CN103772337A - 大孔吸附树脂辅助各种苷类水解制备苷元、次生苷的方法 - Google Patents

Abstract

各种苷类化合物，尤其不稳定、易氧化、难溶于水、难溶于有机溶剂的苷类化合物，利用大孔吸附树脂的吸附、分散、固化、沉降作用，通过水解，生成苷元或苷元与次生苷的混合物，用有机溶剂对大孔吸附树脂二次洗脱或一次洗脱，可得苷元、次生苷或二者的混合物。本发明提供了各种苷类化合物制备苷元和次生苷的通用方法，操作简单，水解-分离近乎－体化，产品的纯度高，收率好，不需要昂贵的试剂，水解液和大孔吸附树脂可反复使用，绿色、环保，易于工业化生产，成本十分低廉，与酶解法、发酵法等方法相比，具有极大的优势。以人参总皂苷水解为例，醋酸等酸水解，得到较多的人参次皂苷Rh2、原人参二醇型苷元，而C17侧链关环产物不明显。

Description

大孔吸附树脂辅助各种苷类水解制备苷元、次生苷的方法

技术领域

本发明大孔吸附树脂吸附、分散、固化、沉降各种苷类化合物，通过水解制备相应的次生苷和苷元，其领域为化学、医药领域。 

背景技术

苷类化合物广泛存在：在自然界中，绿色植物及其藻类通过光和作用，将二氧化碳和水合成糖类，并放出氧气。生成的糖进一步通过不同途径代谢，生成一系列的有机物，如黄酮、蒽醌、皂苷、生物碱、有机酸等化合物，维持植物生命活动和种属不同特征。由植物体合成的酸性化合物或碱性化合物，在植物体内通常以盐的形式存在，如醋酸钙、硫酸吗啡等，在水中有较大的溶解度，以便通过网纹或螺纹导管输送到植物体内各个部位或某个组织贮存起来。然中性化合物、酸性较弱的化合物、碱性较弱的化合物，则无法成盐，如黄酮苷元、蒽醌苷元、苯丙素苷元、皂苷元等化合物，其水溶性不好、难以通过网纹或螺纹导管输送，而这些化合物在植物体内发挥抗菌、抗氧化等作用。为此，绿色植物或藻类，将上述极性较小、水溶性较差的化合物，通过与糖连接，形成苷类化合物，增大了极性，增强了水溶性，易于通过网纹、螺纹等导管输送到植物体各个部位或组织，发挥其作用。因而，苷类化合物广泛存在于自然界中，种类繁多，结构各异，生理活性多样。 

苷类化合物生物利用度低：对于人等哺乳动物来说，不存在网纹或螺纹导管，细胞之间不存在细胞壁，而是细胞膜。由于细胞膜具有脂质双分子层，要求分子具有一定亲脂性和亲水性，才容易透过。而糖和离子由于极性大，难以自由通过细胞膜，通常需要生物泵的参与，属于主动吸收，能量消耗较多，如葡萄糖、Na⁺等。当化合物为多糖苷时，极性进一步增大，对能量的消耗更高，因此透过细胞膜的能力进一步下降，导致生物利用度进一步降低。碱性苷：氨基糖苷类抗生素如硫酸卡那霉素、阿米卡星、硫酸庆大霉素等、抗结核药如硫酸链霉素；降糖药如ɑ-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖，上述化合物不被吸收或吸收很少。酸性苷：黄酮类化合物及因分子中有两个苯环，具有较好的平面性，水溶性较小，植物常将其制备成双糖化合物，如芦丁、橙皮苷、柚皮苷、地奥司明等，其中黄芩苷因分子中有羧基，以盐的形式存在于黄芩植物中，故其糖量减少；中性苷：皂苷类化合物，由于分子中具有较大的亲脂性基团，三萜皂苷元有30个碳原子、甾体皂苷元有27个碳原子，较黄酮15个碳原子增大1或近1倍，故其分子中的糖也较黄酮较多，多为3-6个单糖，这些糖可以单糖链或双糖链存在，如人参皂苷、西洋参皂苷、绞股蓝皂苷、三七皂苷、薯蓣皂苷、柴胡皂苷等，其中甘草皂苷因分子中具有羧基，以盐的形成存在，故糖量减少，为2个。这些黄酮、皂苷类等化合物分子中的糖基，常为β-糖苷键，难以被人体内的ɑ-糖苷键酶解。已发表的有关这些多糖苷化合物的体内代谢相关文献，较难检测到这些化合物的原型，究其原因，其吸收通常在大肠杆菌等肠道菌群的作用下，细菌利用分子中的糖基生成苷元或单糖苷，再被人体所吸收。由于细菌利用有限，故多糖苷被人体利用极少，如地奥司明生物利用度低于12%，人参皂苷生物利用度更低。 

苷健的裂解：苷是苷元和糖通过苷键连接，苷元为非糖物质，而苷键为C、O、S、N原子，其中O原子最多。苷类化合物，由于分子中含糖，极性较强，加之苷元，分子量大。其在吸收、分布，所需能量过高，生物利用度一般很低。苷元或单糖苷，分子量较小，极性适中，易于被人体所吸收，具有较高的生物利用度。因此，天然的苷类化合物，常需要降解成单糖苷或苷元。目前苷类化合物制备苷元的方法，通常有五种方法： 

simith降解法、

乙酰解法、

碱水解法、

酶解法、

酸解法。其中

Simith降解所用过碘酸，开环裂解糖分子及邻二醇，由于过碘酸价格昂贵，主要用于苷元的结构研究，未见其用于产业化的研究；

乙酰解法，主要用于结构鉴定研究，因成本较高，工业化生产不常用，仅利巴韦林的半合成用到；

碱水解法适合β位有吸电子基、酚苷、酯苷的水解。

酶解法，要求苷类溶于水，酶解条件温和，可获得次生苷和苷元。

酸水解，方法简单，成本低廉，广泛的用于苷类化合物的水解制备苷元或次生苷。 

碱、酶、酸水解的缺点：碱水解：黄酮苷、蒽醌苷等酚性苷，在碱液下容易破环其母核，用法很有限，仅中性苷用到，然裂解苷键选择性差，裂解产物复杂，产率过低；酶解：该法需要专有的酶，且酶解速度慢，时间长，成本较高，适合制备昂贵的单糖苷和苷元，如人参皂苷Rh2和Rg3；酸水解虽较为简单，成本低廉，然酸水解法也有诸多缺点，要求苷类对热、对酸叫较为稳定，易溶于水或有机的醇溶剂，且不宜被氧化。因此其应用也有明显的局限性。由于涉及苷的种类极多，现就起局限性举例说明。 

局限之一：对酸不稳定的苷类难用此法，以人参次皂苷Rh2为例说明。人参次皂苷Rh2 有极强的抗肿瘤活性，然Rh2 含量极少，只存在于红参和山参中，研究者们采用各种方法如酸水解、碱水解、酶水解，将人参总皂苷、人参茎叶总皂苷、西洋参总皂苷、三七总皂苷、西洋参茎叶总皂苷制备Rh2，其工艺通常具有产率低、操作繁琐。如强酸水解，导致20-OH容易和△²⁴加成关环，形成吡喃化合物，活性降低，见图1。采用50%乙酸水解，人参皂苷生成人参次皂苷Rg3，由于Rg3不溶于水，导致水解难以进一步进行；碱水解法，产物复杂，产率低下；酶水解方法操作繁琐，时间过长。其中佟心发明的一种人参皂苷Rh2的制备方法，在实施例4中，13g人参总皂苷制备3.98g人参皂苷Rh2，纯度为96.8%，转化率为42.7%，此转化产率很高，但方法较为繁琐。假定整个转化、分离过程中，人参皂苷损耗率为零，人参总皂苷以分子量最小的原人参皂苷Rd分子量963.17计，生成人参皂苷Rh2分子量为622.88。按上述转化方法计算，生成3.98g 96.8%人参皂苷Rh2，需要人参皂苷Rd理论值为3.98g*96.8%/42.7%*963.17/622.8=13.95g。因此，以3.98g 96.8%人参次皂苷Rh2计，在整个过程中、转化、分离损耗率为零，需要100%分子量较小的人参皂苷Rd理论值为13.95g。故13g人参总苷不太可能转化3.98g人参皂苷Rh2。微生物也存在方法繁琐，操作复杂。因此，现有公开发表的文献，如论文、专利等，对人参皂苷转化人参次皂苷如Rh2、Rh1，均不理想。 

局限之二：难溶于水、有机醇等溶剂难用此法，如橙皮苷、黄芩苷、地奥司明、野漆树苷等，以橙皮苷为例说明。橙皮苷易溶于吡啶、氢氧化钠溶液，溶于二甲基甲酰胺，微溶于甲醇和热冰醋酸，极微溶于乙醚，丙酮、氯仿和苯，该品1g溶于50000mL（50L）水。橙皮素(Hesperetin)是一种黄烷酮类化合物，多以糖苷形式存在于芸香科植物中，在陈皮、积壳、积实、青皮等药材中含量颇高，也是其主要的药效活性成分之一，以糖苷在人肠道菌群作用下水解生成橙皮素而发挥药效作用。研究表明，橙皮素具有抗氧化、抗血小板凝聚、抗炎、防止骨质疏松、抗肿瘤等功效，已为天然药物研究热点之一。另外，由橙皮素能够制备木犀草素(Luteolin)，而木犀草素又具有镇咳、祛痰、抗癌、抗炎症、抗过敏作用和免疫增强作用。而人工合成木犀草素价格昂贵，通过橙皮素能够很容易制备木犀草素。橙皮素的全合成以3,4-二羟基苯甲醛和2,4,6-三羟基苯乙酮出发，通过单甲基化，羟基保护，羟醛缩合, Mchael加成及脱保护，5步全合成天然产物橙皮素，总收率8.8%，较低。橙皮素的获得主要是从天然产物柑桔皮中提取橙皮苷，再经水解制得橙皮素。其水解方法有水相法、水相-乙醇法、甲醇法、环己醇法等。由于橙皮苷不溶于水及有机溶剂，水解条件多剧烈，收率较低。如水-醇法存在着反应时间过长的缺点；甲醇法存在分离提纯比较繁琐，并且需要毒性较大的甲醇；环己醇法存在成本较高。因此，现有公开发表的文献，如论文、专利等，对橙皮苷制备橙皮素，工艺均不太理想。利用橙皮苷制备橙皮素-7-O-葡萄糖苷，尚未见产业化的工艺路线。橙皮素-7-O-葡萄糖苷可还原制备橙皮素二氢查尔酮-7-O-葡萄糖苷，后者具有苹果香的甜味剂，没有金属的苦味，还具有一定抗氧化性，为一种市场前景较好的功能性甜味剂。其它难溶于水、有机溶剂的苷，如野漆树苷、地奥司明等，现有公开的文献，如论文或专利等，也没有一种较好的水解制备工艺。 

局限之三：对热、酸不稳定，易被氧化的苷，如柚皮苷、白藜芦醇苷等。以柚皮苷为例说明。柚皮素为芸香科柑橘属植物中的一种多羟基黄酮类单体成分。药理研究表明，柚皮素具有抗癌、抗炎、抗氧化、抗溃疡、抗血栓和扩张血管作用。但是柚皮素在植物中质量分数很低，一般以柚皮苷的形式存在于自然界中，可以通过水解柚皮苷制备柚皮素。柚皮苷在水或醇中进行水解，生成的柚皮素不稳定，易被氧化，其水解产物红色（水和醇中水解产物均是如此），需要重结晶，才能得到白色的柚皮素，产率有所降低，方法繁琐。有文献报道聚山梨酯80为增溶剂，采用蜗牛酶水解制备柚皮素。其方法繁琐，蜗牛酶来源较贵，不具备工业化。因此，现有公开发表的文献，如论文、专利等，对柚皮苷制备柚皮素，工艺均不太理想。其它不稳定苷也多是如此。 

大孔吸附树脂性质：大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，其孔径与比表面积都比较大，在树脂内部具有三维空间立体孔结构，其不溶于酸、碱及各种有机溶剂，具有良好的化学、物理稳定性、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点。故大孔吸附树脂广泛应用水溶液中有选择地吸附有机物，在中草药有效成分的富集上广泛应用。 

发明内容

本发明针对上述的糖苷键裂解的局限性，特别是酸、酶水解的缺点，如不稳定的苷、易氧化的苷、难溶于水及有机溶剂的苷。利用大孔吸附树脂的吸附、分散、固化、沉降苷类化合物。通过水解，苷类化合物生成苷元和次生苷，继续被大孔吸附树脂所吸附、分散、固化。由于大孔吸附树脂具有较大的颗粒，易于过滤，滤过水液可以反复利用。而大孔吸附树脂所吸附的苷元或苷元和次生苷的混合物，可被甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂洗脱。其洗脱方法由一次性洗脱和二次洗脱。一次洗脱可直接洗脱苷元、或苷元和次生苷的混合物。二次洗脱，采用极性梯度洗脱，苷元可先被极性较小的有机溶剂洗脱，如用氯仿、乙醚，次生苷可被极性稍大的有机溶剂洗脱，如用乙酸乙酯、丙酮或醇，分别回收有机溶剂，可得苷元和次生苷，苷元和次生苷直接分离。树脂可以反复使用。因此，该方法将水解、提纯、分离一体化，具有操作简单，成本低廉，环境污染较小，易于工业化生产各种苷元及次生苷的方法。 

吸附：大孔吸附树脂通过范德华力和氢键作用将溶液中苷元、苷类化合物吸附在其表面的过程，称之为吸附，其吸附没有选择性，具有相似相吸附。如非极性树脂对非极性化合物的吸附力强于非极性树脂对极性化合物的吸附力，故非极性树脂对苷元的吸附力，强于其对苷的吸附力，有利于保护苷元的稳定。同理，非极性树脂对对单糖苷的吸附力，强于多糖苷的吸附力，有利于保护单糖苷的稳定。 

分散：苷元、苷类被吸附分散大孔吸收树脂表面或内孔道上。由于大孔吸附树脂具有庞大的比表面积，通过吸附，可以分散大量的苷元和苷类化合物在其表面和内孔道的表面上，适合不溶于水、不溶于有机溶剂的苷和苷元。 

固化：大孔吸附树脂具有刚性结构，在溶液中，其表面和内孔道所吸附的苷类、苷元类化合物，因范德华力或氢键作用，分子及分子内的基团移动、转动等运动受阻，称为固化。对不稳定的苷元或次生苷，有稳定其结构的作用。 

沉降：大孔吸附树脂将吸附苷类化合物，沉淀在容器底部，远离界面上的氧气（空气中所含的氧气），称之为沉降。沉降作用可以保护苷及苷元不受空气中的氧气氧化，有利于提高产品的纯度和收率，产品的色泽也较好。 

本发明利用大孔吸附树脂具多孔径、比较大的比表面积，对各种苷及苷元均具有良好的吸附作用，使苷及苷元被分散大孔吸附树脂的表面及内部孔道的表面，防止分子间的聚集、结晶。因此各种苷类，溶于水及醇的有机溶剂、不溶于水及醇的有机溶剂的苷类化合物，均可利用大孔吸附树脂吸附、分散作用，进行水解。如黄芩苷、橙皮苷、地奥司明、芦丁、野漆树苷、知母皂苷、薯蓣皂苷等。 

本发明利用大孔吸附树脂对苷及苷元的吸附作用，分子在一定程度上，其自由运动受到一定的阻碍，分子及内部非极性基团也不能自由移动，阻碍其关环等不稳定因素，提高了不稳定次生苷或苷元的在酸液中的稳定性，有利于不稳定性苷的水解；利用大孔吸附树脂对苷元吸附力强于苷的吸附力，故多糖苷可被单糖苷所置换出来，苷元可将单糖苷和多糖苷从大孔吸附树脂表面置换出来，故大孔吸附树脂有利于糖苷健的水解。如果单糖苷水溶性很小，置换速度大为减慢，有利于得到较多量的单糖苷。故在一定程度是，可以提高次生苷的产率，特别是单糖苷，如人参总皂苷水解制备Rh2为例说明，见图2。 

本发明利用大孔吸附树脂吸附苷及溶液，沉淀在水解液底部，使不稳定的苷类、苷元远离溶剂界面的空气，被空气氧化的几率降低，提高了产品的收率及色泽。特别适合易被氧化的苷类化合物的水解，见图3。 

将苷类与大孔吸附树脂混合，或被大孔吸附树脂预先吸附，加入酸水或碱水，在一定温度下水解一段时间。TLC或HPLC或PC跟踪检查，待达到目标结果。将大孔吸附树脂调至中性，有三种通用方法：

滤过酸水液或碱水液，水洗涤大孔吸附树脂至中性；酸水解液加入除酸剂调制中性，或碱性水解液，加入除碱剂，调制中性，滤过，水洗涤大孔吸附树脂至无盐离子；

滤过酸水液或碱水液，再向大孔吸附树脂加入水和除酸剂或除碱剂，调制中性后，滤过，水洗水洗涤大孔吸附树脂至无盐离子。大孔吸附树脂次生苷或苷元洗脱有两种通用方法：（a）一步法提取：将大孔吸附树脂以有机溶剂回流提取、索氏提取或置入层析柱中，以不同有机溶剂洗脱，回收洗脱剂，可得苷元、或苷元和次生苷的混合物。（b）梯度提取：将中性大孔吸附树脂晾干，先以极性较小的有机溶剂提取苷元，再以极性较大的有机溶剂提取次生苷，达到苷元和次生苷直接分离的目的。分别回收有机溶剂，即得所要的苷元或次生苷。 

本发明所说的大孔吸附树脂，指各种苯乙烯型、苯乙烯型衍生物，如ɑ-甲基苯乙烯等、交联的具苯乙烯、苯丙烯型，其与苷或总苷重量比例为1:1-1000:1。 

本发明所说的各种苷类，糖或糖的衍生物通过半缩醛或半缩酮的形式，与苷元（非糖物质）脱水形成的一类化合物，即指单体苷类化合物，也可指苷类混合物，其难溶于水的苷类化合物，代表性化合物有黄芩苷（CAS:21967-41-9 ）、橙皮苷（CAS:520-26-3 ）、地奥司明（CAS:520-27-4 ）、野漆树苷（CAS:17306-46-6）等，易被氧化的苷类化合物，代表性化合物柚皮苷（CAS:10236-47-2 ）、橙皮苷（CAS:520-26-3 ）、芦丁（CAS:153-18-4 ）等；不稳定苷类化合物，其表性的苷包括人参总皂苷、人参茎叶总皂苷、西洋参总皂苷、西洋参茎叶总皂苷、三七总皂苷、三七茎叶总皂苷、绞股蓝总皂苷、绞股蓝茎叶总皂苷，知母总皂苷、酸枣仁总皂苷、柴胡总皂苷以及上述苷类的单体成分如人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Re、Rb2、Rg1、Rf等。 

本发明所说的酸，指具有水溶性的有机酸和无机酸，有机酸如甲酸、甲磺酸、乙酸、草酸、一氯乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、乙磺酸、丙酸、枸橼酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸等，及其含水、含醇的，其酸浓度为0-100%的任意比例；无机酸指盐酸、溴酸、碘酸、磷酸、硫酸、硝酸等，其浓度为0-85%的任意比例。或上述有机酸或无机酸的任意两种混合物，其比例任意。 

本发明所说的碱，无机碱指具有氢氧化钠、氢氧化钾，氢氧化钙、氢氧化锂、氢氧化钡，浓度为 0-30%；有机碱指醇钠、醇钾等，浓度为 0-30%。 

本发明所说的温度指在室温-150℃水解。 

附图说明

附图1，无大孔吸附树脂，人参皂苷次皂苷在强酸水解关环示意图

附图2，大孔吸附树脂对不稳定苷的固化作用，以人参皂苷Rb1水解为例说明图

附图3，大孔吸附树脂对易氧化的苷及苷元的保护及密封水解图

具体实施方式

本发明公开了各种苷类制备苷元和次生苷的通用制备方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，对不同苷类化合物进行适当改进工艺参数，如调整溶剂的种类、用量、温度、酸的种类、用量等而实现不同苷类化合物的水解制备苷元和次生苷。特别需要指出的是，各种苷类化合物在水解制备次生苷或苷元的过程中，大孔吸附树脂起到吸附、分散、固化、沉降的任一作用，它们都将被视为本发明所包括。相关任意明显不能在脱离本发明的内容、精神和范围对本文所述的方法、原理进行适当改动或变更与组合，来实现和应用本发明技术。 

由于涉及的苷类化合物，种类较多，数目众多。因此，不能对每一种苷类化合物进行举例说明，但为了进一步理解本发明，以大孔吸附树脂在苷类水解过程中，所起到的作用，进行分类说明，实施例如下： 

第一类：对易氧化的苷元，大孔吸附树脂起到吸附、分散、沉降作用，防止其氧化。

实施例1：                      

取98%柚皮苷10g，大孔吸附树脂D101型100g（约200ml），置于500ml三角烧瓶中，加入6%硫酸（6ml→100ml）150ml，上接30cm-40cm空气冷凝管， 水浴90℃密闭水解48h（大孔吸附树脂由白色变浅黄色，溶液无色），放凉，滤过，大孔吸附树脂以少量水洗涤，大孔吸附树脂置另一烧杯中，加入300ml水液，加入碳酸氢钠，调至中性，滤过，200ml水洗，晾干，以乙醇为溶剂，回流提取3次（大孔吸附树脂恢复白色），每次20min，合并乙醇溶液，回收乙醇，得白色的柚皮素4.62g，经HPLC测定其纯度为94.5%。

实施例2： 

取98%柚皮苷6g，大孔吸附树脂D101型100g，置于250ml三角烧瓶中，加入8%HCl酸（20ml→100ml）100ml， 加入40ml正丙醇，上接30cm-40cm空气冷凝管，水浴80℃密闭水解18h（水液成浅黄色，放凉（水液无色，有无色针状结晶析出），滤过，水洗涤，晾干，以乙醚冷浸提取3次（大孔吸附树脂恢复白色），合并乙醚液，以无水硫酸钠干燥，回收乙醚，得白色的柚皮素4.52g，经HPLC测定其纯度为99.23%。

实施例3： 

取98%柚皮苷6g，大孔吸附树脂D101型100g，置于250ml三角烧瓶中，加入6%硫酸（4ml→100ml）100ml，上接30cm-40cm空气冷凝管，水浴80℃密闭水解18h（水液无色，大孔吸附树脂成浅黄色），放凉，滤过，大孔吸附树脂以水洗涤至中性，晾干，以乙醚提取2次，合并乙醚液，乙醚液以无水硫酸钠干燥，得柚皮素2.21g，经HPLC测定纯度为92.16%，另含少量柚皮素-7-O-葡萄糖苷。大孔吸附树脂，再以丙酮浸提2次（大孔吸附树脂恢复白色），合并丙酮液，回收丙酮，得柚皮素-7-O-葡萄糖苷3.48g、经HPLC测定纯度为91.57%，另含少量柚皮苷。

第二类：对易氧化、难溶于水、有机醇等溶液的苷类、苷元类，大孔吸附树脂起到吸附、分散、沉降作用。 

实施例4： 

称取92%橙皮苷10g，加入KOH3.0g，加入水140ml，摇匀至橙皮苷溶解（红棕色溶液），加入大孔吸附树脂150g（260ml），摇匀，边振摇，边缓缓滴加磷酸至酸性（橙皮苷颜色逐渐褪去），再加磷酸2ml，摇匀，加入大孔吸附树脂10g，加入30ml盐酸，摇匀，上接30cm-40cm空气冷凝管，水浴85℃密闭水解48h，滤过，大孔吸附树脂置500ml烧瓶中，加入200ml水，加入CaCO₃，调制中性水洗至中性，滤过，大孔吸附树脂置索氏提取器中，甲醇回流提取2h，回收甲醇适量，析晶，滤过，干燥，即得水解产物4.48g，含橙皮素94.8%。

实施例5： 

称取92%橙皮苷5g，加入水液100ml，加入盐酸30ml，加入正丙醇60ml，加入大孔吸附树脂100g，摇匀，上接60cm-80cm空气冷凝管，水浴85℃密闭水解，水解过程中每隔2-4h，振摇一次，水解48h（溶液成浅黄色），放凉（溶液成无色），滤过，大孔吸附树脂置500ml烧瓶中，加入200ml水，加入NaHCO₃溶液，调制中性，滤过，水洗去盐离子，大孔吸附树脂，乙醇回流提取0.5h，提取3次，合并乙醇液，回收乙醇适量，析晶，滤过，干燥，即得水解产物2.16g，含橙皮素95.3%。

实施例6： 

称取92%橙皮苷10g，加入KOH3.0g，加入水160ml，摇匀至橙皮苷溶解（红棕色溶液），加入大孔吸附树脂170g，摇匀，边振摇，边缓缓滴加冰醋酸至酸性（橙皮苷颜色逐渐褪去），再加磷酸2ml，摇匀，加入大孔吸附树脂10g，加入30ml盐酸，摇匀，上接30cm-40cm空气冷凝管，水浴70℃密闭水解24h，滤过，大孔吸附树脂置500ml烧瓶中，加入200ml水，加入CaCO₃，调制中性水洗至中性，滤过，大孔吸附树脂晾干。以乙醚提取4次，合并乙醚液，乙醚液以无水硫酸钠干燥，得橙皮素2.69g，经HPLC测定其纯度95.2%。大孔吸附树脂，再以乙醇回流提取提3次（大孔吸附树脂恢复白色），合并乙醇液，回收乙醇，得类白色橙皮素-7-O-葡萄糖苷2.72g，经HPLC测定其纯度93.7%。

实施例7： 

称取85%黄芩苷5g，加入KOH3.0g，加入水100ml，摇匀至黄芩苷溶解（红棕色溶液），加入大孔吸附树脂100g，摇匀，边振摇，边缓缓滴加冰醋酸至酸性（黄芩苷颜色逐渐褪去），摇匀，加入30ml盐酸，摇匀，在快速加入大孔吸附树脂10g，再摇匀，上接30cm-40cm空气冷凝管，水浴90℃密闭水解24h，滤过，大孔吸附树脂置500ml烧瓶中，加入200ml水，加入CaCO₃，调制中性水洗至中性，滤过，大孔吸附树脂晾干。以乙醇回流提取3次，每次10min，合并乙醇，回收乙醇，得黄芩素2.18g，经HPLC测定其纯度为89.4%。

第三类：对不稳定、难溶于水的苷类、苷元类，大孔吸附树脂起到吸附、分散、固化、沉降作用。 

实施例8： 

称取10g人参总皂苷，加入50ml冰乙酸，加入水50ml，85℃加热、搅拌，混成均匀溶液，加入D101大孔吸附树脂100g，加入水10ml，加入空气冷凝管，85℃水浴反应48h，过滤，水洗至中性，加入NaOH至5%，放置过夜。滤过，水洗至中性，加入30%乙醇400ml洗脱、弃去。60%乙醇洗脱，回收乙醇，得棕色皂苷2.5g，经硅胶柱层析得类白色人参次皂苷Rh2 0.45g，90%乙醇洗脱，回收乙醇，主得苷元1.0g。经硅胶柱层析得Rh2 0.12g，原人参二醇型皂苷元0.31g。该法未见20-OH和△²⁴加成关环产物。

实施例9： 

称取10g人参总皂苷于500ml三角烧瓶中，加入50ml冰乙酸，加入水60ml，磷酸10ml，85℃加热、搅拌，混成均匀溶液，加入D101大孔吸附树脂100g，加入水10ml于85℃水浴反应48h，过滤，水洗至中性，加入NaOH至5%，放置过夜。滤过，水洗至中性，加入30%乙醇400ml洗脱、弃去。95%乙醇洗脱900ml洗脱，回收乙醇，主得棕色皂苷3.2g，经硅胶柱层析得Rh2 0.41g，Rg3 0.20g，原人参二醇型皂苷元0.22g。该法未明显见20-OH和△²⁴加成关环产物。

实施例10： 

称取10g人参茎叶总皂苷于500ml三角烧瓶中，加入50ml冰乙酸，加入水60ml，85℃加热、搅拌，混成均匀溶液，加入D101大孔吸附树脂100g，加入水10ml于85℃水浴反应48h，过滤，水洗至中性，加入NaOH至5%，放置过夜。滤过，水洗至中性，加入30%乙醇400ml洗脱、弃去。60%乙醇洗脱，回收乙醇，主得棕色皂苷2.5g，经硅胶柱层析得类白色人参次皂苷Rh1 0.37g，原人参三醇型皂苷元0.11g。90%乙醇洗脱，回收乙醇，主得苷元1.0g。经硅胶柱层析得类白色人参次皂苷Rh1 0.15g，原人参三醇型皂苷元0.37g。该法未见20-OH和△²⁴加成关环产物。

实施例11： 

称取10g人参茎叶总皂苷于500ml三角烧瓶中，加入水60ml，KOH6.0g，乙二醇60ml，85℃℃搅拌至溶解，加入D101大孔吸附树脂100g，搅匀，放入烘箱中，温度为125℃，反应为22h，放冷，加入200ml冷水，滤过棕色水液，再用水液洗涤至中性，加入30%乙醇400ml洗脱、弃去。60%乙醇洗脱，回收乙醇，主得棕色皂苷2.5g，经硅胶柱层析得类白色人参次皂苷Rh1 0.38g， Rh2 0.11g，原人参三醇型皂苷元0.34g，经HPLC测定纯度约为90%。该法未见20-OH和△²⁴加成关环产物。

实施例12： 

称取10g人参总皂苷于500ml三角烧瓶中，加入水60ml，KOH5.0g，甘油60ml，85℃搅拌至溶解，加入D101大孔吸附树脂80g（174ml），搅匀，放入烘箱中，温度为125℃，反应为20h，放冷，加入200ml冷水，滤过棕色水液，再用100ml水液洗涤，加入30%乙醇(含1%NaOH)除杂，400ml洗脱、弃去。90%乙醇洗脱，回收乙醇，主得棕色皂苷2.9g，经硅胶柱层析得类白色人参次皂苷Rh2 0.46g，Rg3 0.21g，原人参二醇型皂苷元0.34g，经HPLC测定纯度约为90%。该法未见C 20-OH和△²⁴加成关环产物。

实施例13： 

称取10g人参总皂苷于500ml磨口三角烧瓶中，加入水100ml，加入大孔吸附树脂100g，95 ℃加热，摇成均匀溶液，加入50%硫酸10ml，70℃加热水解36h，滤过，滤饼以NaCO₃调制碱性，滤过碱水液，以盐酸调制中性，水洗去盐离子，加入30%乙醇400ml洗脱、弃去。95%乙醇洗脱600ml洗脱，回收乙醇，主得棕色皂苷2.6g，经硅胶柱层析得类白色人参次皂苷Rh2 0.35g，Rg3 0.18g，原人参二醇型皂苷元0.26g，经HPLC测定上述化合物的纯度约为90%。C20-OH和△²⁴加成关环产物很少。

  由于苷类化合物种类特别多，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对各种苷，包括本发明所提到的苷，进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利有求保护范围之内。 

Claims (9)

1.大孔吸附树脂辅助各种苷类水解制备苷元、次生苷的方法，其特征在于各种苷类化合物，与大孔吸附树脂混合，或预先被大孔吸附树脂所吸附，通过酸法或碱法水解，在一定温度下，水解一段时间，生成的苷元和次生苷，滤过，洗涤大孔吸附树脂至无酸性或碱性，或调制中性，以有机溶剂洗脱苷元或次生苷，回收有机溶剂，即得苷元或次生苷。

2.如权利1要求所述的方法，其特征在于大孔吸附树脂，具多孔径、比较大的比表面积，指各种苯乙烯型、苯乙烯型衍生物，如ɑ-甲基苯乙烯等、交联的具苯乙烯、苯丙烯型，在水解过程中起到吸附、分散、固化、沉降作用或其任一作用，其与苷或总苷重量比例为1:1-1000:1。

3.如权利1要求所述的方法，其特征在于各种苷类化合物，指糖或糖的衍生物通过半缩醛或半缩酮的形式，与苷元（非糖物质）脱水形成的一类氧苷类化合物，其通式为：

即指单体苷类化合物，也指苷类混合物，其难溶于水的苷类化合物，代表性化合物有黄芩苷（CAS:21967-41-9 ）、橙皮苷（CAS:520-26-3 ）、地奥司明（CAS:520-27-4 ）、野漆树苷（CAS:17306-46-6）等，易被氧化的苷类化合物，代表性化合物柚皮苷（CAS:10236-47-2 ）、橙皮苷（CAS:520-26-3 ）、芦丁（CAS:153-18-4 ）等；不稳定苷类化合物，其表性的苷包括人参总皂苷、人参茎叶总皂苷、西洋参总皂苷、西洋参茎叶总皂苷、三七总皂苷、三七茎叶总皂苷、绞股蓝总皂苷、绞股蓝茎叶总皂苷，知母总皂苷、酸枣仁总皂苷、柴胡总皂苷以及上述苷类的单体成分如人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Re、Rb2、Rg1、Rf等。

4.如权利1要求所述的方法，本发明所说的酸，指具有水溶性或醇溶性的有机酸和无机酸，有机酸如甲酸、甲磺酸、乙酸、草酸、一氯乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、乙磺酸、丙酸、枸橼酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸等，及其含水、含醇的，其酸浓度为0-100%的任意比例；无机酸指盐酸、溴酸、碘酸、磷酸、硫酸、硝酸等，其浓度为0-85%的任意比例。

5.如权利1，4要求所述的方法，上述有机酸或无机酸的任意两种混合物，其比例任意。

6.如权利1要求所述的方法，本发明所说的碱，无机碱指具有氢氧化钠、氢氧化钾，氢氧化钙、氢氧化锂、氢氧化钡，浓度为 0-30%；有机碱指醇钠、醇钾等，浓度为 0-30%。

7.如权利1要求所述的方法，本发明所说的温度指在室温-150℃水解。

8.如权利1，3要求所述的方法，本发明所说的苷类，除上述所列举的苷类代表性的化合物外，还包括其它苷类在水解苷元和次生苷的过程中，大孔吸附树脂起到吸附、分散、固化、沉降作用或其任一作用，所制得的苷元或次生苷。

9.如权利1要求所述的方法，本发明所说的有机溶剂，可以是甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙二醇、甘油、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、氯仿、二氯甲烷、甲苯、环己烷、石油醚等。

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