CN103641899B - 一种板蓝根植物蛋白或多肽及其提取方法和其在抗病毒药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了板蓝根植物蛋白或多肽及其提取方法和其在抗病毒药物中的应用，通过粉碎板蓝根药材，将粉碎后的板蓝根药材用去离子水浸渍数小时并离心，将清液过超滤膜超滤，再冷冻干燥，可得分子量为15-50kDa的板蓝根粗蛋白或多肽，并检测得出粗蛋白或多肽为板蓝根质量百分数的50～90%。上述板蓝根植物蛋白或多肽，用于制备预防和治疗病毒性疾病、炎症、提高免疫的抗病毒药物。

Description

一种板蓝根植物蛋白或多肽及其提取方法和其在抗病毒药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种从中药板蓝根中提取的一类植物蛋白及其提取方法和其在抗病毒药物中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

近年来，SARS、禽流感、以及甲型H1N1流感病毒在我国乃至世界范围频繁爆发，对人的生命安全和社会经济造成极大损害。

长期以来，人们通过疫苗来预防病毒，且取得了良好效果，但疫苗只有与病毒亚型相配时才会有效。病毒变异快且爆发具有不可预测性，而疫苗研究和生产相对滞后。

针对疫苗的这种弊端，人们开始广泛研究抗病毒药物，以此来对抗病毒。西药抗病毒药物具有见效快、疗效高、作用准确等特点，但每类药物均具有针对性，只针对某种特定的病毒起作用，因病毒抗原易变异性因素，导致一些制作抗病毒药物的化学药物的应用也有一定局限性。许多中药具有抑制病毒复制、阻止病毒致细胞病变等功效，中药通过调节免疫功能、改善肺循环、镇痛抗炎等综合作用，进而抑制或者杀灭病毒，具有良好的防治病毒的作用。

从传统中药中充分挖掘和寻找抗病毒活性物质也是近年研究的热点之一。板蓝根具有可靠的抗病毒作用，为家庭常备药物。板蓝根为十字花科植物菘蓝(Isatisindigotica)的干燥根，具有清热解毒、凉血利咽之功效，常用于治疗流感、腮腺炎、温病发热、流行性乙型脑炎、肝炎等病毒感染性疾病。板蓝根成分复杂，其物质基础和作用机制的不明确，生产工艺仍然比较落后，生产处于一种粗放型状态，产品科技含量低，附加值不高，限制了产品的推广和应用，难以进入国际市场。企业迫切需要对板蓝根产品进行“二次开发”，增加产品科技含量和提高竞争力，为此，研究板蓝根抗病毒效应成为关键。

发明内容

本发明的目的在于提供一种板蓝根植物蛋白或多肽，可以用于制备抗病毒、抗炎、促进免疫的药物。

本发明的另一目的在于提供一种板蓝根植物蛋白或多肽的提取方法，提取方法简单，容易制备。

本发明的另一目的在于提供一种板蓝根植物蛋白或多肽在抗病毒药物中的应用，用于制备抗病毒、抗炎、促进免疫的药物，为SARS、禽流感以及甲型H1N1流感病毒等病毒提供有效的预防药物。

本发明板蓝根植物蛋白或多肽，所述植物蛋白或多肽的分子量为15-50kDa，是通过对板蓝根进行提纯而获得的，其在板蓝根提纯物中的质量百分数为50～90%。

本发明对板蓝根进行提纯的方法，包括以下步骤：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目；

B、加5-20倍去离子水在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；

C、取上清液，超滤膜超滤，得滤液，再冷冻干燥得板蓝根粗蛋白或多肽。

D、在滤液中加入硫酸铵使其含量达到80%，静置2-24小时；

E、过滤，用去离子水透析，至去除可检测的残余硫酸根，获得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥。

本发明对板蓝根进行提纯的方法，包括以下步骤：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目；

B、加5-20倍8-20mM的pH5-9的磷酸缓冲液，在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；

C、取上清液，过超滤膜超滤，得滤液，再冷冻干燥得板蓝根粗蛋白或多肽。

D、在滤液中加入硫酸铵使其含量达到80%，静置2-24小时；

E、过滤，用去离子水透析，至未见可检测的残余硫酸根，获得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥。

本发明对板蓝根进行提纯的方法，包括以下步骤：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目；

B、加5-20倍8-20mM的pH5-9的磷酸缓冲液，在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；

C、取上清液，过超滤膜超滤，得滤液，再冷冻干燥得板蓝根粗蛋白或多肽。

D、在滤液中加入丙酮使其含量达到40-80%，静置2-24小时；

E、过滤取沉淀，得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥。

本发明对板蓝根进行提纯的方法，包括以下步骤：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目；

B、加5-20倍去离子水在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；

C、取上清液，过超滤膜超滤；

D、滤液加入丙酮使其含量达到40-80%，静置2-24小时。

E过滤取沉淀，得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥。

进一步地，所述对板蓝根进行提纯的方法，还包括以下步骤：

F、将所得粗蛋白或多肽用去离子水溶解，用盐酸调pH4-6；

G、取阳离子交换介质，用盐酸调节pH4-6的去离子水悬浮，并装柱平衡；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用去离子水洗脱至色变淡，再用氨水调节pH8-9的去离子水洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽提纯物。

进一步地，所述对板蓝根进行提纯的方法，还包括以下步骤：

F、将所得粗蛋白或多肽用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液溶解，取阳离子交换介质；

G、用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液悬浮，并装柱，平衡缓冲；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液洗脱至色淡，再用含0.2-10M的起始缓冲液洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽提纯物。

本发明板蓝根植植物蛋白或多肽的制备方法，包括上述对板蓝根进行提纯的方法。

本发明植物蛋白或多肽作为抗病毒药物的应用。

本发明板蓝根植物蛋白或多肽，分子量为15-50kDa，是通过对板蓝根进行提纯而获得的，其在板蓝根提纯物中的质量百分数为50～90%。板蓝根植物蛋白或多肽从板蓝根中提取，为板蓝根的二次开发，其提取方法简单，容易制备，同时从板蓝根中提取的植物蛋白或多肽可以用于制备抗病毒、抗炎、促进免疫的药物，为SARS、禽流感以及甲型H1N1流感病毒等病毒提供有效的预防药物。

附图说明

图1为本发明板蓝根植物蛋白或多肽的电泳谱图。

具体实施方式

以下通过实施例的形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

请参阅图1，本发明实施例板蓝根植物蛋白或多肽，其分子量为15-50kDa（千道尔顿），纯度达50～90%（质量百分数），是由板蓝根中提纯而获得的。其中，15、24、26、34KDa四个条带，24KDa为胰蛋白酶的条带，其他几个为板蓝根蛋白或多肽。

以下通过BCA法(bicinchoninicacid)来测定板蓝根中植物蛋白或多肽的含量（质量百分数）。

标准曲线制作：分别精密吸取1、2、4、8、12、20μL的1mg/mLBSA（牛血清白蛋白）标液，加于96孔板中，加水补足20μL，各孔然后加入200μLBCA工作液，放入酶标仪中。设定程序如下：摇匀30s（秒），37℃下保温15min（分），562nm（纳米）波长检测。

以BSA浓度为横坐标，测量值为纵坐标，绘制出标准曲线为y=0.010x+0.146，R²=0.998。结果显示BSA在0～90.909μg/mL范围内线性关系良好。

样品测定：准备三批板蓝根样品，分别加超纯水定容于25mL量瓶中，吸取20μL加入96孔板中，然后加入200μLBCA工作液，按上述程序设定检测。三批样品多肽含量（质量百分比）结果如下：

准备多批次板蓝根提纯物，通过BCA法测出的实验结果显示，上述板蓝根中植物蛋白或多肽的纯度达50～90%（质量百分数）。

本发明的板蓝根植物蛋白或多肽的分子量为15-50kDa（千道尔顿），由板蓝根中提纯而获得，纯度达50～90%（质量百分数），其提取方法步骤如下：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目。

B、加5-20倍去离子水在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm（rev/min，转圈/每分钟）离心5-15min(分钟)。

C、取上清液，过1000Da（道尔顿）的超滤膜超滤，得滤液，再冷冻干燥得板蓝根粗蛋白或多肽。

上述方法中，为使板蓝根粗蛋白更纯，还可以再加入以下步骤：

D、在滤液中加入硫酸铵使其含量达到80%，静置2-24小时。

E、过滤，用去离子水透析，至去除可检测的残余硫酸根，获得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥。

本发明提供了第二种板蓝根植物蛋白或多肽的提取方法，其步骤如下：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目。

B、加5-20倍8-20mM（mmol/L，毫摩尔/升）的磷酸缓冲液（pH5-9）在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min。

C、取上清液，过1000Da的超滤膜超滤，得滤液，再冷冻干燥得板蓝根粗蛋白或多肽。

上述第二种方法中，为使板蓝根粗蛋白更纯，还包括以下步骤：

D、在滤液中加入硫酸铵使其含量达到80%，静置2-24小时。

E、过滤，用去离子水透析，至未见可检测的残余硫酸根，获得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥。

上述第二种方法中，为使板蓝根粗蛋白更纯，也可以还包括以下步骤：

D、在滤液中加入丙酮使其含量达到40-80%，静置2-24小时。

E、过滤取沉淀，得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥。

本发明提供了第三种板蓝根植物蛋白或多肽的提取方法，其步骤如下：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目。

B、加5-20倍去离子水在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min。

C、取上清液，过1000Da的超滤膜超滤。

D、滤液加入丙酮使其含量达到40-80%，静置2-24小时。

E、过滤取沉淀，得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥。

上述三种方法提取所得的板蓝根粗蛋白或多肽可以用以下方法精制：

F、将所得粗蛋白或多肽用去离子水溶解，用HCl溶液（盐酸）调pH4-6。

G、取阳离子交换介质，用HCl调节pH4-6的去离子水悬浮，并装柱平衡。

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用去离子水洗脱至色变淡，再用氨水调节pH8-9的去离子水洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽。

上述三种方法提取所得的板蓝根粗蛋白或多肽也可以用以下方法精制：

F、将所得粗蛋白或多肽用8-20mMpH4-6磷酸缓冲液溶解，取阳离子交换介质。

G、用8-20mMpH4-6磷酸缓冲液悬浮，并装柱，平衡缓冲。

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液洗脱至色淡，再用含0.2-10M（mol/L，摩尔/升）的起始缓冲液洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽。

在具体实例中，按以上方法制备的板蓝根植物蛋白或多肽用BCA法测定，可测得其含量为50-90%，取适量样本在聚丙烯酰胺电泳，通过考马斯亮蓝染色显示可测得蛋白带主要集中于分子量15-50kDa（如图1）。

针对板蓝根化学成份的抗病毒作用，深入研究发现板蓝根中分子量为15-50kDa（千道尔顿），纯度达50～90%的植物蛋白或多肽，进行分离纯化后，药理研究显示具有强烈的抗病毒活性。因此，板蓝根蛋白或多肽极大可能是板蓝根抗病毒的主要活性成分。

上述板蓝根植物蛋白或多肽可以应用在抗病毒药物中，用于制备抗病毒、抗炎、促进免疫的药物。

上述板蓝根植物蛋白或多肽作为抗病毒药物的主要成份，可以单独制成成药，也可与板蓝根其它有效成分合用制成成药，以用于制备治疗或预防病毒性疾病、炎症、提高免疫的药物。例如添加稀释剂、崩解剂、矫味剂、着色剂、防腐剂，也可以制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、口服液等口服用制剂及溶液剂、气雾剂、滴鼻剂、注射剂、粉针。

上述板蓝根植物蛋白或多肽用于制备预防和治疗病毒性疾病、炎症、提高免疫的药物。

上述板蓝根植物蛋白或多肽作为板蓝根主要的抗病毒活性成分，可用于控制板蓝根药材及其相关制剂的指标成分。

上述板蓝根植物蛋白或多肽在抗病毒药物中的应用，其在胃肠道中降解成小肽被吸收发挥作用，可用于控制板蓝根药材及其相关制剂的质量。

上述板蓝根植物蛋白或多肽作为板蓝根主要的抗病毒活性成分，可以通过如下实验来证明：

实验1板蓝根植物蛋白或多肽对流感病毒感染小鼠死亡的保护实验

1.实验材料

甲型流感病毒鼠肺适应株H1N1(A/PR8/34)（中科院武汉病毒研究所提供），在9-10日龄的SPF（specificpathogenfree,无特定病原体）鸡胚中传代增殖后，分装保存于–80℃备用；SPF级雌性昆明小鼠，14-16g（青岛市实验动物和动物实验中心提供）；利巴韦林注射液（50mg/ml）（山东鲁抗辰欣药业有限公司提供），板蓝根（甘肃产）。

2.实验方法

将小鼠随机分为6组，每组10只，分别为正常组、模型组、利巴韦林组、多肽大、中、小剂量组，除空白对照组外，各实验组动用乙醚轻度麻醉，以4LD50（半数致死量，即LethalDose,50'）的流感病毒液滴鼻感染小鼠造模，0.05ml/只，正常组生理盐水滴鼻对照。造模后当日灌胃给药，其中利巴韦林为腹腔注射，连续7天，正常组和模型组给予生理盐水对照。自造模当日起连续观察14天，计算各组死亡率及平均生时间。

3.结果见表1

表1板蓝根多肽对流感病毒感染小鼠死亡保护率的影响

注：与正常组对比：#p<0.05，##p<0.01；与模型对照组对比：*p<0.05，**p<0.01

4.结果和分析

上述结果表明，板蓝根植物蛋白或多肽对流感病毒感染的小鼠的死亡率有明显的保护作用。

实验2板蓝根多肽对流感病毒不同时相感染小鼠肺损伤及病毒增殖的影响

1.实验材料

与实验1相同。

2.实验方法

将小鼠随机分为6组，每组15只，分别为正常组、模型组、利巴韦林组、多肽大、中、小剂量组，除空白对照组外，各实验组动用乙醚轻度麻醉，以4LD50的流感病毒液滴鼻感染小鼠造模，0.05ml/只，正常组生理盐水滴鼻对照。造模后当日灌胃给药，其中利巴韦林为腹腔注射，分别于24、72、120h(小时)处死1/3小鼠，摘取肺脏，计算肺指数和肺组织中病毒滴度的检测。

3.检测结果见表2

表2板蓝根多肽对流感病毒感染小鼠肺指数和病毒滴度的影响

注：与正常组对比：#p<0.05，##p<0.01；与模型对照组对比：*p<0.05，**p<0.01

4.结果和分析

上述结果表明，板蓝根植物蛋白或多肽对流感病毒感染的小鼠肺炎有显著性的抑制作用。

实验3板蓝根多肽对流感病毒不同时相感染小鼠免疫功能的影响

1.实验材料

与实验1相同。

2.实验方法

将小鼠随机分为6组，每组15只，分别为正常组、模型组、利巴韦林组、多肽大、中、小剂量组，除空白对照组外，各实验组动用乙醚轻度麻醉，以4LD50的流感病毒液滴鼻感染小鼠造模，0.05ml/只，正常组生理盐水滴鼻对照。造模后当日灌胃给药，其中利巴韦林为腹腔注射，分别于24、72、120h(小时)取1/3小鼠，眼眶取血，检测各个免疫因子。

3.检测结果见表3—表6

表3板蓝根多肽对不同时相感染小鼠T细胞增殖活性的影响

注：与正常组对比：#p<0.05，##p<0.01；与模型对照组对比：*p<0.05，**p<0.01

表4板蓝根多肽对不同时相感染小鼠B细胞增殖活性的影响

注：与正常组对比：#p<0.05，##p<0.01；与模型对照组对比：*p<0.05，**p<0.01

表5板蓝根多肽对不同时相感染小鼠血清TNF-α的影响

注：与正常组对比：#p<0.05，##p<0.01；与模型对照组对比：*p<0.05，**p<0.01

表6板蓝根多肽对不同时相感染小鼠肺匀浆TNF-α的影响

注：与正常组对比：#p<0.05，##p<0.01；与模型对照组对比：*p<0.05，**p<0.01

4.结果和分析

上述结果表明，板蓝根植物蛋白或肽对流感病毒感染的小鼠免疫功能有显著的促进作用。

通过上述实验1至实验3，完全可以证明本发明板蓝根中的植物蛋白或多肽是板蓝根主要的抗病毒活性成分。

本发明板蓝根植物蛋白或多肽，从板蓝根中提取，为板蓝根的二次开发，其提取方法简单，容易制备，同时从板蓝根中提取的植物蛋白或多肽可以用于制备抗病毒、抗炎、促进免疫的药物，为SARS、禽流感以及甲型H1N1流感病毒等病毒提供有效的预防药物。

Claims (5)

1.一种板蓝根提纯物，含有植物蛋白或多肽，所述植物蛋白或多肽的分子量为15-50kDa，是通过对板蓝根进行提纯而获得的，其在板蓝根提纯物中的质量百分数为50~90%；所述对板蓝根进行提纯的方法是选自以下方法中的一种：

第一种方法，包括以下步骤：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目；

B、加5-20倍去离子水在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；

C、取上清液，过1000Da的超滤膜超滤，得滤液，再冷冻干燥得板蓝根粗蛋白或多肽；

D、在滤液中加入硫酸铵使其含量达到80%，静置2-24小时；

E、过滤，用去离子水透析，至去除可检测的残余硫酸根，获得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥；

进一步包括精制的步骤：

F、将所得粗蛋白或多肽用去离子水溶解，用HCl溶液调pH4-6；

G、取阳离子交换介质，用HCl调节pH4-6的去离子水悬浮，并装柱平衡；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用去离子水洗脱至色变淡，再用氨水调节pH8-9的去离子水洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽；

或者F、G、H步骤为：

F、将所得粗蛋白或多肽用8-20mMpH4-6磷酸缓冲液溶解，取阳离子交换介质；

G、用8-20mMpH4-6磷酸缓冲液悬浮，并装柱，平衡缓冲；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液洗脱至色淡，再用含0.2-10M的起始缓冲液洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽；

第二种方法，包括以下步骤：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目；

B、加5-20倍8-20mM的磷酸缓冲液pH5-9在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；

C、取上清液，过1000Da的超滤膜超滤，得滤液，再冷冻干燥得板蓝根粗蛋白或多肽；

D、在滤液中加入硫酸铵使其含量达到80%，静置2-24小时；

E、过滤，用去离子水透析，至未见可检测的残余硫酸根，获得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥；

或者D、E步骤为：

D、在滤液中加入丙酮使其含量达到40-80%，静置2-24小时；

E、过滤取沉淀，得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥；

进一步包括精制的步骤为：

F、将所得粗蛋白或多肽用去离子水溶解，用HCl溶液调pH4-6；

G、取阳离子交换介质，用HCl调节pH4-6的去离子水悬浮，并装柱平衡；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用去离子水洗脱至色变淡，再用氨水调节pH8-9的去离子水洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽；

或者F、G、H步骤为：

F、将所得粗蛋白或多肽用8-20mMpH4-6磷酸缓冲液溶解，取阳离子交换介质；

G、用8-20mMpH4-6磷酸缓冲液悬浮，并装柱，平衡缓冲；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液洗脱至色淡，再用含0.2-10M的起始缓冲液洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽；

第三种方法包括以下步骤：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目；

B、加5-20倍去离子水在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；

C、取上清液，过1000Da的超滤膜超滤；

D、滤液加入丙酮使其含量达到40-80%，静置2-24小时；

E、过滤取沉淀，得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥；

进一步包括精制的步骤：

F、将所得粗蛋白或多肽用去离子水溶解，用HCl溶液调pH4-6；

G、取阳离子交换介质，用HCl调节pH4-6的去离子水悬浮，并装柱平衡；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用去离子水洗脱至色变淡，再用氨水调节pH8-9的去离子水洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽；

或者F、G、H步骤为：

F、将所得粗蛋白或多肽用8-20mMpH4-6磷酸缓冲液溶解，取阳离子交换介质；

G、用8-20mMpH4-6磷酸缓冲液悬浮，并装柱，平衡缓冲；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液洗脱至色淡，再用含0.2-10M的起始缓冲液洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽。

2.如权利要求1所述的板蓝根提纯物，其特征在于，所述植物蛋白或多肽在板蓝根提纯物中的质量百分数为64.17~90%。

3.提取板蓝根植物蛋白或多肽的方法包括以下步骤：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目；

B、溶解、浸渍及离心；具体为：

加5-20倍去离子水在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；或者

加5-20倍8-20mM的pH5-9的磷酸缓冲液，在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；

C、取上清液，过超滤膜超滤，得滤液，再冷冻干燥得板蓝根粗蛋白或多肽；

D、在滤液中加入丙酮使其含量达到40-80%，静置2-24小时；

E、过滤取沉淀，得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥；

F、将所得粗蛋白或多肽用去离子水溶解，用盐酸调pH4-6；

G、取阳离子交换介质，用盐酸调节pH4-6的去离子水悬浮，并装柱平衡；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用去离子水洗脱至色变淡，再用氨水调节pH8-9的去离子水洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽提纯物。

4.提取板蓝根植物蛋白或多肽的方法，包括以下步骤：

A、板蓝根药材粉碎过20-40目；

B、溶解、浸渍及离心；具体为：

加5-20倍去离子水在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；或者

加5-20倍8-20mM的pH5-9的磷酸缓冲液，在4-30℃浸渍2-24小时，4000-9000rpm离心5-15min；

C、取上清液，过超滤膜超滤，得滤液，再冷冻干燥得板蓝根粗蛋白或多肽；

D、在滤液中加入丙酮使其含量达到40-80%，静置2-24小时；

E、过滤取沉淀，得板蓝根的粗蛋白或多肽，冷冻干燥；

F、将所得粗蛋白或多肽用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液溶解，取阳离子交换介质；

G、用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液悬浮，并装柱，平衡缓冲；

H、粗蛋白或多肽溶液加入到平衡的阳离子交换柱子，用8-20mMpH4-6的磷酸缓冲液洗脱至色淡，再用含0.2-10M的起始缓冲液洗脱，留取洗脱液冷冻干燥，得精制的板蓝根植物蛋白或多肽提纯物。

5.如权利要求1或2所述的板蓝根提纯物作为制备抗病毒药物中的应用。