CN103709216A - 从野生龙胆草里提取龙胆苦甙的新型工艺方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生龙胆草里提取龙胆苦甙的方法，特别是涉及一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法。本发明优点：1、应用超临界CO2流体萃取可确保原有的色、味不因受热破坏，更能确保其中热敏性，易氧化物质不被破坏；还可在萃取的过程中同时对萃取物进行分离纯化。2、采用大孔树脂纯化技术，有效成分纯化效果好，有利于工业化大生产。3、超滤是在常温下进行的，因此避免了因热效应引起的有效成分结构变化、损失以及生理活性降低，提高了有效成分的收率。
Description
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生龙胆草里提取龙胆苦甙的方法，特别是涉及一种超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化的新方法。
背景技术：
龙胆草为多年生草本，高1-2尺。叶对生，下部叶2-3对很小，呈现鳞片状，中部和上部叶披针形，表面暗绿色，背面淡绿色，有三条明显叶脉，无叶柄。花生于枝梢或近梢的叶腋间，开蓝色筒状钟形花。果实长椭圆形稍扁，成熟后二瓣开裂，种子多数，很小。根茎短，簇生多数细长根，淡黄棕色或淡黄色。头花龙胆本品长15-30cm。根茎较粗，微弯曲，长0.5-7cm。直径0.5-1cm，表面灰褐色，粗糙，有疣状突起的茎痕。根及根茎入药。味苦，性寒。归肝、胆经。有清热燥湿，泻肝胆实火的作用。主治高血压，头晕耳鸣，胆囊炎、急性传染性肝炎、阴部湿痒、湿热黄疸、疮疖痈肿，口苦和惊风等症，为保肝利胆之良药。
龙胆草根含裂环烯醚萜甙类苦味成分：龙胆苦甙，当药苦甙，当药龙胆草甙，苦龙胆酯甙，痕量苦当药酯甙；苦甙总含量可高达7.33％，而龙胆苦甙含量可达6.34％。生物碱包含龙胆碱即秦艽碱甲，龙胆黄碱。
国内一般用溶剂法提取苦甙，存在着操作温度高，得率偏低，耗时长等缺点，本发明的不同之处在于所用的提取分离方法主要采用超临界CO2流体萃取法，后期采用大孔树脂纯化龙胆苦甙，产品不仅得率高，而且纯度高。
发明内容：
本发明优点：
本发明主要采用超临界CO2流体萃取技术，用乙醇做夹带剂，萃取时间短，有效成分活性高；后期采用大孔树脂吸附，纯化效果好。本发明方法简单易操作，适合大生产。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其步骤如下：
(1)将龙胆草切断3～6cm，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，萃取压力为20MPa～40MPa，温度为50℃～60℃，萃取时间100min～140min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的龙胆苦甙萃取液用盐酸调其pH值为3.0～4.0，静置、抽滤、减压浓缩得龙胆苦甙粗提物；
(3)采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为0.2-0.3MPa，截留率为90-95％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化龙胆草甙、树脂型号为AB-8、D4006或NKA-II中的一种，在径高比1∶6-1∶8，体积流量2-4BV／h，流速为3-5BV／h下进行吸附；
(5)用体积分数70-80％乙醇，体积流量2-3BV／h条件下进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)回收乙醇，将龙胆苦甙各阶段洗脱液浓缩，得苦甙半成品，其纯度为75％以上；
(7)粗粉溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-90％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到纯度为98％以上龙胆苦甙成品。
本发明应用超临界CO2流体萃取可确保原有的色、味不因受热破坏，更能确保其中热敏性，易氧化物质不被破坏；还可在萃取的过程中同时对萃取物进行分离纯化；本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附草苁蓉甙，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施方式：
实施案例1：一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其步骤如下：
(1)1000g龙胆草全草切断至3cm，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1％，萃取压力为20MPa，温度为50℃，萃取时间100min，CO2流量为1mg／g生药·min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的龙胆苦甙萃取液用盐酸调其pH值为3.0，静置、抽滤、减压浓缩得龙胆苦甙粗提物；
(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为0.2MPa，截留分子量1000，截留率为90％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化龙胆苦甙、树脂型号为AB-8，最佳吸附条件为径高比1∶6，体积流量2BV／h，流速为3BV／h，吸附pH值为6；
(5)用70％乙醇体积分数，体积流量2BV／h进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)将龙胆苦甙各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得苦甙半成品，其含量为70.1％；
(7)取苦甙半成品溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到纯度为98.3％的龙胆苦甙成品。
实施案例2：一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其步骤如下：
(1)1000g龙胆草全草切断至4cm，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1％，萃取压力为30MPa，温度为50℃，萃取时间120min，CO2流量为1mg／g生药·min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的龙胆苦甙萃取液用盐酸调其pH值为4.0，静置、抽滤、减压浓缩得龙胆苦甙粗提物；
(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为0.2MPa，截留分子量3000，截留率为90％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化龙胆苦甙、树脂型号为D4006，最佳吸附条件为径高比1∶8，体积流量2BV／h，流速为3BV／h，吸附pH值为7；
(5)用80％乙醇体积分数，体积流量2BV／h进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)将龙胆苦甙各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得苦甙半成品，其纯度为72.6％；
(7)取苦甙半成品溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用80％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到纯度为99.1％的龙胆苦甙成品。
实施案例3：一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其步骤如下：
(1)1000g龙胆草全草切断至6cm，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1％，萃取压力为30MPa，温度为50℃，萃取时间120min，CO2流量为1mg／g生药·min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的龙胆苦甙萃取液用盐酸调其pH值为4.0，静置、抽滤、减压浓缩得龙胆苦甙粗提物；
(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为0.2MPa，截留分子量5000，截留率为95％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化龙胆苦甙、树脂型号为NKA-II，最佳吸附条件为径高比1∶8，体积流量4BV／h，流速为5BV／h，吸附pH值为6；
(5)用75％乙醇体积分数，体积流量3BV／h进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)将龙胆苦甙各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得苦甙半成品，其纯度为73.7％；
(7)取苦甙粗粉溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用90％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到纯度为98.9％龙胆草苦甙成品。
Claims (4)
1.一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其步骤如下：
(1)将龙胆草切断3～6cm，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，萃取压力为20MPa～40MPa，温度为50℃～60℃，萃取时间100min～140min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的龙胆苦甙萃取液用盐酸调其pH值为3.0～4.0，静置、抽滤、减压浓缩得龙胆苦甙粗提物；
(3)采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为0.2-0.3MPa，截留率为90-95％；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化龙胆草甙、树脂型号为AB-8、D4006或NKA-II中的一种，在径高比1∶6-1∶8，体积流量2-4BV／h，流速为3-5BV／h下进行吸附；
(5)用体积分数70-80％乙醇，体积流量2-3BV／h条件下进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；
(6)回收乙醇，将龙胆苦甙各阶段洗脱液浓缩，得苦甙半成品，其纯度为75％以上；
(7)粗粉溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-90％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(8)回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到纯度为98％以上龙胆苦甙成品。
2.根据权利要求1所述的一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其特征是：在所述的步骤(1)中，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1％。
3.根据权利要求2所述的一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其特征是：在所述的步骤(3)中，超滤膜截留分子量为1000-5000。
4.根据权利要求3所述的一种利用超临界CO2流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其特征是：在所述的步骤(4)中，大孔树脂吸附时，调整吸附pH值为6-7。
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