KR101162102B1 - 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인 및 그 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 나노섬유와 페이퍼가 일체화된 웨스턴 블롯(western blot)용 트렌스퍼 멤브레인(transfer membrane)에 관한 것으로서, 전기방사에 의한 평균 섬유직경 50～1,000㎚, 평균 세공경 0.1～0.5㎛로 구성되는 나노섬유층과 페이퍼층이 일체로 구성된 웨스턴 블롯용 멤브레인에 관한 것이다.
본 발명에 의한 일체형 멤브레인은 단백질 분리 검출 및 진단시 초보자도 손쉽게 사용할 수 있으며, 페이퍼가 일체화되어 있어 겔 트렌스퍼(gel transfer)시 부수적으로 사용되는 페이퍼층의 공정이 단축되는 이점이 있다.
전기방사, 나노섬유, 단백질 검출, 웨스턴 블롯, 페이퍼

Description

웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인 및 그 제조방법{Transfer Membranes for Western Blot Integrated with Papers and Process for Manufacturing the Same}
본 발명은 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인 및 그 제조방법에 관한 것으로, 구체적으로는 전기방사에 의해 형성된 나노섬유층과 페이퍼층이 일체로 구성된 웨스턴 블롯(western blot)용 트렌스퍼 멤브레인(transfer membrane) 및 그 제조방법에 관한 것이다.
웨스턴 블롯(western blot)은 여러 단백질 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 찾아내는 기법으로서, 찾고자 하는 단백질에 대한 항체(antibody)를 사용하여 항원-항체반응(antigen-antibody reaction)을 일으킴으로써 특정 단백질의 존재 여부를 밝혀내는 가장 효과적인 방법 중의 하나이다.
웨스턴 블롯에 사용되는 트렌스퍼 멤브레인은 단백질과 소수성 결합(hydrophobic interaction)을 할 수 있는 니트로셀룰로오스(nitrocellulose)나 폴리비닐리덴플로라이드(PVdF), 나일론(Nylon) 등의 재질로 구성된 다공성 멤브레인을 사용하여 왔다. 이러한 멤브레인은 물과 같은 비용매속에 용매와 고분자를 부어 제작하는 상전이법(phase separation)에 의한 건식(dry), 습식(wet), 건습 식(dry-wet casting) 등과 같은 방법으로 제조되고 있으나 제조단가가 고가이며, 대량으로 생산하는데 한계가 있다.
현재, 웨스턴 블롯은 PVdF 멤브레인을 겔(gel) 크기에 맞게 자른 후 겔(gel)내 단백질과 멤브레인이 소수성 결합(hydrophobic interaction)을 할 수 있도록 100% 메탄올에 1～5분간 침지하여 활성화시켜 사용한다. 이렇게 활성화된 PVdF 멤브레인을 겔(gel)위에 기포가 생기지 않도록 주의하여 올려 놓고, 트랜스퍼 버퍼(transfer buffer)로 적셔놓은 3M 페이퍼(3M paper)를 대고 키트에 장착한 후 전기영동하여 겔(gel)로부터 단백질을 멤브레인으로 트랜스퍼하게 된다.
그런데, 이때 사용되는 멤브레인의 두께가 얇을 경우 겔(gel)위에 정확하게 올려놓는 것은 숙련된 연구원이 아니고는 매우 어려운 경우가 많고, 또한 멤브레인끼리 달라붙어 작업이 손쉽게 이루어지지 않는 경향이 있다. 이러한 경우에는 좋은 시그널(signal)을 얻을 수 없을 뿐 아니라 백그라운드(background)가 지저분하게 나오는 경향이 있다. 또한, 작업성을 향상시키기 위해 멤브레인의 두께를 과도하게 크게 할 경우 공정비용이 상승하게 되고, 멤브레인 세공구조를 제어하는데 어려움이 있다.
특히, 멤브레인 상에 3M 페이퍼(3M paper)를 올려놓고 전기영동 키트에 장착하여 트렌스퍼를 하게 되는데, 만약 멤브레인과 페이퍼를 일체화된 구조로 한다면 초보자도 손쉽게 사용할 수 있으며, 트랜스퍼 공정 단축은 물론 우수한 감도를 갖는 멤브레인이 제공될 것이라는 가정 하에 본 발명자들은, 이에 관하여 많은 연구를 한 끝에 전기방사 기법을 사용하여 세공구조의 조절이 가능하면서 표면적이 극대화된 나노섬유로 구성된 멤브레인과 페이퍼를 일체화시킴으로서 단백질 검출 및 진단용으로 감도가 향상된 트렌스퍼 멤브레인을 제공할 수 있다는 사실을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 단백질 검출 및 진단에 사용되는 웨스턴 블롯용 멤브레인을 전기방사 기법을 사용하여 표면적이 극대화된 나노섬유층과 페이퍼를 일체화함으로써 작업성이나 취급성을 향상시켜 감도의 증진을 도모하고, 아울러 사용자 편의 제공 등이 가능한 멤브레인을 제공하는 것이다.
이러한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은, 소수성 고분자 물질을 용매에 용해하여 방사용액을 제조하는 단계; 상기 방사용액을 방사방법에 의하여 소수성 고분자의 나노섬유 웹을 얻는 단계; 상기 얻어진 나노섬유 웹을 라미네이팅하여 웨스턴 블롯용 멤브레인을 얻는 단계; 및 상기 멤브레인을 일면에 접착제층이 형성된 웨스턴 블롯용 페이퍼와 라미네이팅하여 상기 멤브레인과 상기 페이퍼가 일체로 결합된 일체형 멤브레인을 얻는 단계를 포함하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은, 소수성 고분자 물질을 용매에 용해하여 방사용액을 제조하는 단계; 상기 방사용액을 방사방법에 의하여 일면에 접착제층이 형성된 웨스턴 블롯용 페이퍼상에 소수성 고분자의 나노섬유 웹을 방사하는 단계; 상기 얻어진 나노 섬유 웹을 라미네이팅하여 상기 멤브레인과 상기 페이퍼가 일체로 결합된 일체형 멤브레인을 얻는 단계를 포함하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 페이퍼상에 접착성 물질을 도포 내지는 스프레이하여 상기 소수성 고분자 나노섬유층과 페이퍼가 접착 결합되어 구성된 웨스턴 블롯용 나노섬유/페이퍼 일체형 멤브레인을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 소수성 고분자 나노섬유층과 페이퍼를 라미네이팅(laminating)에 의해 나노섬유의 탈리 및 나노섬유층과 페이퍼의 분리가 이루어지지 않도록 한 웨스턴 블롯용 나노섬유/페이퍼 일체형 멤브레인을 제공한다.
또한, 본 발명은 소수성 고분자 물질의 방사용액을 전기방사하여 얻어진 나노섬유 웹을 라미네이팅하여 제조되며, 평균 세공경이 0.1～0.5㎛, 멤브레인 두께가 30～200㎛인 멤브레인; 및 상기 멤브레인의 일면에 접착제층을 개재하여 접착되는 웨스턴 블롯용 페이퍼를 포함하는 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인을 제공한다.
상기 소수성 고분자 물질로는 예를 들면, PVdF(polyvinylidene fluoride), 나일론(nylon), 니트로셀룰로오스(nitrocellulose), PU(polyurethane), PC(polycarbonate), PS(polystryene), PAN(polyacrylonitrile), PLA(polylatic acid), PLGA,(polylactic-co-glycolic acid) PEI(polyethyleneimine), PPI(polypropyleneimine), PMMA(Polymethylmethacrylate), PVC(polyvinylcholride), PVAc(polyvinylacetate), 폴리스티렌 디비닐벤젠 공중합 체(Polystylene divinylbenzene copolymer) 등을 단독 내지 복합화하여 구성될 수 있으며, 특별히 이들에 제약을 두지는 않는다.
상기 용매는 디메틸 포름아미드(di-methylformamide, DMF), 디메틸 아세트마아미드(di-methylacetamide, DMAc), THF(tetrahydrofuran), 아세톤(Acetone), 알코올(Alcohol)류, 클로로포름(Chloroform), DMSO(dimethyl sulfoxide), 디클로로메탄(dichloromethane), 초산(acetic acid), 개미산(formic acid), NMP(N-Methylpyrrolidone), 불소계 알콜류, 및 물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 한다.
상기 방사방법은 전기방사(electrospinning), 전기분사(electrospray), 전기분사방사(electrobrown spinning), 원심전기방사(centrifugal electrospinning), 플래쉬 전기방사(flash-electrospinning) 등으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 1종인 것을 특징으로 한다.
상기 소수성 고분자로 구성된 나노섬유층의 라미네이팅 결합은 후처리 공정인 가압, 컬렌더링, 열처리, 롤링, 열접합, 초음파 접합, 심 실링 테이프 중의 어느 하나에 의해 이루어지는 것이 바람직하다.
본 발명에서 사용 가능한 접착제로는 메탄올이나 물, 또는 전기영동시 분해되지 않고, 상온 경화 또는 열처리시 경화되는 제품으로 실리콘계, 에폭시계, 아크릴계, 우레탄계 등에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 한다.
상기 페이퍼로는 3M사에서 나오는 웨스턴 블롯용 페이퍼나 두께가 100㎛ 이상인 페이퍼이면 족하고 특정의 것에 한정되지 않는다.
이상과 같이, 본 발명에 의하면, 단백질 검출 및 진단에 사용되는 웨스턴 블롯용 멤브레인을 전기방사 기법을 사용하여 표면적이 극대화된 나노섬유층과 페이퍼를 일체화함으로써 작업성이나 취급성을 향상시키는 것이 가능하여 사용자에게 편의성을 제공할 수 있는 이점이 있다.
또한, 본 발명에 의하면, 일체형 멤브레인은 저렴한 비용으로 대량생산이 가능하고, 기존 멤브레인에 비해 우수한 감도를 제공함으로써 단백질 분리, 분석용 및 다양한 검출에 활용이 가능한 이점이 있다.
본 발명에 따른 웨스턴 블롯용 나노섬유, 페이퍼로 구성된 일체형 멤브레인은 먼저 소수성 고분자를 방사 가능한 농도로 용액을 제조하고, 방사구로 이송한 후 노즐에 고전압을 인가하여 전기방사(electrospinning)하고, 나노섬유층과 페이퍼와의 접착을 위해 경화형 접착제를 분사 내지는 도포하여 나노섬유층, 페이퍼 등을 라미네이팅하여 구성되는 단백질 분리, 검출용 멤브레인을 제조한다.
이하 각 단계별로 상세히 설명한다.
소수성 고분자 함유 방사용액 제조
소수성 고분자를 적당한 용매를 사용하여 방사 가능한 농도로 용해하여 방사용액을 준비한다. 본 발명에 있어서 소수성 고분자 물질로는 PVdF(polyvinylidene fluoride), Nylon, nitrocellulose, PU(polyurethane), PC(polycarbonate), PS(polystryene), PLA, PLGA, PEI(polyethyleneimine), PPI(polypropyleneimine), PMMA, PVC, PVAc, Polystylene divinylbenzene copolymer 등을 단독 내지는 복합화 하여 사용할 수 있으며, 상용성 있는 용매를 사용하여 방사가능한 농도의 방사용액을 제조하여 사용한다.
상기 방사용액 제조에 있어서 소수성 고분자 물질의 함량은 방사용액 전체에 대해 5～50중량%가 적당하며, 5중량% 미만의 경우 나노섬유를 형성하기 보다는 비드(bead)상으로 분사되어 멤브레인을 구성하기 어려우며, 50중량% 초과인 경우에는 점도가 높아 방사성이 불량하여 섬유를 형성하기 곤란한 경우가 있다. 따라서 방사용액의 제조는 특별한 제약은 없으나, 섬유상 구조를 형성하기 쉬운 농도로 섬유의 형상(morphology)을 제어하는 것이 바람직하다.
고분자 나노섬유 웹 형성
상기 제조된 방사용액을 정량펌프를 사용하여 방사팩(spin pack)으로 이송하고, 이때 고전압 조절장치를 사용하여 방사팩에 전압을 인가하여 전기방사를 실시한다. 이때 사용되는 전압은 0.5kV～100kV까지 조절하는 것이 가능하며, 집전판은 접지를 하거나 (-)극으로 대전하여 사용할 수 있으며, 전기전도성 금속, 박리지 등으로 구성되는 것이 바람직하다. 집전판의 경우 방사시 섬유의 집속을 원활하게 하기 위해 포집장치(suction collector)를 부착하여 사용하는 것이 바람직하다.
또한 방사팩과 집전판까지의 거리는 5～50㎝로 조절하여 사용하는 것이 바람직하다. 방사시 토출량은 정량펌프를 사용하여 홀당 0.01～5cc/hole.min으로 토출하여 방사하고, 방사시 온도 및 습도를 조절할 수 있는 챔버 내에서 상대습도 30-80%의 환경에서 방사하는 것이 바람직하다.
접착제 도포단계
3M 페이퍼(3M paper)나 도화지 상에 접착제를 분사하여 나노섬유층과 페이퍼간에 분리가 일어나지 않도록 균일하게 도포한다. 도포량은 열압착시 섬유층으로 접착제가 베어 나오지 않도록 적절히 조절되어야 하며, 접착제는 열처리시 경화되는 열경화형 접착제가 바람직하다.
나노섬유와 페이퍼의 라미네이팅 단계
제조된 소수성 고분자로 구성된 나노섬유는 접착제가 도포된 페이퍼와 합지하여 압착, 롤링, 열접합, 초음파 접함, 심 실링 테이프(Sim sealing tape) 등의 다양한 방법으로 라미네이팅한다.
이때 온도는 대략 150℃ 정도에서 실시하는 것이 바람직하다. 즉, 접착제가 열처리에 의해 경화되어, 단백질 분석을 수행할 때 메탄올에 의해 또는 전기영동시 분해되지 않아야 한다.
또한, 멤브레인의 두께는 30～200㎛, 평균 세공경은 0.1～0.5㎛가 되도록 한다. 멤브레인 두께가 30㎛ 미만이면 웨스턴 블롯시 강직도가 낮아 취급이 불량하며, 200㎛를 초과할 경우 제조비용이 상승하므로 바람직하지 않다. 또한, 멤브레인의 평균 세공경이 0.1㎛ 미만의 경우 후처리에 의한 공정비용이 상승하고 트랜스퍼 시간이 지연되며, 0.5㎛ 초과이면 트랜트퍼 농도가 낮아 정확한 단백질 분석이 이루어질 수 없는 단점이 있다.
특히, 라미네이팅을 할 경우 열처리를 동반하면서 할 수 있는데, 고분자가 용융되지 않는 60～200℃의 온도범위에서 실시하는 것이 바람직하다. 60℃ 미만의 경우 열처리 온도가 낮아 나노섬유간 융착이 불안정하여 웨스턴 블롯 수행 전 메탄올(methanol) 전처리시 나노섬유간 분리가 진행되어 적당한 웨스턴 블롯을 수행하기 어렵게 된다. 또한 열처리 온도가 200℃ 초과시 나노섬유를 구성하는 소수성 고분자의 용융에 의해 세공 구조가 막혀 적절한 SDS-page로부터 단백질 전이(transfer)가 이루어지지 않아 정확한 분석이 이루어지지 않는 경향이 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 그러나, 본 발명의 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
(실시예 1)
1. PVdF 나노섬유층의 제조
소수성 고분자 PVdF(Kyner 761)를 20중량%가 되도록 하여 용매 DMAc에 용해하였다. 상기 제조된 용액을 정량펌프를 이용하여 방사노즐로 이송하고 인가전압 25kV, 방사구와 집전체와의 거리 20㎝, 토출량 분당 0.05cc/g으로 상온, 상압에서 전기방사를 실시하였으며, 그 결과로 얻어진 PVdF 나노섬유층의 주사전자현미경 사진을 도 1에 나타냈었다.
도 1에서와 같이, 얻어진 PVdF 나노섬유층을 구성하는 섬유직경은 대부분 1㎛ 미만으로 평균 약 400㎚를 나타냈다. 이때 방사된 나노섬유로 구성된 멤브레인의 두께는 약 80㎛이었다. 상기 멤브레인을 140℃로 가열된 롤러를 이용하여 라미네이션을 실시하여 두께 약 60㎛으로 하였으며, 이때 평균 세공경(직경)의 크기는 0.45㎛를 나타냈다.
2. 일체형 멤브레인의 제조
3M사에서 제공하는 웨스턴 블롯용 페이퍼에 열경화형 실리콘 접착제를 분사하여 접착제층이 도포된 페이퍼를 준비하였다. 이렇게 준비된 페이퍼 상에 상기 1의 방법에 의해 제조된 PVdF 나노섬유층을 합지하였다. 이렇게 합지된 복합 멤브레인을 145℃의 롤러로 구성된 라미네이팅 기계로 압착하여 페이퍼와 나노섬유층이 일체로 결합된 일체형 멤브레인을 얻었다.
도 2는 본 실시예에 따라 얻어진 일체형 멤브레인의 단면을 나타내는 주사전자 현미경 사진으로, 도 2에서 보는 바와 같이, 멤브레인을 이루는 나노섬유층이 3M 페이퍼와 융착되어 견고하게 결합된 것을 알 수 있다.
3. 웨스턴 블롯 테스트
상기 2에서 제조된 일체형 멤브레인 샘플을 이용하여 웨스턴 블롯을 실시하였다. 먼저, 제조된 샘플을 가로×세로 각각 6×8㎝로 미리 잘라 겔(gel)내의 단백질과 소수성 결합(hydrophobic interaction)을 할 수 있도록 100% 메탄올에 약 5분간 침지하여 활성화시켰다.
이렇게 활성화된 멤브레인을 1×트랜스퍼 버퍼(1×transfer buffer)로 옮겨준 후 10분간 방치하였다. 이때 1×트랜스퍼 버퍼(1×transfer buffer)의 구성은 3.03g/L 트리스마-베이스(trisma-base), 14.4g/L 글리신(Glycine), 20% 메탄올 (200ml/L)이었다. 그리고, 트렌스퍼할 겔(gel)을 1×트랜스퍼 버퍼(1×transfer buffer)로 살짝 적셔주고 멤브레인 위에 기포가 생기지 않도록 주의하여 올려놓는다.
트렌스퍼는 Mini-gel 트렌스퍼 키트(Transfer kit)를 사용하여 100V에서 1시간 실시하였으며, 이때 발생하는 열을 막아주기 위하여 트렌스퍼 탱크(Transfer tank)를 얼음 속에 놓아 실시하였다. 트렌스퍼가 끝난 후 장치를 해체하고 멤브레인을 분리하여 1xTBST로 살짝 찧어준다. 이때 TBST의 구성은 0.2M Tris pH 8 (24.2g Trisma base),1.37M NaCl (80g NaCl), Adjust pH7.6 by conc HCl로 이루어졌다.
그리고 이때 정제된 단백질 항원의 농도는 20, 10, 5, 2.5, 1㎍이었으며, 10% SDS-page gel을 이용하였다. 전체 트렌스퍼 타임(transfer time)은 약 1시간 40분이었으며, 블록킹 타임(blocking time)은 1시간 30분이었다. First Antibody로는 β-actin (Santa cruz, sc-47778)이었으며, Ab dilution : 1:5000으로 -4℃에서 하루정도 실시하였다. 이렇게 트렌스퍼된 것을 X-ray 필름을 이용하여 단백질 발현을 확인하였으며, 그 결과를 일체형이 아닌 종래의 경우와 비교하여 도 5에 나타내었다.
도 5에서와 같이, 본 발명의 경우가 종래에 비하여 보다 뚜렷하게 블롯의 크기가 크게 나타나는 것을 확인할 수 있다. 이것은 본 발명의 경우가 종래에 비하여 보다 민감하게 작용한 때문으로 해석된다.
보다 구체적으로 설명하면, 종래의 경우, 젤(gel)위에 멤브레인을 올려놓고 그 위에 다시 페이퍼를 올려 놓은 후 전기영동 키트에 장착하여 세워서 1시간 정도 전기영동을 실시하므로 본 발명의 일체형에 비해 멤브레인과 젤과의 접착력이 약하 게 되거나 또는 젤과 멤브레인이 접촉하는데 키트내 공간이 생길 경우 페이퍼와 멤브레인간의 유동이 생겨 정확한 단백질 트렌스퍼를 하기 곤란한 경우가 발생할 수 있다. 또한, 동일한 멤브레인을 사용하더라도 페이퍼와 멤브레인을 일체화함으로써 단백질 트랜스퍼시 페이퍼가 멤브레인을 고정시킴으로써 단백질의 전이를 보다 정확한 위치로 할 수 있는 장점이 있다. 이러한 이유로 종래기술에 비해 보다 정확하면서도 감도가 향상된 결과가 얻어지는 것으로 예측된다.
도 6의 경우도, 상기 도 5와 같이 키트내 공간이 있거나 젤과 멤브레인이 정확하게 접촉하지 않았을 경우 종래기술에서는 멤브레인이 흘러내리거나 이동이 생겨 백그라운드가 일체형에 비해 훨씬 많이 발생할 가능성이 있다.
또한, 도 6에서처럼 멤브레인과 페이퍼를 일체화함으로써 보다 간편하게 초보자도 후속공정 없이 웨스턴 블롯팅을 수행할 수 있는 효과가 있으며, 기존방법처럼 젤 위에 메탄올로 활성화한 PVdF 멤브레인을 올릴 경우 멤브레인에 힘이 없어 구부려지거나 기포가 발생하거나 또는 정확하게 일치시키는데 어려움이 있어 수회 반복하는 시행착오를 통해 젤과 멤브레인을 정확한 위치로 고정하는 것이 가능하지만, 멤브레인과 페이퍼를 일체화하여 메탄올로 활성화함으로써 젤 위에 멤브레인을 간단하고 손쉽게 고정시킬 수 있으며, 딱딱한 페이퍼가 올라감으로써 기포발생이 생기지 않고, 위치 등을 단 한 번의 조작으로 고정할 수 있어 낮은 백그라운드와 높은 시그널을 얻을 수 있다. 따라서, 종래기술에 비해 일체형은 보다 높은 감도를 제공할 수 있다.
(실시예 2)
상기 실시예 1의 1 및 2에 의해 제조된 일체형 멤브레인을 사용하여 상기 실시예 1의 3과 동일한 방법으로 MMP-2 단백질을 분석하였으며, 그 결과를 일체형이 아닌 종래의 경우와 비교하여 도 6에 나타내었다. 이때 사용된 액틴(actin)은 단백질 양을 동일하게 걸었는지를 보기 위해 실시하였다.
도 6에서 보는 바와 같이, 본 발명의 경우 종래에 비하여 분석 결과가 백그라운드 없이 보다 선명하게 나타나는 것을 확인할 수 있는데, 도 6의 경우에 있어서도, 도 5의 경우와 마찬가지로 키트내 공간이 있거나 젤과 멤브레인이 정확하게 접촉하지 않았을 경우 종래 분리형에서는 멤브레인이 흘러내리거나 이동이 생겨 백그라운드가 훨씬 많이 발생하는 경향을 보이기 때문인 것으로 판단된다.
이상 본 발명에 의하면, 멤브레인과 페이퍼를 일체화함으로써 초보자도 보다 간편하게 후속공정 없이 웨스턴 블롯팅을 수행할 수 있는 효과가 있다.
즉, 기존방법처럼 젤 위에 메탄올로 활성화한 PVdF 멤브레인을 올릴 경우 멤브레인에 힘이 없어 구부려지거나 기포가 발생하거나 또는 정확하게 일치시키는데 어려움이 있어 수회 반복하는 시행착오를 통해서만 비로소 젤과 멤브레인을 정확한 위치로 고정하는 것이 가능하지만, 본 발명에서는 멤브레인과 페이퍼를 일체화하여 활성화함으로써 젤 위에 멤브레인을 간단하고 손쉽게 고정시킬 수 있으며, 딱딱한 페이퍼가 올라감으로써 기포 발생이 생기지 않고, 위치 등을 단 한 번의 조작으로 간단히 고정할 수 있어 낮은 백그라운드와 높은 시그널을 얻을 수 있다. 따라서, 종래기술에 비해 일체형은 보다 높은 감도를 제공할 수 있는 이점이 있다.
도 1은 본 발명에 따라 얻어진 PVdF 나노섬유 웹을 나타낸 주사전자현미경 사진이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 의해 제조된 일체형 멤브레인의 단면을 나타낸 주사전자현미경 사진이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 의해 제조된 일체형 멤브레인을 사용하여 웨스턴 블롯을 수행한 분석 결과이다.
도 4는 본 발명의 다른 실시예에 의해 제조된 일체형 멤브레인을 사용하여 웨스턴 블롯을 수행한 분석 결과이다.

Claims (11)

  1. 소수성 고분자 물질을 용매에 용해하여 방사용액을 제조하는 단계;
    상기 방사용액을 방사방법에 의하여 소수성 고분자의 나노섬유 웹을 얻는 단계;
    상기 얻어진 나노섬유 웹을 라미네이팅하여 웨스턴 블롯용 멤브레인을 얻는 단계; 및
    상기 멤브레인을 일면에 접착제층이 형성된 웨스턴 블롯용 페이퍼와 라미네이팅하여 상기 멤브레인과 상기 페이퍼가 일체로 결합된 일체형 멤브레인을 얻는 단계를 포함하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법.
  2. 소수성 고분자 물질을 용매에 용해하여 방사용액을 제조하는 단계;
    상기 방사용액을 방사방법에 의하여 일면에 접착제층이 형성된 웨스턴 블롯용 페이퍼상에 웨스턴 블롯용 멤브레인으로 사용되는 소수성 고분자의 나노섬유 웹을 방사하는 단계; 및
    상기 얻어진 나노섬유 웹을 라미네이팅하여 상기 멤브레인과 상기 페이퍼가 일체로 결합된 일체형 멤브레인을 얻는 단계를 포함하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 소수성 고분자 물질은 PVdF(polyvinylidene fluoride), 나일론(nylon), 니트로셀룰로오스(nitrocellulose), PU(polyurethane), PC(polycarbonate), PS(polystryene), PLA(polylatic acid), PAN(polyacrylonitrile), PLGA,(polylactic-co-glycolic acid) PEI(polyethyleneimine), PPI(polypropyleneimine), PMMA(Polymethylmethacrylate), PVC(polyvinylcholride), PVAc(polyvinylacetate), 및 폴리스티렌 디비닐벤젠 공중합체(Polystylene divinylbenzene copolymer)로 구성되는 군에서 선택되는 어느 1종 또는 2종이상을 복합화하여 구성되는 것을 특징으로 한 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 용매는 디메틸 포름아미드(di-methylformamide, DMF), 디메틸 아세트마아미드(di-methylacetamide, DMAc), THF(tetrahydrofuran), 아세톤(Acetone), 알코올(Alcohol)류, 클로로포름(Chloroform), DMSO(dimethyl sulfoxide), 디클로로메탄(dichloromethane), 초산(acetic acid), 개미산(formic acid), NMP(N-Methylpyrrolidone), 불소계 알콜류, 및 물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 한 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 나노섬유 웹을 형성하는 나노섬유의 직경은 50～1000㎚인 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 방사방법은 전기방사(electrospinning), 전기분사(electrospray), 전기분사방사(electroblown spinning), 원심전기방사(centrifugal electrospinning), 및 플래쉬 전기방사(flash-electrospinning)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 1종인 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 각 단계에서의 라미네이팅은 가압, 컬렌더링, 롤링, 열접합, 초음파 접합, 심 실링 테이프법 중에서 선택된 어느 하나의 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 방사용액 전체에 대하여 상기 소수성 고분자 물질의 함량은 5～50중량%인 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 각 단계에서의 라미네이팅 공정은 60～200℃ 온도범위에서 열처리를 수반하면서 수행되는 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인의 제조방법.
  10. 소수성 고분자 물질의 나노섬유 웹으로 형성된 멤브레인; 및
    상기 멤브레인의 일면에 접착제층을 개재하여 접착되는 웨스턴 블롯용 페이퍼로 구성되는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인.
  11. 소수성 고분자 물질의 방사용액을 전기방사하여 얻어진 나노섬유 웹을 라미네이팅하여 제조되어 평균 세공경이 0.1～0.5㎛, 두께가 30～200㎛인 소수성 고분자 멤브레인; 및
    상기 멤브레인의 일면에 접착제층을 개재하여 접착되어 일체화되는 웨스턴 블롯용 페이퍼를 포함하는 것을 특징으로 하는 웨스턴 블롯용 일체형 멤브레인.
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