CN103645177A - 一种改进苏丹红1检测试剂盒的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种改进苏丹红1检测试剂盒的方法，属于分析化学领域。该方法采用磁固相萃取的方式对样品进行前处理选择性富集苏丹红1，再用苏丹红1检测试剂盒进行检测，包括以下步骤：准确称取样品于容器中，加入提取溶剂，振荡，静置，取上清液为上样液；取上样液加入到装有磁固相萃取材料的容器中，振荡，外加磁铁，倒出上清液；加入正己烷，振荡，外加磁铁，倒出上清液；加入丙酮，振荡，取上清滴加于点样板，吹干；参照检测试剂盒操作说明书。本发明通过磁固相萃取可以有效快速的富集样品中的苏丹红1，使试剂盒的检出限降低了3倍，在很大程度上避免了假阳性及漏检情况；本发明具有简单、快速、省溶剂、易操作等优点，适用于进行现场检测。

Description

一种改进苏丹红1检测试剂盒的方法

 

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种改进苏丹红1检测试剂盒的方法。

背景技术

苏丹染料是偶氮染料中的一种，它包括苏丹红1–4、苏丹红B、苏丹红7B、苏丹红G、苏丹橙G、苏丹黑、二甲基黄、对位红。苏丹染料广泛应用于科学研究、颜料和化妆品中。同时，由于低廉的价格和好的着色效果，苏丹红1–4被应用于一些食品中作为添加剂来提高含有辣椒的食品（如含辣椒、咖喱、棕榈油的食品，冷冻肉，混合香辛料）的着色效果。已有研究表明苏丹红1–4对人体具有致癌性，对人体健康造成了极大的威胁，它们是不允许作为食品添加剂的。然而，近年来还是出现了不同程度的苏丹红添加事件，2005年2月2日，英国第一食品公司（Premier Foods）向英国环境卫生部门报告，该公司2002年从印度进口的5吨辣椒粉中含有苏丹红1染料；2005年3月15日，著名连锁快餐品牌肯德基的两个品种新奥尔良烤翅新奥尔良烤鸡腿堡调料在检查中被发现含有苏丹红1成分；2006年11月12日，央视播报了北京市个别市场和经销企业售卖来自河北石家庄等地用添加苏丹红的饲料喂鸭所生产的红心鸭蛋，并在该批鸭蛋中检测出苏丹红1，类似这样的苏丹红添加事件还有很多，考虑到苏丹红1是常用添加染料，所以本发明主要研究苏丹红1。

苏丹红1常见的分析检测方法有HPLC、电化学、质谱等，但这些方法依赖于特殊设备，不适用于现场分析。近年来，出现了一些新的检测手段，试剂盒就是其中之一，与传统实验室操作相比，采用试剂盒进行样品处理的分析模式，最主要的优点和特点是简单、快速、方便，整个检测过程实现标准化、流水化工作，适用于现场操作，在很短的时间里可以得到检测结果。由于试剂盒方法被广泛认可及在某些领域的不可替代性，越来越多的检测机构使用试剂盒检测食品中的苏丹红。这种状况既存在良性健康发展，也存在着不可忽视的隐患，一方面各国对苏丹红在食品中的最高残留限量的规定越来越低，对苏丹红试剂盒的灵敏度要求也随之提高，另一方面辣椒食品中基质复杂，杂质干扰严重，使其易产生假阳性结果以及漏检的情况。所以，在试剂盒检测前进行样品前处理是非常必要的。

苏丹红1是一类脂溶性染料，不溶于水，易溶于多种有机溶剂。基于苏丹红1的物理化学性质，有很多样品前处理方法，如正相固相萃取，液相微萃取，加压溶剂萃取，超声辅助萃取等。固相萃取由于其重现性较好，使用较为普遍，但用时长，不适用于现场分析。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种改进苏丹红1检测试剂盒的方法。该方法采用磁固相萃取对样品进行前处理选择性富集苏丹红1，再用试剂盒进行检测，能有效避免漏检及假阳性的情况。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种改进苏丹红1检测试剂盒的方法，包括以下步骤：

（1）提取苏丹红1：准确称取样品于容器中，加入提取溶剂，振荡，静置，取上清液为上样液；

（2）上样：取上样液，加入到装有磁固相萃取材料的容器中，振荡，外加磁铁，倒出上清液；

（3）清洗：加入正己烷，振荡，外加磁铁，倒出上清液；

（4）解吸：加入丙酮，振荡，取上清滴加于点样板，吹干；

（5）检测及判断：参照苏丹红1检测试剂盒操作说明书。

步骤（1）中所述的提取溶剂优选为乙腈、乙酸乙酯、正己烷、丙酮或上述溶剂以任意比例混合的溶液。提取溶剂的作用是：在有效地提取出分析物的前提下，尽可能少地提取杂质等干扰物。

步骤（2）中所述的磁固相萃取材料优选为聚吡咯包裹磁性四氧化三铁的复合材料，通过聚吡咯与分析物之间的π-π作用富集苏丹红1。所述的聚吡咯包裹磁性四氧化三铁的复合材料优选通过包含如下步骤的方法制备得到：将1.0 g磁性Fe₃O₄、9.1 g FeCl₃·6H₂O和100 mL去离子水加入到250 mL烧瓶，在25 ℃摇床下，150 r/min摇3 h；再加入20 mL SDS（5.85wt%）和0.5 mL吡咯单体，继续摇12 h；然后用水和乙醇依次将得到的材料清洗至上清液澄清，于60 ℃真空干燥箱中烘干备用。

考虑到需要适用于现场操作的方法，所述的振荡优选为手动摇20 s～2 min；步骤（4）中所述的吹干优选为用吸耳球或电吹风吹干。

优选的，所述的苏丹红1检测试剂盒优选为广州达元食品安全技术有限公司的苏丹红快速检测盒。

优选的，所述的的改进苏丹红1检测试剂盒的方法，包括以下步骤：

（1）提取苏丹红1：准确称取1.0 g样品于容器中，加入5～6 mL提取溶剂，振荡，静置，取上清液为上样液；

（2）上样：取上样液，加入到装有50 mg磁固相萃取材料的容器中，振荡，外加磁铁，倒出上清液；

（3）清洗：加入正己烷，振荡，外加磁铁，倒出上清液；

（4）解吸：加入1 mL丙酮，振荡，取上清滴加于点样板，吹干；

（5）检测及判断：参照苏丹红1检测试剂盒操作说明书。

本发明相对于现有技术具有如下优点和效果：本发明将磁固相萃取引入样品前处理中，并结合试剂盒检测，具有简单、快速、省溶剂、易操作等优点，非常适用于进行现场检测。本发明以聚吡咯包裹磁性四氧化三铁的复合材料作为磁固相萃取材料对样品进行前处理，可以有效快速的富集样品中的苏丹红1，再结合试剂盒进行检测，使试剂盒的检出限降低了3倍。本发明既能保持苏丹红试剂盒快速简单，现场检测的优点，又在一定程度上改进了试剂盒，避免假阳性及漏检情况。

附图说明

图1是不经过磁固相萃取的辣椒粉用试剂盒检测的结果图，其中，A、B、C分别为苏丹红1在辣椒粉中的浓度为0 μg/g、6 μg/g、5 μg/g的结果图；

图2是经过磁固相萃取的辣椒粉用试剂盒检测的结果图，其中，A、B、C分别为苏丹红1在辣椒粉中的浓度为3 μg/g 、2 μg/g、1 μg/g的结果图；

图3是不同基质经过磁固相萃取用试剂盒检测的结果图，其中，A-H依次为辣椒油、辣椒酱、番茄酱、草莓酱、混合果蔬、果缤纷、鸭蛋黄、腊肠的结果图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

下述实施例中所使用的苏丹红1检测试剂盒为广州达元食品安全技术有限公司的苏丹红快速检测盒，检测方法参照操作说明书，具体步骤如下：从包装袋中取出检测卡，将检测卡放平，用一次性滴管吸取待测液，垂直滴加两滴处理好样本到微孔中，吹吸混匀，室温静置反应5 min，吸取微孔中全部样本滴加到检测卡的加样孔，加样后开始计时，8-10 min内观察结果，12 min后无效。结果判断：阳性：若质控线（C线）显色，检测线（T线）不显色，表示样品中含有苏丹红1；阴性：若质控线（C线）和检测线（T线）均显色，表示样品中不含有苏丹红1；无效：若质控线（C线）不显色，表示存在不正确的操作工程或检测卡已失效。在此过程中，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新检测。

实施例1

将本发明方法应用于辣椒粉中。

首先合成聚吡咯包裹磁性四氧化三铁的复合材料，具体合成步骤如下：以溶剂热法合成磁性Fe₃O₄；将1.0 g磁性Fe₃O₄、9.1 g FeCl₃·6H₂O和100 mL去离子水加入到250 mL烧瓶，在25 ℃摇床下，150 r/min摇3 h；再加入20 mL SDS（5.85wt%）和0.5 mL吡咯单体，继续摇12 h；然后用水和乙醇依次将得到的材料清洗至上清液澄清，于60 ℃真空干燥箱中烘干备用。

不经过磁固相萃取：称取1.0 g的辣椒粉于10 mL离心管内，加入苏丹红1标准品（0 μg/g、6 μg/g、5 μg/g），6 mL正己烷，手动摇1 min，静置，取上清液用吸耳球/电吹风吹干，用苏丹红1检测试剂盒进行检测。

检测结果见图1，加入的苏丹红1在辣椒粉中浓度为0 μg/g时，检测显示阴性；苏丹红1在辣椒粉中浓度为6 μg/g时，检测显示阳性；苏丹红1在辣椒粉中浓度为5 μg/g时，显示阴性。即：空白的辣椒粉提取液中未检测到苏丹红1；不经过磁固相萃取，试剂盒能检测到6 μg/g（在辣椒粉中的浓度）。

经过磁固相萃取：称取1.0 g的辣椒粉于10 mL离心管内，加入苏丹红1标准品（3 μg/g、2 μg/g、1 μg/g），6 mL正己烷，手动摇1 min，静置，取上清液为上样液。称取50 mg聚吡咯包裹磁性四氧化三铁的复合材料于安普瓶内，加入上样液，手动摇1 min，外加磁铁，倒出上清液；加入2 mL正己烷清洗，手动摇20 s，外加磁铁，倒出上清液；加入1 mL丙酮解吸，手动摇2 min，倒出上清液于1.5 mL离心管内，滴加溶液于点样板，用吸耳球/电吹风吹干，随后用苏丹红1检测试剂盒进行检测。

检测结果见图2，样品经过磁固相萃取，苏丹红1在辣椒粉中浓度为3 μg/g时，检测显示阳性；苏丹红1在辣椒粉中浓度为2 μg/g时，显示阳性；苏丹红1在辣椒粉中浓度为1 μg/g时，检测显示阴性。即：经过处理，试剂盒能检测到2 μg/g（在辣椒粉中的浓度）。

综上，样品不经过磁固相萃取，试剂盒的检出限为6 μg/g；经过磁固相萃取，试剂盒的检出限为2 μg/g。即：经过磁固相萃取，试剂盒的检出限降低了3倍，在很大程度上改进了避免了漏检情况。

实施例2

将本发明方法应用于辣椒油、香辣酱、草莓酱、软性饮料等基质中。

各基质的样品处理过程如下：

辣椒油：取辣椒油1.0 g，加入正己烷6 mL，手摇1 min混匀，静置，取上清液为上样液；

香辣酱：取香辣酱1.0 g，加入正己烷6 mL，手摇1 min，静置，取上清液为上样液；

农夫果园混合果蔬：取饮料1.0 g，加入正己烷/丙酮（4/1，v/v）6 mL，手摇1 min混匀，静置，取上清液作为上样液；

果缤纷果汁：取饮料1.0 g，加入正己烷/丙酮（4/1，v/v）6 mL，手摇1 min，静置，取上清液为上样液；

番茄酱：称取番茄酱1.0 g，加入1 mL H₂O，再加入5 mL正己烷/丙酮（4/1，v/v），手摇1 min，取上层有机相，加无水硫酸钠0.5 g，手摇0.5 min，静置，取上清液作为上样液；

草莓酱：取草莓酱1.0 g，加入1 mL H₂O，再加入5 mL正己烷/丙酮（4/1，v/v），手摇1 min，静置，取上清液为上样液；

鸭蛋黄：把鸭蛋打碎，倒出蛋清，留下蛋黄，用玻璃棒搅碎，取1.0 g蛋黄，加入6 mL正己烷溶解，手摇2 min，静置，取上清液为上样液；

腊肠：将腊肠切成小丁，用榨汁机搅碎，称取1.0 g，加入6 mL正己烷溶解，手摇1 min，静置，取上清液为上样液；

以上处理过程中均加入苏丹红1标准品（在基质中浓度为2 μg/g）。磁固相萃取过程同实施例1辣椒粉处理过程。

用苏丹红1检测试剂盒检测结果见图3，苏丹红1在不同基质中浓度为2 μg/g时，检测均显示阳性，即：苏丹红1在不同基质中浓度为2 μg/g以上均能检测到。表明此方法适用多种基质，体现了方法的普适性。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种改进苏丹红1检测试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）提取苏丹红1：准确称取样品于容器中，加入提取溶剂，振荡，静置，取上清液为上样液；

（2）上样：取上样液，加入到装有磁固相萃取材料的容器中，振荡，外加磁铁，倒出上清液；

（3）清洗：加入正己烷，振荡，外加磁铁，倒出上清液；

（4）解吸：加入丙酮，振荡，取上清滴加于点样板，吹干；

（5）检测及判断：参照苏丹红1检测试剂盒操作说明书。

2.根据权利要求1所述的改进苏丹红1检测试剂盒的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的提取溶剂为乙腈、乙酸乙酯、正己烷、丙酮或上述溶剂以任意比例混合的溶液。

3.根据权利要求1所述的改进苏丹红1检测试剂盒的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的磁固相萃取材料为聚吡咯包裹磁性四氧化三铁的复合材料。

4.根据权利要求3所述的改进苏丹红1检测试剂盒的方法，其特征在于：所述的聚吡咯包裹磁性四氧化三铁的复合材料通过包含如下步骤的方法制备得到：将1.0 g磁性Fe₃O₄、9.1 g FeCl₃·6H₂O和100 mL去离子水加入到250 mL烧瓶，在25 ℃摇床下，150 r/min摇3 h；再加入20 mL 5.85wt%的SDS和0.5 mL吡咯单体，继续摇12 h；然后用水和乙醇依次将得到的材料清洗至上清液澄清，于60 ℃真空干燥箱中烘干备用。

5.根据权利要求1所述的改进苏丹红1检测试剂盒的方法，其特征在于：所述的振荡为手动摇20 s～2 min。

6.根据权利要求1所述的改进苏丹红1检测试剂盒的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的吹干为用吸耳球或电吹风吹干。

7.根据权利要求1所述的改进苏丹红1检测试剂盒的方法，其特征在于：所述的苏丹红1检测试剂盒为广州达元食品安全技术有限公司的苏丹红快速检测盒。

8.根据权利要求1所述的改进苏丹红1检测试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）提取苏丹红1：准确称取1.0 g样品于容器中，加入5～6 mL提取溶剂，振荡，静置，取上清液为上样液；

（2）上样：取上样液，加入到装有50 mg磁固相萃取材料的容器中，振荡，外加磁铁，倒出上清液；

（3）清洗：加入正己烷，振荡，外加磁铁，倒出上清液；

（4）解吸：加入1 mL丙酮，振荡，取上清滴加于点样板，吹干；

（5）检测及判断：参照苏丹红1检测试剂盒操作说明书。

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