CN108264576A - 提取莼菜活性物质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了提取莼菜活性物质的方法，包括：脱脂、提取、脱蛋白、纯化，首先将莼菜干粉以分析纯丙酮脱脂，脱脂残渣先后以乙醇溶液提取、蒸馏水提取并浓缩的浓缩液，将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯的混合物倒入浓缩液中脱蛋白得莼菜多糖粗液，在粗液中加入乙醇溶液分离出固形物，然后以98‑99%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物即得莼菜活性物质。有益效果为：本方法提取莼菜活性物质简单易行，莼菜活性物质中多糖的含量可达97%以上，大大提高了莼菜多糖的利用价值，莼菜活性物质同时具有调节免疫功能、抗肿癌、抗感染、降血糖血脂、延年益寿的功效。

Description

提取莼菜活性物质的方法

技术领域

本发明涉及莼菜的深加工领域，尤其是涉及提取莼菜活性物质的方法。

技术背景

莼菜（学名：Brasenia schreberi J.F.Gmel.）：又名蒪菜、马蹄菜、湖菜等，是多年生水生宿根草本。性喜温暖，适宜于清水池生长。由地下葡萄茎萌发须根和叶片，并发出4-6个分枝，形成丛生状水中茎，再生分枝。深绿色椭圆形叶子互生，长约6至10厘米，每节1-2片，浮生在水面或潜在水中，嫩茎和叶背有胶状透明物质。夏季抽生花茎，开暗红色小花。莼菜嫩叶可供食用，莼菜本身没有味道，胜在口感的圆融、鲜美滑嫩，为珍贵蔬菜之一。莼菜含有丰富的胶质蛋白、碳水化合物，脂肪、多种维生素和矿物质，常食莼菜具有药食两用的保健作用。主产于中国浙江、江苏两省太湖流域和湖北省，4 月下旬至10 月下旬采摘带有卷叶的嫩梢。

发明内容

本发明的目的在于提供提取莼菜活性物质的方法，莼菜活性物质的提取方法简单易行，活性物质中莼菜多糖的含量可达97%以上，大大提高了莼菜多糖的利用价值，提取方法可以降低莼菜多糖以蛋白质渠道被分离出去的概率，提高莼菜多糖的得率与含量。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：提取莼菜活性物质的方法，包括：脱脂、提取、脱蛋白、纯化，具体包括以下步骤：

脱脂：在莼菜干粉中加入10-12倍分析纯丙酮，搅拌脱脂2-3小时，以3000-3500r/min离心10-12分钟，弃去上清液，沉淀中再加入莼菜干粉5-6倍的分析纯丙酮，重复以上操作，最后所得残渣在常温下挥干并回收丙酮；以分析纯级丙酮脱脂简单易控，不会破坏莼菜多糖的结构与性质，同时丙酮可以回收再利用，降低了成本；

提取：按质量体积比为1g︰5-8mL将体积分数85-95%的乙醇溶液加入到莼菜残渣中，于65-70℃水浴中提取15-30分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2-3次，收集滤渣；在滤渣中加入12-15倍重量份的蒸馏水，于55-60℃水浴中提取45-60分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2-3次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；醇提与水提结合可以大大提高莼菜多糖的得率，不会破坏多糖的结构，同时提取溶剂容易除去，不会增加除杂工序；

脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯按照体积比75-80:15-18:1:0.1-0.12的比例混合均匀得混合溶液，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为16.5-17.0:1；在不断搅拌下，按照体积比3-4:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封后用磁力搅拌器缓慢搅拌20-30分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作2-3次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得莼菜多糖粗液；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除莼菜多糖中蛋白质的目的；特定比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯在乙酸的存在下可以对蛋白质变性胶状物起作用，可以起到隔离多糖与蛋白质变性胶状物的作用，因此可以大大降低蛋白质变性胶状物包裹的莼菜多糖的量，大大降低莼菜多糖以蛋白质渠道被分离出去的概率，提高莼菜多糖的得率与含量，降低提取成本；

纯化：向莼菜多糖粗液加入8-12倍体积分数为95-98%的乙醇溶液，静置过夜后离心，分离出固形物，分别以98-99%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物，冷冻干燥，即得莼菜活性物质；莼菜活性物质中多糖的含量可达97%以上，大大提高了莼菜多糖的利用价值，莼菜活性物质具有较好的清热解毒作用，能抑制细菌的生长，食之清胃火、泻肠热，捣烂外敷可治痈疽疔疮；莼菜活性物质同时具有调节免疫功能、抗肿癌、抗感染、降血糖血脂、延年益寿的功效。

与现有技术相比，本发明的优点在于：1）特定比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯在乙酸的存在下可以对蛋白质变性胶状物起作用，可以起到隔离多糖与蛋白质变性胶状物的作用，因此可以大大降低蛋白质变性胶状物包裹的莼菜多糖的量，大大降低莼菜多糖以蛋白质渠道被分离出去的概率，提高莼菜多糖的得率与含量，降低提取成本；2）莼菜活性物质中多糖的含量可达97%以上，大大提高了莼菜多糖的利用价值，莼菜活性物质具有较好的清热解毒作用，能抑制细菌的生长，食之清胃火、泻肠热，捣烂外敷可治痈疽疔疮；莼菜活性物质同时具有调节免疫功能、抗肿癌、抗感染、降血糖血脂、延年益寿的功效。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：

实施例1：

提取莼菜活性物质的方法，包括：脱脂、提取、脱蛋白、纯化，具体包括以下步骤：

1）脱脂：在莼菜干粉中加入10倍分析纯丙酮，搅拌脱脂2小时，以3000r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀中再加入莼菜干粉5倍的分析纯丙酮，重复以上操作，最后所得残渣在常温下挥干并回收丙酮；以分析纯级丙酮脱脂简单易控，不会破坏莼菜多糖的结构与性质，同时丙酮可以回收再利用，降低了成本；

2）提取：按质量体积比为1g︰5mL将体积分数85%的乙醇溶液加入到莼菜残渣中，于65℃水浴中提取15分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2次，收集滤渣；在滤渣中加入12倍重量份的蒸馏水，于55℃水浴中提取45分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；醇提与水提结合可以大大提高莼菜多糖的得率，不会破坏多糖的结构，同时提取溶剂容易除去，不会增加除杂工序；

3）脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯按照体积比75:15:1:0.1的比例混合均匀得混合溶液，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为16.5:1；在不断搅拌下，按照体积比3:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封后用磁力搅拌器缓慢搅拌20分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作2次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得莼菜多糖粗液；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除莼菜多糖中蛋白质的目的；特定比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯在乙酸的存在下可以对蛋白质变性胶状物起作用，可以起到隔离多糖与蛋白质变性胶状物的作用，因此可以大大降低蛋白质变性胶状物包裹的莼菜多糖的量，大大降低莼菜多糖以蛋白质渠道被分离出去的概率，提高莼菜多糖的得率与含量，降低提取成本；

4）纯化：向莼菜多糖粗液加入8倍体积分数为95%的乙醇溶液，静置过夜后离心，分离出固形物，分别以98%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物，冷冻干燥，即得莼菜活性物质；莼菜活性物质中多糖的含量可达97%以上，大大提高了莼菜多糖的利用价值，莼菜活性物质具有较好的清热解毒作用，能抑制细菌的生长，食之清胃火、泻肠热，捣烂外敷可治痈疽疔疮；莼菜活性物质同时具有调节免疫功能、抗肿癌、抗感染、降血糖血脂、延年益寿的功效。

实施例2：

提取莼菜活性物质的方法，包括以下步骤：

1）在莼菜干粉中加入12倍分析纯丙酮，搅拌脱脂3小时，以3500r/min离心12分钟，弃去上清液，沉淀中再加入莼菜干粉6倍的分析纯丙酮，重复以上操作，最后所得残渣在常温下挥干并回收丙酮；2）按质量体积比为1g︰8mL将体积分数95%的乙醇溶液加入到莼菜残渣中，于70℃水浴中提取30分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取3次，收集滤渣；在滤渣中加入15倍重量份的蒸馏水，于60℃水浴中提取60分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取3次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；3）将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯按照体积比80:18:1:0.12的比例混合均匀得混合溶液，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为17.0:1；在不断搅拌下，按照体积比4:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封后用磁力搅拌器缓慢搅拌30分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作3次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得莼菜多糖粗液；4）向莼菜多糖粗液加入12倍体积分数为98%的乙醇溶液，静置过夜后离心，分离出固形物，分别以99%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物，冷冻干燥，即得莼菜活性物质；莼菜活性物质中多糖的含量可达97%以上，大大提高了莼菜多糖的利用价值，莼菜活性物质具有较好的清热解毒作用，能抑制细菌的生长，食之清胃火、泻肠热，捣烂外敷可治痈疽疔疮；莼菜活性物质同时具有调节免疫功能、抗肿癌、抗感染、降血糖血脂、延年益寿的功效。

实施例3：

提取莼菜活性物质的方法，包括：脱脂、提取、脱蛋白、纯化，具体包括以下步骤：

脱脂：在莼菜干粉中加入10倍分析纯丙酮，搅拌脱脂2.5小时，以3300r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀中再加入莼菜干粉5倍的分析纯丙酮，重复以上操作，最后所得残渣在常温下挥干并回收丙酮；以分析纯级丙酮脱脂简单易控，不会破坏莼菜多糖的结构与性质，同时丙酮可以回收再利用，降低了成本；

提取：按质量体积比为1g︰7mL将体积分数90%的乙醇溶液加入到莼菜残渣中，于68℃水浴中提取25分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2次，收集滤渣；在滤渣中加入14倍重量份的蒸馏水，于58℃水浴中提取50分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取3次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；醇提与水提结合可以大大提高莼菜多糖的得率，不会破坏多糖的结构，同时提取溶剂容易除去，不会增加除杂工序；

脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯按照体积比78:16:1:0.1的比例混合均匀得混合溶液，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为16.8:1；在不断搅拌下，按照体积比3:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封后用磁力搅拌器缓慢搅拌25分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作3次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得莼菜多糖粗液；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除莼菜多糖中蛋白质的目的；特定比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯在乙酸的存在下可以对蛋白质变性胶状物起作用，可以起到隔离多糖与蛋白质变性胶状物的作用，因此可以大大降低蛋白质变性胶状物包裹的莼菜多糖的量，大大降低莼菜多糖以蛋白质渠道被分离出去的概率，提高莼菜多糖的得率与含量，降低提取成本；

纯化：向莼菜多糖粗液加入10倍体积分数为96%的乙醇溶液，静置过夜后离心，分离出固形物，分别以98%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物，冷冻干燥，即得莼菜活性物质；莼菜活性物质中多糖的含量可达97%以上，大大提高了莼菜多糖的利用价值，莼菜活性物质具有较好的清热解毒作用，能抑制细菌的生长，食之清胃火、泻肠热，捣烂外敷可治痈疽疔疮；莼菜活性物质同时具有调节免疫功能、抗肿癌、抗感染、降血糖血脂、延年益寿的功效。

本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.提取莼菜活性物质的方法，其特征在于：所述提取莼菜活性物质的方法包括：

脱脂：在莼菜干粉中加入10-12倍分析纯丙酮，搅拌脱脂2-3小时，离心后弃去上清液，沉淀中再加入莼菜干粉5-6倍的分析纯丙酮，重复以上操作，最后所得残渣在常温下挥干并回收丙酮；

提取：莼菜残渣中加入乙醇溶液并提取，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2-3次，收集滤渣；在滤渣中加入蒸馏水提取，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2-3次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；

脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯混合均匀得混合溶液，在不断搅拌下，按照体积比3-4:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封并搅拌后倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作2-3次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得莼菜多糖粗液；

纯化：向莼菜多糖粗液加入8-12倍体积分数为95-98%的乙醇溶液，静置过夜后离心，分离出固形物，洗涤固形物并冷冻干燥，即得莼菜活性物质。

2.根据权利要求1所述的提取莼菜活性物质的方法，其特征在于：所述脱脂步骤中，离心转速为3000-3500r/min，离心时间为10-12分钟。

3.根据权利要求1所述的提取莼菜活性物质的方法，其特征在于：所述提取步骤中，莼菜残渣中加入乙醇溶液的质量体积比为1g︰5-8mL，乙醇溶液的体积分数为85-95%。

4.根据权利要求1所述的提取莼菜活性物质的方法，其特征在于：所述提取步骤中，乙醇溶液提取的温度为65-70℃，提取时间为15-30分钟。

5.根据权利要求1所述的提取莼菜活性物质的方法，其特征在于：所述提取步骤中，滤渣中加入蒸馏水的量为滤渣重量的12-15倍，提取温度为55-60℃，提取时间为45-60分钟。

6.根据权利要求1所述的提取莼菜活性物质的方法，其特征在于：所述脱蛋白步骤中，氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯的体积比为75-80:15-18:1:0.1-0.12。

7.根据权利要求1或6所述的提取莼菜活性物质的方法，其特征在于：所述脱蛋白步骤中，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为16.5-17.0:1。

8.根据权利要求1所述的提取莼菜活性物质的方法，其特征在于：所述纯化步骤中，分别以98-99%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物。