底烧瓶中称取0.50 mmol五味子酚，加适量甲醇使样品完全溶解，再称取0.75 mmol N-氯代丁二酰亚胺（NCS）于瓶内，20 ℃ 左右搅拌反应6 h，待薄层层析检测反应完全后，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取3 次，浓缩乙酸乙酯层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯=10：1），可制备得到化合物10（产率为90.8%）。

EI-MS：m/z 436 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.59（1H，s）5.62（1H，s），3.98（3H，s），3.94（3H，s），3.91（3H，s），3.87（3H，s），3.61（3H，s），2.39（2H，m），2.12（1H，m），1.99（1H，m）1.78（1H，m），1.01（3H，d，J = 7.6 Hz），0.81（3H，d，J = 6.8 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：153.5（s），151.1（s），147.9（s），145.7（s），139.7（s），139.6（s），138.4（s），133.1（s），120.5（s），120.4（s），120.4（s），107.6（d），61.2（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），60.9（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），55.8（OCH₃，q），41.3（d），35.7（t），34.5（d），34.4（t），21.6（q），10.2（q）。

实施例7：五味子乙素C₁₁位单氯化反应：

于 25 mL 干燥的圆底烧瓶中称取0.50 mmol五味子乙素，加适量二甲基甲酰胺（DMF）使样品完全溶解，再加0.86 mmol N-氯代丁二酰亚胺（NCS）于瓶内，20℃左右搅拌反应12 h，待薄层层析检测反应完全后，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取3 次，浓缩乙酸乙酯层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-氯仿=3：5），可制备得到化合物11（收率为21.2%）。

EI-MS：m/z 434 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.48（1H，s），6.95（2H，s），3.96（6H，s），3.78（3H，s），3.52（3H，s），2.31（2H，m），2.08（1H，m），2.05（1H，m），1.76（1H，m），1.65（1H，s），0.97（3H，d，J = 6.8 Hz），0.80（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：152.6（s），152.0（s），150.5（s），143.4（s），140.9（s），137.9（2C，s），137.8（s），133.2（s），127.2（s），122.9（s），100.4（s），96.6（s），61.0（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），60.0（OCH₃，q），41.9（t），38.5（d），37.8（t），34.2（d），20.1（q），12.3（q）。

实施例8：五味子酚C₄位的单溴化反应

于50mL干燥的圆底烧瓶中称取1.25 mmol五味子酚，加适量 CCl₄ 使样品完全溶解，再滴加 4 滴溴水于瓶内，20℃ 左右搅拌反应 24 h，待薄层层析检测反应完全后，搅拌下加适量10 % 的 Na₂S₂O₃ 使反应体系由淡黄色变为无色，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取 3 次，浓缩乙酸乙酯层，依次通过两次减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯=5：1和纯氯仿），可制备得到化合物12（收率为25%）。

    EI-MS：m/z 482 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.58（1H，s），5.66（1H，s），3.97（3H，s），3.92（6H，s），3.90（3H，s），3.60（3H，s），2.40（2H，m），2.14（1H，d，J = 13.2 Hz），1.96（1H，m），1.76（2H，m），1.00（3H，d，J = 7.2 Hz），0.84（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：153.4（s），151.0（s），148.7（s），146.3（s），139.6（s），139.4（s），138.3（s），134.6（s），120.6（s），120.6（s），112.1（s），107.4（d），61.1（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），60.8（OCH₃，q），60.5（OCH₃，q），55.8（OCH₃，q），41.2（d），37.0（t），35.8（t），34.4（d），21.2（q），10.6（q）。

实施例9：五味子乙素C₁₁位的单溴化反应

于 25 mL 干燥的圆底烧瓶中称取0.75 mmol五味子乙素，加适量甲醇使样品完全溶解，再加0.75 mmol N-溴代丁二酰亚胺（NBS） 于瓶内，冰水浴下搅拌反应 8 h，待薄层层析检测反应完全后，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取 3 次，浓缩乙酸乙酯层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-氯仿=3：5），可制备得到化合物13（收率为19.5%）。

EI-MS：m/z 478 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.57（1H，s），6.05（2H，s），3.89（6H，s），3.80（3H，s），3.57（3H，s），2.61（4H，m），1.93（1H，m），1.79（1H，m），1.07（3H，d，J = 7.1 Hz），0.76（3H，d，J = 7.1 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：151.8（s），151.4（s），146.8（s），140.4（s），139.9（s），136.1（C，s），134.6（s），134.0（s），123.1（s），123.0（s），110.6（d），110.5（d），101.1（t），61.1（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），60.9（OCH₃，q），55.8（OCH₃，q），38.6（t），38.4（d），33.3（d），33.2（t），20.9（q），12.9（q）。

实施例10：五味子酚C₄位溴化、C₁₁位氯化的交叉卤化反应

步骤（1）：于 50 mL 干燥的圆底烧瓶中称取0.50 mmol五味子酚，加适量甲醇使样品完全溶解，再称取0.75 mmol的 N-氯代丁二酰亚胺（NCS）于瓶内，20 ℃ 左右搅拌反应6 h，待薄层层析检测反应完全后，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取3 次，浓缩乙酸乙酯层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯=10：1），可制备得到化合物10。

步骤（2）：将上述反应一中制备得到的0.45 mmol化合物10 置于25 mL干燥的圆底烧瓶内，加6 mL甲醇和4滴溴水，室温下（20 ℃ 左右）搅拌反应24 h，待薄层层析检测反应完全后，搅拌下加适量10 %的Na₂S₂O₃ 使反应体系由橙色变为无色，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取3 次，浓缩乙酸乙酯层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯=5：1），可制备得到化合物14（收率为56.3%）。

EI-MS：m/z 516 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：5.73（1H，s），4.00（3H，s），3.97（6H，s），3.91（3H，s）3.61（3H，s），2.56（1H，d，J = 13.6 Hz），2.36（1H，m），2.25（1H，d，J = 14.0 Hz），2.00（1H，brs），1.80（1H，brs），1.65（1H，s），1.09（3H，d，J = 5.6 Hz），0.84（3H，d，J = 5.6 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：151.1（s），150.6（s），148.0（s），145.5（s），144.5（s），138.8（s），138.4（s），133.1（s），125.1（s），120.6（s），120.2（s），114.6（s），61.3（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），60.9（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），39.1（d），34.3（d），34.2（t），29.8（t），20.9（q），10.2（q）。

实施例11：五味子醇甲的溴化、氧化衍生物

于 25 mL 圆底烧瓶中称取1.08 mmol化合物3， 7.41 mmol甲醇钠，2.09 mmol CuCl，再滴加8 mL二甲基甲酰胺（DMF），于 90-95℃条件下搅拌反应6h，待薄层层析检测反应完全后，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取3次，浓缩有机层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯=8：1），再通过制备薄层层析（展开剂为石油醚-乙酸乙酯=6：1），可制备得到化合物15（收率为16%）、化合物16（收率为48%）、化合物17（收率为7%）。

化合物15：EI-MS：m/z 554 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：3.98（6H，s），3.95（9H，s），3.66（3H，s），3.43（3H，s），3.11（1H，s），2.81（2H，m），2.42（1H，d，J = 13.7 Hz），1.90（1H，m），1.26（3H，s），0.91（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：151.1（s），150.5（s），147.5（s），147.1（s），146.1（s），145.1（s），144.6（s），135.3（s），126.8（s），126.5（s），126.2（s），116.3（d），72.8（s），61.2（OCH₃，q），61.1（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），60.8（OCH₃，q），60.5（OCH₃，q），60.5（OCH₃，q），41.0（d），34.5（t），32.1（t），30.5（q），13.3（q）。

化合物16：EI-MS：m/z 540 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.63（1H，s），6.43（1H，s），5.78（1H，s），5.64（1H，s），3.96（9H，s），3.53（3H，s），2.67（1H，s），2.35（1H，m），2.11（1H，d，J = 13.2 Hz），1.95（1H，brs），1.82（1H，brs），1.05（3H，d，J = 6.8 Hz），0.81（3H，d，J = 6.4 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：150.6（s），147.3（s），146.7（s），144.5（s），135.8（s），135.4（s），134.4（s），133.8（s），120.3（s），116.5（s），107.4（d），107.1（d），61.0（OCH₃，q），60.5（OCH₃，q），56.0（OCH₃，q），55.7（OCH₃，q），40.8（d），39.2（t），35.3（t），33.6（d），21.6（q），12.7（q）。

化合物17：EI-MS：m/z 508 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：5.77（1H，s），5.05（1H，s），4.74（1H，s），4.01（3H，s），3.95（6H，s），3.91（3H，s），3.63（3H，s），3.42（3H，s），2.78（2H，m），2.62（2H，m），1.93（1H，m），1.13（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：152.2（s），151.0（s），150.4（s），144.9（s），143.7（s），143.4（s），142.8（s），139.5（s），133.9（s），127.4（s），125.3（s），121.6（s），116.2（s），111.2（t），61.2（OCH₃，q），61.1（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），40.0（d），35.7（t），29.0（t），18.7（q）。

实施例12：五味子酚和五味子乙素的氧化产物化合物18-21的制备

反应一：称取0.25 mmol五味子酚于干燥的 25 mL 圆底瓶中，加适量丙酮使样品刚好完全溶解，再称取0.34 mmol Pb(OAc)₄ 加入反应瓶内，室温下搅拌反应 30 min，薄层层析检测反应完全后，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取 3 次，浓缩有机层，并通过制备薄层层析（展开剂为石油醚-乙酸乙酯=4：1）和凝胶柱层析，可制备得到化合物18（收率为59.9%%）。

    EI-MS：m/z 460 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.51（1H，s），5.40（1H，s），3.86（3H，s），3.84（3H，s），3.82（3H，s），3.74（3H，s），3.59（3H，s），2.58（1H，m），2.39（2H，m），2.19（1H，d，J=12.4 Hz），2.11（3H，s），2.00（1H，brs），1.73（1H，brs），1.04（3H，d，J = 7.2 Hz），0.96（3H，d，J = 7.2 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：189.1（s），169.3（s），157.6（s），153.4（s），151.4（s），151.3（s），139.6（s），139.2（s），125.5（s），120.0（s），107.6（d），102.8（d），93.3（s），60.7（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），55.9（OCH₃，q），55.8（OCH₃，q），52.0（OCH₃，q），41.0（t），40.0（d），36.2（t），33.5（d），20.8（q），20.4（q），13.3（q）。

反应二：称取1.24 mmol五味子酚于 50 mL 干燥的圆底烧瓶中，加适量甲醇使样品完全溶解，再加1.42 mmol N-溴代丁二酰亚胺（NBS） 于瓶内，20 ℃ 左右搅拌反应 48 h，待薄层层析检测反应完全后，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取三次，浓缩有机层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚-氯仿=1：8），可制备得到化合物19（收率为21%）。

EI-MS：m/z 432 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.51（1H，s），6.37（1H，s），5.84（1H，m），3.94（3H，s），3.91（3H，s），3.88（3H，s）3.87（3H，s），3.81（3H，s），3.82（1H，m），3.02（3H，s），2.34（1H，m），2.07（2H，m），1.90（1H，m），1.73（1H，m），0.92（6H，m）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：153.0（s），151.1（s），150.1（s），147.1（s），139.6（s），137.1（s），135.1（s），134.0（s），121.3（s），116.6（s），107.8（d），107.0（d），90.3（d），60.8（OCH₃，q），60.7（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），55.7（2OCH₃，q），55.7（OCH₃，q），38.5（d），36.4（d），34.9（t），17.6（q），16.7（q）。

反应三：分别称取1.37 mmol五味子酚和2.63 mmol费米盐（自制）于 25 mL 反应瓶中，依次加入 2 mLH₂O 和 4 mL 丙酮，于 55-60 ℃ 下，搅拌反应 6 h，待薄层层析检测反应完全后，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取 3 次，乙酸乙酯层用 Na₂SO₄ 干燥，浓缩有机层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯=6：1），可制备得到化合物20（收率为59.2%）。

EI-MS：m/z 416 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.60（1H，s），3.90（9H，s），3.58（3H，s），3.53（3H，s），2.58（1H，m），2.50（1H，m），2.29（1H，m），2.16（1H，m），2.04（1H，m），1.82（1H，m），0.99（3H，d，J = 2.0 Hz），0.75（3H，d，J = 2.0 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：184.1（C=O），183.1（C=O），154.4（s），153.3（s），150.7（s），144.7（s），144.3（s），141.7（s），139.5（s），138.3（s），134.0（s），110.7（d），61.1（OCH₃，q），61.0（OCH₃，q），60.9（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），55.9（OCH₃，q），39.6（d），39.4（t），36.5（t），33.0（d），21.0（q），12.6（q）。

反应四：于 50 mL 干燥的圆底烧瓶中称取 200 mg 五味子乙素，加适量冰醋酸刚好使样品完全溶解，，冰浴控制温度在 0 ℃ 左右，滴加 5 mL 混酸（混酸制备：低温搅拌条件下，2 mL 醋酸酐中滴加7 mL 95 % 发烟硝酸，0~5 ℃ 左右搅拌反应5 h，薄层层析检测反应完全后，加水终止反应，用乙酸乙酯萃取 3 次，浓缩有机层，并通过减压硅胶柱层析（洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯=7：1），可制备得到化合物21（收率为68.1%）。

EI-MS：m/z 442 [M]⁺；¹H-NMR（CDCl₃，400 MHz）δ（ppm）：6.56（1H，s），6.04（2H，s），3.89（9H，s），3.55（3H，s），2.59（3H，s），2.51（2H，s），2.11（1H，m），1.88（2H，m），1.74（1H，s），1.00（3H，d，J = 6.8 Hz），0.73（3H，d，J = 6.8 Hz）；¹³C-NMR（CDCl₃，100 MHz）δ（ppm）：199.3（s），151.7（s），151.3（s），149.0（s），143.2（s），139.8（s），136.9（s），134.4（s），133.7（s），123.1（s），122.7（s），115.5（s），110.4（d），101.0（t），60.9（OCH₃，q），60.6（OCH₃，q），59.6（OCH₃，q），55.8（OCH₃，q），39.8（d），39.2（t），33.1（d），32.5（q），31.0（t），19.9（q），13.8（q）。

以上实施例中的化合物以400MHz核磁共振仪（INOVA型，Varian Inc.）测定其¹H谱和¹³C谱；除核磁共振用氘代试剂外，其他所用试剂均为分析纯或化学纯。

所得化合物的抗肝损伤活性结果如下：

采用人肝HL-7702细胞测试其体外抗CCl₄致肝细胞损伤活性。

方法：常规体外培养人肝HL-7702细胞接种于96孔板，分别给予不同浓度的待筛选药物以及阳性对照药物联苯双酯（DDB）继续培养12 h后，用CCl₄  5μL或8μL造成肝损伤，每一种药物均设两个平行对照孔。应用MTS法在酶联免疫检测仪490nm测定吸光度，计算细胞生存率，分析不同浓度的不同药物对CCl₄所致肝细胞毒性的保护作用。测试结果见表1-11 (*vs-正常组，#vs-四氯化碳组，给药量为终浓度)：

表1  化合物1-2和20体外对CCl₄所致肝细胞损伤的保护作用

表2  化合物6-9和11-12体外对CCl₄所致肝细胞损伤的保护作用

表3  化合物10体外对CCl₄所致肝细胞损伤的保护作用

表4  化合物10、13-14、16、19和21体外对CCl₄所致肝细胞损伤的保护作用

  表5  化合物15和17-18体外对CCl₄所致肝细胞损伤的保护作用

表6  化合物15和18体外对CCl₄所致肝细胞损伤的保护作用

  表7  化合物17体外对CCl4所致肝细胞损伤的保护作用

表8  化合物13-14、19和21物体外对CCl4所致肝细胞损伤的保护作用

表9  化合物1-5和20体外对CCl₄所致肝细胞损伤的保护作用

表10  化合物6-9和11-12体外对CCl₄所致肝细胞损伤的保护作用

表11  化合物16体外对CCl₄所致肝细胞损伤的保护作用

Claims (5)

1.五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物，其特征在于：具有如下通式（一）的结构：

通式（一）

其中，在4取代位和/或11取代位分别卤代和/或氧化。

2.按照权利要求1所述五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物，其特征在于：4取代位取代基R₁₁代表氢、氯、溴、碘、甲氧基或羰基。

3.按照权利要求1所述五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物，其特征在于：11取代位取代基R₄代表氢、氯、溴、碘或乙酰基。

4.按照权利要求1至3任一所述五味子醇甲、五味子酚和五味子乙素的衍生物，其特征在于：所述R₁和R₂代表甲氧基，R₃代表羰基，R₈代表氢、羟基或甲氧基，R₁₂和R₁₃代表甲氧基或亚甲二氧基，R₁₄代表羟基、甲氧基或羰基。

5.权利要求1至4任一项所述衍生物在制备治疗肝细胞损伤的药物中的应用。