CN103721572B - 一种含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法 - Google Patents

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本发明涉及一种含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,利用层层组装制备表面呈负电性的复合膜,再通过静电结合作用使包裹有水通道蛋白的正电性的磷脂囊泡溶液在复合膜上铺展形成磷脂双层膜。本发明通过层层组装制备含水通道蛋白的磷脂仿生膜,加入水通道蛋白后膜的通量比原来提高了4~5倍,约为16~28L/m2h(原膜水通量为3~5L/m2h),对一价Na+的截留率提高到40%以上,对二价Mg2+的截留率提高到65%以上,可应用于水软化,废水处理等不同领域,具有广阔的应用前景。

Description

一种含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法
技术领域
本发明涉及一种含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,属于仿生膜制备技术领域。
背景技术
海水淡化是解决当今世界水资源短缺的途径之一。近年来,膜分离技术凭借其节能、高效、环保的优势,在水处理领域得到了迅速的发展。膜法水处理的关键在于分离膜的性能。开发新型的复合膜材料来降低能耗,实现高效、轻便的净水技术是目前膜材料领域的研究热点和发展趋势。水通道蛋白是一种理想的水分子通道,它具有超强的水渗透性和单一选择通过性。含水通道蛋白的新型复合膜克服了传统分离膜不能同时提高水通量和截留率的缺点。
层层组装是一种基于物质交替沉积而制备复合膜的方法,可以实现膜结构和组成的精确调控。Lutz Krasemann等研究发现静电层层自组装法是制备渗透分离膜的合适的方法,膜的渗透分离性能主要受聚电解质的电荷密度影响,聚电解质又受其极性基团的离子化程度和化学结构控制。所以选择合适的基体、聚离子,控制聚电解质吸附的条件,可设计出性能优越的渗透分离膜。通过层层自组装原理,利用静电作用力制备含水通道蛋白的磷脂仿生膜,可以增强磷脂双层膜与基膜之间的作用力,提高磷脂膜的机械强度,使其同时具有高的水通量及高的截盐率,在海水淡化、水处理等其它水资源领域,都有良好的应用前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,以便通过层层组装制备含水通道蛋白的磷脂仿生膜,提高膜的水透过率及离子截留率,且制备方法简单,便于操作,得到的膜的机械强度高,延长了其使用寿命。
为了实现上述目的,本发明的技术方案如下。
一种含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,利用层层组装制备表面呈负电性的复合膜,再通过静电结合作用使包裹有水通道蛋白的正电性的磷脂囊泡溶液在复合膜上铺展形成磷脂双层膜,其具体步骤如下:
(1)制备基膜:将聚丙烯腈溶解在极性溶剂N,N-二甲基甲酰胺中,加入致孔剂,加热搅拌12~48h,冷却脱泡12~48h,在20~30℃的恒温、湿度60~80%的恒湿环境下,将配制好的铸膜液在玻璃板上刮膜,刮好后浸入凝胶浴成膜,再经漂洗后,浸入碱溶液中进行碱处理,得到表面带负电荷的基膜;
(2)制备层层组装复合膜:将步骤(1)处理好的基膜用超纯水洗涤后先后浸入带正电的高分子溶液与带负电的高分子溶液中,通过静电作用制备表面呈负电性的复合纳滤膜;
(3)制备磷脂囊泡溶液:按比例取1,2-二油酰基磷脂酰胆碱、1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷(阳离子脂质体)混合氯仿溶液于烧瓶中,用高纯氮气气流将其中的氯仿缓慢吹干,然后将烧瓶浸入恒温水浴中,连接真空泵真空干燥;向干燥后的烧瓶中加入磷酸盐缓冲溶液,经震荡和超声,得到磷脂囊泡溶液;
(4)引入水通道蛋白:将步骤(3)所制得的磷脂囊泡溶液与配制好的水通道蛋白溶液(0.008mg/ml)、甘油(0.1mg/ml)和n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.01mg/ml)按比例混合,加入1%的n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷后,再将所得溶液放入磷酸盐缓冲溶液中渗析三天,得到纯净的含水通道蛋白的蛋白脂质体;
(5)制备含水通道蛋白磷脂仿生膜:将步骤(2)制备好的复合纳滤膜浸入步骤(4)所制备的含水通道蛋白的磷脂囊泡溶液中铺展,完成制备。
进一步地,步骤(1)中的碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂中的一种或者几种。
进一步地,步骤(1)中所制备的基膜为羟基化的聚偏氟乙烯膜、磺化聚砜膜、磺化聚醚砜膜、磺化聚醚醚酮膜、聚酰胺-酰亚胺膜、聚哌嗪酰胺膜中的一种。
进一步地,步骤(2)中,带正电的高分子溶液是聚乙烯亚胺、聚烯丙基胺盐酸盐、聚二烯丙基二甲基胺盐酸盐中的一种或者几种;带负电的高分子溶液是聚苯乙烯磺酸钠、聚丙烯酸钠盐中的一种或者几种。
进一步地,步骤(2)中,制得的复合纳滤膜采用交联剂进行交联,交联剂为戊二醛、环氧氯丙烷、丙三醇三缩水甘油醚、甲苯二异氰酸酯中的一种或者几种。
进一步地,步骤(3)中,使用的1,2-二油酰基磷脂酰胆碱能用二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1-十六酰-SN-丙三醇-磷酸胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱中的一种或者几种替代。
进一步地,步骤(3)中,1,2-二油酰基磷脂酰胆碱与1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷混合质量比为20%~80%。
进一步地,步骤(4)中,加入的水通道蛋白与磷脂囊泡溶液的混合质量比分别为1:50或1:100或1:400。
进一步地,步骤(4)中,水通道蛋白为水通道蛋白1、水通道蛋白z、水通道蛋白γ-TIP、水通道蛋白PIP、水通道蛋白NIP中的一种或几种。
该发明的有益效果在于:本发明通过层层组装制备含水通道蛋白的磷脂仿生膜,加入水通道蛋白后膜的通量比原来提高了4~5倍,约为16~28L/m2h(原膜水通量为3~5L/m2h),对一价Na+的截留率提高到40%以上,对二价Mg2+的截留率提高到65%以上,可应用于水软化,废水处理等不同领域,具有广阔的应用前景。
具体实施方式
本发明提出了一种新型含水通道蛋白复合膜的制备方法,利用层层组装制备表面呈负电性的复合膜,再通过静电结合作用使包裹有水通道蛋白的正电性的磷脂囊泡溶液在复合膜上铺展形成磷脂双层膜。然后膜在外压、错流的方式下在反渗透膜性能评价仪上进行测试。测试压力为0.4MPa,预压约0.5h,至能量稳定后,测试复合膜的分离性能,这些分离性能包括水通量和截留率。
下面结合具体实施例对本发明进行详细描述,但实施例仅仅是提供为说明而不是限定本发明。
实施例1
将2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油酰基磷脂酰胆碱与2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷的氯仿溶液混合,用氮气吹干并真空干燥,然后加入pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液30ml,经震荡和超声,制备得到两种磷脂的混合磷脂囊泡溶液;加入水通道蛋白1(0.008mg/ml)、甘油(0.1mg/ml)和n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.01mg/ml)的磷酸盐缓冲溶液5ml,将混合溶液装入截留分子量为7KDa的渗析袋中,然后在磷酸盐缓冲溶液中渗析3天,制备蛋白与磷脂比为1:50的蛋白脂质体;将相转化法制得的聚丙烯腈膜浸入1.5MNaOH溶液中1.5h,用去离子水洗涤干净后,将膜交替浸泡于的聚乙烯亚胺溶液与聚苯乙烯磺酸钠溶液中,得到一层组装的表面为聚苯乙烯磺酸钠的复合膜,用去离子水反复清洗;加入15ml蛋白脂质体,反应4h,得到含水通道蛋白的磷脂复合膜。测定该分离膜的性能,操作压力0.4MPa,水通量为25.0L/m2h,对于500ppm的NaCl,Na+截留率为41.0%,对于500ppm的MgCl2,Mg2+截留率为66.3%。
实施例2
将2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油酰基磷脂酰胆碱与2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷的氯仿溶液混合,用氮气吹干并真空干燥,然后加入pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液30ml,经震荡和超声,制备得到上述两种磷脂的混合磷脂囊泡溶液;加入水通道蛋白1(0.008mg/ml)、甘油(0.1mg/ml)和n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.01mg/ml)的磷酸盐缓冲溶液2.5ml,将混合溶液装入截留分子量为7KDa的渗析袋中,然后在磷酸盐缓冲溶液中渗析3天,制备蛋白与磷脂比为1:100的蛋白脂质体;将相转化法制得的聚丙烯腈膜浸入1.5M NaOH溶液中1.5h,用去离子水洗涤干净后,将膜交替浸泡于的聚乙烯亚胺溶液与聚苯乙烯磺酸钠溶液中,得到一层组装的表面为聚苯乙烯磺酸钠的复合膜,用去离子水反复清洗;加入15ml蛋白脂质体,反应4h,得到含水通道蛋白的磷脂复合膜。测定该分离膜的性能,操作压力0.4MPa,水通量为23.8L/m2h,对于500ppm的NaCl,Na+截留率为39.4%,对于500ppm的MgCl2,Mg2+截留率为65.0%。。
实施例3
将2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油酰基磷脂酰胆碱与2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷的氯仿溶液混合,用氮气吹干并真空干燥,然后加入pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液30ml,经震荡和超声,制备得到上述两种磷脂的混合磷脂囊泡溶液;加入水通道蛋白1(0.008mg/ml)、甘油(0.1mg/ml)和n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.01mg/ml)的磷酸盐缓冲溶液1.25ml,将混合溶液装入截留分子量为7KDa的渗析袋中,然后在磷酸盐缓冲溶液中渗析3天,制备蛋白与磷脂比为1:200的蛋白脂质体;将相转化法制得的聚丙烯腈膜浸入1.5M NaOH溶液中1.5h,用去离子水洗涤干净后,将膜交替浸泡于的聚乙烯亚胺溶液与聚苯乙烯磺酸钠溶液中,得到一层组装的表面为聚苯乙烯磺酸钠的复合膜,用去离子水反复清洗;加入15ml蛋白脂质体,反应4h,得到含水通道蛋白的磷脂复合膜。测定该分离膜的性能,操作压力0.4MPa,水通量为22.5L/m2h,对于500ppm的NaCl,Na+截留率为40.5%,对于500ppm的MgCl2,Mg2+截留率为67.0%。
实施例4
将2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油酰基磷脂酰胆碱与2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷的氯仿溶液混合,用氮气吹干并真空干燥,然后加入pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液30ml,经震荡和超声,制备得到上述两种磷脂的混合磷脂囊泡溶液;加入水通道蛋白1(0.008mg/ml)、甘油(0.1mg/ml)和n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.01mg/ml)的磷酸盐缓冲溶液5ml,将混合溶液装入截留分子量为7KDa的渗析袋中,然后在磷酸盐缓冲溶液中渗析3天,制备蛋白与磷脂比为1:50的蛋白脂质体;将相转化法制得的聚丙烯腈膜浸入1.5M NaOH溶液中1.5h,用去离子水洗涤干净后,将膜交替浸泡于的聚乙烯亚胺溶液与聚苯乙烯磺酸钠溶液中,得到两层组装的表面为聚苯乙烯磺酸钠的复合膜,用去离子水反复清洗;加入15ml蛋白脂质体,反应4h,得到含水通道蛋白的磷脂复合膜。测定该分离膜的性能,操作压力0.4MPa,水通量为19.6L/m2h,对于500ppm的NaCl,Na+截留率为43.4%,对于500ppm的MgCl2,Mg2+截留率为73.5%。。
实施例5
将2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油酰基磷脂酰胆碱与2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷的氯仿溶液混合,用氮气吹干并真空干燥,然后加入pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液30ml,经震荡和超声,制备得到上述两种磷脂的混合磷脂囊泡溶液;加入水通道蛋白1(0.008mg/ml)、甘油(0.1mg/ml)和n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.01mg/ml)的磷酸盐缓冲溶液2.5ml,将混合溶液装入截留分子量为7KDa的渗析袋中,然后在磷酸盐缓冲溶液中渗析3天,制备蛋白与磷脂比为1:100的蛋白脂质体;将相转化法制得的聚丙烯腈膜浸入1.5M NaOH溶液中1.5h,用去离子水洗涤干净后,将膜交替浸泡于的聚乙烯亚胺溶液与聚苯乙烯磺酸钠溶液中,得到两层组装的表面为聚苯乙烯磺酸钠的复合膜,用去离子水反复清洗;加入15ml蛋白脂质体,反应4h,得到含水通道蛋白的磷脂复合膜。测定该分离膜的性能,操作压力0.4MPa,水通量为19.0L/m2h,对于500ppm的NaCl,Na+截留率为42.5%,对于500ppm的MgCl2,Mg2+截留率为70.0%。。
实施例6
将2ml浓度为1mg/ml的1,2-二油酰基磷脂酰胆碱与2ml浓度为1mg/ml 1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷的氯仿溶液混合,用氮气吹干并真空干燥,然后加入pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液30ml,经震荡和超声,制备得到上述两种磷脂的混合磷脂囊泡溶液;加入水通道蛋白1(0.008mg/ml)、甘油(0.1mg/ml)和n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.01mg/ml)的磷酸盐缓冲溶液5ml,将混合溶液装入截留分子量为7KDa的渗析袋中,然后在磷酸盐缓冲溶液中渗析3天,制备蛋白与磷脂比为1:50的蛋白脂质体;将相转化法制得的聚丙烯腈膜浸入1.5MNaOH溶液中1.5h,用去离子水洗涤干净后,将膜交替浸泡于的聚乙烯亚胺溶液与聚苯乙烯磺酸钠溶液中,得到两层组装的表面为聚苯乙烯磺酸钠的复合膜,用去离子水反复清洗;加入15ml蛋白脂质体,反应4h,得到含水通道蛋白的磷脂复合膜。测定该分离膜的性能,操作压力0.4MPa,水通量为16.8L/m2h,对于500ppm的NaCl,Na+截留率为43.0%,对于500ppm的MgCl2,Mg2+截留率为75.0%。
以上所述是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,其特征在于:利用层层组装制备表面呈负电性的复合膜,再通过静电结合作用使包裹有水通道蛋白的正电性的磷脂囊泡溶液在复合膜上铺展形成磷脂双层膜;具体步骤如下:
(1)制备基膜:将聚丙烯腈溶解在极性溶剂N,N-二甲基甲酰胺中,加入致孔剂,加热搅拌12~48h,冷却脱泡12~48h,在20~30℃的恒温、湿度60~80%的恒湿环境下,将配制好的铸膜液在玻璃板上刮膜,刮好后浸入凝胶浴成膜,再经漂洗后,浸入碱溶液中进行碱处理,得到表面带负电荷的基膜;
(2)制备层层组装复合膜:将步骤(1)处理好的基膜用超纯水洗涤后先后浸入带正电的高分子溶液与带负电的高分子溶液中,通过静电作用制备表面呈负电性的复合纳滤膜;
(3)制备磷脂囊泡溶液:按比例取1,2-二油酰基磷脂酰胆碱、1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷混合氯仿溶液于烧瓶中,用高纯氮气气流将其中的氯仿缓慢吹干,然后将烧瓶浸入恒温水浴中,连接真空泵真空干燥;向干燥后的烧瓶中加入磷酸盐缓冲溶液,经震荡和超声,得到磷脂囊泡溶液;1,2-二油酰基磷脂酰胆碱与1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷混合质量比为20%~80%;
(4)引入水通道蛋白:将步骤(3)所制得的磷脂囊泡溶液与配制好的0.008mg/ml的水通道蛋白溶液、0.1mg/ml的甘油和0.01mg/ml的n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷按比例混合,加入1%的n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷后,再将所得溶液放入磷酸盐缓冲溶液中渗析三天,得到纯净的含水通道蛋白的蛋白脂质体;加入的水通道蛋白与磷脂囊泡溶液的混合质量比分别为1:50或1:100或1:400;
(5)制备含水通道蛋白磷脂仿生膜:将步骤(2)制备好的复合纳滤膜浸入步骤(4)所制备的含水通道蛋白的磷脂囊泡溶液中铺展,完成制备。
2.根据权利要求1所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中的碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂中的一种或者几种。
3.根据权利要求1所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中所制备的基膜为羟基化的聚偏氟乙烯膜、磺化聚砜膜、磺化聚醚砜膜、磺化聚醚醚酮膜、聚酰胺-酰亚胺膜、聚哌嗪酰胺膜中的一种。
4.根据权利要求1所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,带正电的高分子溶液是聚乙烯亚胺、聚烯丙基胺盐酸盐、聚二烯丙基二甲基胺盐酸盐中的一种或者几种;带负电的高分子溶液是聚苯乙烯磺酸钠、聚丙烯酸钠盐中的一种或者几种。
5.根据权利要求1所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,制得的复合纳滤膜采用交联剂进行交联,交联剂为戊二醛、环氧氯丙烷、丙三醇三缩水甘油醚、甲苯二异氰酸酯中的一种或者几种。
6.根据权利要求1所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中,使用的1,2-二油酰基磷脂酰胆碱能用二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1-十六酰-SN-丙三醇-磷酸胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱中的一种或者几种替代。
7.根据权利要求1所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法,其特征在于:所述步骤(4)中,水通道蛋白为水通道蛋白1、水通道蛋白z、水通道蛋白γ-TIP、水通道蛋白PIP、水通道蛋白NIP中的一种或几种。
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"Preparation of supported lipid membranes for aquaporin Z incorporation";Xuesong Li等;《Colloids and Surfaces B:Biointerfaces》;20120601(第94期);第333-340页 *

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