CN103721176A

CN103721176A - 治疗乳腺癌复发转移的中药制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN103721176A
Application number: CN201210388536.6A
Authority: CN
Inventors: 刘胜; 张宁; 韩向晖; 陆德铭; 唐汉钧
Original assignee: Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM
Current assignee: Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM
Priority date: 2012-10-12
Filing date: 2012-10-12
Publication date: 2014-04-16
Anticipated expiration: 2032-10-12
Also published as: CN103721176B

Abstract

本发明公开了一种治疗乳腺癌复发转移的中药制剂，它是由以下重量份的原料药制备而成：丽江山慈菇0.3-2份；莪术10-30份；淫羊藿10-30份；蜂房10-20份；预知子9-30份。该中药制剂能对治疗乳腺癌复发转移的效果进行有效质控，更切合临床乳腺癌发病发展转归的病机特点。本发明还公开了该中药制剂颗粒剂的制备方法。

Description

治疗乳腺癌复发转移的中药制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗乳腺癌复发转移的中药制剂；此外，本发明还涉及该中药制剂的制备方法。

背景技术

乳腺癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤，其发病率已居女性恶性肿瘤的首位。浸润和转移是恶性肿瘤的基本特征。放、化疗能有效降低肿瘤的复发转移率，但毒副反应明显，尤其是放、化疗后西医的治疗手段目前仍比较有限。

中国专利CN1628721A于2005年06月22日公开了一种治疗乳腺癌复发转移的药物,由以下重量份的原料药制备而成：露蜂房10-20份、山慈菇6-15份、莪术10-30份、八月札9-30份、生米仁10-30份。本发明为雌激素受体阴性的乳腺癌患者提供了能够防止乳腺癌复发转移以及治疗发生复发转移的乳腺癌的药物。另外本发明还公开了该药物的颗粒剂的制备方法。

但中国专利CN1628721A公开的“乳康颗粒”中君药山慈菇有效成分不明确，无法进行质量控制，不利于该方作为新药的研究和开发；佐使药-薏苡仁的有效成分薏苡仁酯的提取工艺复杂，且无标准品对照，难以对整方颗粒剂的工艺研究进行质量控制。因此，“乳康颗粒”防治乳腺癌复发转移的效果无法进行有效质控，不切合临床乳腺癌发病发展转归的病机特点。

发明内容

针对现有技术的上述不足，本发明所要解决的技术问题之一在于提供一种能对治疗乳腺癌复发转移的效果进行有效质控，更切合临床乳腺癌发病发展转归的病机特点的治疗复发转移性乳腺癌的中药制剂，并提供该中药制剂的制备方法。

根据实施例，本发明提供的一种治疗乳腺癌复发转移的中药制剂，它是由以下重量份的原料药制备而成：丽江山慈菇0.3-2份；莪术10-30份；淫羊藿10-30份；蜂房10-20份；预知子9-30份。

根据一个实施例，本发明上述治疗乳腺癌复发转移的中药制剂，它是由以下重量份的原料药制备而成：丽江山慈菇1份；莪术12份；淫羊藿15份；蜂房12份；预知子9份。

根据实施例，本发明提供的治疗乳腺癌复发转移的中药制剂颗粒剂的制备方法，包括如下步骤：

按配比称取丽江山慈菇，粉碎，过10目筛，加6-10倍量体积浓度为35-95%的乙醇回流提取1-3次，每次0.5-2.5h，收集提取液备用；

按配比称取莪术，加8-12倍量水，提取挥发油4-8h，收集挥发油，用β-环糊精包合，药渣及提取液备用；

按配比分别称取淫羊藿、蜂房和预知子，与莪术药渣共水煎，第一煎加水8-12倍量，第二、三煎加水6-10倍量，每煎0.5-1.5h，合并三次水煎药液，过滤，滤液与莪术提取液合并，浓缩至60℃下的相对密度为1.03-1.05，加入体积浓度为95%的乙醇醇沉至含醇量为50-80%，静置12h，抽取上清液，沉淀，离心过滤；上清液、过滤液与丽江山慈菇醇提液合并，浓缩至60℃下的相对密度为1.2，在60-90℃下将浓缩液真空干燥至水分含量≤2.5％，得浸膏粉；

将浸膏粉粉碎，加入环糊精包合物，过80目筛，加入适量糊精和适量阿斯巴甜等辅料，干法制粒，过10-60目筛，制得颗粒剂。

本发明上述治疗乳腺癌复发转移的中药制剂中，（1）丽江山慈菇：为方中君药，主要有效成分为秋水仙碱，为大环类生物碱，由于其分子中的氮原子呈酰胺状态，pKa近于中性，具有易溶于乙醇、甲醇等有机溶剂的特点。文献报道，用70%乙醇提取率高，故拟确定丽江山慈菇提取方式为乙醇回流提取。（2）莪术：抗肿瘤主要有效成分集中于挥发油中，应先提取挥发油，药渣再与淫羊藿、蜂房、预知子共煎。挥发油用β-CD包合成包合物，以提高挥发油的稳定性，降低其挥发。（3）淫羊藿、蜂房、预知子：淫羊藿为方中臣药，其抗肿瘤有效成分以淫羊藿苷为代表的黄酮苷类成分水溶性好，且含量测定方法稳定可控；蜂房中所含成分不明确，而预知子中所含有的三萜皂苷类成分在水中有一定的溶解度。故确定此三味药水煎，以淫羊藿苷转移率为指标控制。

相对于中国专利CN1628721A公开的“乳康颗粒”，由于“乳康颗粒”原方中君药-山慈菇有效成分不明确，无法进行质量控制，不利于该方作为新药的研究和开发。因此，本发明采用含有秋水仙碱成分的丽江山慈菇作为君药。综合其药效和毒性作用，并参考2005版《中华人民共和国药典》中山慈菇的用量范围，对丽江山慈菇的药量进行了规定。“乳康颗粒”原方中佐使药-薏苡仁的有效成分薏苡仁酯的提取工艺复杂，且无标准品对照，难以对整方颗粒剂的工艺研究进行质量控制。经过反复试验和论证，将治疗乳腺癌确切有效的中药淫羊藿取代薏苡仁，不但可进行有效质控，而且更切合临床乳腺癌发病发展转归的病机特点。

本发明选用临床治疗乳腺癌复发转移确切有效的经验方，按照6类中药新药注册申请办法的技术要求，研究制成颗粒剂（本发明治疗乳腺癌复发转移的中药制剂颗粒剂以下称乳移平颗粒）。作为新药临床前研究，旨在通过客观、科学的研究，评价其体内外实验研究的疗效。同时，对其安全性进行评价，为该药进行中药新药注册和下一步临床研究打好临床前研究基础，推动新药的上市，填补中医药治疗晚期及复发转移性乳腺癌的中成药制剂的空白，造福广大乳腺癌患者。

附图说明

图1是乳移平颗粒长期给药对于小鼠体重影响图。

图2试验例1中乳腺荷瘤小鼠的瘤径统计结果图。

图3试验例1中乳腺荷瘤小鼠的瘤重的实验结果图。

图4试验例1中乳腺荷瘤小鼠的肺结节指数的实验结果图。

图5试验例2中乳腺荷瘤小鼠的瘤径统计结果图。

图6试验例2中乳腺荷瘤小鼠的瘤重的实验结果图。

图7试验例2中乳腺荷瘤小鼠的肺结节指数的实验结果图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求所限定的范围。

本发明以下实施例所用的设备包括：多功能提取罐(型号：1000L；编号：N443300-14-10)；多效节能蒸发浓缩装置(型号：DJZ1-700；厂家：温州鸿驰化工医药设备有限公司)；真空干燥箱(型号：FZG-15；编号：N445100-01-01)；WF-16型高效粉碎机(厂家：江阴市通达机械设备有限公司)；干压造粒机(型号：GY-20X8；编号：N447200-01-01)

本发明以下实施例所用的试药包括：丽江山慈菇(购于云南，批号：200804)；莪术(购自华宇药业，批号：2010010404)、淫羊藿(购自华宇药业，批号：2010020502)、预知子(购自华宇药业，批号：20100502)；蜂房(购自同济堂，批号：100301)

实施例1

称取丽江山慈菇0.5kg、莪术6kg、淫羊藿7.5kg、蜂房6kg和预知子4.5kg，备用。

用WF-16型高效粉碎机将丽江山慈菇粉碎，过10目(1号筛)，在多功能提取罐内加6倍量35%乙醇回流提取1次，每次0.5h。提取液收集备用。

莪术加8倍量水，提取挥发油4h，收集挥发油，用β-环糊精包合，药渣及提取液备用。包合工艺：油与β-环糊精之比为1:6(ml/g)，60℃包合2h，然后放出冷藏24h，抽滤，40℃干燥至恒重，备用。

其余药味(淫羊藿、蜂房、预知子)与莪术药渣共水煎，第一煎加水8倍量，第二、三煎加水6倍量，每煎0.5h。药液过滤与莪术提取液合并，浓缩至相对密度为1.03-1.05(60℃)，加95%乙醇醇沉至含醇量为50%，静置12h，抽取上清液，沉淀离心过滤。上清液、过滤液与山慈菇醇提液合并，浓缩至相对密度为1.2(60℃)，真空干燥箱中70℃真空干燥至水分≤2.5。

浸膏粉粉碎，加入环糊精包合物，过80目筛，加入适量糊精、阿斯巴甜、等辅料，用干压造粒机干法制粒(10目-60目)，制得颗粒剂4kg，分装每3.3g一袋。

实施例2

称取丽江山慈菇0.15kg、莪术5kg、淫羊藿5kg、蜂房5kg和预知子4.5kg，备用。

用WF-16型高效粉碎机将丽江山慈菇粉碎，过10目筛，在多功能提取罐内加6倍量体积浓度为35%的乙醇回流提取3次，每次2.5h，收集提取液备用。

莪术加12倍量水，提取挥发油8h，收集挥发油，用β-环糊精包合，莪术药渣及包合后的莪术提取液备用；莪术挥发油用β-环糊精包合时，莪术挥发油与β-环糊精的用量之比为1ml:6g，在60℃条件下包合2h，然后放出冷藏24h，抽滤，在40℃条件下干燥至恒重。

将淫羊藿、蜂房、预知子与莪术药渣共水煎，第一煎加水12倍量，第二、三煎加水10倍量，每煎1.5h，合并三次水煎药液，过滤，滤液与包合后的莪术提取液合并，浓缩至60℃下的相对密度为1.03-1.05，加入体积浓度为95%的乙醇醇沉至含醇量为50%，静置12h，抽取上清液，沉淀，离心过滤；上清液、过滤液与丽江山慈菇醇提液合并，浓缩至60℃下的相对密度为1.2，真空干燥箱中在70℃下将浓缩液真空干燥至水分含量≤2.5％，得浸膏粉；

将浸膏粉粉碎，加入环糊精包合物，过80目筛，加入适量糊精和适量阿斯巴甜，用干压造粒机干法制粒，过10-60目筛，制得颗粒剂3kg，分装每3.3g一袋。

实施例3

称取丽江山慈菇1kg、莪术15kg、淫羊藿15kg、蜂房10kg和预知子15kg，备用。

用WF-16型高效粉碎机将丽江山慈菇粉碎，过10目筛，在多功能提取罐内加10倍量体积浓度为35%的乙醇回流提取1次，每次0.5h，收集提取液备用。

将淫羊藿、蜂房、预知子与莪术药渣共水煎，第一煎加水8倍量，第二、三煎加水6倍量，每煎0.5h，合并三次水煎药液，过滤，滤液与包合后的莪术提取液合并，浓缩至60℃下的相对密度为1.03-1.05，加入体积浓度为95%的乙醇醇沉至含醇量为80%，静置12h，抽取上清液，沉淀，离心过滤；上清液、过滤液与丽江山慈菇醇提液合并，浓缩至60℃下的相对密度为1.2，真空干燥箱中在70℃下将浓缩液真空干燥至水分含量≤2.5％，得浸膏粉；

将浸膏粉粉碎，加入环糊精包合物，过80目筛，加入适量糊精和适量阿斯巴甜，用干压造粒机干法制粒，过10-60目筛，制得颗粒剂8kg，分装每3.3g一袋。

实施例4

用WF-16型高效粉碎机将丽江山慈菇粉碎，过10目筛，在多功能提取罐内加6倍量55%乙醇回流3次，每次0.5h。提取液收集备用。

莪术加8倍量水，提取挥发油8h，收集挥发油，用β-环糊精包合，药渣及提取液备用。包合工艺：油与β-环糊精之比为1:6(ml/g)，60℃包合2h，然后放出冷藏24h，抽滤，40℃干燥至恒重，备用。

其余药味(淫羊藿、蜂房、预知子)与莪术药渣共水煎，第一煎加水10倍量，第二、三煎加水8倍量，每煎0.5h。药液过滤与莪术提取液合并，浓缩至相对密度为1.03-1.05(60℃)，加95%乙醇醇沉至含醇量为50%，静置12h，抽取上清液，沉淀离心过滤。上清液、过滤液与山慈菇醇提液合并，浓缩至相对密度为1.2(60℃)，70℃真空干燥至水分≤2.5。

浸膏粉粉碎，加入环糊精包合物，过80目筛，加入适量糊精、阿斯巴甜、等辅料，干法制粒(10目-60目)，制成4kg，分装每3.3g一袋。

实施例5

用WF-16型高效粉碎机将丽江山慈菇粉碎，过10目筛，在多功能提取罐内加6倍量75%乙醇超声提取3次，每次0.5h。提取液收集备用。

莪术加10倍量水，提取挥发油6h，收集挥发油，用β-环糊精包合，药渣及提取液备用。包合工艺：油与β-环糊精之比为1:6(ml/g)，60℃包合2h，然后放出冷藏24h，抽滤，40℃干燥至恒重，备用。

其余药味(淫羊藿、蜂房、预知子)与莪术药渣共水煎，第一煎加水12倍量，第二、三煎加水10倍量，每煎1.5h。药液过滤与莪术提取液合并，浓缩至相对密度为1.03-1.05(60℃)，加95%乙醇醇沉至含醇量为80%，静置12h，抽取上清液，沉淀离心过滤。上清液、过滤液与山慈菇醇提液合并，浓缩至相对密度为1.2(60℃)，90℃真空干燥至水分≤2.5。

浸膏粉粉碎，加入环糊精包合物，过80目筛，加入适量糊精、阿斯巴甜、等辅料，干法制粒(10目-60目)，制成3.8kg，分装每3.3g一袋。

随机选取实施例1-5制得的颗粒（以下称乳移平颗粒）用于试验例1-3。用于试验例之前进行水分检查、粒度检查和溶化性检查，检查方法和检查结果如下：

（1）水分检查：照《中国药典》2005年版一部附录I C颗粒剂项下要求，对实施例1-5制得的样品的含水量进行测定，不得过6%，实施例1-5制得的样品的水分检查合格。

（2）粒度检查：实施例1-3制得的样品随机抽取10g，按《中国药典》2005年版一部附录I C颗粒剂项下要求，对实施例1-5制得样品的粒度进行检查，不能通过一号筛（10目）与能通过五号筛（80目）的总数不超过15%，实施例1-5制得的样品粒度检查合格。

（3）溶化性检查：取实施例1-5制得的样品各10g，分别加入热水200ml，搅拌5分钟，立即观察，颗粒全部溶化，表明实施例1-5制得的样品的溶化性符合要求。

试验例1-乳移平颗粒与环磷酰胺（CXT）联合用药治疗乳腺荷瘤小鼠药效评价。

1实验目的

乳移平颗粒对于小鼠乳腺实体肿瘤及肿瘤肺转移的药效确认。

2实验动物及分组

Balb/c小鼠，雌性，18-20g，96只。随机分为模型对照及中西药治疗组。共8组，每组12只。

（1）生理盐水对照组（模型组）；

（2）0.5g/kg乳移平颗粒组；

（3）1g/kg乳移平颗粒组；

（4）2g/kg乳移平颗粒组；

（5）CXT 40mg/kg组；

（6）0.5g/kg乳移平颗粒+CXT 40mg/kg组；

（7）1g/kg乳移平颗粒+CXT 40mg/kg组；

（8）2g/kg乳移平颗粒+CXT 40mg/kg组。

3实验材料及药物

3.1肿瘤细胞

4T1小鼠乳腺癌细胞，来源于中科院药物所。

3.2受试药物

乳移平颗粒。

4实验方法：

4.1小鼠乳腺癌肿瘤模型：将4T1细胞消化并计数，将细胞悬于PBS中，调细胞浓度至2×105/ml每只小鼠左侧腋下乳腺组织内注射2×104/只（0.1ml）肿瘤细胞。

4.2治疗：肿瘤接种5天后开始给药，乳移平颗粒（3.3g）每包颗粒用纯水溶于15ml为高剂量，后倍比稀释2个浓度，每只小鼠每天给药0.2ml。CTX（200mg）每瓶溶于25ml生理盐水中，每只小鼠每3天给0.1ml每只。模型对照每天给等体积纯水。连续治疗26天。至肿瘤接种第19天，腋下肿瘤可测时测量肿瘤直径与横径，每3天测量一次。

4.3动物处理

于肿瘤接种后第32天处死各组小鼠，取腋下肿瘤组织并称重。取小鼠肺脏，固定于Bouin氏固定液，计肺结节数及评分。

5实验结果

5.1体重。

肿瘤接种第6天起测量荷瘤小鼠体重，每两天测量一次，如图1所示，从实验结果证明，各组小鼠体重无明显差异，CTX治疗小鼠体重略低于其它各组小鼠。显示乳移平颗粒长期给药对于小鼠体重变化无明显影响。

5.2瘤径。

肿瘤接种第19天，腋下肿瘤可用游标卡尺测量起，开始测量实体瘤瘤径，每3天测量一次。具体测量实体瘤直径a、横径b，瘤径统计结果=(a+b)/2。如图2所示，实验结果显示，乳移平颗粒给药各组有一定抑制肿瘤生长作用，乳移平颗粒与CTX联合用药能明显抑制肿瘤的生长，且优于CTX单独用药。瘤径结果显示乳移平颗粒单独用药和与CTX联合用药对于肿瘤生长的抑制作用均具有量效关系。

5.3瘤重。

肿瘤接种第32天处死小鼠，取腋下实体瘤并称重。如图3所示，实验结果显示，除乳移平颗粒低剂量组以外，其它各组对于肿瘤瘤重均具有一定抑制作用，乳移平颗粒与CTX联合用药各组疗效明显且具有统计学差异，且优于CTX单独用药。

5.4肿瘤肺转移指数：

肿瘤接种第32天处死小鼠，取小鼠两侧肺脏，固定于Bouin氏固定液。染色48h后用75%乙醇洗脱，按肺结节评分标准(表1)进行评价。

表1.肺结节评分标准

如图4所示，实验结果显示，乳移平颗粒单独用药及与CTX联合用药均能抑制肿瘤细胞的肺转移，且量效关系较为明显，联合用药各组的效果更为显著。表明乳移平颗粒具有良好的抑制乳腺癌肿瘤肺转移的作用。

试验例2-乳移平颗粒与5-FU联合用药治疗乳腺荷瘤小鼠药效评价。

1实验目的

确认乳移平颗粒与5-FU联合用药治疗乳腺荷瘤小鼠的药效。

2实验动物及分组

（1）溶剂对照组；

（2）0.25g/kg乳移平颗粒与5-FU联合用药组；

（3）0.5g/kg乳移平颗粒与5-FU联合用药组；

（4）1g/kg乳移平颗粒与5-FU联合用药组；

（5）1g/kg乳移平颗粒单独用药组；

（6）5-FU对照组。

各组5-FU用量均为0.5mg/kg，该剂量为前期实验确认的最低有效剂量。

3实验方法

常规乳腺癌造模方法，本次实验与接种后第6天开始给药，乳移平颗粒每日一次，5FU每周2次；于接种后第11开始测量瘤径；与接种后第29天处死实验小鼠，测量瘤重，固定肺组织进行评分。

4实验结果

4.1瘤径的实验结果如图5所示。

4.2瘤重的实验结果如图6所示。

4.3肺结节指数的实验结果如图7所示。

上述实验结果显示，乳移平颗粒与5-FU联合用药可抑制乳腺癌肿瘤的生长和癌细胞的肺部转移，且具有剂量依赖关系。

试验例3-乳移平颗粒急性及长期毒性试验研究（小鼠口服乳移平颗粒急性毒性试验）

1实验目的

观察小鼠灌胃受试物乳移平颗粒后的中毒反应及死亡情况，用于初步评价受试物安全性。

2实验动物及分组

2.1实验动物

KM小鼠60只，雌雄各半，体重17.8～21.6g，SPF级。购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。动物许可证号（质量合格证编号）：SCXK（沪）2007-0005。饲养于上海中医药大学药物安全评价研究中心SPF级实验室。温度20～25℃，湿度40％～70％，昼夜明暗交替时间12h明12h暗。小鼠自由饮食、饮水。

2.2动物分组

60只小鼠，按体重随机分为乳移平颗粒2个剂量组（20g/kg、14g/kg）和空白对照组（以下简称对照组），每组各20只。空白对照组给予等容量的纯水。

2.3剂量设置及依据：受试物乳移平颗粒的小鼠最小有效剂量为1g/kg，人临床日用量为6.6g，人体重按60kg折算，则人临床日用量0.11g/kg。根据预试验结果，设计组距0.7，选用2个剂量进行实验，分别为20g/kg、14g/kg剂量组，分别约相当于人临床用量的182、127倍。

3实验方法

3.1给药方法

给药前禁食不禁水过夜。2个剂量给药组小鼠均按最大给药浓度、最大给药容量40ml/kg，灌胃给药1次。对照组同时给予等容量纯水。给药或水后4h内严密观察动物出现的反应及死亡情况。然后每天上、下午各观察一次，连续14天。

3.2检测指标

（1）一般症状观察：小鼠给药当天，尤其是给药后4h内严密观察，下午再观察1次。然后每天上、下午各一次，连续观察14天，包括动物体重变化、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物，动物异常反应的症状、起始时间、严重程度、持续时间、是否可逆以及动物死亡情况。

（2）体重、耗食量：小鼠体重在给药当天、第7天、第15天测定；测定给药第6～7天及第14～15天的耗食量（给药第6、14天投食），如有异常则跟踪观察。

（3）大体解剖肉眼观察：动物死亡及时剖检，其他动物在观察期结束后进行大体解剖，记录病变情况，主要观察心脏、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏、胃肠道等内脏，观察是否有出血点、水肿等异常情况，并作书面记录。当发现器官出现体积、颜色、质地等改变时须进行病理组织学检查。

4实验结果

4.1一般症状观察

（1）给药当天详细观察情况：小鼠灌服不同剂量乳移平颗粒1次，各给药组部分动物在给药后10～20分钟左右开始出现不同程度的活动减少，上述症状持续时间约1h，严重者持续6h左右直至死亡；各剂量给药组大部分动物在给药后1～3h出现稀便，症状持续约3h或更长时间（约24h）；其余出现异常反应的动物编号及具体症状、对应剂量、持续时间等详见表2。

（2）动物死亡情况见表3。

（3）14天观察期内情况：给药后第2天，20g/kg组存留动物中有1只动物（48号♂）死亡；41号动物(♂)在给药后第10天发现下颌至颈部被毛中度稀疏，45号动物(♂)在给药后第13天发现颈部右侧绿豆样大小中度被毛稀疏，上述异常至观察期结束时已基本恢复。其余动物在14天观察期内均未见异常反应，小鼠活动、精神状况良好，大、小便如常。

表2动物异常症状情况表

表3小鼠口吸服乳移平急性毒性试验动物死亡情况

4.2体重

与对照组比较，乳移平颗粒20g/kg组♂小鼠第7、15天体重明显偏轻，有极显著性差异（P＜0.01），见表4；与对照组比较，乳移平颗粒20g/kg组♀小鼠第7天体重明显偏轻，存在显著性差异（P＜0.05），见表5。其余组别♂、♀小鼠体重增长情况良好。结果见表4～5。

表4小鼠口服乳移平急性毒性试验对雄性小鼠体重的影响

注：1.^▲表示第7、l5天各组小鼠动物数：

2.与对照组比较，^**P＜0.01

表5小鼠口服乳移平急性毒性验对雌性小鼠体重的影响

注：1.^▲表示第7、15天各组小鼠动物数：

2.与对照组比较，^*P＜0.05。

4.3耗食量

小鼠口服乳移平颗粒后，第6～7天、第14-15天各组小鼠平均耗食量未见明显差异。结果见表6。

表6小鼠口服乳移平急性毒性试验对小鼠平均耗食量的影响

注：1.每组2笼；

2.除乳移平

笼分别5只、2只，12笼分别5只、3只，其余每笼5只。

4.4大体解剖肉眼观察：对死亡动物及时解剖，肉眼观察见给药当天死亡的动物胃粘膜发红、胃肠道内较多棕黄色液体，60(♀)号动物的胃和胰之间见一黄豆大小白色囊泡，第2天死亡的动物和当天死亡动物的其他脏器组织未见明显异常。试验结束时对照组和给药组存留小鼠进行大体解剖，肉眼观察均未见明显异常。

4.5对被毛稀疏的41、45号动物毛发进行镜检，未发现螨虫，不能确定脱毛原因。

4.6异常脏器组织病理学检查

（1）对给药组41、49、50号和对照组2号动物的肝脏、肾脏、胃肠道进行组织学检查，发现：49号动物小叶中央性肝细胞肿大（±）、肾小管上皮细胞空泡化（+）、胃粘膜层炎细胞浸润（±）、盲肠自溶（++）；50号动物小叶中央性肝细胞肿大（±）、肝脏局灶性单细胞坏死（±）、肾小管上皮细胞空泡化（+）、胃粘膜层充血、出血（+）、盲肠自溶（+）。给药组41号和对照组2号动物肝脏、肾脏和胃肠道组织学检查均无明显异常，41号动物颈部皮肤组织学检查无明显异常。

（2）对给药组60号动物的胃肠道和白色囊泡进行组织学检查：60号动物胃粘膜层充血（±）、胃与胰之间的白色囊泡是角质囊泡（Keratinizingcyst）。

5结果讨论与分析：

5.1小鼠单次灌服给予受试药物后，乳移平颗粒14、20g/kg组大部分小鼠出现稀便，且20g/kg剂量组动物体重明显下降；对20g/kg剂量组死亡的动物进行解剖，肉眼观察见胃粘膜发红，病理组织学检查结果显示胃粘膜层炎细胞浸润、胃粘膜层充血、出血、盲肠自溶。分析上述症状出现的原因，认为受试药物乳移平颗粒中含有少量的秋水仙碱可能是引起动物胃肠道刺激症状的主要原因，这与相关文献报道相符。盲肠自溶可能与组织固定不良有关，与受试物关系不明确。

5.2病理组织学检查结果显示，20g/kg剂量组动物出现的肝脏小叶中央性肝细胞肿大、局灶性单细胞坏死，肾小管上皮细胞空泡化等病变，不能排除受试物对肝脏、肾脏的毒性作用，本试验研究结果与已有的文献报道相符。

6试验结论

本次试验乳移平颗粒的最大耐受量为14g/kg；单次使用试验设计剂量的乳移平颗粒并观察14天，20g/kg剂量组动物死亡率为25%，不能排除受试物对胃粘膜的刺激作用和对肝脏、肾脏的毒性作用。

Claims

1.一种治疗乳腺癌复发转移的中药制剂，其特征是，它是由以下重量份的原料药制备而成：丽江山慈菇0.3-2份；莪术10-30份；淫羊藿10-30份；蜂房10-20份；预知子9-30份。

2.根据权利要求1所述的治疗乳腺癌复发转移的中药制剂，其特征是，它是由以下重量份的原料药制备而成：丽江山慈菇1份；莪术12份；淫羊藿15份；蜂房12份；预知子9份。

3.权利要求1或2所述的治疗乳腺癌复发转移的中药制剂颗粒剂的制备方法，其特征是，包括如下步骤：

按配比分别称取淫羊藿、蜂房和预知子，与莪术药渣共水煎，第一煎加水8-12倍量，第二、三煎加水6-10倍量，每煎0.5-1.5h，合并三次水煎药液，过滤，滤液与莪术提取液合并，浓缩至60℃下的相对密度为1.03-1.05，加入体积浓度为95%的乙醇醇沉至含醇量为50-80%，静置12h，抽取上清液，沉淀，离心过滤；上清液、过滤液与丽江山慈菇醇提液合并，浓缩至60℃下的相对密度为1.2，在70℃下将浓缩液真空干燥至水分含量≤2.5％，得浸膏粉；

将浸膏粉粉碎，加入环糊精包合物，过80目筛，加入适量糊精和适量阿斯巴甜，干法制粒，过10-60目筛，制得颗粒剂。

4.根据权利要求3所述的治疗乳腺癌复发转移的中药制剂颗粒剂的制备方法，其特征是，莪术挥发油用β-环糊精包合，莪术挥发油与β-环糊精的用量之比为1ml:6g，在60℃条件下包合2h，然后放出冷藏24h，抽滤，在40℃条件下干燥至恒重。