CN103710274A - 一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌及其应用 - Google Patents

一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103710274A
CN103710274A CN201310722490.1A CN201310722490A CN103710274A CN 103710274 A CN103710274 A CN 103710274A CN 201310722490 A CN201310722490 A CN 201310722490A CN 103710274 A CN103710274 A CN 103710274A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cuta
plasmid
prs306tef1
glabrata
genetic engineering
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201310722490.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103710274B (zh
Inventor
陈坚
郭洪伟
周景文
堵国成
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201310722490.1A priority Critical patent/CN103710274B/zh
Priority to US14/185,928 priority patent/US9447437B2/en
Publication of CN103710274A publication Critical patent/CN103710274A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103710274B publication Critical patent/CN103710274B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces

Abstract

本发明公开了一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌及其应用，在光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)CCTCC M202019中过量异源表达编码抗逆性蛋白CutA的基因，所述编码抗逆性蛋白CutA的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过异源过量表达抗逆性蛋白CutA,提高了光滑球拟酵母对温度的抗逆性，并提高了基因重组菌株生产丙酮酸过程中最适生产温度，使得该基因重组菌株发酵液中丙酮酸含量，具有广阔的应用前景。

Description

一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌及其应用
技术领域
本发明涉及一种提高光滑球拟酵母产丙酮酸的方法，属于代谢工程领域。
背景技术
丙酮酸(Pyruvic acid)，是最重要的α-氧代羧酸之一。丙酮酸不仅在生物能量代谢中具有十分重要的作用，而且是多种有用化合物的前体，它在化工、制药和农用化学品等工业及科学研究中有着广泛的用途。作为一种重要的化工产品，传统化学法和生物发酵法生产丙酮酸都已实现工业化，传统化学法生产丙酮酸大规模推广受制于高昂的原材料成本和低生产率，而生物发酵法生产该有机酸过程中，由于生产过程中的复杂性，能高产丙酮酸的微生物细胞容易受到环境因素如金属离子和温度胁迫，这些因素都限制了细胞的正常生长和代谢，因此，如能提高微生物细胞对这些不利环境因素抗逆性对生物发酵法生产丙酮酸起重要作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌，是在光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)CCTCC M202019中过量异源表达编码抗逆性蛋白CutA的基因。
所述编码抗逆性蛋白CutA的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2。
SEQ ID NO.2序列如下：
ATGATCATCG TTTACACTAC TTTCCCAGAC TGGGAATCTG CTGAAAAGGT TGTTAAGACT  60
TTGTTGAAGG AAAGATTGAT CGCTTGTGCT AACTTGAGAG AACACAGAGC TTTCTACTGG  120
TGGGAAGGTA AGATCGAAGA AGACAAGGAA GTTGGTGCTA TCTTGAAGAC TAGAGAAGAC  180
TTGTGGGAAG AATTGAAGGA AAGAATCAAG GAATTGCACC CATACGACGT TCCAGCTATC  240
ATCAGAATCG ACGTTGACGA CGTTAACGAA GACTACTTGA AGTGGTTGAT CGAAGAAACT  300
AAGAAGTAAG                                                         310
本发明要要解决的另一个技术问题是提供两种构建上述基因工程菌的方法，
方法1为：
(1)获得外源目的基因：对已知的掘越氏热球菌(Pyrococcus horikoshii)抗逆性蛋白CutA核苷酸序列（SEQ ID NO.1），进行优化获得SEQ ID NO.2所示序列；
SEQ ID NO.1序列如下：
ATGATAATAG TTTACACGAC TTTTCCGGAC TGGGAGAGTG CTGAGAAAGT TGTGAAAACT  60
CTTTTAAAAG AGAGGTTGAT TGCATGCGCA AATTTAAGGG AGCACAGGGC CTTTTACTGG  120
TGGGAAGGTA AGATCGAGGA AGATAAAGAA GTTGGAGCTA TCCTTAAAAC TAGGGAAGAT  180
CTGTGGGAAG AACTTAAGGA AAGGATAAAG GAGCTTCATC CTTACGATGT TCCGGCCATA  240
ATCAGGATTG ACGTTGATGA TGTTAACGAG GATTACCTCA AATGGTTAAT TGAAGAGACG  300
AAAAAATGAG                                                         310
(2)构建重组表达质粒：全化学合成步骤1）中的SEQ ID NO.2序列，并克隆至多拷贝表达载体pRS306TEF1中的Bam HI-Eco RI插入位点，获得重组表达质粒pRS306TEF1-CutA；
(3)获得基因工程菌：利用电穿孔转化方法将被分离纯化的重组质粒pRS306TEF1-CutA转化T.glabrata CCTCC M202019△ura3，在YNB培养基平板中筛选原养型细胞，T.glabrata Q1。
方法2为：
（1）获得外源目的基因：对已知的掘越氏热球菌(Pyrococcus horikoshii)抗逆性蛋白CutA核苷酸序列（SEQ ID NO.1），进行优化获得SEQ ID NO.2所示序列；
（2）构建重组表达质粒：全化学合成步骤1）中的SEQ ID NO.2序列，并克隆至多拷贝表达载体pRS306TEF1中的Bam HI-Eco RI插入位点，获得重组表达质粒pRS306TEF1-CutA；化学合成酿酒酵母(Saccharomyces cerevisae)热击蛋白HSP150编码基因的启动子序列，克隆至pRS306TEF1-CutA质粒上的Sac I-Xho I插入位点，替换pRS306TEF1-CutA质粒上的组成型启动子TEF1为温度诱导型启动子，并获得pRS306HSP150-CutA质粒；
(3)获得基因工程菌：利用电穿孔转化方法将被分离纯化的重组质粒pRS306HSP150-CutA质粒转化T.glabrata CCTCC M202019△ura3，在YNB培养基平板中筛选原养型细胞，获得的基因工程菌命名为T.glabrata Q2。
本发明还提供一种以所述基因工程菌发酵生产丙酮酸的方法，将获得的新鲜基因工程菌斜面培养物接种至含有25mL种子培养基的250mL三角摇瓶中，30℃、200rpmin，培养24小时；按10%(v/v)的接种量接入3L发酵罐中，发酵培养基装液量为1.5L，发酵罐培养条件为通气量4vvm，搅拌转速400r/min，温度30℃，pH值和溶氧通过自动流加泵流加浓度为8mol·L-1NaOH和2mol·L-1HCl浓度的溶液维持培养基pH控制在稳定范围内。
与对照菌相比：33℃和36℃对异源表达CutA的重组菌株T.glabrata Q1都有具有促进作用，此时最大生物量分别是30℃条件下的112.4%和120.7%；并且在36℃、200rpm条件下，所述的T.glabrata菌株Q1细胞外丙酮酸含量从56.8g·L-1上升至74.2g·L-1。
本发明的有益之处：本发明通过异源过量表达抗逆性蛋白CutA,提高了光滑球拟酵母对温度的抗逆性，并提高了基因重组菌株生产丙酮酸过程中最适生产温度，使得该基因重组菌株发酵液中丙酮酸含量。
附图说明
图1CutA提高T.glabrata对温度抗逆性。A：不同温度条件对出发菌株T.glabrata C的影响，■:30℃;●:33℃;▲:36℃;◆:39℃。B：不同温度条件对重组菌株T.glabrata Q1的影响，■:30℃;●:33℃;▲:36℃;◆:39℃。
图2温度诱导调控异源CutA表达。
图3高温促进重组T.glabrata菌株的合成丙酮酸，■:T.glabrata C;●:T.glabrata Q1。
具体实施方式
材料与方法
YPD培养基(g·L-1)：蛋白胨10，酵母浸膏5，葡萄糖20，固体培养基另加20g·L-1琼脂。
YNB培养基(g·L-1)：葡萄糖20，Yeast Nitrogen Base1.7，(NH4)2SO45,用2mol·L-1NaOH调节pH至5.0,固体培养基另加20g·L-1琼脂。
种子培养基(g·L-1)：葡萄糖20，蛋白胨10，MgSO4·7H2O0.5g·L-1，KH2PO41。用稀盐酸调pH至5.5，115℃维持15min灭菌。固体斜面另添加20g·L-1琼脂粉。
发酵培养基(g·L-1)：葡萄糖100，NH4Cl7，KH2PO45，MgSO4·7H2O0.8，乙酸钠6，烟酸4×10-3，盐酸硫胺素30×10-6，烟酸吡哆醇100×10-6，生物素10×10-6，核黄素50×10-6。培养基初始pH5.0。维生素液过滤除菌后加入。
光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)从中国典型培养物保藏中心CCTCC获得，菌种编号为CCTCC NO：M202019。
酮酸含量测定：将发酵液在12000g离心5min后，取上清液，用超纯水稀释50倍，HPLC检测。细胞内酮酸含量测定：离心收集细胞，用0.9%生理盐水洗涤，用10mL0.1mol·L-1KH2PO4-K2HPO4，1mmol·L-1EDTA，0.01mmol·L-1DTT pH7.5缓冲液悬浮细胞，加入石英砂研磨5min，13000×g离心10min，去除沉淀，取5ml上清液过0.22μm滤膜，用于HPLC分析。
HPLC条件：Aminex HPX-87H ion exchange column；流动相：5mmol·L-1硫酸溶(550μL浓硫酸定容到2L),用0.22μm孔径的微滤膜抽滤并脱气；柱温：35℃；进样量：10μL；流速：0.6mL·min-1。紫外检测器检测：波长210nm。
光滑球拟酵母转化方法：将在YPD培养基上新鲜长出的T.glabrata CCTCCM202019△ura3(Zhou,J.W.,Dong,Z.Y.,Liu,L.M.,Du,G.C.,Chen,J.,2009a.Areusable method for construction of non-marker large fragment deletion yeastauxotroph strains:A practice in Torulopsis glabrata.J.Microbiol.Methods76,70–74.)单菌落转接至液体YPD培养基中，28C，200rpm，过夜培养。按10%接种量转接至新鲜的液体YPD培养基中28℃，200rpm培养至OD600=1.2左右，离心收集细胞，于30℃用8mL100mmol·L-1LiAc,10mmol·L-1DTT,0.6mol·L-1sorbitol10mmol·L-1Tris-HCL，pH=7.5缓冲液处理8×108细胞。离心收集细胞，用5mL预冷的1mol·L-1的sorbitol洗涤细胞三次，并用1mol·L-1的sorbitol悬浮细胞至1010细胞·mL-1。加入1μg预先纯化重组表达质粒pRS306TEF1-CutA至细胞悬浮液中，置于冰上温孕5分钟，将该混合物转移至预冷的0.2cm电转杯中，电击，电击条件为2.5KV，25μF，200Ω，立即加入1mL预冷的1mol·L-1sorbitol,室温静置1小时，将0.2mL电击产物涂布于含有YNB培养基的选择平板中，28℃培养96-144小时。以原养型细胞的基因组为模板，利用验证引物对P1/P2(表1)，利用PCR对外源基因的表达验证。将成功表达外源基因的光滑球拟酵母命名为T.glabrata Q1，转化带有不含外源基因的pRS306TEF1的对照菌株命名为T.glabrata C。
全化学合成酿酒酵母(Saccharomyces cerevisae)热击蛋白HSP150(NCBI登录号：YJL159W)编码基因的启动子序列，克隆至pRS306TEF1-CutA质粒上的Sac I-Xho I插入位点，替换pRS306TEF1-CutA质粒上的组成型启动子TEF1为温度诱导型启动子，并获得pRS306HSP150-CutA质粒，按上述电穿孔方法转化T.glabrata CCTCC M202019△ura3菌株，在含有YNB培养基的选择平板中选择原养型细胞，并以原养型细胞的基因组为模板，利用验证引物对P1/P2(表1)，利用PCR对外源基因的表达验证。将成功表达外源基因的光滑球拟酵母命名为T.glabrata Q2。
Figure BDA0000445250720000041
Figure BDA0000445250720000051
表1
实施例1不同温度条件对重组菌株T.glabrata Q1的影响。
将新鲜培养的T.glabrata菌株Q1的单菌落细胞与对照菌株T.glabrata C的单菌落细胞分别接种至含有25mL YPD培养的250mL三角瓶中，分别放置于30℃、33℃、36℃和39℃，200rpm条件下培养，每4h测定细胞生长情况(图1)。
如图1所示，在30℃条件下，与对照菌株相比，异源表达CutA并未对菌株生产造成明显差异，提高培养温度至33℃会加快菌株T.glabrata C生长，但是当温度提高至36℃和39℃时，菌株T.glabrata C的生长受到明显的抑制作用，此时最大生物量分别是30℃培养条件下的，87.4%和63.6%；然而提高培养温度至33℃和36℃对异源表达CutA的重组菌株T.glabrata Q1的生长都有具有促进作用，此时最大生物量分别是30℃条件下的112.4%和120.7%，然而，在39℃条件下该促进作用才消失，菌体生长受到抑制，此时菌株T.glabrataQ1的最大生物量分别是30℃培养条件下的96.2%。
实施例2温度诱导调控异源CutA表达
为进一步验证过量表达CutA能提高T.glabrata菌株对温度的抗逆性，将新鲜培养的T.glabrata菌株Q2的单菌落细胞与对照菌株T.glabrata C的单菌落细胞分别接种至含有25mLYPD培养的250mL三角瓶中，放置于30℃，200rpm条件下培养8h后，然后放置在37℃，诱导CutA酶表达，200rpm条件下继续培养16h，观察生长情况(图2)。
在30℃条件下，T.glabrata Q2与对照菌株T.glabrata C的生长没有明显差异，但变换培养温度后，高温诱导CutA蛋白的表达，对环境温度变化不敏感，在此条件下，与T.glabrataQ1类似，高温加快细胞生长，对照菌株C在此温度下生长受到抑制。
实施例3高温促进重组T.glabrata菌株的合成丙酮酸。
将获得到T.glabrata菌株Q1分布至固体斜面种子培养基中，将新鲜的斜面培养物接种至含有50mL种子培养基的500mL三角瓶中，温度为30℃，转速200rpmin，培养24小时。按10%的接种量将培养好的种子接入发酵培养基，36℃、200rpm条件下培养72小时，对照菌株T.glabrata C发酵培养条件为30℃、200rpm条件下培养60小时。与对照菌相比：所述的T.glabrata菌株Q1细胞外丙酮酸含量从56.8g·L-1上升至74.2g·L-1(图3)。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Figure IDA0000445250800000011

Claims (7)

1.一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌，其特征在于，在光滑球拟酵母(Torulopsisglabrata)CCTCC M202019中过量异源表达编码抗逆性蛋白CutA的基因。
2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述编码抗逆性蛋白CutA的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.构建权利要求1或2所述的基因工程菌的具体包括以下步骤：
(1)获得外源目的基因：对已知的掘越氏热球菌(Pyrococcus horikoshii)抗逆性蛋白CutA核苷酸序列（SEQ ID NO.1），进行优化获得SEQ ID NO.2所示序列；
(2)构建重组表达质粒：全化学合成步骤1）中的SEQ ID NO.2，并克隆至多拷贝表达载体pRS306TEF1中的Bam HI-Eco RI插入位点，获得重组表达质粒pRS306TEF1-CutA；
(3)获得基因工程菌：利用电穿孔转化方法将被分离纯化的重组质粒pRS306TEF1-CutA转化T.glabrata CCTCC M202019△ura3，在YNB培养基平板中筛选原养型细胞。
4.权利要求1或2所述基因工程菌的方法，具体包括以下步骤：
(1)获得外源目的基因：对已知的掘越氏热球菌(Pyrococcus horikoshii)抗逆性蛋白CutA核苷酸序列进行优化获得SEQ ID NO.2所示序列；
(2)构建重组表达质粒：全化学合成步骤1）中的SEQ ID NO.2所示序列，并克隆至多拷贝表达载体pRS306TEF1中的Bam HI-Eco RI插入位点，并获得重组表达质粒pRS306TEF1-CutA；化学合成酿酒酵母(Saccharomyces cerevisae)热击蛋白HSP150编码基因的启动子序列，克隆至pRS306TEF1-CutA质粒上的Sac I-Xho I插入位点，替换pRS306TEF1-CutA质粒上的组成型启动子TEF1为温度诱导型启动子，并获得pRS306HSP150-CutA质粒；
(3)获得基因工程菌：利用电穿孔转化方法将被分离纯化的重组质粒pRS306HSP150-CutA质粒转化T.glabrata CCTCC M202019△ura3，在YNB培养基平板中筛选原养型细胞。
5.应用权利要求1或2所述的基因工程菌发酵生产丙酮酸的方法，其特征在于，将所得基因工程菌分布至含有种子培养基的斜面培养基上，并将新鲜培养的斜面培养物接种至含有25mL种子培养基的250mL三角摇瓶中，28℃、200rpmin，培养24小时；按10%(v/v)的接种量接入3L发酵罐中，发酵培养基装液量为1.5L，发酵罐培养条件为通气量4vvm，搅拌转速400r/min，温度30℃，pH值和溶氧通过自动流加泵流加浓度为8mol·L-1NaOH和2mol·L-1HCl浓度的溶液维持培养基pH控制在稳定范围内。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述种子培养基成分为：葡萄糖20g·L-1，蛋白胨10g·L-1，MgSO4·7H2O0.5g·L-1，KH2PO41g·L-1，调pH为5.5。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基成分为：葡萄糖100g·L-1，NH4Cl7g·L-1，KH2PO45g·L-1，MgSO4·7H2O0.8g·L-1，乙酸钠6g·L-1，烟酸4m g·L-1，盐酸硫胺素30μg·L-1，烟酸吡哆醇100μg·L-1，生物素10μg·L-1，核黄素50μg·L-1。培养基初始pH5.0。维生素液过滤除菌后加入。
CN201310722490.1A 2013-12-24 2013-12-24 一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌及其应用 Active CN103710274B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310722490.1A CN103710274B (zh) 2013-12-24 2013-12-24 一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌及其应用
US14/185,928 US9447437B2 (en) 2013-12-24 2014-02-21 Genetically engineered Torulopsis glabrata with enhanced extracellular secretion of pyruvic acid

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310722490.1A CN103710274B (zh) 2013-12-24 2013-12-24 一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103710274A true CN103710274A (zh) 2014-04-09
CN103710274B CN103710274B (zh) 2016-03-23

Family

ID=50403637

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310722490.1A Active CN103710274B (zh) 2013-12-24 2013-12-24 一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌及其应用

Country Status (2)

Country Link
US (1) US9447437B2 (zh)
CN (1) CN103710274B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105368884A (zh) * 2015-12-10 2016-03-02 江南大学 一种丙酮酸生产强度提高的重组菌及其应用
CN105462868A (zh) * 2015-12-10 2016-04-06 江南大学 一种提高丙酮酸产量和生产强度的方法
CN106834364A (zh) * 2017-01-09 2017-06-13 通辽市黄河龙生物工程有限公司 丙酮酸工业量产发酵工艺
CN108949656A (zh) * 2018-04-19 2018-12-07 江南大学 一种工程菌及其在生产丙酮酸中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102121035B (zh) * 2010-12-10 2013-08-07 江南大学 一种提高丙酮酸产量的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102121035B (zh) * 2010-12-10 2013-08-07 江南大学 一种提高丙酮酸产量的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AZUMI HIRATA.,ET AL: "A stable protein-CutA1", 《INTECH》, 20 April 2012 (2012-04-20), pages 249 - 262 *
KAWARABAYASI, Y.,ET AL: "Pyrococcus horikoshii OT3 DNA, complete genome", 《GENBANK》, 19 May 2007 (2007-05-19) *
董志姚等: "过量表达NADH氧化酶加速光滑球拟酵母合成丙酮酸", 《微生物学报》, vol. 48, no. 8, 4 August 2008 (2008-08-04), pages 1061 - 1066 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105368884A (zh) * 2015-12-10 2016-03-02 江南大学 一种丙酮酸生产强度提高的重组菌及其应用
CN105462868A (zh) * 2015-12-10 2016-04-06 江南大学 一种提高丙酮酸产量和生产强度的方法
CN105368884B (zh) * 2015-12-10 2019-01-04 江南大学 一种丙酮酸生产强度提高的重组菌及其应用
CN106834364A (zh) * 2017-01-09 2017-06-13 通辽市黄河龙生物工程有限公司 丙酮酸工业量产发酵工艺
CN108949656A (zh) * 2018-04-19 2018-12-07 江南大学 一种工程菌及其在生产丙酮酸中的应用
CN108949656B (zh) * 2018-04-19 2021-03-26 江南大学 一种工程菌及其在生产丙酮酸中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
US9447437B2 (en) 2016-09-20
CN103710274B (zh) 2016-03-23
US20150176036A1 (en) 2015-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107586789B (zh) 高产酸性蛋白酶黑曲霉重组表达菌株及其构建方法和应用
CN105400796A (zh) 一种调控产长链二元酸的基因及其应用
CN103710274B (zh) 一种胞外丙酮酸产量提高的基因工程菌及其应用
CN104651287A (zh) 一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌和应用
CN104805026A (zh) 一株产β-半乳糖苷酶菌株及其制备高纯度低聚半乳糖的方法
CN104046586A (zh) 一株基因工程菌及其在生产(2r,3r)-2,3-丁二醇中的应用
CN102517303B (zh) 一种产乳酸的重组蓝藻及其制备方法与应用
CN104450804A (zh) 一种削弱丙酮酸分解代谢强化丙酮酸积累的方法
CN101979535B (zh) 等位基因的敲除方法及其构建的重组gal菌株和用途
CN103484391B (zh) 一种胞外α-酮戊二酸产量提高的解脂亚洛酵母基因工程菌
CN111484942A (zh) 一种利用酿酒酵母生产己二酸的方法
CN114561301B (zh) 重组裂殖壶菌及其构建方法和应用
CN106754448B (zh) 一种重组酵母菌株及其应用
CN105062981A (zh) 一种酶活性提高的丙酮酸羧化酶突变体n315f及其应用
CN116024150A (zh) 一种生产乙偶姻基因工程菌株及其构建方法与应用
CN106148255A (zh) 产有机酸途径缺失的工程菌及其在联产1,3-丙二醇、2,3-丁二醇和乙醇中的应用
CN103421698B (zh) 木糖醇高温高产工程菌株的构建及应用
CN110029081B (zh) 过表达碳分解代谢物阻遏效应转录抑制因子基因的工程菌及其构建方法
CN104403956B (zh) 木糖醇高温高产工程菌株的构建及应用
CN105132388A (zh) 一种酶活性提高的丙酮酸羧化酶突变体r485p及其应用
CN108949724B (zh) 一种新型葡糖淀粉酶及其基因与应用
CN102660599B (zh) 一种采用自克隆工程菌发酵生产l-山梨糖的方法
CN105462868A (zh) 一种提高丙酮酸产量和生产强度的方法
CN104845948B (zh) 一种酶活性提高的丙酮酸羧化酶突变体p474n及其应用
CN101412991B (zh) 以甘油为碳源并流加底物诱导制备甘露聚糖酶的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C53 Correction of patent of invention or patent application
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Chen Jian

Inventor after: Zhou Jingwen

Inventor after: Guo Hongwei

Inventor after: Du Guocheng

Inventor before: Chen Jian

Inventor before: Guo Hongwei

Inventor before: Zhou Jingwen

Inventor before: Du Guocheng

COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: CHEN JIAN GUO HONGWEI ZHOU JINGWEN DU GUOCHENG TO: CHEN JIAN ZHOU JINGWEN GUO HONGWEI DU GUOCHENG

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CP02 Change in the address of a patent holder
CP02 Change in the address of a patent holder

Address after: Liangxi District Food Science and Technology Park, 7th floor, South Building, 898 Tongsha Road, Liangxi District, Wuxi City, Jiangsu Province

Patentee after: Jiangnan University

Address before: No. 1800 road 214112 Jiangsu Lihu Binhu District City of Wuxi Province

Patentee before: Jiangnan University