CN103709014B

CN103709014B - 一种转化率高且回收率高的羟基酪醇提取方法

Info

Publication number: CN103709014B
Application number: CN201310712259.4A
Authority: CN
Inventors: 杨文国; 宋云飞; 李元元; 梁远盛; 蒋治舟; 赵军
Original assignee: GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2013-12-20
Filing date: 2013-12-20
Publication date: 2015-08-12
Anticipated expiration: 2033-12-20
Also published as: CN103709014A

Abstract

本发明公开了一种转化率高且回收率高的羟基酪醇提取方法，包括以下步骤：1)获取橄榄叶提取液，提取液浓缩至浸膏；2)向所得浸膏中加入相当于浸膏重量1～2％的浓盐酸，升温至85～95℃保温水解20～40min；所得水解液冷却至常温后再加入相当于浸膏重量4～8％的浓盐酸，常温下水解100～150min，得到二次水解液；3)将二次水解液调pH值至6.0～6.5，用乙酸乙酯萃取，萃取相回收溶剂，干燥，即得。本发明采用间歇性两次水解的方式，不仅克服了现有技术中一次水解不完全的缺陷，有效提高了橄榄苦甙分解转化为羟基酪醇的转化率，达98.5％以上，同时提高了羟基酪醇的收率，达95％以上；而且简化了工艺。

Description

一种转化率高且回收率高的羟基酪醇提取方法

技术领域

本发明涉及植物中有效成分的提取方法，具体涉及一种转化率高且回收率高的羟基酪醇提取方法。

背景技术

羟基酪醇(Hydroxytyrosol)化学名为3,4-二羟基苯乙醇，是一种多酚类物质，分子式C₈H₁₀O₃，相对分子量154。

羟基酪醇有着安全卓越的抗氧化能力以及抗菌、抗癌、抗炎等多种生物和药理活性，可以促进骨骼发育，还可以预防心脑血管疾病。在抗氧化方面：能促进新陈代谢，促进伤口愈合，消除体内自由基，恢复人体脏腑器官的健康状态，防止脑衰，延缓衰老，保持青春活力；还可以保护人体视网膜上皮细胞，防治和治疗视网膜黄斑病，保护视力。在促进骨骼发育方面：有助于人体对矿物质的吸收，无需补钙，自然吸收，保持骨密度，减少骨骼疏松和促进骨骼发育。在抗菌方面：发现羟基酪醇对革兰氏阴性菌显出很强的抑菌性，主要是通过穿透革兰氏阴性菌的细胞黏膜，分解细菌的黏肽，或者引发细菌黏膜的破损。在心脑血管疾病和抗炎方面，能抑制血小板聚集和血栓素的产生，降低动脉粥样硬化疾病的发生；还能够抑制白血细胞的增殖，并诱导其凋亡，从而达到抗炎的效果。

羟基酪醇最初来源于油橄榄中，是橄榄中的一种次生代谢物，游离的羟基酪醇很少，在橄榄中主要以橄榄苦甙的形式存在，可由橄榄苦甙分解而得到。橄榄中各个部位都含有橄榄苦甙，在干燥的橄榄叶中可达到2％～10％。目前羟基酪醇主要是从橄榄果、叶以及在制备橄榄油过程中产生的残渣和废水中分离得到。如公开号为CN1665764的发明专利，公开了一种制备富含羟基酪醇的组合物的方法，包括：(a)用橄榄制备植物液；(b)将酸加入植物液中，由此制得酸化的植物液；(c)将酸化的植物液培养一段时间直至植物液中原先存在的油橄榄苦甙(环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙)有至少50％转化成羟基酪醇，其中所说的一段时间至少为2个月，通常为2～12个月。虽然该方法可以使植物液中原先存在的油橄榄苦甙的90％转化成羟基酪醇，但完成这一转化需要花费的时间太长，导致生产周期长，不适于工业化生产。本申请人之前申请的公开号为CN101973853A的发明专利，公开了一种生产周期较短的羟基酪醇的提取方法，具体是通过在提取液中加入浓盐酸使其pH值为0～2，煮沸2～4h水解，水解液进大孔吸附树脂柱层析，用pH值为1～2的酸液洗脱，合并流出液及酸洗液，调pH值至中性，浓缩，过滤；滤液再进大孔吸附树脂柱层析，用体积浓度10～30％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到羟基酪醇。该方法虽然在较短的生产周期内获得了较高的转化率(转化率达85％以上)，但一次性加酸水解会使药液在水解过程中易出现结团从而造成橄榄苦甙水解转化为羟基酪醇不完全，通常的转化率在85～90％；而且该方法需要进行两次树脂柱层析，工艺较为繁烦。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种转化率高且回收率高的羟基酪醇提取方法。该方法的生产周期短、工艺简单，橄榄苦甙的转化率可达98.5％以上，羟基酪醇的收率可达95％以上。

本发明所述的转化率高且回收率高的羟基酪醇提取方法，包括以下步骤：

1)获取橄榄叶提取液，提取液浓缩至浸膏；

2)向所得浸膏中加入相当于浸膏重量1～2％的浓盐酸，升温至85～95℃保温水解20～40min；所得水解液冷却至常温后再加入相当于浸膏重量4～8％的浓盐酸，常温下进行二次水解，时间为100～150min，得到二次水解液；

3)将二次水解液调pH值至6.0～6.5，用乙酸乙酯萃取，收集萃取相，回收溶剂，干燥，得到羟基酪醇。

上述方法中，

步骤1)中，橄榄叶提取液可以是以橄榄叶为原料按现有常规技术进行提取来获得橄榄叶提取液，通常采用的方法为：取橄榄叶，粉碎，用5～10倍原料重量的水或乙醇提取1～3次，每次提取后压出药液，合并药液，过滤，即得提取液。提取用乙醇的浓度通常为70～90％(v/v)，当用水进行提取时，通常采用煮沸提取的方式；当用乙醇进行提取时，通常是在80～85℃条件下加热回流提取；不论以何种原料进行提取，每次提取的时间通常在30～150min。橄榄叶提取液也可以从市场上直接购买得到，此时，可以不用进行浓缩操作。

步骤1)中，优选是将提取液减压浓缩成原料重量0.5～0.6倍量的浸膏。

步骤2)中，在进行第一次水解时，水解的温度优选为90℃，水解的时间优选为25～35min。在进行第二次水解时，水解的时间优选为120～130min。

步骤3)中，通常是氢氧化钠溶液(质量浓度为5～10％)调节二次水解液的pH值。所述干燥通常在60～70℃、-0.01～-0.06Mpa条件下进行。

与现有技术相比，本发明采用间歇性两次水解的方式，不仅克服了现有技术中一次水解不完全的缺陷，使得橄榄苦甙分解转化为羟基酪醇的转化率更高，可达98.5％以上，同时提高了羟基酪醇的收率，可达95％以上；而且整个方法生产周期短，不需要进行树脂柱层，有效简化了工艺。

具体实施方式

下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1

1)以500kg橄榄叶为原料，粉碎，加入相当于原料重量6倍量的75％(v/v)，于80℃提取120min，压出药液；再加入相当于原料重量6倍量的75％(v/v)，于80℃提取120min，压出药液，合并药液，过滤，即得橄榄叶提取液；将提取液减压浓缩至原料重量0.5倍量的浸膏；

经测定，浸膏中橄榄苦甙(裂环环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙)的含量为6.96％。测定的方法为(下同)：HPLC，色谱条件：色谱柱(Kromasil 100-5C18)；流动相：乙腈：水＝25：75，紫外检测波长：285nm，柱温：27℃，流速：1mL/min。

2)向所得浸膏中加入相当于浸膏重量1％的浓盐酸，升温至90℃保温水解30min；所得水解液冷却至常温后再加入相当于浸膏重量5％的浓盐酸，常温下进行二次水解，时间为120min，得到二次水解液；

3)将二次水解液用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调pH值至6.0，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，然后置于真空干燥箱中于65℃、-0.06Mpa条件下干燥，得到羟基酪醇(油状物)12019g，纯度为40.01％。

对比例1

1)同实施例1步骤1)，所得浸膏中橄榄苦甙(裂环环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙)的含量为6.96％；

2)向所得浸膏中加入相当于浸膏重量6％的浓盐酸，升温至90℃保温水解150min，得到水解液；

3)将水解液用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调pH值至6.0，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，然后置于真空干燥箱中于65℃、-0.06Mpa条件下干燥，得到羟基酪醇(油状物)11485g，纯度为39.56％。

实施例2

1)以500kg橄榄叶为原料，粉碎，加入相当于原料重量10倍量的90％(v/v)，于80～85℃提取150mim，压出药液；再加入相当于原料重量6倍量的90％(v/v)，于80～85℃提取90mim，压出药液，合并药液，过滤，即得橄榄叶提取液；将提取液浓缩至原料重量0.6倍量的浸膏；

经测定，浸膏中橄榄苦甙(裂环环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙)的含量为5.77％。测定的方法同实施例1。

2)向所得浸膏中加入相当于浸膏重量2％的浓盐酸，升温至95℃保温水解20min；所得水解液冷却至常温后再加入相当于浸膏重量8％的浓盐酸，常温下进行二次水解，时间为130min，得到二次水解液；

3)将二次水解液用质量浓度为10％的氢氧化钠溶液调pH值至6.5，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，然后置于真空干燥箱中于70℃、-0.05Mpa条件下干燥，得到羟基酪醇7608g，纯度为65.71％。

对比例2

1)同实施例2步骤1)，所得浸膏中橄榄苦甙(裂环环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙)的含量为5.77％；

2)向所得浸膏中加入相当于浸膏重量10％的浓盐酸，升温至95℃保温水解150min，得到水解液；

3)将水解液用用质量浓度为10％的氢氧化钠溶液调pH值至6.5，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，然后置于真空干燥箱中于70℃、-0.05Mpa条件下干燥，得到羟基酪醇(油状物)7215g，纯度为64.85％。

实施例3

1)以500kg橄榄叶为原料，粉碎，加入相当于原料重量8倍量的80％(v/v)，于85℃提取100mim，压出药液；然后加入相当于原料重量6倍量的80％(v/v)，于85℃提取90mim，压出药液；再加入相当于原料重量5倍量的70％(v/v)，于85℃提取30mim，压出药液，合并药液，过滤，即得橄榄叶提取液；将提取液浓缩至原料重量0.55倍量的浸膏；

经测定，浸膏中橄榄苦甙(裂环环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙)的含量为6.33％。测定的方法同实施例1。

2)向所得浸膏中加入相当于浸膏重量1.5％的浓盐酸，升温至85℃保温水解25min；所得水解液冷却至常温后再加入相当于浸膏重量4％的浓盐酸，常温下进行二次水解，时间为100min，得到二次水解液；

3)将二次水解液用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调pH值至6.2，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，然后置于真空干燥箱中于60℃、-0.04Mpa条件下干燥，得到羟基酪醇7004g，纯度为69.12％。

实施例4

1)以500kg橄榄叶为原料，粉碎，加水煎煮提取2次(每次加水量为原料重量的10倍，每次提取120min)，合并煎煮液，过滤，即得橄榄叶提取液；将提取液浓缩至原料重量0.5倍量的浸膏；

经测定，浸膏中橄榄苦甙(裂环环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙)的含量为5.62％。测定的方法同实施例1。

2)向所得浸膏中加入相当于浸膏重量1％的浓盐酸，升温至90℃保温水解35min；所得水解液冷却至常温后再加入相当于浸膏重量6％的浓盐酸，常温下进行二次水解，时间为150min，得到二次水解液；

3)将二次水解液用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调pH值至6.3，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，然后置于真空干燥箱中于65℃、-0.06Mpa条件下干燥，得到羟基酪醇5614g，纯度为70.52％。

实施例5

1)取从市场上购买的1L橄榄提取液(生产厂商ebiser s.L，注册商标名称Hitofulvic，橄榄苦甙(裂环环烯醚萜类葡糖苷油橄榄苦甙)的含量为0.16％，羟基酪醇的含量为0.25％；

2)向所得浸膏中加入相当于浸膏重量1％的浓盐酸，升温至85℃保温水解40min；所得水解液冷却至常温后再加入相当于浸膏重量7％的浓盐酸，常温下进行二次水解，时间为120min，得到二次水解液；

3)将二次水解液用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调pH值至6.4，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，然后置于真空干燥箱中于70℃、-0.01Mpa条件下干燥，得到羟基酪醇16.84g，纯度为22.31％。

Claims

1.一种羟基酪醇提取方法，包括以下步骤：

1)获取橄榄叶提取液，提取液浓缩至浸膏；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，在进行第一次水解时，水解的温度为90℃，水解的时间为25～35min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，在进行第二次水解时，水解的时间为120～130min。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于：步骤1)中，获取橄榄叶提取液的方法为：取橄榄叶，粉碎，用5～10倍原料重量的水或乙醇提取1～3次，每次提取后压出药液，合并药液，过滤，即得提取液。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于：步骤1)中，将提取液浓缩成原料重量0.5～0.6倍量的浸膏。