CN103705775B - 一种保肝镇痛中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种保肝镇痛中药组合物及其制备方法，制成该中药组合物的方法主要为：取广金钱草、玉米须、石韦、鸡骨草、茯苓、车前草、海金沙草、白茅根共8味药材，广金钱草、石韦、鸡骨草用碱性水溶液提取，白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草水提，最后合并两种提取方法所得流浸膏。通过动物药效实验及临床试验，结果证明：本发明提供的中药组合物在治疗泌尿系统结石时，保肝镇痛效果优于现有技术。

Description

一种保肝镇痛中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及治疗泌尿系统结石的中药组合物，具体涉及一种保肝镇痛中药组合物及其制备方法。

背景技术

泌尿系统结石属中医淋病中的“砂淋”、“石淋”及“血淋”范围，主要包括4种证型：

(1)气滞血瘀型：症见腰部隐痛，钝痛，脉正常或弦紧，舌正常；或溺时小便突然中断，疼痛剧烈，上连腰腹，砂石排出后疼痛即缓；或腰、侧腹部疼痛如掣如绞，痛引少腹，频频发作，痛时面色苍白、冷汗、呕恶，伴尿血或尿色黄赤，舌质暗红或有瘀点、瘀斑，脉弦紧或缓涩。

(2)湿热下注型：证见恶寒发热，腰痛，少腹急满，小便频数短赤，溺时涩痛难忍，淋沥不爽。苔黄腻，脉弦滑或滑数。

(3)肾阴虚型：结石久停，邪热久郁。真阴亏损，头昏耳鸣，腰酸腿痛，小便淋沥或不爽，失眠多梦，时有低热，心悸气短，五心烦热，盗汗，眼干或涩，腹胀便秘，纳差，脉细数，舌质红或少苔。

(4)肾阳虚型：结石久留，肾阳虚衰，腰腿酸重，精神不振，全身怯冷，四肢欠温或下半身常有冷感，尿频或小便不利，夜尿多，面色皓白，脉沉细弱，苔白舌质淡。

《卫生部药品标准》第13册公开的结石通片公开了如下信息：

1）组成：广金钱草、玉米须、石韦、鸡骨草、茯苓、车前草、海金沙草、白茅根。

2）制法：以上八味，取茯苓96g粉碎成细粉，剩余茯苓与其余玉米须等七味加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.19—1.20(90℃)的清膏，加入茯苓细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，加适量辅料，制颗粒，混匀，压制成1000片，包糖衣，即得。

3）功能与主治：清热利湿，通淋排石，镇痛止血。用于泌尿系统感染，膀胱炎，肾炎水肿，尿路结石，血尿，淋沥混浊，尿道灼痛等。

但是在所述部颁标准中没有明确各成分的配比量。

关于结石通的提取方法有以下报道：

中国专利申请01100318.9明确了结石通的制备方法为：所有药材粉碎为纳米级，微波萃取，减压浓缩，干燥。

中国专利申请200510032580.3公开了结石通丸、滴丸、微丸、分散片、微丸胶囊等制剂。该专利公开的制备方法采用部分茯苓粉碎，剩余茯苓与其余7味药材水提，或全部药材水提。

中国专利申请200510047400.9公开了一种用于治疗尿路结石的中药无糖颗粒剂及其制备方法。该专利原料为结石通片原料，公开的制备方法为部分茯苓粉碎，剩余茯苓与其余7味药材水提，采用低温干燥方法。

中国专利申请200910224023.x公开了治疗泌尿系统疾病的药物组合物及其组份的检测方法。该专利使用的原料为结石通片原料，公开的制备方法为部分茯苓粉碎，剩余茯苓与其余7味药材水提。公开了制剂中鸡骨草、绿原酸的检测方法。

中国专利申请200910249899.x公开了治疗泌尿系统疾病的药物组合物的制备方法及其组份的检测方法。该专利使用的原料为结石通片原料，公开的制备方法为部分茯苓粉碎，剩余茯苓与其余7味药材水提。公开了制剂中石韦的检测方法。

由于八味药材中活性成分的性质各不相同，如上述专利中制备方法均采用水提法，会导致一些活性成分无法提出，或提取率低，影响药效的发挥。

因此，需要寻找提供一种可以提高药品保肝镇痛作用的制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种疗效确切的保肝镇痛中药组合物。

本发明提供的一种保肝镇痛中药组合物，其活性成分的制备方法包括以下步骤：

1）取以下重量份的药材：广金钱草456份、玉米须302份、石韦228份、鸡骨草228份、茯苓228份、车前草165份、海金沙草165份、白茅根228份；

2）广金钱草、石韦、鸡骨草使用碱性水溶液为提取溶媒提取，提取物制成流浸膏；

3）白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取，提取物制成流浸膏；

4）将步骤2）、3）所得两种流浸膏混匀，即得。

上面所述制备保肝镇痛中药组合物步骤中：

所述步骤2）中碱性水溶液优选为：质量-体积百分比为0.1-5%的碳酸氢钠溶液。

所述步骤2）碱性水溶液进一步优选为：质量-体积百分比为0.5-1%的碳酸氢钠溶液。

所述步骤2）提取方法优选为：

广金钱草、石韦、鸡骨草加碱性水溶液提取2-3次，每次加药材总重量10-20倍量的碱性水溶液，每次提取时间为1-4小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成流浸膏。

所述步骤3）优选为：

白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2-3次，每次加五味中药总重量6-12倍量的水，每次煎煮1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏。

所述步骤3）进一步优选为：

白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2-3次，每次加五味中药总重量8-10倍量的水，每次煎煮2-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏。

所述步骤3）更进一步优选为：

白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2次，每次加五味中药总重量8-10倍量的水，每次煎煮2-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏。

本发明还提供了含上述中药组合物的制剂，该制剂由中药组合物单独制成或由中药组合物和药学上可接受的载体组成。

所述制剂为固体制剂或液体制剂，固体制剂为片剂、胶囊剂或颗粒剂；液体制剂为合剂或口服液。

所述药学上可接受的载体为乳糖、淀粉、糊精、甘露醇、蔗糖、羟丙甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、微晶纤维素、微粉硅胶、预胶化淀粉、山梨醇、硬脂酸镁、滑石粉、羟丙甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、苯甲酸钠、山梨酸钾、蔗糖或阿斯巴甜、味精、蜂蜜、甜橙香精中的一种或几种。

本发明中药组合物制剂的制备方法，该方法可以采用常规制剂工艺制备为各种常见剂型。

例如：

方法1：本发明中药组合物胶囊剂

取中药组合物制备步骤4）中所得中药组合物，干燥成干膏粉，加入胶囊剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明中药组合物的胶囊剂。

方法2：本发明中药组合物片剂

取中药组合物制备步骤4）中所得中药组合物，干燥成干膏粉，加入片剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明中药组合物的片剂。

方法3：本发明中药组合物颗粒剂

取中药组合物制备步骤4）中所得中药组合物，干燥成干膏粉，加入颗粒剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明中药组合物的颗粒剂。

方法4：本发明中药组合物合剂

取中药组合物制备步骤4）中所得中药组合物，加入合剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明中药组合物的合剂。

方法5：本发明中药组合物口服液

取中药组合物制备步骤4）中所得中药组合物，加入口服液常用辅料，按常规生产方法制备得本发明中药组合物的口服液。

方法6：本发明中药组合物糖浆剂

取中药组合物制备步骤4）中所得中药组合物，加入糖浆剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明中药组合物的糖浆剂。

本发明还提供了上述中药组合物或制剂在制备治疗泌尿系统结石疾病时提高保肝镇痛效果的应用。

泌尿系统结石在中医淋病中属石淋、砂淋，由于湿热下注，化炎灼阴，煎熬尿液，结为砂石，淤积水道，而为石淋。积于下则膀胱气化失司，尿出不利，甚则欲出不能，窘迫难受，痛引少腹；滞留于上，则影响肾脏司小便之职，郁结不得下泄，气血滞涩，不通则痛，由肾而波及膀胱、阴部；砂石伤络则为尿血。淋久不愈，湿热害脾，以致脾气虚弱，中气下陷，脾气不旺，运化失常，引致血液生化不足，肝血亏虚。因此，治疗石淋应在涤除砂石、通淋利尿的同时，应养护因久患淋病导致的肝损伤。使病情得以尽快彻底痊愈，并为患者缓解结石未除时出现的剧烈疼痛。

本发明所公开的中药组合物有效成分是由广金钱草、玉米须、石韦、鸡骨草、茯苓、车前草、海金沙草、白茅根等原料制备而成。发明人在多年的制剂研究过程中发现，相同的药物用量，不同提取工艺制备所得的活性成分，其药理作用也会存在较大的差异和侧重点，为此，申请人对本发明的中药组合物结合药理实验进行了一系列的工艺研究，总结出本发明的提取工艺方法，并且经实验验证这样的改进带来了药效增效：当广金钱草、石韦、鸡骨草使用碱性水溶液为提取溶媒提取，白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草药材水提，以上两种提取物合并所得中药组合物，用于治疗泌尿系统结石时，其保肝镇痛效果远远优于相同处方的现有提取技术，临床疗效显示，本发明的提取物与现有技术相比，保肝镇痛疗效有显著差异，具有显著性进步。

发明人对本发明中药组合物检测，发现：本发明中药组合物总黄酮含量很高，与现有提取工艺所得产品相比，两者有明显差异，可能是由于广金钱草、石韦、鸡骨草中黄酮成分易溶于碱性水溶液，所以在碱性水溶液中提取较完全。

上述检测结果从侧面表明了各组成分中某些有效成分的提取优于现有技术。由于每味中药材均含有诸多的活性成分，至少尚未有任何一味中药被完完全全地分析清楚所有成分，不同的中药合并在一起用不同提取方式提取时，由于溶剂、温度及不同成分之间的相互影响和作用，会产生极为复杂的化学反应。因此，上述有效成分只是中药提取物活性成分的一部分，对于整体药物的药效作用影响尚不明确。目前我们只能通过药效实验来对比不同提取方式在某个治疗用途方面的优劣，尚无法从部分有效成分的变化指标来判断复方中成药的疗效变化。

我们通过“醋酸所致小鼠扭体反应的影响”动物实验对比不同提取方式在镇痛方面的疗效；通过“对大鼠急性肝损伤的影响”对比不同提取方式在保肝方面的疗效。

发明人对结石通的各个药材的提取方法与药物优效进行了大量系统性的研究实验，通过把药材拆分为多组，用不同的方法提取，最后得到了本发明的提取技术方案，使相同配方的药材，发挥出治疗目的更明确、疗效更显著的作用。

本发明提供的一种保肝镇痛中药组合物具有以下优点：

1、本发明中药组合物保肝作用明显，给药后大鼠与模型组大鼠相比肝细胞索排列相对整齐、坏死灶明显减少炎性细胞浸润显著减少，且本发明组较对比例组效果更为显著。此外，肝组织病理切片镜检结果也证实了本发明提供的中药组合物能减轻干细胞变性、坏死、出血，促进肝细胞再生，对肝脏起到较好的保护作用。

2、本发明中药组合物镇痛效果显著，与空白对照组比较，醋酸所致小鼠扭体次数极显著减少（P＜0.01）；且本发明与对比例比较，存在极显著性差异（P＜0.01）或显著性差异（P＜0.05）

3、临床试验结果显示：本发明对结石引起的肝损伤有明显的改善作用。给药后，本发明对患者肝功能的改善和疼痛的缓解效果优于对照组，具有显著性差异（P<0.05）。本发明药物的保肝效果和对泌尿系结石疼痛的镇痛的功效优于现有技术结石通片。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

如无特殊说明，本发明中的乙醇浓度均为体积百分比。

实施例1：

1）取以下重量份的药材：广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

2）广金钱草、石韦、鸡骨草加质量-体积百分比为0.1%的碳酸氢钠溶液提取2次，每次分别加药材总重量20倍、15倍量的碳酸氢钠溶液，每次提取时间分别为4小时、2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

3）白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2次，每次分别加五味中药总重量12倍、10倍量的水，每次分别煎煮3小时、2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃时相对密度为1.25的清膏，干燥成流浸膏；

4）将步骤2）、3）所得两种流浸膏混匀，得中药组合物。

实施例2：

1）取以下重量份的药材：广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

2）广金钱草、石韦、鸡骨草加质量-体积百分比为1%的碳酸氢钠溶液提取3次，每次分别加药材总重量20倍、15倍、10倍量的碳酸氢钠溶液，每次提取时间分别为4小时、2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

3）白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取3次，每次分别加五味中药总重量12倍、10倍、6倍量的水，每次分别煎煮3小时、2小时、1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

4）将步骤2）、3）所得两种流浸膏混匀，得中药组合物。

实施例3：

1）取以下重量份的药材：广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

2）广金钱草、石韦、鸡骨草加质量-体积百分比为0.5%的碳酸氢钠溶液提取3次，每次分别加药材总重量20倍、15倍、10倍量的碳酸氢钠溶液，每次提取时间分别为3小时、2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

3）白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取3次，每次分别加五味中药总重量10倍、8倍、8倍量的水，每次分别煎煮3小时、2小时、2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

4）将步骤2）、3）所得两种流浸膏混匀，得中药组合物。

实施例4：

1）取以下重量份的药材：广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

2）广金钱草、石韦、鸡骨草加质量-体积百分比为5%的碳酸氢钠溶液提取2次，每次分别加药材总重量20倍、10倍量的碳酸氢钠溶液，每次提取时间分别为2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

3）白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2次，每次分别加五味中药总重量10倍、10倍量的水，每次分别煎煮3小时、2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

4）将步骤2）、3）所得两种流浸膏混匀，得中药组合物。

实施例5：

1）取以下重量份的药材：广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

2）广金钱草、石韦、鸡骨草加质量-体积百分比为2%的碳酸氢钠溶液提取3次，每次分别加药材总重量20倍、15倍、15倍量的碳酸氢钠溶液，每次提取时间分别为2小时、2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

3）白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2次，每次分别加五味中药总重量10倍、8倍量的水，每次分别煎煮3小时、2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

4）将步骤2）、3）所得两种流浸膏混匀，得中药组合物。

实施例6：

1）取以下重量份的药材：广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

2）广金钱草、石韦、鸡骨草加质量-体积百分比为0.1%的碳酸钠溶液提取3次，每次分别加药材总重量20倍、15倍、15倍量的碳酸钠溶液，每次提取时间分别为2小时、2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

3）白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2次，每次分别加五味中药总重量10倍、8倍量的水，每次分别煎煮3小时、2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

4）将步骤2）、3）所得两种流浸膏混匀，得中药组合物。

实施例7：

1）取以下重量份的药材：广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

2）广金钱草、石韦、鸡骨草加质量-体积百分比为0.05%的氢氧化钠溶液提取2次，每次分别加药材总重量15倍、8倍量的氢氧化钠溶液，每次提取时间分别为2小时、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

3）白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2次，每次分别加五味中药总重量10倍、10倍量的水，每次分别煎煮3小时、2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

4）将步骤2）、3）所得两种流浸膏混匀，得中药组合物。

实施例8：胶囊剂

1、组成：实施例1所得的流浸膏，干燥成干膏粉，得285g，加入预胶化淀粉60g，硬脂酸镁5.3g，滑石粉5.5g。。

2、制备方法：参照常规中药制剂的方法制成胶囊剂。

实施例9：片剂

1、组成：实施例2所得的流浸膏，干燥成干膏粉，得290g，加入乳糖99g，交联羧甲基纤维素钠8.1g，微粉硅胶5.5g。

2、制备方法：参照常规中药制剂的方法制成片剂。

实施例10：颗粒剂

1、组成：实施例3所得的流浸膏，干燥成干膏粉，得300g，加入糊精1280g，淀粉148g。

2、制备方法：参照常规中药制剂的方法制成颗粒剂。

实施例11：口服液

1、组成：实施例4所得流浸膏4.2L(相对密度1.050～1.065/30℃)，蔗糖500g，味精8.5g，山梨酸钾5.1g。

2、制备方法：将流浸膏加热至80℃以上，然后加入蔗糖及防腐剂，灌封，灭菌，制成口服液。

实施例12：糖浆剂

1、组成：实施例6所得流浸膏9.5L(相对密度1.015～1.035/30℃)，蔗糖9.5kg，甜橙香精25g，山梨酸钾23g。

2、制备方法：参照常规中药制剂的方法制成糖浆剂

对比例1：

参考《卫生部药品标准》第13册公开的结石通片提取及制备方法，具体如下：

称取广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

以上八味，取茯苓96g粉碎成细粉，剩余茯苓与其余玉米须等七味加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.19(90℃)的清膏，加入茯苓细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，即得。

对比例2：全水提

称取广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

以上八味，加水提取3次，每次加药材总重量10倍量的水，每次煎煮3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.10的清膏，加浓度为95%的乙醇使得含醇量达到60%，静置12小时，滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.15的清膏，干燥成干膏粉，即得。

对比例3：全醇提

称取广金钱草456g、玉米须302g、石韦228g、鸡骨草228g、茯苓228g、车前草165g、海金沙草165g、白茅根228g；

以上八味，用乙醇提取3次，每次加药材总重量10倍量80%乙醇，每次提取2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.15的清膏，干燥成干膏粉，即得。

实验例1：广金钱草、石韦、鸡骨草提取方法比较

用不同的提取方法对广金钱草、石韦、鸡骨草进行提取，通过动物药效实验比较不同提取物的镇痛作用。

1提取溶媒：0.5%的碳酸氢钠溶液、30%乙醇溶液、水。

2提取方法：按处方量称取广金钱草、石韦、鸡骨草，加上述不同溶媒分别提取3次，每次分别加药材总重量12倍、10倍、10倍量的溶媒，每次提取时间分别为5小时、4小时、3小时，合并提取液，滤过，回收药渣，滤液浓缩成流浸膏。

3镇痛效果试验方法：醋酸所致小鼠扭体反应的影响

4分析结果见表1

表1不同提取方法对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与0.5%的碳酸氢钠溶液实验组比较，#P<0.05，##P＜0.01。

表1结果显示：以0.5%的碳酸氢钠溶液为溶媒提取所得的提取物，对醋酸所致小鼠扭体反应的影响最高，镇痛效果最好，与30%乙醇实验组、水实验组相比，镇痛效果具有显著性或极显著性差异（P<0.05，P＜0.01）。

实验例2：白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草五味药材提取方法比较

用不同的提取方法对白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草五味药材进行提取，通过动物药效实验比较不同提取物的护肝效果。

1提取溶媒：30%乙醇溶液、70%乙醇溶液、水、0.1%碳酸氢钠溶液。

2提取方法：按处方量称取白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草，加不同溶媒提取3次，每次分别加药材总重量12倍、10倍、8倍的溶媒，每次提取时间分别为5小时、4小时、3小时，合并提取液，滤过，回收药渣，滤液浓缩成流浸膏。

3保肝试验方法：对大鼠急性肝损伤的影响。

4分析结果见表2

表2各组大鼠ALT、AST活性比较

注：与空白对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，##P＜0.01；与水提取组比较，◆P<0.05，◆◆P<0.01。

表2结果显示：以水为溶媒提取所得的提取物，与模型组大鼠相比肝细胞索排列相对整齐、坏死灶明显减少炎性细胞浸润显著减少，且本发明组较30%乙醇实验组、70%乙醇实验组、0.1%碳酸氢钠溶液实验组效果更为显著。此外，肝组织病理切片镜检结果也证实了本发明提供的中药组合物能减轻干细胞变性、坏死、出血，促进肝细胞再生，对肝脏起到较好的保护作用。

实验例3：中药组合物提取方法的比较

1样品分组

实施例1-7、对比例1-3分别制成干膏粉，分组。

2对比项目

总黄酮含量：用比色法测定总黄酮含量。

3实验结果，见表3

表3不同提取方法对药材的提取效果

组别	总黄酮（mg·g-1）
		实施例1	67.367±1.74
实施例2	68.657±1.81
		实施例3	69.879±1.78
实施例4	68.677±1.81
		实施例5	68.980±1.79
实施例6	68.601±1.77
		实施例7	69.136±1.81
对比例1	57.541±1.78
		对比例2	59.327±1.79

对比例3	58.012±1.82

表3结果显示：本发明实施例1-7的总黄酮含量优于对比例1-3。实验结果提示本发明技术提取生物碱成分及总黄酮与现有技术相比，提取较完全。

保肝镇痛药效实验

一、对大鼠急性肝损伤的影响

1、实验材料

（1）动物

健康SPF级SD大鼠，雄性，体重180±20g，购买自广西医科大学实验动物中心（生产许可证号：SCXK桂2009-0002）。

（2）药品与试剂

本发明实施例1-7，对比例1-3，脂多糖(LPS)（SIGMA），ALT、AST测定试剂盒（南京建成生物工程研究所），0.9%生理盐水（广西南宁百会药业集团有限公司）。

2、实验分组

取大鼠120只，随机分成12组：正常对照组、模型对照组、实施例1-7组、对比例1-3组，每组10只。

3、实验方法

除正常组外，其余动物腹腔注射LPS10mg/kg造模。造模后大鼠常规喂养，自由饮水，饲养室光照10小时，黑暗14小时，温度21～25℃，湿度30％～70％。造模成功后，正常组及模型组均给予10mL/kg体积生理盐水水灌胃，实施例1-7和对比例1-3组给药剂量均按生药量3.1g/kg计，1次/d，连续12天。末次给药后30min，称重。摘眼球取血，以5000r/min离心15min，分离血清，按测定试剂盒（赖氏法）操作方法测定血清血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）；颈椎脱臼法处死大鼠，取肝大叶，10％甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，常规苏木精一伊红染色，观察肝组织病理改变。

4、实验结果

表4各组大鼠ALT、AST活性比较

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组比较，^☆P＜0.05，^☆☆P＜0.01；与对比例1组比较，^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与对比例2组比较，^▲P＜0.05，^▲▲p＜0.01；与对比例3组比较，^◆P＜0.05，^◆◆P＜0.01。

结论：

1）各组大鼠ALT、AST活性比较

表4结果显示，与正常对照组相比，模型组血清ALT与AST的含量明显升高（P＜0.01），表明此时小鼠肝细胞已经损伤，模型制备成功。与模型组相比，实施例1-7组及对比例1-3组血清中ALT、AST含量均显著降低（P＜0.01，P＜0.05）。说明它们能降低CCl4对肝细胞膜的溶解作用，对肝细胞膜具有一定的保护作用。且实施例1-7组ALT、AST含量与对比例1-3组相比，存在显著性差异（P＜0.01，P＜0.05）。

2）肝组织病理检查

光镜下正常组大鼠肝小叶结构正常，肝细胞排列整齐，形态正常，结构清晰；模型组大鼠肝细胞存在大量点状及炎性细胞浸润，坏死、小灶性坏死及灶性纤维化，肝细胞索排列紊乱；各药物组大鼠与模型组大鼠相比肝细胞索排列相对整齐、坏死灶明显减少炎性细胞浸润显著减少，且实施例1-7组较对比例1-3组效果更为显著。此外，肝组织病理切片镜检结果也证实了本发明提供的中药组合物能减轻干细胞变性、坏死、出血，促进肝细胞再生，对肝脏起到较好的保护作用。

结果表明，本发明提供的中药组合物对肝脏损伤具有保护作用，且效果优于现有技术。

二、对疼痛模型—醋酸所致小鼠扭体反应的影响

1、实验材料

（1）动物

健康SPF级昆明小鼠，18～22g，雌雄兼用，购买自广西医科大学实验动物中心（生产许可证号：SCXK桂2009-0002）。

（2）药品

本发明实施例1-7、对比例1-3、0.9%生理盐水（贵州科伦药业有限公司）、阿司匹林（阿斯利康制药有限公司）、冰醋酸（西陇化工股份有限公司）

2、实验方法

取昆明种小鼠120只，雌雄不拘，随机分为12组：空白对照组（生理盐水）、阿司匹林组（0.15g/kg）、实施例1-7组和对比例1-3组（4.5g/kg），每组10只。各组小鼠灌胃给药后lh，腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1mL/10g，观察并记录15min内各鼠发生扭体反应的次数并按下式计算镇痛百分率。

3、实验结果

表5各实验组药物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与对比例1组比较，^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与对比例2组比较，^▲P＜0.05，^▲▲p＜0.01；与对比例3组比较，^◆P＜0.05，^◆◆P＜0.01。

表5结果显示，与空白对照组比较，实施例1-7组及对比例1-3组小鼠扭体次数显著减少（P＜0.01，P＜0.05）；且实施例1-7组与对比例组1-3比较，存在显著性差异（P＜0.01，P＜0.05）。

结果表明，本发明提供的中药组合物镇痛作用优于现有技术。

临床试验：

对本发明保肝镇痛的疗效进行临床观察，通过对比服药前后患者的肝功能情况及疼痛缓解情况分析本发明的保肝镇痛效果。

1诊断依据

1.1肝功能异常

1.1.1蛋白质代谢功能检查：血清总蛋白、清蛋白、球蛋白、清蛋白与球蛋白比值A/G等高于或低于临床正常值。

1.1.2胆红素代谢功能检查：检测血清总胆红素、直接胆红素和间接胆红素。

1.1.3血清酶学检查：血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）正常参考值：比色法为5-25U（卡门单位），速率法<40U/L（37℃）；血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）正常参考值8-12U；血清碱性磷酸酶（ALP）正常参考值：比色法3-13金氏单位，速率法<240U/L。

1.2泌尿系结石疼痛程度检查

疼痛按照WHO疼痛程度分级(VRS)：0级为无痛，1～3级为轻度疼痛，4～7级为中度疼痛，8～10级为重度疼痛。将此评估表发给每个患者，在接受治疗前，由患者根据自己的疼痛,情况，在表中圈出自己所处的级别。

2病例选择

年龄20～70岁，愿意接受2周治疗者，签署进入临床研究知情同意书者。

3治疗药物

实验组：实施例3

对照组：结石通片，广西梧州制药（集团）股份有限公司

4疗效指标

4.1肝功能检查

显效：临床症状明显好转，肝脾肿大缩小或稳定不变，肝功能检查ALT，TB恢复正常；

有效：临床症状好转或稳定不变，肝脾肿大稳定不变，肝功能检查ALT，AST或(和)TB较前降低>50％以上；

无效：无改变，达不到以上标准或病情进展者。

4.2疼痛治疗效果

疼痛疗效评定用药2周后按照VRS分级再评估。

显效：疼痛减轻二级以上；

有效：疼痛减轻一级；

无效：疼痛未减轻或虽有减轻但疗程中又回到原有程度及以上。总有效率以显效与有效之和计算。

5临床分组及治疗方法

入组病例342例患者，男180例，女162例；平均约45岁；所有患者均经彩超或腹平片检查及化验确诊为泌尿系统结石、肝功能异常，结石直径在0.3～1.0cm之间；其中肾结石122例，输尿管结石120例，膀胱结石100例，病例按不同病种随机分为两组。

治疗方法：

实验组：本发明实施例5，每次服用量相当于原药材10g，一日三次。

对照组：结石通片，每次1.5g，一日三次。

实验组和对照组在服药同时，加大每日饮水量，平均日饮水量为3000～5000ml，多做运动，以跳跃运动或登楼梯运动为主，双手于背侧交叉叩击后腰部。

6结果

实验例组病例中大部分患者服用本发明实施例3后，阵发性腰痛等疼痛现象减小或消失，肝功能恢复或改善。

表6：治疗后肝功能检查结果

注：实验组与对照组比较，*P＜0.05。

表7：治疗后缓解疼痛的效果

注：实验组与对照组比较，*P＜0.05。

结果分析：上述结果表明，实验组对患者肝功能的改善和疼痛的缓解效果优于对照组，具有显著性差异（P<0.05）。本发明药物的保肝效果和对泌尿系结石疼痛的镇痛的功效优于结石通片。

典型病例：

1.高女士，38岁，5年前无明显诱因出现腰痛、耳鸣，入当地医院化验血常规、肾功、B超均正常。一年前出现腰痛，伴尿频、尿急、尿痛、口干伴脱发。经尿常规检查：潜血（2+），草酸钙结晶3+/HP，24h尿蛋白定量尿蛋白0.34g/l，尿肌酐4250umol/l；肝功能检查ALT：176，AST：97；舌暗苔白，脉细滑，诊断为肾结石。予本发明实施例9片剂，1日3次，每次5片。3周后，上述症状明显好转，血常规：潜学（-），24h尿蛋白定量尿蛋白0.15g/L，尿肌酐6500umol/L，ALT：61，AST：38，降低明显。

2.张某，男，39岁。一个月前突发左侧腰腹疼痛，痛势较重，伴肉眼血尿。B超探查提示输卵管结石，舌苔黄腻，脉弦细略数。予本发明实施例10颗粒剂，1日3次，每次2袋。并配合跳跃动作及日饮开水4000ml左右，一周后复诊，患者已无腰痛，小便畅利，舌淡红，苔薄白，脉细滑有力。复查尿常规：红细胞+，其余阴性；肝功能检查：AST：117，ALT：79。继续服用1周，每天饮水量为4000ml左右，一周后再复诊：患者自诉已无不适，结石排出，尿液清亮畅利，脉细滑，舌淡红，苔薄白，再次复查尿常规、B超探查均无异常，转氨酶降低明显。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (4)

1.一种保肝镇痛中药组合物，其特征在于其活性成分的制备方法包括以下步骤：

1）取以下重量份的药材：广金钱草456份、玉米须302份、石韦228份、鸡骨草228份、茯苓228份、车前草165份、海金沙草165份、白茅根228份；

2）广金钱草、石韦、鸡骨草加碱性水溶液提取2-3次，每次加药材总重量10-20倍量的质量-体积百分比为0.1-5%的碳酸氢钠溶液，每次提取时间为1-4小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

3）白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2-3次，每次加五味中药总重量6-12倍量的水，每次煎煮1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏；

4）将步骤2）、3）所得两种流浸膏混匀，即得。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述碳酸氢钠溶液质量-体积百分比为0.5-1%。

3.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，步骤3）所述水提方法为：白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2-3次，每次加五味中药总重量8-10倍量的水，每次煎煮2-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏。

4.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，步骤3）所述水提方法为：白茅根、茯苓、车前草、玉米须、海金沙草加水提取2次，每次加五味中药总重量8-10倍量的水，每次煎煮3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成流浸膏。