KR101170059B1

KR101170059B1 - 웨스턴 블롯용 나노섬유 멤브레인 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR101170059B1
Application number: KR1020090093184A
Authority: KR
Inventors: 국중기; 조기운; 김찬; 서상철; 김철현; 서인용; 이승훈; 김윤혜
Original assignee: 조선대학교산학협력단; 주식회사 아모메디
Priority date: 2009-09-30
Filing date: 2009-09-30
Publication date: 2012-07-31
Also published as: KR20110035454A

Abstract

본 발명은 나노섬유로 구성된 웨스턴 블롯(western blot)용 트랜스퍼 멤브레인(transfer membrane)으로, 전기방사에 의한 평균섬유직경 50～1000㎚, 평균세공경 0.1～0.5㎛로 구성되는 웨스턴 블롯용 멤브레인에 관한 것이다.

본 발명에 의한 웨스턴 블롯용 멤브레인은 제조가 간편하고, 제조비용이 저렴하며 빠른 응답특성으로 특정 물질을 검출할 수 있으며, 소량으로 존재하는 물질도 용이하게 검출할 수 있으므로 단백질 검출을 비롯한 다양한 물질의 검출에 유용하게 사용할 수 있다.

전기방사, 나노섬유, 단백질 검출, 웨스턴 블롯, 평균세공

Description

웨스턴 블롯용 나노섬유 멤브레인 및 그 제조방법{Nano-fibered Membrane for Western Blot and Manufacturing Method of the Same}

본 발명은 나노섬유로 구성된 웨스턴 블롯(western blot)용 멤브레인 및 그 제조방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 전기방사에 의해 평균섬유경 50～1000㎚, 평균세공경 0.1～0.5㎛로 구성되는 웨스턴 블롯용 트랜스퍼 멤브레인(transfer membrane) 및 그 제조방법에 관한 것이다.

웨스턴 블롯(western blot)은 여러 단백질 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 찾아내는 기법으로서, 찾고자 하는 단백질에 대한 항체(antibody)를 사용하여 항원-항체반응(antigen-antibody reaction)을 일으킴으로써 특정 단백질의 존재 여부를 밝혀내는 가장 효과적인 방법이다.

현재, 특정 물질을 검출하기 위해서는 고가의 가스 크로마토그래피(GC, gas chromatograph)나 HPLC(high performance liquid chromatograph) 등의 크로마토그래피, ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), 면역조직화학법(Immunohis technology) 및 DNA 분석 등과 같은 방법을 사용하여 왔으며, 단백질의 경우 웨스턴 블롯을 이용한 항원-항체반응에 의해 특정 단백질을 분리, 분석하는 방법이 일 반적으로 알려져 있다.

웨스턴 블롯은 세포나 조직으로부터 추출된 단백질을 샘플 버퍼(sample buffer)와 섞어 아크릴아미드(acrylamide)로 만든 분자체(molecular sieve)에 올려놓고 전기영동을 하면 샘플 버퍼에 들어있던 SDS(sodium dodecylsulfate, SDS-page) 라는 물질이 단백질 전체에 (-) 전기를 띠게 해서 (+) 전기쪽으로 단백질이 끌려가게 된다. 이때 분자체가 단백질의 진행을 방해하여 작은 분자는 빨리, 큰분자는 느리게 이동하여 여러 크기의 밴드(band)를 형성하게 되는데, 이때 크기에 따라 분리된 젤(gel)위에 멤브레인을 올려놓고 전기를 흘려주면 단백질은 분리된 상태로 멤브레인에 옮겨진다(transfer). 여기서 검출하고자 하는 특정 단백질에 대한 항체(antibody)를 결합시키고 다시 그 항체에 특이적인 2차 항체를 결합시켜 발색 내지는 형광에 의해 나타나는 반응을 X-ray로 이미지화하는 방법이다. 도 1에는 일반적으로 웨스턴 블롯 방법을 이용하여 단백질을 검출하는 과정을 나타낸 것이다.

이때 사용되는 트랜스퍼 멤브레인은 단백질과 소수성 결합(hydrophobic interaction)을 하기 쉬운 니트로셀룰로오즈(nitrocellulose), 나일론(nylon), 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVdF) 등을 원료로 사용하며 평균세공경이 0.2㎛～0.45㎛로 구성되어 있다. 이러한 멤브레인은 물과 같은 비용매 속에 용매와 고분자를 부어 제작하는 상전이법(phase separation)에 의한 건식(dry), 습식(wet), 건습식(dry-wet casting)과 같은 방법으로 제조되고 있으나 제조단가가 고가이며, 대량생산에는 한계가 있었다. 도 2에는 대표적인 상전이법에 의해 제조되는 막구조의 형성방법을 나타냈다.

따라서, 본 발명의 발명자들은 방사기법을 이용하여 가격이 저렴하면서 제조방법이 간편하고, 세공구조의 인위적 조절이 가능하고, 표면적이 극대화된 나노섬유로 구성된 멤브레인을 개발함으로써 단백질 검출 및 진단용으로 감도가 우수한 트랜스퍼 멤브레인을 제조함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 단백질 검출 및 진단에 사용되는 웨스턴 블롯용 멤브레인을 방사기법을 사용하여 표면적이 극대화된 나노섬유 웹으로 구성된 고감도 멤브레인 및 그 제조방법을 제공하는 것이다.

이러한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 의하면, 웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법에 있어서, 소수성 고분자 물질을 용매에 용해하여 방사용액을 제조하는 단계; 상기 방사용액을 방사방법에 의하여 소수성 고분자 나노섬유 방사 웹을 얻는 단계; 상기 얻어진 나노섬유 방사 웹을 라미네이팅(laminating)하여 웨스턴 블롯용 멤브레인을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법이 제공된다.

또한 본 발명에 의하면, 상기 방법에 따라 제조되는 웨스턴 블롯용 멤브레인으로서, 평균 세공경이 0.1～0.5㎛, 두께가 30～200㎛, 기공도가 60%이상인 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 멤브레인이 제공된다.

상기 소수성 고분자 물질로는 예를 들면, PVdF(polyvinylidene fluoride), 나일론(nylon), 니트로셀룰로오스(nitrocellulose), PU(polyurethane), PC(polycarbonate), PS(polystyrene), PAN(polyacrylonitrile), PLA(polylatic acid), PLGA,(polylactic-co-glycolic acid) PEI(polyethyleneimine), PPI(polypropyleneimine), PMMA(Polymethylmethacrylate), PVC(polyvinylcholride), PVAc(polyvinylacetate), 폴리스티렌 디비닐벤젠 공중합체(Polystylene divinylbenzene copolymer) 등을 단독 내지 복합화하여 구성될 수 있으며, 특별히 이들에 제약을 두지는 않는다.

상기 용매는 디메틸 포름아미드(di-methylformamide, DMF), 디메틸 아세트마아미드(di-methylacetamide, DMAc), THF(tetrahydrofuran), 아세톤(Acetone), 알코올(Alcohol)류, 클로로포름(Chloroform), DMSO(dimethyl sulfoxide), 디클로로메탄(dichloromethane), 초산(acetic acid), 개미산(formic acid), NMP(N-Methylpyrrolidone), 불소계 알콜류, 및 물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 한다.

상기 방사 방법은 전기방사(electrospinning), 전기분사(electrospray), 전기분사방사(electrobrown spinning), 원심전기방사(centrifugal electrospinning), 플래쉬 전기방사(flash-electrospinning) 등으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 1종인 것을 특징으로 한다.

상기 소수성 고분자로 구성된 나노섬유층의 라미네이팅 결합은 후처리 공정인 압착, 가압, 컬렌더링, 열처리, 롤링, 열접합, 초음파 접합, 심 실링 테이프 중 의 어느 하나에 의해 이루어지는 것이 바람직하다.

본 발명에 의해 제조된 웨스턴 블롯용 멤브레인은 제조공정이 간단하므로 저렴한 비용으로 대량생산이 가능하며, 기존 멤브레인에 비해 우수한 감도를 제공함으로써 단백질 분리, 분석용 및 다양한 검출에 활용이 가능하다.

예를 들어, 본 발명에 따른 웨스턴 블롯용 나노섬유 웹으로 구성된 멤브레인은 먼저 소수성 고분자를 적절한 용매에 용해하여 방사 가능한 농도로 용액을 제조하고, 방사구로 이송한 후 노즐에 고전압을 인가하여 전기방사(electrospinning)하고, 이를 라미네이팅하여 평균 세공경 0.1～0.5㎛, 평균 섬유경 50～1000㎚, 멤브레인 두께 30～200㎛로 구성된 단백질 분리, 검출용 멤브레인을 제조한다.

이하 각 단계별로 상세히 설명한다.

소수성 고분자 함유 방사용액 제조

소수성 고분자를 적당한 용매를 사용하여 방사 가능한 농도로 용해하여 방사용액을 준비한다. 본 발명에 있어서 소수성 고분자 물질로는 PVdF(polyvinylidene fluoride), Nylon, nitrocellulose, PU(polyurethane), PC(polycarbonate), PS(polystyrene), PLA, PLGA, PEI(polyethyleneimine), PPI(polypropyleneimine), PMMA, PVC, PVAc, Polystylene divinylbenzene copolymer 등을 단독 내지는 복합화 하여 사용할 수 있으며, 상용성 있는 용매를 사용하여 방사가능한 농도의 방사용액을 제조하여 사용한다.

상기 방사용액 제조에 있어서 소수성 고분자 물질의 함량은 약 5～50중량%가 적당하며, 5중량% 미만의 경우 나노섬유를 형성하기 보다는 비드(bead)상으로 분사되어 멤브레인을 구성하기 어려우며, 50중량% 초과인 경우에는 점도가 높아 방사성이 불량하여 섬유를 형성하기 곤란한 경우가 있다. 따라서 방사용액의 제조는 특별한 제약은 없으나, 섬유상 구조를 형성하기 쉬운 농도로 섬유의 형상(morphology)을 제어하는 것이 바람직하다.

고분자 나노섬유 웹 형성

상기 제조된 방사용액을 정량펌프를 사용하여 방사팩(spin pack)으로 이송하고, 이때 고전압 조절장치를 사용하여 방사팩에 전압을 인가하여 전기방사를 실시한다. 이때 사용되는 전압은 0.5kV～100kV까지 조절하는 것이 가능하며, 집전판은 접지를 하거나 (-)극으로 대전하여 사용할 수 있으며, 전기전도성 금속, 박리지 등으로 구성되는 것이 바람직하다. 집전판의 경우 방사시 섬유의 집속을 원활하게 하기 위해 포집장치(suction collector)를 부착하여 사용하는 것이 바람직하다.

또한 방사팩과 집전판까지의 거리는 5～50㎝로 조절하여 사용하는 것이 바람직하다. 방사시 토출량은 정량펌프를 사용하여 홀당 0.01～5cc/hole.min으로 토출하여 방사하고, 방사시 온도 및 습도를 조절할 수 있는 챔버(chamber)내에서 상대습도 30-80%의 환경에서 방사하는 것이 바람직하다.

고분자 나노섬유 웹 라미네이팅 단계

제조된 소수성 고분자로 구성된 나노섬유 웹은 압착, 롤링, 열접합, 초음파 접함, 심 실링 테이프(Sim sealing tape) 등의 다양한 방법으로 라미네이팅하여 멤 브레인 두께 30～200㎛, 평균 세공경 0.1～0.5㎛가 되도록 한다.

멤브레인 두께가 30㎛ 미만의 경우 웨스턴 블롯시 강직도가 낮아 취급이 불량하며, 200㎛를 초과할 경우 제조 비용이 상승하므로 30～200㎛가 적당하다. 또한, 멤브레인 평균세공경은 0.1～0.5㎛가 적당하며, 0.1㎛ 미만의 경우 후처리 공정비용이 상승하고 트랜스퍼 시간이 지연되며, 0.5㎛ 초과이면 트랜트퍼 농도가 낮아 정확한 단백질 분석이 이루어질 수 없는 단점이 있다.

특히, 라미네이팅을 할 경우 열처리를 동반하면서 할 수 있는데 고분자가 용융되지 않는 범위인 60～200℃의 온도범위에서 실시하는 것이 바람직하다. 60℃미만의 경우 열처리 온도가 낮아 나노섬유간 융착이 불안정하여 웨스턴 블롯 수행전 메탄올(methanol) 전처리시 나노섬유간 분리가 진행되어 적당한 웨스턴 블롯을 수행하기 어렵게 된다. 또한 열처리 온도가 200℃ 초과시 나노섬유를 구성하는 소수성 고분자의 용융에 의해 세공구조가 막혀 적절한 SDS-page로부터 단백질 전이(transfer)가 이루어지지 않아 정확한 분석이 이루어지지 않는 경향이 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

(실시예 1)

소수성 고분자인 호모(homo)폴리머로 구성된 PVdF(HSV 900)를 20중량%가 되도록 용매 DMAc에 용해하였다. 제조된 용액을 정량펌프를 이용하여 방사노즐로 이 송하고 인가전압 25kV, 방사구와 집전체와의 거리 20㎝, 토출량 분당 0.05cc/g?holl으로 상온, 상압에서 방사를 실시하여 PVdF 나노섬유 방사 웹을 얻었다.

방사에 의해 얻어진 나노섬유 방사 웹의 두께는 약 120㎛였으며, 이 PVdF 방사 웹을 145℃로 가열된 롤러를 이용하여 라미네이팅을 실시하여 PVdF 멤브레인을 제작하였으며, 라미네이팅 후 멤브레인의 두께는 약 80㎛였으며, 평균 세공경의 크기는 0.45㎛를 나타냈다.

도 3은 실시 예 1에서 얻은 PVdF 멤브레인의 주사전자 현미경사진을 나타낸 것이다. 도 3에서 보는 바와 같이, PVdF 나노섬유의 섬유직경은 대부분 1㎛ 미만이었으며, 평균 500㎚ 정도를 나타냈다. 세공경이 비교적 균일하며 그 구조에 있어서도 3차원적으로 열린 세공구조(3-Dimensional open pore structure)로 형성되어 있음을 알 수 있다.

(실시예 2 및 3)

실시예 2 및 3은 소수성 고분자인 호모폴리머로 구성된 PVdF(761) 단독(실시예 2) 및 공중합체인 PVdF 2801을 PVdF 761과 50:50중량%로 혼합(실시 예 3)하여 실시예 1에서의 방법과 동일한 방법으로 전기방사를 실시하였다.

제조된 실시예 2 및 3의 샘플은 비교예의 샘플과 비교를 위하여 TGA, XRD, SEM, DSC 분석을 실시하였다. 열분석 결과 비교예와 실시예에 의해 제조된 샘플의 경우 거의 동일한 결과를 나타냈으며, PVdF 고분자의 전형적인 결과를 나타냈다.

(비교예)

비교를 위하여 상분리법을 이용하여 제조된 상용화 멤브레인인 Pall사(PALL CO., LTD., BioTrace™ PVdF)의 PVdF 멤브레인을 사용하여 웨스턴 블롯을 실시 예 3의 방법과 동일하게 실시하였다.

멤브레인 구조분석

실시 예 1 내지 3에 의해 제조된 PVdF 멤브레인과 비교 예에 의해 제조된 상용화 멤브레인의 구조분석을 DSC, XRD, TGA, SEM을 통하여 하였다. SEM 분석결과, 비교 예의 경우에는, 제조된 멤브레인의 주사전자 현미경사진을 나타내는 도 4에서 보는 바와 같이, 세공경이 균일하지 못하고, 또한 세공구조에 있어서도 닫힌 세공구조(closed pore structure)임을 알 수 있다.

열중량 분석(TGA)결과를 나타낸 도 5로부터, 상용화 멤브레인에 대한 비교 예와 본 발명의 실시 예 모두 약 500℃까지는 공기 중에서 분해되지 않는다는 것을 알 수 있으며, 다만, 본 발명의 실시 예들의 경우가 비교 예에 비하여 열적 안정성이 다소 우수하다는 것을 확인할 수 있다.

한편, 본 발명의 실시 예 1과 비교 예에 의해 제조된 각 멤브레인의 기공도(porosity)는 각각 가로×세로 1㎝씩 절단하여 다음 식 (1)에 의해 측정하였다.

..........(1)

여기서,

는 PVdF의 밀도로 1.76g/㎤ 이며,

는 계산된 값이다.

상기 식에 의해 얻어진 기공도는 실시 예 1의 경우가 73.3%, 비교 예의 경우가 약 67%로 되어 본 발명의 실시 예 1의 방법에 의해 제조된 멤브레인의 기공도가 약 10% 더 크다는 사실을 확인하였다.

웨스턴 블롯시험

상기 실시 예 1과 비교 예의 샘플을 이용하여 웨스턴 블롯을 실시하였다.

먼저 실시 예 1과 비교 예에서 제조된 샘플을 가로×세로 각각 8㎝×9㎝로 미리 잘라놓고 겔(gel)내 단백질과 멤브레인이 소수성 결합(hydrophobic interaction)을 할 수 있도록 100% 메탄올에 약 5분간 침지하여 활성화시켰다.

이렇게 활성화된 멤브레인을 트랜스퍼 완충용액(1×transfer buffer)으로 옮겨준 후 10분간 방치하였다. 이때 이 트랜스퍼 완충용액의 구성은 3.03g/L trisma-base, 14.4g/L Glycine, 20% 메탄올(200ml/L)로 하였다. 트랜스퍼할 겔을 트랜스퍼 완충용액으로 살짝 적셔주고 멤브레인 위에 기포가 생기지 않도록 주의하여 올려놓는다. 겔과 멤브레인을 밀착시킨후 양면에 트랜스퍼 완충용액으로 미리 적셔준 3M 지(3M paper)를 대고 트랜스퍼 키트(Transfer kit)에 장착한다.

트랜스퍼는 Mini-gel 트랜스퍼 키트를 사용하여 100V에서 1시간 실시하였으며, 이때 발생하는 열을 차단하기 위하여 트랜스퍼 용기(Transfer tank)를 얼음 속에 놓아 실시하였다. 트랜스퍼가 끝난 후 장치를 해체하고 멤브레인을 분리하여 1xTBST(Tris-buffered saline with 0.05% tween 20)로 살짝 찧어준다. 이때 TBST의 구성은 0.2M Tris pH 8 (24.2g Trisma base), 1.37M NaCl (80g NaCl), Adjust pH 7.6 by conc HCl로 이루어진다.

이때 구강상피세포암종 KB 세포주에서 추출한 총 단백질 농도는 20, 10, 5, 2.5, 1㎍이었으며, 10% SDS-page gel을 이용하였다. 전체 트랜스퍼 시간(transfer time)은 약 1시간 40분이었으며, 차단 시간(blocking time)은 1시간 30분이었다.

검출대상 단백질은 β-actin이었으며, 1차 항체(First Antibody)로는 마우스로부터 얻은 β-actin 항체(Santa cruz, sc-47778)이었으며, 이를 1:5000으로 희석하여 트랜스퍼 멤브레인과 4℃에서 하루 정도 반응시켰다. 그 후, horseradish peroxidase가 결합되어 있는 이차 항체(Secondary Antibody)인 goat anti-mouse IgG-HRP(Santa cruz, sc-2005, 마우스 면역글로빈을 염소에 주입시켜서 만든 항체)와 반응시킨 후, horseradish peroxiase(양고추냉이에서 추출한 과산화수소 분해효소)에 대한 기질인 과산화수소 용액(Peroxide solution)과 Luminol Enhancer Solution(과산화수소 분해효소에 의해 분해된 산소유리기에 의해 Luminol이 산화되면서 형광을 내게됨; LF-QC1010, ABFRONTIER, Korea)을 넣고 1분간 반응시켰다. 기질과 반응시킨 트랜스퍼 멤브레인을 X-ray 필름에 2분간 노출하여 β-actin 단백질의 발현을 확인하였다.

도 6은 실시 예 1과 비교 예에 의해 제조된 멤브레인을 사용하여 웨스턴 블롯을 시행한 결과를 나타낸 것이다.

도 6에서 보는 바와 같이, 실시 예 1의 경우가 비교 예에 비하여 반응 밴드가 보다 명확하고 뚜렷하게 나타나는 것을 확인할 수 있다. 이것은 본 발명의 실시 예의 멤브레인이 비교 예에 비하여 세공경이 균일하며, 높은 기공도에 의해 보다 큰 비표면적을 가지므로 이에 따라 우수한 민감도(sensitivity)를 보인 것이다.

이상에서는 본 발명을 특정의 바람직한 실시예를 예로 들어 도시하고 설명하였으나, 본 발명은 상기한 실시예에 한정되지 아니하며 본 발명의 정신을 벗어나지 않는 범위 내에서 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 변경과 수정이 가능할 것이다.

도 1은 PVdF 멤브레인을 이용한 웨스턴 블롯 방법에 의해 특정의 단백질을 검출하는 방법을 나타낸 순서도,

도 2는 종래 일반적인 상전이법에 의한 멤브레인의 제조방법을 나타낸 순서도.

도 3은 본 발명의 실시예 1에 의해 제조된 PVdF 멤브레인의 주사전자 현미경사진 ; (a) 1k, (b) 10k x 배율,

도 4는 비교예에 의해 제조된 멤브레인의 주사전자 현미경사진 ; (a) 3k, (b) 10k x 배율,

도 5는 본 발명의 실시예 및 비교예에 의해 제조된 멤브레인의 공기중에서의 TGA 분석 결과; (a) 비교예, (b) 실시예 1(PVdF HSV 900), (c) 실시예 2(PVdF 761), (d) 실시예 3 (PVdF 761/2801),

도 6는 본 발명의 실시예 1과 비교예에 의해 제조된 각 멤브레인의 웨스턴 블롯 평가 결과를 나타낸 것이다.

Claims

웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법에 있어서,

소수성 고분자 물질을 용매에 용해하여 방사용액을 제조하는 단계;

상기 방사용액을 방사방법에 의하여 50～1000㎚의 직경을 갖는 소수성 고분자의 나노섬유 웹을 얻는 단계;

상기 얻어진 나노섬유 웹을 라미네이팅하여 웨스턴 블롯용 멤브레인을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법.
제1항에 있어서,

상기 소수성 고분자 물질은 PVdF(polyvinylidene fluoride), 나일론(nylon), 니트로셀룰로오스(nitrocellulose), PU(polyurethane), PC(polycarbonate), PS(polystryene), PLA(polylatic acid), PAN(polyacrylonitrile), PLGA,(polylactic-co-glycolic acid) PEI(polyethyleneimine), PPI(polypropyleneimine), PMMA(Polymethylmethacrylate), PVC(polyvinylcholride), PVAc(polyvinylacetate), 및 폴리스티렌 디비닐벤젠 공중합체(Polystylene divinylbenzene copolymer)로 구성되는 군에서 선택되는 어느 1종 또는 2종이상을 복합화하여 구성되는 것을 특징으로 한 웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법.
제1항에 있어서,

상기 용매는 디메틸 포름아미드(di-methylformamide, DMF), 디메틸 아세트마아미드(di-methylacetamide, DMAc), THF(tetrahydrofuran), 아세톤(Acetone), 알코올(Alcohol)류, 클로로포름(Chloroform), DMSO(dimethyl sulfoxide), 디클로로메탄(dichloromethane), 초산(acetic acid), 개미산(formic acid), NMP(N-Methylpyrrolidone), 불소계 알콜류, 및 물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 한 웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법.
삭제
제1항에 있어서,

상기 방사방법은 전기방사(electrospinning), 전기분사(electrospray), 전기분사방사(electroblown spinning), 원심전기방사(centrifugal electrospinning), 및 플래쉬 전기방사(flash-electrospinning)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 1종인 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법.
제1항에 있어서,

상기 라미네이팅은 압착, 가압, 컬렌더링, 롤링, 열접합, 초음파 접합, 심 실링 테이프법 중에서 선택된 어느 하나의 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법.
제1항에 있어서,

상기 방사용액 전체에 대하여 상기 소수성 고분자 물질의 함량은 5～50중량%인 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법.
제1항에 있어서,

상기 라미네이팅 공정은 60～200℃ 온도범위에서의 열처리를 수반하면서 수행되는 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 멤브레인의 제조방법.
제1항에 따라 제조되는 웨스턴 블롯용 멤브레인으로서, 평균 세공경이 0.1～0.5㎛, 멤브레인 두께가 30～200㎛, 기공도가 60% 이상인 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 멤브레인.