CN103695418B - 玉米低磷胁迫响应基因内含子长度多态性标记 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了玉米低磷胁迫响应基因内含子长度多态性标记。本发明在低磷胁迫响应基因的跨内含子的两侧外显子区域设计特异引物，即PSR‑ILP标记。在我国玉米生产及育种上广泛应用的30份骨干自交系中进PCR检测、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显色，不同自交系中得到扩增长度不同的片段，银染显色为不同自交系的PSR‑ILP标记。为玉米磷胁迫响应基因QTL定位和分子标记辅助育种提供操作简单、成本低、适用性强的分子标记，为玉米磷高效育种奠定了基础。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学和遗传育种领域，尤其涉及的是玉米低磷胁迫响应基因内含子长度多态性标记。
背景技术
玉米作为饲料、粮食、工业原料等多用途的第一大农作物，对我国工业的发展和人民的生活发挥着巨大的推动作用。其中自交系178是典型的耐低磷的材料，9782、Zheng58、Chang7-2等是典型的低磷敏感型材料，其他多为中间型材料。
在对磷利用分子遗传方面的研究深度与其在作物中的重要地位极不相称，远远落后于水稻等模式植物以及番茄和大豆等。植物低磷胁迫响应（Phosphate StarvationResponses，PSR）的遗传机制非常复杂，在长期的进化过程中形成了一个缺磷的分子应答反应网络调控。且磷胁迫特异性表达基因（如SQD2，PLDζ1等基因）在低磷胁迫分子应答网络调控中起着重要作用。内含子是结构基因中可转录但在mRNA成熟之前又被剪切的氨基酸非编码序列，广泛分布于真核生物基因组中。外显子位于氨基酸编码区，为保证编码的蛋白质能够行使正常的功能受到的选择压较大，进化过程中相对保守。而内含子位于非编码区，在进化过程中产生的突变、插入、缺失等变异由于受到的选择压力较小，在不同地域不同自交系材料中被保留下来的几率较大，表现出核苷酸多态性或长度多态性。其中内含子长度多态性（Intron Length Polymorphism，ILP）是最容易被鉴别的一种，因此可以在跨内含子的两侧外显子区域设计引物将ILP开发为分子标记。由于ILP标记位于基因内部，是一种基因标记，因而它是一种功能性标记。目前已在十几个物种中开发有ILP标记，且水稻中已利用ILP构建了首张连锁图谱，但迄今为止PSR-ILP标记的开发和应用尚无报道。
分子标记是进行标记辅助选择和分子设计育种所必需的基本工具，其中RFLP标记由于技术上比较繁琐，现在已很少使用。基于PCR扩增技术的随机标记RAPD和AFLP，因其扩增片段是随机的，这些标记构建的遗传图谱难以相互比较，这大大限制了其应用价值。微卫星SSR标记数量丰富、多态性高、检测方便，并且扩增产物具有特异性，克服了随机标记的缺点，因此成为目前植物遗传育种研究中最受欢迎的一种分子标记。但是，大多数SSR标记位于基因间区域。近年来由于基因组研究的发展，大量的InDel和SNP开发成分子标记，但这类标记的检测主要通过直接测序、Taqman探针、SNaPshot、DNA芯片技术等方法进行，成本高。目前适合于比较基因组学研究和适用于作物育种辅助选择等要求低成本、操作简便的分子标记还比较少。因此，开发基于功能基因并具有操作简单、成本低、功能性强的基因内分子标记显得十分必要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有分子标记的不足，提供了玉米低磷胁迫响应基因内含子长度多态性标记。
本发明的技术方案如下：
玉米低磷胁迫响应基因内含子长度多态性标记，其序列为：
ZmCRE1-ILP-F:5’CCTTTTGACCTGCGTTCTCT3’，ZmCRE1-ILP-R:5’TCCCGACCAAATTTGTCAAT3’；
ZmAMYB5-ILP-F: 5’TCTTCTACACCAACCGGAGTG 3’，
ZmAMYB5-ILP-R: 5’AGTCCCACCTCAATGTCCAC 3’；
ZmMGD2-ILP-F: 5’CTGGACCAGGTACCATTGCT 3’，
ZmMGD2-ILP-R: 5’CGGGCAACAAGACTAGCAG 3’；
ZmMYB62-ILP-F: 5’ACGGTAGACGAGGACCTCAC 3’，
ZmMYB62-ILP-R: 5’TGAAGTTGCCACGCTTCAC 3’；
ZmPHT2;1-ILP-F: 5’CGTTCCAAGGGAAGGACTCT 3’，
ZmPHT2;1-ILP-R: 5’ATCCACCCCTCCATACACC 3’；
ZmPLDζ1-ILP-F: 5’TTCACTTTCAGGTTAGCCATATCA 3’，
ZmPLDζ1-ILP-R: 5’ACACAAAATGCAACCCCAAT 3’；
ZmSQD2-ILP-F: 5’CACGTCAGTTGCACCTTTTG 3’，
ZmSQD2-ILP-R: 5’ATGGATTATGTCCGGCTTGA 3’；
ZmSUS1-ILP-F: 5’CTCGTGGACTTCTTCGACAA 3’，
ZmSUS1-ILP-R: 5’TCCAGGTTGGACACGTACTTC 3’；
ZmPTF1-ILP-F: 5’AGGGGCACAAAGTGATTCTG 3’，
ZmPTF1-ILP-R: 5’CTGCTTCTGAGTCTTGAAACCA 3’。
本发明在低磷胁迫响应基因的跨内含子的两侧外显子区域设计特异引物，即PSR-ILP标记。在我国玉米生产及育种上广泛应用的30份骨干自交系中进PCR检测、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显色，不同自交系中得到扩增长度不同的片段，银染显色为不同自交系的PSR-ILP标记。为玉米磷胁迫响应基因QTL定位和分子标记辅助育种提供操作简单、成本低、适用性强的分子标记，为玉米磷高效育种奠定了基础。
附图说明
图1为玉米PSR-ILP标记PCR扩增检测结果。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。
实施例1 ZmCRE1基因内含子长度多态性标记开发
1、提取基因组DNA
取30份玉米自交系（表1，由四川农业大学玉米研究所提供）各自幼苗叶片，采用CTAB法提取基因组DNA。
表1 PCR扩增所用自交系材料
| 编号 | 自交系 | 系谱 | 编号 | 自交系 | 系谱 |
| 01 | 178 | 美国杂交种78599选系 | 16 | Qi205 | （VeiAi141×ZhongXi017）×Population70 |
| 02 | 9782 | 美国杂交种 | 17 | Dan599 | 美国杂交种78599选系 |
| 03 | B73 | BSSS群体选系 | 18 | Chang7-2 | 黄早四×潍95×S901 |
| 04 | MO17 | CL187-2×C103 | 19 | Dan340 | 白骨旅9×有稃玉米（辐射） |
| 05 | CML166 | P66C1F215-4-1-2-BB-2-BBB | 20 | S37 | SUWAN1群 |
| 06 | (CML-306)-B | SINT.AM.TSR-19-1-2-3-1-BB-f | 21 | Jiao51 | 贵州地方种选系 |
| 07 | (CML-473)-B | P31C4S5B-23-#-#-4-BBBB | 22 | Dan598 | 美国杂交种78599选系 |
| 08 | Ye478 | 沈5003×U8112 | 23 | Zheng58 | YE478天然变异株选系 |
| 09 | Ye107 | Foreign Hybrid XL80 | 24 | Liao138 | 丹340改良 |
| 10 | Qi319 | 美国杂交种78599选系 | 25 | Huotanghuang | Mo17×获唐白42×海1917 |
| 11 | Zong31 | 自330×综合种选系 | 26 | K10 | 沈5003×长3 |
| 12 | Ji853 | 黄早四×自330 | 27 | 835 | U8112×Ye515 |
| 13 | Tie7922 | 美国杂交种3382选系 | 28 | R15 | 美国杂交种 |
| 14 | P138 | 美国杂交种78599选系 | 29 | Duohuang29 | 美国杂交种78599选系 |
| 15 | K12 | 黄早四×WeiChun | 30 | ES40 | 四川地方种选系 |
2、PSR-ILP特异引物设计
在MaizeGDB数据库中下载ZmCRE1基因（GRMZM2G151223）的基因序列和cDNA序列。经Blast序列比对和序列分析，对ZmCRE1基因的第7内含子进行特异引物设计。分别在跨第7内含子的第7外显子区域和第8外显子区域设计上下游引物，并经过特异引物筛选、优化得到上游引物ZmCRE1-ILP-F和下游引物ZmCRE1-ILP-R，具体如下：
ZmCRE1-ILP-F: 5’ CCTTTTGACCTGCGTTCTCT 3’
ZmCRE1-ILP-R: 5’ TCCCGACCAAATTTGTCAAT 3’
3、PCR扩增及检测
3.1 PCR反应体系
PCR反应采用25 μL的体系，具体成分：基因组DNA 50 ng，上下游引物ZmCRE1-ILP-F和ZmCRE1-ILP-R各0.2 µmol/L，dNTP 混合物0.2 mmol/L，Taq（2.5U/µL）0.5µL，10×TaqBuffer 2.5µL，补ddH2O至总体积25 µL。
3.2 PCR反应程序
94℃预变性，5 min；94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸30 s，35个循环；72℃延伸5 min。
3.3 电泳检测及显色
产物上样于6%的变性聚丙烯酰胺凝胶（配方见表2），75 V电泳2.0 h，银染显色。
表2 6%变性聚丙烯酰胺凝胶的制备
实施例2 ZmAMYB5基因内含子长度多态性标记开发
1、提取基因组DNA，同实施例1。
2、PSR-ILP特异引物设计
在MaizeGDB数据库中下载ZmAMYB5基因（GRMZM2G058310）的基因序列和cDNA序列。经Blast序列比对和序列分析，对ZmAMYB5基因第2内含子进行特异引物设计。分别在跨第2内含子的第2外显子区域和第3外显子区域设计上下游引物，并经过特异引物筛选、优化得到上游引物ZmAMYB5-ILP-F和下游引物ZmAMYB5-ILP-R，具体如下：
ZmAMYB5-ILP-F: 5’ TCTTCTACACCAACCGGAGTG 3’
ZmAMYB5-ILP-R: 5’ AGTCCCACCTCAATGTCCAC 3’
3、PCR扩增及检测
3.1 PCR反应体系 同实施例1。
3.2 PCR反应程序
94℃预变性，5 min；94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸25 s，35个循环；72℃延伸5 min。
3.3 电泳检测及显色，同实施例1。
实施例3 ZmMGD2基因内含子长度多态性标记开发
1、提取基因组DNA，同实施例1。
2、PSR-ILP特异引物设计
在MaizeGDB数据库中下载ZmMGD2基因（GRMZM2G178892）的基因序列和cDNA序列。经Blast序列比对和序列分析，对ZmMGD2基因的第8内含子进行特异引物设计。分别在跨第8内含子的第8外显子区域和第9外显子区域设计上下游引物，并经过特异引物筛选、优化得到上游引物ZmMGD2-ILP-F和下游引物ZmMGD2-ILP-R，具体如下：
ZmMGD2-ILP-F: 5’ CTGGACCAGGTACCATTGCT 3’
ZmMGD2-ILP-R: 5’ CGGGCAACAAGACTAGCAG 3’
3、PCR扩增及检测
3.1 PCR反应体系，同实施例1。
3.2 PCR反应程序
94℃预变性，5 min；94℃变性30 s，63℃（每循环递减1℃）退火30 s，72°C延伸30s，15个循环；94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸25 s，25个循环；72℃延伸5 min。
3.3 电泳检测及显色，同实施例1。
实施例4 ZmMYB62基因内含子长度多态性标记开发
1、提取基因组DNA，同实施例1。
2、PSR-ILP特异引物设计
在MaizeGDB数据库中下载ZmMYB62基因（GRMZM2G143046）的基因序列和cDNA序列。经Blast序列比对和序列分析，对ZmMYB62基因的第2内含子进行特异引物设计。分别在跨第2内含子的第2外显子区域和第3外显子区域设计上下游引物，并经过特异引物筛选、优化得到上游引物ZmMYB62-ILP-F和下游引物ZmMYB62-ILP-R，具体如下：
ZmMYB62-ILP-F: 5’ ACGGTAGACGAGGACCTCAC 3’
ZmMYB62-ILP-R: 5’ TGAAGTTGCCACGCTTCAC 3’
3、PCR扩增及检测
3.1 PCR反应体系，同实施例1。
3.2 PCR反应程序
94℃预变性，5 min；94℃变性30 s，63℃（每循环递减1℃）退火30 s，72℃延伸30s，15个循环；94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸20 s，25个循环；72℃延伸5 min。
3.3 电泳检测及显色，同实施例1。
实施例5 ZmPHT2;1基因内含子长度多态性标记开发
1、提取基因组DNA，同实施例1。
2、PSR-ILP特异引物设计
在MaizeGDB数据库中下载ZmPHT2;1基因（GRMZM2G092780）的基因序列和cDNA序列。经Blast序列比对和序列分析，对ZmPHT2;1基因的第1内含子进行特异引物设计。分别在跨第1内含子的第1外显子区域和第2外显子区域设计上下游引物，并经过特异引物筛选、优化得到上游引物ZmPHT2;1-ILP-F和下游引物ZmPHT2;1-ILP-R，具体如下：
ZmPHT2;1-ILP-F: 5’ CGTTCCAAGGGAAGGACTCT 3’
ZmPHT2;1-ILP-R: 5’ ATCCACCCCTCCATACACC 3’
3、PCR扩增及检测
3.1 PCR反应体系，同实施例1。
3.2 PCR反应程序
94℃预变性，5 min；94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸50 s，35个循环；72℃延伸5 min。
3.3 电泳检测及显色，同实施例1。
实施例6 ZmPLDζ1基因内含子长度多态性标记开发
1、提取基因组DNA，同实施例1。
2、PSR-ILP特异引物设计
在MaizeGDB数据库中下载ZmPLDζ1基因（GRMZM2G066485）的基因序列和cDNA序列。经Blast序列比对和序列分析，对ZmPLDζ1基因的第16内含子进行特异引物设计。分别在跨第16内含子的第16外显子区域和第17外显子区域设计上下游引物，并经过特异引物筛选、优化得到上游引物ZmPLDζ1-ILP-F和下游引物ZmPLDζ1-ILP-R，具体如下：
ZmPLDζ1-ILP-F: 5’ TTCACTTTCAGGTTAGCCATATCA 3’
ZmPLDζ1-ILP-R: 5’ ACACAAAATGCAACCCCAAT 3’
3、PCR扩增及检测
3.1 PCR反应体系，同实施例1。
3.2 PCR反应程序
94℃预变性，5 min；94℃变性30 s，63℃（每循环递减1℃）退火30 s，72℃延伸30s，15个循环；94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸40 s，25个循环；72℃延伸5 min。
3.3 电泳检测及显色，同实施例1。
实施例7 ZmSQD2基因内含子长度多态性标记开发
1、提取基因组DNA，同实施例1。
2、PSR-ILP特异引物设计
在MaizeGDB数据库中下载ZmSQD2基因（GRMZM2G049190）的基因序列和cDNA序列。经Blast序列比对和序列分析，对ZmSQD2基因的第3内含子进行特异引物设计。分别在跨第3内含子的第3外显子区域和第4外显子区域设计上下游引物，并经过特异引物筛选、优化得到上游引物ZmSQD2-ILP-F和下游引物ZmSQD2-ILP-R，具体如下：
ZmSQD2-ILP-F: 5’ CACGTCAGTTGCACCTTTTG 3’
ZmSQD2-ILP-R: 5’ ATGGATTATGTCCGGCTTGA 3’
3、PCR扩增及检测
3.1 PCR反应体系，同实施例1。
3.2 PCR反应程序
94℃预变性，5 min；94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸30 s，35个循环；72℃延伸5 min。
3.3 电泳检测及显色，同实施例1。
实施例8 ZmSUS1基因内含子长度多态性标记开发
1、提取基因组DNA，同实施例1。
2、PSR-ILP特异引物设计
在MaizeGDB数据库中下载ZmSUS1基因（GRMZM2G152908）的基因序列和cDNA序列。经Blast序列比对和序列分析，对ZmSUS1基因的第13内含子进行特异引物设计。分别在跨第13内含子的第13外显子区域和第14外显子区域设计上下游引物，并经过特异引物筛选、优化得到上游引物ZmSUS1-ILP-F和下游引物ZmSUS1-ILP-R，具体如下：
ZmSUS1-ILP-F: 5’ CTCGTGGACTTCTTCGACAA 3’
ZmSUS1-ILP-R: 5’ TCCAGGTTGGACACGTACTTC 3’
3、PCR扩增及检测
3.1 PCR反应体系，同实施例1。
3.2 PCR反应程序
94℃预变性，5 min；94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸25 s，35个循环；72℃延伸5 min。
3.3 电泳检测及显色，同实施例1。
实施例9 ZmPTF1基因内含子长度多态性标记开发
1、提取基因组DNA，同实施例1。
2、PSR-ILP特异引物设计
在MaizeGDB数据库中下载ZmPTF1基因（GRMZM2G024530）的基因序列和cDNA序列。经Blast序列比对和序列分析，对ZmPTF1基因的第3内含子进行特异引物设计。分别在跨第3内含子的第3外显子区域和第4外显子区域设计上下游引物，并经过特异引物筛选、优化得到上游引物ZmPTF1-ILP-F和下游引物ZmPTF1-ILP-R，具体如下：
ZmPTF1-ILP-F: 5’ AGGGGCACAAAGTGATTCTG 3’
ZmPTF1-ILP-R: 5’ CTGCTTCTGAGTCTTGAAACCA 3’
3、PCR扩增及检测
3.1 PCR反应体系，同实施例1。
3.2 PCR反应程序
94℃预变性，5 min；94℃变性30 s，63℃（每循环递减1℃）退火30 s，72℃延伸30s，15个循环；94℃变性30 s，54℃退火30 s，72℃延伸20 s，25个循环；72℃延伸5 min。
3.3 电泳检测及显色，同实施例1。
实施例10 玉米重要磷胁迫响应基因内含子长度多态性标记最优化结果
最终优化获得玉米重要磷胁迫响应基因内含子长度多态性特异性标记，结果如图1所示。
1、玉米ZmCRE1基因特异性标记ZmCRE1-ILP在不同自交系中的特异性表现
在178、9782、B73、Mo17、等30份磷耐性不同的材料中进行PCR扩增，经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和银染显色。ZmCRE1-ILP在B73中扩增片段大小为360 bp，在其余各自交系中扩增的电泳条带与360 bp电泳条带相同或扩增了小于360 bp电泳条带，表现出该标记特异的长度多态性。
2、玉米ZmAMYB5基因特异性标记ZmAMYB5-ILP在不同自交系中的特异性表现
在178、9782、B73、Mo17等30份磷耐性不同的材料中进行PCR扩增，经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和银染显色。ZmAMYB5-ILP在B73中扩增片段大小为282 bp，在其余各自交系中扩增电泳条带与282 bp电泳条带相同或小于282 bp电泳条带，表现出该标记特异的长度多态性。
3、玉米ZmMGD2基因特异性标记ZmMGD2-ILP在不同自交系中的特异性表现
在178、9782、B73、Mo17等30份磷耐性不同的材料中进行PCR扩增，经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和银染显色。ZmMGD2-ILP在B73中扩增片段大小为405 bp，在其余各自交系中扩增电泳条带与405 bp电泳条带相同或大于405 bp电泳条带，表现出该标记特异的长度多态性。
4、玉米ZmMYB62基因特异性标记ZmMYB62-ILP在不同自交系中的特异性表现
在178、9782、B73、Mo17等30份磷耐性不同的材料中进行PCR扩增，经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和银染显色。ZmMYB62-ILP在B73中扩增片段大小为279 bp，在其余各自交系中扩增电泳条带与279 bp电泳条带相同或小于279 bp电泳条带，表现出该标记丰富的长度多态性。
5、玉米ZmPHT2;1基因特异性标记ZmPHT2;1-ILP在不同自交系中的特异性表现
在178、9782、B73、Mo17等30份磷耐性不同的材料中进行PCR扩增，经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和银染显色。ZmPHT2;1-ILP在B73中扩增片段大小为828 bp，在其余各自交系中扩增电泳条带与828 bp电泳条带相同或小于828 bp电泳条带，且在部分材料无带，表现出该标记特异的长度多态性和有无多态性。
6、玉米ZmPLDζ1基因特异性标记ZmPLDζ1-ILP在不同自交系中的特异性表现
在178、9782、B73、Mo17等30份磷耐性不同的材料中进行PCR扩增，经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和银染显色。ZmPLDζ1-ILP在B73中扩增片段大小为555 bp，在其余各自交系中扩增电泳条带与555 bp电泳条带相同或小于555 bp电泳条带，表现出该标记特异的长度多态性。
7、玉米ZmSQD2基因特异性标记ZmSQD2-ILP在不同自交系中的特异性表现
在178、9782、B73、Mo17等30份磷耐性不同的材料中进行PCR扩增，经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和银染显色。ZmSQD2-ILP在B73中扩增片段大小为794 bp，在其余各自交系中扩增电泳条带或与794 bp电泳条带相同，或小于794 bp电泳条带，或大于794 bp电泳条带，表现出该标记丰富、特异的长度多态性。
8、玉米ZmSUS1基因特异性标记ZmSUS1-ILP在不同自交系中的特异性表现
在178、9782、B73、Mo17等30份磷耐性不同的材料中进行PCR扩增，经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和银染显色。ZmSUS1-ILP在B73中扩增片段大小为247 bp，在其余各自交系中扩增电泳条带与247 bp电泳条带相同或小于247 bp电泳条带，表现出该标记特异的长度多态性。
9、玉米ZmPTF1基因特异性标记ZmPTF1-ILP在不同自交系中的特异性表现
在178、9782、B73、Mo17等30份磷耐性不同的材料中进行PCR扩增，经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和银染显色。ZmPTF1-ILP在B73中扩增片段大小为298 bp，在其余各自交系中扩增电泳条带与298 bp电泳条带相同或小于298 bp电泳条带，表现出该标记特异的长度多态性。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 申请人 四川农业大学
<120> 玉米低磷胁迫响应基因内含子长度多态性标记
<130>
<160> 18
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> ZmCRE1-ILP-F
<400> 1
ccttttgacc tgcgttctct 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> ZmCRE1-ILP-R
<400> 2
tcccgaccaa atttgtcaat 20
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> ZmAMYB5-ILP-F
<400> 3
tcttctacac caaccggagt g 21
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> ZmAMYB5-ILP-R
<400> 4
agtcccacct caatgtccac 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> ZmMGD2-ILP-F
<400> 5
ctggaccagg taccattgct 20
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> ZmMGD2-ILP-R
<400> 6
cgggcaacaa gactagcag 19
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> ZmMYB62-ILP-F
<400> 7
acggtagacg aggacctcac 20
<210> 8
<211> 19
<212> DNA
<213> ZmMYB62-ILP-R
<400> 8
tgaagttgcc acgcttcac 19
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> ZmPHT2;1-ILP-F
<400> 9
cgttccaagg gaaggactct 20
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<211> 19
<212> DNA
<213> ZmPHT2;1-ILP-R
<400> 10
atccacccct ccatacacc 19
<210> 11
<211> 24
<212> DNA
<213> ZmPLDζ1-ILP-F
<400> 11
ttcactttca ggttagccat atca 24
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<211> 20
<212> DNA
<213> ZmPLDζ1-ILP-R
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acacaaaatg caaccccaat 20
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<212> DNA
<213> ZmSQD2-ILP-F
<400> 13
cacgtcagtt gcaccttttg 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> ZmSQD2-ILP-R
<400> 14
atggattatg tccggcttga 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> ZmSUS1-ILP-F
<400> 15
ctcgtggact tcttcgacaa 20
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<211> 21
<212> DNA
<213> ZmSUS1-ILP-R
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tccaggttgg acacgtactt c 21
<210> 17
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<212> DNA
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aggggcacaa agtgattctg 20
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<212> DNA
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<400> 18
ctgcttctga gtcttgaaac ca 22
Claims (1)
1.玉米低磷胁迫响应基因内含子长度多态性标记扩增引物对，其特征是，该标记扩增引物对为在低磷胁迫响应基因的跨内含子的两侧外显子区域设计特异引物对，所述特异引物对的序列为：
ZmCRE1-ILP-F:5’CCTTTTGACCTGCGTTCTCT 3’，
ZmCRE1-ILP-R:5’TCCCGACCAAATTTGTCAAT 3’；或
ZmAMYB5-ILP-F:5’TCTTCTACACCAACCGGAGTG 3’，
ZmAMYB5-ILP-R:5’AGTCCCACCTCAATGTCCAC 3’；或
ZmMGD2-ILP-F:5’CTGGACCAGGTACCATTGCT 3’，
ZmMGD2-ILP-R:5’CGGGCAACAAGACTAGCAG 3’；或
ZmMYB62-ILP-F:5’ACGGTAGACGAGGACCTCAC 3’，
ZmMYB62-ILP-R:5’TGAAGTTGCCACGCTTCAC 3’；或
ZmPHT2；1-ILP-F:5’CGTTCCAAGGGAAGGACTCT 3’，
ZmPHT2；1-ILP-R:5’ATCCACCCCTCCATACACC 3’；或
ZmPLDζ1-ILP-F:5’TTCACTTTCAGGTTAGCCATATCA 3’，
ZmPLDζ1-ILP-R:5’ACACAAAATGCAACCCCAAT 3’；或
ZmSQD2-ILP-F:5’CACGTCAGTTGCACCTTTTG 3’，
ZmSQD2-ILP-R:5’ATGGATTATGTCCGGCTTGA 3’；或
ZmSUS1-ILP-F:5’CTCGTGGACTTCTTCGACAA 3’，
ZmSUS1-ILP-R:5’TCCAGGTTGGACACGTACTTC 3’；或
ZmPTF1-ILP-F:5’AGGGGCACAAAGTGATTCTG 3’，
ZmPTF1-ILP-R:5’CTGCTTCTGAGTCTTGAAACCA 3’。
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