CN103755822A - 一种莼菜多糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种莼菜多糖的制备方法，是选取新鲜的莼菜为原料，干燥后粉碎，得莼菜粉；莼菜粉加水稀释后调节pH值，加入木瓜蛋白酶，控制条件进行酶解处理，过滤，浓缩后加入有机溶剂氯仿与正丁醇混合，搅拌，脱除蛋白质；再经透析膜透析脱盐，醇沉，收集沉淀，洗涤后干燥，得莼菜粗多糖。本发明的制备方法，其蛋白质脱除率高，多糖损失小，分离纯化效果好，经测定：蛋白质脱除率达到80%以上%，所得到的莼菜粗多糖纯度达70%以上。本制备方法工艺合理、技术先进、操作可行，适合大规模工厂化生产。

Description

一种莼菜多糖的制备方法

技术领域

本发明涉及多糖的制备，尤其是一种莼菜多糖的制备方法。

背景技术

莼菜(Brasenia schreber J．F．Gme1)系原始花被亚纲睡莲科(Nymphaeaceae)莼属多年生淡水水生草本植物，又名马蹄草、湖菜、水葵、露葵，原产于我国东南地区，生长于池塘、湖泊和沼泽中，尤其以江苏的太湖，苏北的高宾湖，以及杭州的西湖等地生产为多。

莼菜茎叶表面含有丰富的腺细胞，能够分泌大量的透明胶质。莼菜鲜样含水量高达97.5％，总糖含量为0.86%，其中主要是莼菜多糖，主要存在于莼菜茎叶上的透明粘液质中。对莼菜多糖的生物活性研究表明：(1)莼菜的粘质对洋葱的未分化细胞的有丝分裂具抑制作用，故认为莼菜有抗癌活性，对癌细胞有抑制作用，特别适用于胃癌的治疗。(2)增强机体免疫作用，莼菜多糖能增加小鼠脾脏重量，增加巨噬细胞的吞噬功能，促进溶血素的生成．有较好的增加体液免疫和细胞免疫功能，是一种免疫促进剂。(3)莼菜多糖具有明显的降血糖作用，安全无毒，已被卫生部批准为新资源食品，是较为理想的降血糖食品。另外莼菜多糖还具有降血脂、抗氧化等功能。正是由于莼菜多糖具有良好的生物活性和保健功能，在食用药材、饮料、食品添加剂、化妆品和供儿童、孕妇、老人及成人使用的多功能系列营养保健品方面应用前景广阔。

国内对莼菜多糖的研究主要集中在对莼菜多糖粗制品提取工艺优化方面，由于莼菜多糖粘度大，难以纯化，所以国内对莼菜多糖的分离纯化和结构研究非常少。目前，还未见到对莼菜多糖提取后进行分离纯化以获得多糖粗制品的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种工艺合理、技术先进、操作可行的莼菜多糖的制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种莼菜多糖的制备方法，其特征在于：经过下列工艺步骤：

A、原料的选取与处理  选取新鲜的莼菜为原料，干燥后进行粉碎处理，过150～250目筛，得莼菜粉，备用；

B、酶解  称取步骤(A)所得到的莼菜粉加入莼菜粉质量5～10倍的水，调节pH值为6～8，加入莼菜粉质量1～3%的木瓜蛋白酶，控制酶解温度30～50℃，酶解1～2h，然后将温度提高至75～85℃，提取1～3h；得提取液；

C、过滤、浓缩  将步骤(B)所得到的提取液过滤，去除杂质，得过滤液； 将过滤液置于真空减压浓缩器中，控制真空度-0.1～0MPa，将过滤液浓缩至原体积的30～40%，得浓缩液；

D、脱除蛋白质  将步骤(C)所得到的浓缩液体积比1:1～1.5加入氯仿与正丁醇混合，其中，氯仿与正丁醇体积比4:1，搅拌30～60min后，离心，收集上清液，得多糖溶液；

E、去杂质  将步骤(D)所得到的多糖溶液经旋转蒸发器浓缩至溶液浓度5～10%；再采用截留分子量为10 kDa的透析膜透析脱盐1～2d，离心，去除杂质，得透析液；将透析液经旋转蒸发器浓缩至溶液浓度为20～25%，得透析浓缩液；

F、醇沉  将步骤(E)所得到的透析浓缩液加入透析浓缩液质量2～3倍、浓度为90～95%的乙醇溶液，采用搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置6～12h，离心，收集沉淀，采用无水乙醇洗涤2-3次，送入真空干燥机，控制干燥机内真空度-0.09～0.03 kpa，温度35～60℃，进行低温真空干燥，得莼菜粗多糖。

本发明是选取新鲜的莼菜为原料，干燥后粉碎，得莼菜粉；莼菜粉加水稀释后调节pH值，加入木瓜蛋白酶，控制条件进行酶解处理，过滤，浓缩后加入有机溶剂氯仿与正丁醇混合，搅拌，脱除蛋白质；再经透析膜透析脱盐，醇沉，收集沉淀，洗涤后干燥，得莼菜粗多糖。本发明所采用的木瓜蛋白酶分解莼菜细胞壁，使细胞壁部分或完全破坏，促进多糖的溶出。其经蛋白酶酶解，蛋白质脱除率高，而对多糖的损失不大；本发明再经氯仿与正丁醇混合脱除蛋白质，使蛋白质脱除率进一步提高；而后经透析脱盐去杂质，醇沉，干燥，得粗多糖，其分离纯化效果好，经测定：蛋白质脱除率达到80%以上，所得到的莼菜粗多糖纯度达70%以。本发明的制备方法工艺合理、技术先进、操作可行，适合大规模工厂化生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

一种莼菜多糖的制备方法，经过下列工艺步骤：

A、原料的选取与处理  选取新鲜的莼菜为原料，干燥后进行粉碎处理，过200目筛，得莼菜粉，备用；

B、酶解  称取步骤(A)所得到的莼菜粉加入莼菜粉质量8倍的水，调节pH值为7，加入莼菜粉质量3%的木瓜蛋白酶，控制酶解温度40℃，酶解1.5h，然后将温度提高至80℃，提取2h；得提取液；

C、过滤、浓缩  将步骤(B)所得到的提取液过滤，去除杂质，得过滤液； 将过滤液置于真空减压浓缩器中，控制真空度-0.1MPa，将过滤液浓缩至原体积的35%，得浓缩液；

D、脱除蛋白质  将步骤(C)所得到的浓缩液体积比1:1.2加入氯仿与正丁醇混合，其中，氯仿与正丁醇体积比4:1，搅拌30 min后，离心，收集上清液，得多糖溶液；

E、去杂质  将步骤(D)所得到的多糖溶液经旋转蒸发器浓缩至溶液浓度5-10%；再采用截留分子量为10 kDa的透析膜透析脱盐2d，离心，去除杂质，得透析液；将透析液浓缩至溶液浓度为22%，得透析浓缩液；

F、醇沉  将步骤(E)所得到的透析浓缩液加入透析浓缩液质量2.5倍、浓度为93%的乙醇溶液，采用搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置10h，离心，收集沉淀，采用无水乙醇洗涤2次，送入真空干燥机，控制干燥机内真空度0.01kpa，温度50℃，进行低温真空干燥，得莼菜粗多糖。

本实施例所给出的制备方法，其蛋白质脱除率高，多糖损失小，分离纯化效果好，经测定：蛋白质脱除率达到90.3%，所得到的莼菜粗多糖纯度达70.6%。本制备方法工艺合理、技术先进、操作可行，适合大规模工厂化生产。

实施例2

一种莼菜多糖的制备方法，经过下列工艺步骤：

A、原料的选取与处理  选取新鲜的莼菜为原料，干燥后进行粉碎处理，过250目筛，得莼菜粉，备用；

B、酶解  称取步骤(A)所得到的莼菜粉加入莼菜粉质量10倍的水，调节pH值为8，加入莼菜粉质量3%的木瓜蛋白酶，控制酶解温度30℃，酶解1h，然后将温度提高至85℃，提取1h；得提取液；

C、过滤、浓缩  将步骤(B)所得到的提取液过滤，去除杂质，得过滤液； 将过滤液置于真空减压浓缩器中，控制真空度0MPa，将过滤液浓缩至原体积的40%，得浓缩液；

D、脱除蛋白质  将步骤(C)所得到的浓缩液体积比1:1加入氯仿与正丁醇混合，其中，氯仿与正丁醇体积比4:1，搅拌60min后，离心，收集上清液，得多糖溶液；

E、去杂质  将步骤(D)所得到的多糖溶液经旋转蒸发器浓缩至溶液浓度10%；再采用截留分子量为10 kDa的透析膜透析脱盐2d，离心，去除杂质，得透析液；将透析液经旋转蒸发器浓缩至溶液浓度为25%，得透析浓缩液；

F、醇沉  将步骤(E)所得到的透析浓缩液加入透析浓缩液质量3倍、浓度为90%的乙醇溶液，采用搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置12h，离心，收集沉淀，采用无水乙醇洗涤3次，送入真空干燥机，控制干燥机内真空度-0.09kpa，温度35℃，进行低温真空干燥，得莼菜粗多糖。

本实施例所给出的制备方法，其蛋白质脱除率达到86.4%，多糖损失小，分离纯化效果好，多糖纯度达70.2%。本制备方法工艺合理、技术先进、操作可行，适合大规模工厂化生产。

实施例3

一种莼菜多糖的制备方法，经过下列工艺步骤：

A、原料的选取与处理  选取新鲜的莼菜为原料，干燥后进行粉碎处理，过150目筛，得莼菜粉，备用；

B、酶解  称取步骤(A)所得到的莼菜粉加入莼菜粉质量5倍的水，调节pH值为6，加入莼菜粉质量1%的木瓜蛋白酶，控制酶解温度50℃，酶解2h，然后将温度提高至75℃，提取3h；得提取液；

C、过滤、浓缩  将步骤(B)所得到的提取液过滤，去除杂质，得过滤液； 将过滤液置于真空减压浓缩器中，控制真空度-0.1MPa，将过滤液浓缩至原体积的30%，得浓缩液；

D、脱除蛋白质  将步骤(C)所得到的浓缩液体积比1: 1.5加入氯仿与正丁醇混合，其中，氯仿与正丁醇体积比4:1，搅拌30min后，离心，收集上清液，得多糖溶液；

E、去杂质  将步骤(D)所得到的多糖溶液经旋转蒸发器浓缩至溶液浓度5%；再采用截留分子量为10 kDa的透析膜透析脱盐1d，离心，去除杂质，得透析液；将透析液经旋转蒸发器浓缩至溶液浓度为20%，得透析浓缩液；

F、醇沉  将步骤(E)所得到的透析浓缩液加入透析浓缩液质量2倍、浓度为95%的乙醇溶液，采用搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置6h，离心，收集沉淀，采用无水乙醇洗涤2次，送入真空干燥机，控制干燥机内真空度-0.09kpa，温度60℃，进行低温真空干燥，得莼菜粗多糖。

本实施例所给出的制备方法，其蛋白质脱除率高，多糖损失小，分离纯化效果好，经测定：蛋白质脱除率达到86.7%，所得到的莼菜粗多糖纯度达70.1%。本制备方法工艺合理、技术先进、操作可行，适合大规模工厂化生产。

Claims (1)

1.一种莼菜多糖的制备方法，其特征在于：经过下列工艺步骤：

A、原料的选取与处理  选取新鲜的莼菜为原料，干燥后进行粉碎处理，过150～250目筛，得莼菜粉，备用；

B、酶解  称取步骤(A)所得到的莼菜粉加入莼菜粉质量5～10倍的水，调节pH值为6～8，加入莼菜粉质量1～3%的木瓜蛋白酶，控制酶解温度30～50℃，酶解1～2h，然后将温度提高至75～85℃，提取1～3h；得提取液；

C、过滤、浓缩  将步骤(B)所得到的提取液过滤，去除杂质，得过滤液； 将过滤液置于真空减压浓缩器中，控制真空度-0.1～0MPa，将过滤液浓缩至原体积的30～40%，得浓缩液；

D、脱除蛋白质  将步骤(C)所得到的浓缩液体积比1:1～1.5加入氯仿与正丁醇混合，其中，氯仿与正丁醇体积比4:1，搅拌30～60min后，离心，收集上清液，得多糖溶液；

E、去杂质  将步骤(D)所得到的多糖溶液经旋转蒸发器浓缩至溶液浓度5～10%；再采用截留分子量为10 kDa的透析膜透析脱盐1～2d，离心，去除杂质，得透析液；将透析液经旋转蒸发器浓缩至溶液浓度为20～25%，得透析浓缩液；

F、醇沉  将步骤(E)所得到的透析浓缩液加入透析浓缩液质量2～3倍、浓度为90～95%的乙醇溶液，采用搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置6～12h，离心，收集沉淀，采用无水乙醇洗涤2-3次，送入真空干燥机，控制干燥机内真空度-0.09～0.03 kpa，温度35～60℃，进行低温真空干燥，得莼菜粗多糖。