CN103608039A

CN103608039A - 基于bcma的针对多发性骨髓瘤患者的分层与治疗

Info

Publication number: CN103608039A
Application number: CN201280029972.2A
Authority: CN
Inventors: E.伯格斯; J.B.赫比斯
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2011-04-21
Filing date: 2012-04-20
Publication date: 2014-02-26
Also published as: US20160131655A1; PE20140612A1; CL2013003031A1; AP2013007178A0; EP2699259B1; AU2012244676A1; CA2832510A1; MX2013012167A; EP2699259A1; IL228701A0; MA35056B1; TN2013000412A1; JP2014520248A; EA201301180A1; KR20140031905A; US20140193433A1; US20130101599A1; CO6801644A2; WO2012143498A1; SG194500A1

Abstract

本发明涉及对多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)患者进行分层的方法，其包括确定在所述患者的B细胞、优选恶性B细胞的表面上是否表达BCMA蛋白。并且，涉及根据患者的B细胞、优选恶性B细胞的细胞表面上是否表达BCMA来选择基于抗体的多发性骨髓瘤(MM)疗法的方法。此外，为具有BCMA阳性恶性B细胞的患者提供了基于抗体的疗法。

Description

基于BCMA的针对多发性骨髓瘤患者的分层与治疗

发明背景

多发性骨髓瘤(Mutiple myeloma，MM)，一种无法治愈的浆B细胞恶性肿瘤，估计导致全部初次诊断的恶性血液病的14%(Colson等人，(2004年)ClinJ Oncol Nurs8(5):473-480)。MM是一种异质性疾病，并且多数是由染色体易位，特别是t(11;14)、t(4;14)、t(8;14)、del(13)、del(17)导致的(Drach等人，(1998年)Blood92(3):802-809；Gertz等人，(2005年)Blood106(8):2837-2840；Facon等人，(2001年)Blood97(6):1566-1571)。由于骨质破坏、骨髓浸润、肾功能衰竭、免疫缺陷以及癌症诊断的心理负担，受MM影响的患者可能会经历多种疾病相关症状。令人兴奋的新疗法，例如化疗和干细胞移植方法可以使用并已提高了生存率，但往往会带来不必要的副作用，因此MM仍然是不可治愈的(Lee等人，(2004年)J Natl Compr Canc Netw8(4):379-383)。

MM是由浆B细胞的恶性肿瘤导致的。为了最终确认所述的恶性浆B细胞，人们发现了一些存在于浆B细胞表面的蛋白(Harada等人，(1993年)Blood81(10):2658-2663；Robillard N等人，Blood(2003年)102(3):1070-1071)。例如，发现CD38在骨髓瘤细胞(恶性浆B细胞)表面上剧烈表达，即CD38 ⁺⁺并因此区分浆B细胞与骨髓中的其他造血细胞。此外，Harada等人还发现来自7名健康捐赠者的骨髓中的正常浆B细胞是VLA-4⁺VLAS-5⁺MPC-1⁺CD44⁺ CD19 ⁺ CD56 ^－，另一方面，成熟的骨髓瘤细胞(20例中的12例)是VLA-4⁺VLAS-5⁺MPC-1⁺ CD19 ^－ CD56 ⁺，而没有骨髓瘤细胞是CD19⁺CD56^－。此外，据报道CD20的表达与小的成熟浆B细胞形态和带有t(11;14)的MM患者相关。

BLyS(B淋巴细胞刺激因子)，也称作BAFF、TALL-1或THANK，是肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员。它是一种II型跨膜蛋白，而且在维持正常B细胞的发育与稳态中发挥重要作用，并且促进恶性B细胞的存活。已经鉴定了BLyS的三种受体，即BCMA(B cell maturation antigen，B细胞成熟抗原)、BAFF受体(BAFF-R)及TACI(transmembrane activator and calcium modulatorcyclophilin ligand interactor，跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子)。这三种受体是I型单膜受体并属于TNF受体家族。BCMA和BAFF-R主要表达在B淋巴细胞上，而TACI可在B细胞上找到并激活T细胞。此外，BCMA和TACI能够结合APRIL(a proliferation–inducing ligand，增殖诱导配体)，其是BLyS的最接近的结构同系物。

Novak等人发现BLyS(BAFF)的三种受体在MM患者的B细胞的细胞表面表达(Novak等人，(2004年)Blood103(2):689-694)。

BLyS的一种受体，BCMA，已知优先表达于成熟的B细胞(Gras等人，(1995年)Int Immunol7:1093-1106；Thompson等人，(2000年)J Exp Med192:129-135)。此外，人们发现BCMA的表达(作为BCMA mRNA)在正常B细胞分化过程的后期阶段被上调，并在MM细胞中高表达(Tarte等人，(2002年)Blood100:1113-1122；Tarte等人，(2003年)Blood102:592-600；Claudio等人，(2002年)Blood100:2175-2186)。此外，Bellucci等人证实了BCMA的表达，即BCMA mRNA在B细胞成熟的后期阶段表现出选择性表达(Belluci等人，(2005年)Blood105:3945-3950)。然而，Li等人发现BCMA的表达，即BCMA mRNA在患者的MM细胞中并非总能检测到(Li等人，(2010年)MedOncol27:439-445)。为此，尽管已经报道BCMA的表达仅限于浆细胞和生发中心的B细胞中，在外周血的初始

B细胞和记忆性的B细胞中也观察到BCMA⁺群(US2009/0325196)。在初始B细胞中BCMA⁺B细胞的平均值是24%而在记忆性B细胞中是20.8%(该值低于浆母细胞(37.9%)的平均值)。然而，BCMA似乎主要表达于浆母细胞。

据报道，在T细胞淋巴瘤患者的肿瘤细胞中发现了t(4;16)(q26;p13.1)染色体易位，其导致BCMA基因与白介素2基因的融合，并且在滤泡性淋巴瘤男性患者中发现了t(16;18)(p13;q21.3)染色体易位，其导致BCMA基因、HLA-D基因和多种血液肿瘤相关基因，如MHC2TA与BCL2基因融合(Laabi等人，(1992年)J EMBO11(11):3897-3904；Mahmoodi等人，(2004年)CanGenet Cytogenet154(2):160-162)。虽然没有报道这些染色体易位导致了MM，但一种易位是与被定义为滤泡中心B细胞的淋巴瘤的滤泡性淋巴瘤相关的。

此外，Novak等人发现MM细胞系和新鲜分离的MM细胞在其细胞表面表达BCMA蛋白和TACI蛋白，并在其细胞表面上具有BAFF-R蛋白的可变表达(Novak等人，(2004年)Blood103(2):689-694)。

虽然最初报道BCMA蛋白是作为在人成熟B淋巴细胞的高尔基体中的完整膜蛋白，即为细胞内蛋白，但还报道了BCMA蛋白表达于MM细胞/细胞系的细胞表面上(Gras等人，(1995年)International Immunol7(7):1093-1105)，表明BCMA似乎在B细胞的发育和稳态期间发挥重要作用。Gras等人的发现可能与由于染色体易位，Gras等人描述的BCMA蛋白是BCMA和IL-2间的融合蛋白的事实相关。然而，由于BCMA与BAFF和APRIL的可能的必要相互作用，人们同时将BCMA确立为一种对于B细胞的发育和稳态必不可少的B细胞标记物(Schliemann等人，(2001年)Science293(5537):2111-2114)。

到目前为止，对于多发性骨髓瘤患者的两种最有前景的治疗方案是串联高剂量化疗后自体干细胞输注，或骨髓消融治疗或低强度调节后的异体造血干细胞移植。然而，由于微小残留疾病的残存，很少能达到治愈。因此，迫切需要创新的治疗方式以稳定或甚至根除残留的肿瘤细胞。

随着癌症靶抗原的发现和分子表征，可能会提供更集中的方法以在常规消融治疗后引导病人的免疫系统识别和根除残余的癌细胞。因此基于抗体的治疗是治疗MM的一种有吸引力的选择。由于MM细胞在俗称“转化”之前已是B细胞，则特异性的B细胞表面蛋白用作抗体的靶点，例如CD20。因为观察到正常的B细胞将恢复，而假设(并已经观察到)恶性的B细胞不会恢复，虽然正常B细胞也是抗-CD20抗体的靶点，抗CD20抗体仍然用于治疗患者。到目前为止，本领域技术人员从以下假设开始，一旦恶性的B细胞在mRNA水平表达对该靶点的兴趣，例如BCMA、PIM2、MUM1/IRF4或XBP1(Claudio等人，(2002年),Blood100:2175-2186)，这种细胞可以是基于抗体的治疗的对象。

然而，迄今尚未有报道在MM患者以及MM细胞系中的BCMA mRNA和BCMA蛋白与评价特别是使用抗-BCMA抗体的MM可能的治疗是否存在相关性。然而，根据普遍接受的DNA到RNA到蛋白的概念，应该假设一旦在MM细胞中检测到BCMA mRNA，则BCMA蛋白作为受体，存在于所述细胞的细胞表面上。这将与报道BCMA在形成B细胞免疫和B细胞稳态中(Mackay和Browning(2002年)Nat Rev Immunol.(2):465-475)以及在MM细胞增殖中(Novak等人，上文所引述；Bellucci等人，(2005年)Blood105:3945-3950)发挥重要作用的多种报告相一致。

最近的一些研究也已证明了在恶性以及正常的浆细胞中BCMA的表达并已表明BAFF通过BCMA信号传导导致骨髓瘤细胞的增殖(Shu等人，(2000年)Proc Natl Acad Sci USA97:9156-9161；O’Connor等人，(2004年)J Exp Med.199:91-98；Novak等人，上文所引述；Avery等人，(2003年)J Clin Invest.112:286-297)。总而言之，这些研究表明BCMA通常表达于骨髓瘤中并且通过BCMA的信号传导也可以有助于体内骨髓瘤细胞的扩散(Bellucci等人，上文所引述)。

因此，基于普遍接受的DNA到RNA到蛋白的概念以及BCMA在MM增殖中发挥重要作用的事实，暗示了MM B细胞的细胞表面上存在BCMA，多发性骨髓瘤的治疗应会自动启动(Ryan等人，(2007年)Mol Cancer Ther6:3009-3018)。

因此，虽然如果BCMA不存在于这些细胞的表面上，对于患有多发性骨髓瘤的患者它不一定会是有益的，但迄今没有人质疑如果检测到其mRNA并因此启动了基于抗体的治疗，BCMA是否确实存在于细胞表面上。

尽管有BCMA似乎在正常的B细胞发育和恶性B细胞的增殖(在多发性骨髓瘤中)均是重要的认识，本发明人还是问自己，如果DNA到RNA到蛋白(假设其存在与细胞表面)的规律仅是基于BCMA mRNA的数据，尽管在MM中BCMA所述重要功能可能是真的，那么这个问题是否还成立。从不同的角度，尽管可检测mRNA，本领域并不认为BCMA不可能存在于MM细胞的细胞表面上，因此BCMA不能作为基于抗体的治疗的靶点(Ryan等人，上文所引述)。因此，即使知道DNA到RNA再到MM细胞表面上的蛋白，铭记BCMA在恶性B细胞的发育和增殖中的重要作用，本领域中还没有人想到过个性化基于抗-BCMA抗体的治疗可以治疗或改善MM。因此，需要个性化抗-BCMA抗体治疗。

因此，本发明解决的技术问题是为了满足上述需要。

附图说明

图1：FACS检测的在OPM-2细胞中抗-BCMA抗体对OPM-2细胞的结合

图2：10种不同MM细胞系的BCMA蛋白(A)和BCMA mRNA(B)的表达水平

图3：原代MM细胞的表达分析--阳性和阴性BCMA表达患者样本的示例性结果

发明概述

本发明通过提供一种使用抗-BCMA抗体的疗法，其优选与用于治疗或改善MM的其他抗体或化合物组合来满足这些需要，所述疗法是基于本发明人的认识：如果BCMA mRNA是可检测的，那么BCMA蛋白自动存在于MM细胞表面上，这个假设不一定对于每一位患者都成立。事实上，本发明人已经发现筛选MM患者在蛋白水平上分别存在或不存在BCMA的表达，即在MM细胞的细胞表面上分别存在或不存在BCMA，是非常重要的。

因此，本发明提供了一种对倾向于有利地响应抗-BCMA抗体治疗的多发性骨髓瘤(MM)患者进行分层(stratification)的方法，其包括确定所述患者的B细胞、优选恶性B细胞(MM细胞或MM B细胞)是否在所述B细胞的表面上表达BCMA蛋白，其中如果所述B细胞在其表面上表达BCMA，则所述患者倾向于有利地响应所述抗-BCMA抗体治疗。

而且，本发明提供了一种用于诊断BCMA阴性多发性骨髓瘤(MM)患者的方法，其包括确定所述患者的B细胞、优选恶性B细胞是否在其表面上表达BCMA蛋白，其中如果在所述B细胞的表面上没有检测到BCMA蛋白，则所述患者患有BCMA阴性MM。

此外，本发明提供了一种选择基于抗体的多发性骨髓瘤(MM)疗法的方法，其包括确定患者的B细胞、优选恶性B细胞是否在所述B细胞的表面上表达BCMA蛋白，其中如果所述B细胞是BCMA阳性，该患者可以进行抗-CD20抗体治疗和/或抗-CD38抗体治疗和/或抗-BCMA抗体治疗和/或抗-CS1抗体治疗，或如果所述B细胞是BCMA阴性，该患者进行抗-CD20抗体治疗和/或抗-CD38抗体治疗和/或抗-CS1抗体治疗。

本发明另一方面涉及：

抗-BCMA抗体疗法，其用于治疗或改善B细胞倾向于为BCMA阳性的多发性骨髓瘤(MM)患者，

抗-BCMA抗体，其用于治疗或改善根据本发明的方法诊断的多发性骨髓瘤(MM)的患者，和

抗-CD20抗体和/或抗-CD38抗体和/或抗-BCMA抗体和/或抗-CS1抗体疗法，其用于治疗或改善B细胞是BCMA阴性的多发性骨髓瘤(MM)患者。

***

必须注意的是，除非上下文另有明确指示，本文所用单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代。因此，例如，“表达盒”包括本文公开的一种或多种表达盒，而“该方法”包括本领域技术人员已知的等效步骤和方法，所述步骤和方法可以被修改或者代替本文所述的方法。

本发明引用的所有出版物和专利均通过引用全文并入本文。当通过引用并入的材料与本说明书冲突或不符合本说明书时，本说明书优先于任何此类材料。

除非另有指示，在一系列元素之前的术语“至少”应理解为是指该系列中每一个元素。仅使用常规实验手段，本领域技术人员将认识到或能够确定本文描述的本发明具体实施方案的许多等效方式。此类等效方式旨在涵盖于本发明。

除非上下文另有指示，在本说明书和所附权利要求书全文中，术语“包含/包括”将理解为表示包括所指出的整数或步骤或者整数或步骤的组，而不排出任何其它整数或步骤或者整数或步骤的组。当本文所用术语“包含/包括”可以被替代为术语“含有”，或者有时可以被替代为术语“具有”。

本文所用“由……组成”排除在要求的元素中被指明的任何元素、步骤或成分。本文所用“基本上由……组成”不排除不会实质上影响该权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。在本文的每个情况下，术语“包含/包括”、“由……组成”和“基本上由……组成”中的任一个可被另外两个术语中任一个替代。

本文所用，在多个所述元素之间的连接术语“和/或”理解为涵盖两个单独的选择和组合选择。例如，当两个元素被“和/或”连接时，第一选择是指应用第一元素而无第二元素。第二选择是指应用第二元素而无第一元素。第三选择是指一起应用第一和第二元素。这些选择中的任一个都理解为落入该含义中，并因此满足如本文所用的术语“和/或”的要求。同时应用超过一个选择也理解为落入该含义中，并因此满足如本文所用的术语“和/或”的要求。

本文内容中引用了一些文献。本文引用的每一篇文献(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的手册、指导等)，无论是上文或下文，其全部内容通过引用方式并入本文。此处任何内容不应解释为承认本发明无权早于因先前发明所作的此类披露。

发明详述

本发明的一个目的是提供一种基于患者的B-细胞，优选恶性B细胞表面上BMCA表达的MM患者的分层方法，以及基于BCMA基因表达，即BCMAmRNA和B细胞，优选MM患者的恶性B细胞表面上的BCMA蛋白的相关性，使用抗-BCMA抗体，优选与其他抗体，如抗-CD38、抗-CD20和/或抗-CS1抗体组合，治疗MM患者的新疗法。

鉴于BCMA没有或基本上没有表达于患者的每一个健康的B细胞，而表达于患者的恶性B细胞上的事实，如果所述患者通过本发明的方法诊断为BCMA阳性，与例如抗-CD20抗体治疗相比，抗-BCMA抗体治疗可能是更优越的，因为CD20被认为在每一个B细胞上表达。因此，不受理论的束缚，所有的B细胞会被耗尽，而抗-BCMA抗体治疗不一定耗尽患者所有健康的B细胞，因为在发育和/或稳态期间，BCMA没有或基本上没有表达于每一个健康的B细胞。

因此，在本发明第一方面提供了一种倾向于有利地响应抗-BCMA抗体治疗的多发性骨髓瘤(MM)患者的分层方法，包括确定所述患者的B细胞、优选恶性B细胞是否在所述B细胞的表面上表达BCMA蛋白，其中如果所述B细胞在其表面上表达BCMA蛋白，则所述患者倾向于有利地响应所述抗-BCMA抗体治疗。

另外或在上面描述的方面的替代方案中，本发明提供一种用于诊断BCMA阴性多发性骨髓瘤(MM)患者的方法，其包括确定所述患者的B细胞、优选恶性B细胞是否在其表面上表达BCMA蛋白，其中如果在所述B细胞的表面上没有检测到BCMA蛋白，则所述患者患有BCMA阴性MM。

本文所用的术语“分层”包括基于BCMA基因转录本，即mRNA的表达，以及所述翻译的基因产物，即定位于细胞表面的BCMA蛋白，例如通过抗-BCMA抗体的检测，将MM患者群体统计划分到BCMA的MM患者亚群以便考虑对MM患者使用抗-BCMA抗体治疗是否可能是有益的。B细胞、优选恶性B细胞细胞表面上的BCMA检测是优选的。然而，尽管如此，可以附加地测试/确定mRNA水平上的BCMA表达。而且，所述术语是指分选出那些可能会或可能不会受益于基于抗-BCMA抗体的治疗或改善多发性骨髓瘤的治疗的患者。特别地，分层患者涉及确定是否没有BCMA表达于患有MM的患者的B细胞、优选恶性B细胞的表面上。B细胞的细胞表面上表达BCMA的那些患者可能受益于上述治疗，而B细胞的细胞表面上不表达BCMA的那些患者可能不会受益于所述抗-BCMA抗体治疗。然而，这样的BCMA阴性患者可能受益于，例如，抗-CD20、抗-CD38和/或抗-CS1抗体治疗或如本文所述的任意其他用于治疗或改善的MM的抗体治疗。

本文所用的术语“B细胞”是指在体液免疫反应(相对于由T细胞支配的细胞介导的免疫反应)中发挥重要作用的淋巴细胞。B细胞的主要功能是产生针对抗原的抗体，发挥抗原呈递细胞(APC)的作用并通过与抗原相互作用活化后最终发展成记忆性B细胞。在该阶段(抗体生成)中B细胞包括“浆细胞”，本文中有时也称作“浆B细胞”。这些浆细胞或浆B细胞也包括在本文中使用的术语“B细胞”中。然而，前体B细胞以及在其发展和/或谱系定型(lineagecommitment)的所有阶段的B细胞也包括在术语“B细胞”中。B细胞是适应性免疫系统的基本组成部分。而术语“B细胞”还包括正常的(即健康的)B细胞，优选包括恶性B细胞，特别是与MM相关的恶性B细胞(即MM B细胞)。

因此，在MM患者的上下文中，术语“B细胞”包括正常和恶性B细胞两者；恶性B细胞是优选的(即MM B细胞)。“恶性”描述的是导致逐渐恶化的疾病，特别是如本文所述的MM的淋巴细胞(特别是B细胞)。该术语作为癌症的描述是最熟悉的，本文是MM。恶性BCMA阳性B细胞在其生长中不是自限性的，其能够侵入到邻近的组织中，并可能能够扩散到远处组织(转移)。本文所用的恶性与癌变是同义的。这些恶性B细胞是本发明内容主要感兴趣的，因为它们应是抗体，特别是抗-BCMA抗体的靶点，为此目的，如本文所述分析了这些B细胞的表面上BCMA的表达。进行本发明的方法和/或基于抗体的治疗处理的MM患者优选具有恶性B细胞，所述恶性B细胞优选是多发性骨髓瘤细胞。当然，所述患者也有(或依然具有)正常的B细胞。优选地可以通过如下文所述的手段和方法确定、检测和/或分离恶性B细胞。简言之，可以通过如本文所述的，且特别是如权利要求书中体现的(CD38阳性、CD56阳性或阴性、CD45阳性和/或CD19阳性)一种或多种特定(即特征性的)B细胞表面标记物来确定、检测和/或分离患者的恶性B细胞。

术语“多发性骨髓瘤(MM)”，也称为浆细胞骨髓瘤或Kahler氏病(OttoKahler之后)，是一种以与基质细胞密切接触的恶性浆B细胞在骨髓内的积累为特征的难治性克隆B细胞肿瘤。MM是一种渐进性疾病，特别是例如由对前体浆B细胞的多种遗传损伤引起的，即主要由易位，例如t(11;14)、t(4;14)、t(8;14)导致的染色体易位，或删除，例如del(13)和del(17)，使得肿瘤细胞大幅增殖并成为凋亡耐受。

B淋巴细胞起始于骨髓中并移动到淋巴结。由于它们的发育，B淋巴细胞在其细胞表面上成熟并展示不同的蛋白。当它们被活化而分泌抗体时，将它们称作浆细胞。在它们离开称为生发中心的部分淋巴结后，多发性骨髓瘤在B细胞中发展。

免疫系统在严格控制下保持B细胞的增殖和抗体的分泌。当染色体和基因受损时(通常通过重排)，失去了这种控制。通常情况下，启动子基因移动(或易位)到染色体，它刺激抗体基因过量产生。

如上所述，在多发性骨髓瘤患者中经常观察到免疫球蛋白重链基因(在染色体14，基因座14q32上)和癌基因(经常11q13、4p16.3、6p21、16q23和20q11[10])之间的染色体易位。该突变导致所述癌基因的失调，这被认为是骨髓瘤发病机制中的一个重要的起始事件。该结果是浆细胞克隆的增殖和基因组不稳定性，导致进一步的突变和易位。在约50%的所有骨髓瘤病例中观察到了14号染色体异常。在约50%的病例中也观察到了13号染色体(一部分)的缺失。

因此，进行本发明的方法和/或基于抗体的治疗处理的MM患者优选地具有任一种本文提到的染色体易位和/或缺失。

浆细胞生成细胞因子(特别是IL-6)导致大量其局部化损坏，例如骨质疏松，并创建了一个恶性细胞在其中茁壮成长的微环境。血管生成(新血管的吸引)增加。

产生的抗体沉积在各个器官中，导致肾功能衰竭、多发性神经病和各种其他骨髓瘤相关的症状。

在本发明的内容中，优选地根据国际分期系统(Greipp等人，(2005年)，J.Clin.Oncol.23(15):3412–3420)和/或根据Durie-Salmon分期系统(Durie等人，(1975年),Cancer36(3):842–854)对MM进行分期。

国际分期系统：

I期：β₂-微球蛋白(β2M)<3.5mg/L，白蛋白>=3.5g/dL

II期：β2M<3.5mg/L和白蛋白<3.5g/dL；或β2M3.5mg/L-5.5mg/L不论血清白蛋白

III期：β2M>=5.5mg/L

Durie-Salmon分期系统：

I期：下列所有

οHb>10g/dL

ο钙值正常

ο骨骼调查：正常或单浆细胞瘤或骨质疏松症

ο如果IgG，血清异常蛋白水平<5g/dL，如果IgA，<3g/dL

ο尿轻链排泄<4g/24h

II期：满足既不是I也不是III的标准

III期：下列一种或多种

οHb<8.5g/dL

ο高钙>12mg/dL

ο骨骼调查：3处或更多处裂解性骨损伤

ο如果IgG，血清异常蛋白>7g/dL，如果IgA，>5g/dL

ο尿轻链排泄>12g/24h

Durie-Salmon分期系统的I、II、和III期可根据血清肌酸酐分为A或B：

A：血清肌酸酐<2mg/dL(<177umol/L)

B：血清肌酸酐>2mg/dL(>177umol/L)

因此，优选地根据国际分期系统和/或根据Durie-Salmon分期系统对进行本发明的方法和/或基于抗体的治疗处理的MM患者进行分期。

并且，根据国际分期系统和/或根据Durie-Salmon分期系统，进行本发明的方法和/或基于抗体的治疗处理的MM患者可能患有I、II或III期MM。

由于骨质破坏、骨髓浸润、肾功能衰竭、免疫缺陷以及癌症诊断的心理负担，MM患者可能会遇到各种疾病相关的症状。令人兴奋的新疗法和治疗方法变得可用，但往往会带来不必要的副作用。

大多数骨髓瘤病例还以异常蛋白(一种可导致肾脏问题并干扰正常抗体的产生，导致免疫缺陷的异常抗体)的产生为特征。经常会发生高血钙(高钙水平)。通过验血(例如蛋白电泳、外周血涂片)、骨髓的显微镜检查(骨髓活检)、和通常包括骨骼的X射线诊断出骨髓瘤。

因为骨髓瘤可以影响许多器官，所以症状和体征差别很大。有时用来记住多发性骨髓瘤的常见的四字助记符为CRAB：C=钙(升高)、R=肾功能衰竭、A=贫血、B=骨损伤。骨髓瘤有许多可能的症状，而且所有症状均可能是由于其他原因导致的。这里按它们发病率的降序排列：骨骼疼痛、感染、肾功能衰竭、贫血、神经症状。

本文所用的术语“BCMA”包括BCMA天然序列以及BCMA变体(其在本文中进一步定义)。所述BCMA可以从多种来源分离到，例如从鼠或人组织类型或另一种来源，或者用重组或合成的方法制备。“BCMA”是B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen)的缩写。BCMA是作为BLyS(B淋巴细胞刺激因子，B Lymphocyte stimulator；trademark of Human Genome ScienceRockville,MD)的受体被分离的，也称为BAFF、THANK、TALL-1、TNFSF13、zTNF4。

BCMA是I型单次跨膜受体，属于TNF家族受体，并主要表达在B淋巴细胞上。本文所用的BCMA还包括BCMA天然序列以及BCMA变体(其在本文中进一步定义)，并且可以从多种来源分离到，例如从鼠或人组织类型或另一种来源，或者用重组或合成的方法制备。

“BCMA天然序列”包括具有与源于自然的BCMA相同的氨基酸序列的多肽。这种BCMA天然序列可以从自然中分离，或者可以通过重组或合成的方法制备。BCMA的天然存在的截短或分泌形式(例如包含如胞外域序列的可溶形式)、天然存在的变体形式(例如可变剪接形式)以及BCMA天然存在的等位变体。在本发明的一个实施方式中，BCMA天然序列是包括SEQ ID NO：1的第1-184位氨基酸的成熟或全长天然序列BCMA多肽或其片段。这些片段优选地是生物活性的。

本发明使用的“生物活性”是指具有可直接或间接表现的体内或体外活性。BCMA的生物活性片段与该受体的活性位点之间可以具有，例如，70%氨基酸同源性，更优选至少80%，和最优选至少90%的氨基酸同源性。受体的同一性或同源性在本发明中定义为候选序列中与SEQ ID NO：1所示的BCMA残基相同的氨基酸残基所占的百分比，或者与SEQ ID NO：1中指定部分相同的氨基酸残基所占的百分比。可以通过与APRIL和/或BAFF相互作用的方式测试生物活性。

“BCMA胞外域”或“BCMA ECD”是指基本上不含BCMA的跨膜和胞质域的BCMA形式。通常，BCMA胞外域带有此类跨膜及胞质域的不足1%，并优选具有这样的域的不足0.5%。任选地，BCMA ECD包含SEQ ID NO：1的氨基酸残基8-41，或SEQ ID NO：1的氨基酸残基4-51，或SEQ ID NO：1的氨基酸残基1-53。在本发明的一个优选实施方式中，所述BCMA ECD包含SEQ ID NO：1的氨基酸残基1-51。熟练技术人员应理解的是，已鉴定的本发明BCMA多肽的跨膜域是根据本领域常规使用的用于鉴定疏水结构域类型的标准来鉴定的。跨膜域的确切边界可能各不相同，但最有可能在本文特别提到的域的任一末端不超过约5个氨基酸。因此，BCMA ECD可以任选地包含氨基酸8-41(SEQ ID NO：1)。

“BCMA-变体”是指如下定义的活性BCMA，其与相对于全长天然序列BCMA具有SEQ ID NO：1所示推导的氨基酸序列的BCMA或与BCMA序列具有至少约80%氨基酸序列同一性。这样的BCMA变体包括，例如，在SEQ ID NO：1所示序列的末端或C-末端添加或缺失一个或多个氨基酸残基而得到的BCMA多肽。通常，BCMA变体与SEQ ID NO：1所示氨基酸序列之间具有至少约80%或85%的氨基酸序列同一性，更优选至少约90%的氨基酸序列同一性，进一步更优选至少约95%的氨基酸序列同一性。

本发明中鉴定的BCMA序列的“百分比(%)氨基酸序列同一性”定义为将候选序列与BCMA序列比对并在必要时引入缺口以便实现最大限度的序列同一性百分比，而且不将任一保守性取代计入序列同一性时，候选序列中与BCMA序列中氨基酸残基相同的氨基酸残基所占的百分比。为测定氨基酸序列同一性百分比而进行的比对可以通过多种途径来实现，这些途径都属于本领域的技术范畴之内，例如，使用公众可得到的电脑软件，如BLAST、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员能够确定适合于测算比对的参数，包括为实现所比较全长序列最大限度比对而需要的任一算法。

在本发明的背景中使用时，术语“倾向于有利地响应”是指施用基于抗体的治疗，特别是抗-BCMA抗体治疗的患者的MM B细胞更有可能对所述抗体易感。MM B细胞(优选从患者获得)可利于响应的可能性依赖于本文所述的MM B细胞的细胞表面上的BCMA表达。更具体地，如果所述MM B细胞的细胞表面上的BCMA的表达水平高于本文所述的参考细胞的表达水平，MM B细胞可能利于响应所述抗体。如本文所述的那样确定MM B细胞的细胞表面上BCMA的表达水平。

BCMA的表面表达可以，例如，使用适当的抗-BCMA抗体通过荧光激活细胞分选(FACS)确定。抗-BCMA抗体可以用本领域中已知的常用手段和方法产生或者通过市售购得。

特别地，本发明还包括与BCMA特异性反应的抗体。可通过标准程序(参见，例如，Antibodies:A Laboratory Manual ed.by Harlow and Lane(Cold SpringHarbor Press:1988))制备抗蛋白/抗肽的抗血清或单克隆抗体。可以用肽的免疫原性形式免疫哺乳动物，例如小鼠、仓鼠或兔。赋予蛋白或肽以免疫原性的技术包括与载体缀合，或本领域公知的其他技术。可在佐剂的存在下给药BCMA的免疫原性部分。可以通过检测血浆或血清中的抗体滴度检测监测免疫进程。可使用免疫原作为抗原以标准的ELISA或其他免疫分析评估抗体水平。

在一个优选的实施方案中，所述抗体是BCMA或其共受体的抗原决定簇免疫特异性的，例如SEQ ID NO：1的多肽的抗原决定簇，或密切相关的人或非人哺乳动物同系物(例如70%、80%或90%的同源性，更优选至少95%的同源性)。在另一个优选的本发明的实施方式中，抗-BCMA抗体基本上不与，例如与SEQ ID NO：1小于80%同源的，优选与SEQ ID NO：1小于90%同源的，最优选与SEQ ID NO：1小于95%同源的蛋白发生交叉反应(即特异性反应)。所谓“基本上不交叉反应”是指抗体具有的对非同源蛋白的结合亲和力为对SEQ ID NO：1的蛋白的结合亲和力的小于10%，更优选小于5%，和进一步更优选小于1%

如上所述，BCMA包含胞外域。本发明的方法和基于抗体的治疗中应用的抗体优选地靶向所述胞外域。优选的抗-BCMA抗体是抗人BCMA抗体，例如大鼠抗-人BCMA抗体、小鼠抗-人BCMA抗体、骆驼抗-人BCMA抗体、绵羊抗-人BCMA抗体。当然，如果要检测在患者，例如猫或狗的表面上的除人以外的哺乳动物的BCMA，则使用要诊断的物种以外的抗体。例如，如果患者是狗或猫，使用小鼠、大鼠、绵羊、骆驼抗-狗或抗-猫的BCMA抗体。

在抗-BCMA抗体的替代方案中，也可以使用anticalin，即针对BCMA，优选人BCMA的脂质运载蛋白突变蛋白，例如泪脂质运载蛋白突变蛋白、细菌脂质运载蛋白突变蛋白或hNGAL脂质运载蛋白突变蛋白。

在本发明的方法中使用的特别优选的抗体是抗-人抗体Vicky-1和/或MAB193(克隆335004)。Vicky-1是大鼠IgG1同种型并可购自GeneTex，目录号＃GTX17323。MAB193是大鼠IgG2a同种型并可购自R＆D System，目录号＃MAB193。

因此，在本发明的方法中，优选地使用Vicky-1或MAB193检测BCMA，优选MM B细胞表面上表达的BCMA。同样，优选地使用Vicky-1或MAB193检测本文所述的患者，其可能患有MM或怀疑带有MM B细胞。换言之，优选的是所述患者(更具体地B细胞，特别是，所述患者的MM B细胞)是，如此说来，Vicky-1和/或MAB193阳性。

也可以通过表面等离子体共振(SPR)技术，例如Biacore测试BCMA的表面表达。

在本发明的方法的背景中，如果MM B细胞显示的可检测信号高于(或超出)参考细胞，优选BCMA阴性细胞，更优选BCMA阴性B细胞，进一步更优选BCMA阴性MM B细胞，则认为MM B细胞在其表面上表达BCMA(即它是BCMA阳性或具有一定的BCMA表达水平)。优选的BCMA阴性MM B细胞是U266B1、JJN-3或LP-1，优选U266B1和JJN-3。值得注意的是，这样的BCMA阴性细胞系仍可检测到BCMA mRNA。熟练技术人员很容易确定可检测信号(由于在感兴趣的B细胞上的BCMA表达)是否高于参考细胞的可检测信号。可检测的信号的上下文中的“高于”是指由于感兴趣的B细胞，例如患者的一个或多个B细胞表面上的BCMA表达的可检测信号比BCMA阴性参考细胞的信号高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%或更高。如上文所述，优选使用所述MAB193或Vicky-1抗体检测/分离/确定B-细胞表面上的BCMA表达，优选患有恶性B细胞的患者，优选MM患者。

“信号”或“可检测的信号”反映了抗原-抗体反应的结果。在本发明的内容中，所述抗原-抗体反应优选地是抗-BCMA抗体与BCMA的反应。

可通过抗体，特别是本发明描述的针对BCMA的抗体的信号产生基团提供的信号确定信号。该信号可以是可通过，例如下文所述的光谱、光化学、生物化学、免疫化学或化学手段检测的任意信号。也可通过下文所述的抗原特异性受体的信号产生基团提供的信号确定信号。

信号产生基团是指可由光谱、光化学、生物化学、免疫化学或化学手段检测的组合物。例如，可使用的标记物包括放射性标记物，如³²P、³⁵S或¹²⁵I；荧光染料(例如，Cy-3，Cy-5)；发色团、电子致密试剂；产生可检测信号的酶(例如，常用于ELISA的酶)；或自旋标记物。该标记物或可检测的部分具有或产生可测量的信号，例如放射性、显色或荧光信号，其可以用于定量样品中结合的可检测部分的量。

可检测的部分可以通过共价键，或通过离子键、范德华力或氢键并入或连接信号产生基团，例如并入放射性核苷酸，或可被链霉亲合素识别的生物素化的核苷酸。所述标记物或可检测的部分可以被直接或间接地检测。间接检测可涉及第二直接或间接可检测部分与可检测部分的结合。例如，可检测部分可以是结合配偶体的配体，例如生物素，其是链霉亲合素的结合配偶体，或核苷酸序列，其是可以与其特异性杂交的互补序列的结合配偶体。结合配偶体本身可以是直接可检测的，例如，抗体本身可能是用荧光分子标记的。结合配偶体也可以是间接可检测的。

当所述抗体特异性受体是“能够结合信号发生基团”时，这是指它可以结合信号发生基团。例如，所述抗体特异性受体可以带有能够结合信号产生基团的官能团。官能团可以是结合生物素的链霉亲合素/亲合素、结合抗体的抗原例如标签，例如GST或组氨酸残基、结合凝集素的糖或公知的Dig/抗-Dig系统。结合官能团的部分携带信号产生基团。

本领域中已知的任何免疫分析法可用于免疫检测抗体对抗原的结合或抗原对抗体的结合。免疫分析是本领域技术人员公知的。进行这些分析的方法以及实际应用和程序概述于相关教科书中。相关教科书的例子是Tijssen,P.,In:Practice and theory of enzyme immunoassays,Burdon,R.H.和v.Knippenberg,P.H.(eds.),Elsevier,Amsterdam(1990),pp.221-278,和Colowick,S.P.andCaplan,N.O.(eds.),Methods in Enzymology,Academic Press,dealing withimmunological detection methods的各卷，特别是卷70、73、74、84、92和121。

免疫分析，例如，包括沉淀(特别是免疫沉淀)、电化学发光(电产生的化学发光)、RIA(放射免疫分析)、ELISA(酶联免疫吸附分析)、夹心酶免疫测试、电化学发光夹心免疫分析(ECLIA)、解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)、闪烁接近检测(SPA)、比浊法(turbidimetry)、浊度法(nephelometry)、乳胶增强比浊法或浊度法、固相免疫测试、以及质谱法，例如SELDI-TOF、MALDI-TOF或毛细管电泳-质谱法(CE-MS)。

此外，适合的免疫分析包括基于微孔板ELISA的方法、完全自动化或机器人免疫分析和乳胶凝集分析。

典型地，在本发明中免疫分析是抗体特异性结合抗原以提供抗体的检测和/或定量的分析或抗原结合抗体以提供所述抗原的检测和/或定量的分析。在本发明的内容中，抗原优选是BCMA或其片段，所述片段优选免疫可检测的，抗体优选是抗-BCMA抗体。

本文所用的“免疫学可检测的”优选包括如本文所述的抗体对抗原的结合或抗原对抗体的结合所产生的信号，通过本领域公知和应用的手段和方法是可检测的。在本发明的背景中，“免疫学可检测的”优选地是指抗-BCMA抗体和BCMA或其片段反应所产生的信号高于(或超过)本文所述的参考细胞，即感兴趣的MM B细胞的，则为BCMA阳性。

本文所用的“免疫学不可检测的”优选包括如本文所述的抗体对抗原的结合或抗原对抗体的结合所产生的信号，通过本领域公知和应用的手段和方法是不可检测的。在本发明的背景中，“免疫学不可检测的”优选地是指抗-BCMA抗体和BCMA或其片段反应所产生的信号等于或低于本文所述的参考细胞，即感兴趣的MM B细胞的，则为BCMA阴性。

“感兴趣的MM B细胞”是指B细胞，优选获得自患有MM或怀疑患有MM的患者的恶性B细胞。在根据本发明的方法分析所述感兴趣的B细胞之前，不能确定所述B细胞分别是BCMA阳性还是阴性。

另外，或作为MM B细胞与BCMA阴性细胞的细胞表面上的BCMA表达水平的比较的替代，BCMA阳性细胞系也可以作为参考细胞。本发明意义(即如本文所定义的)中适合的BCMA阳性细胞系为NCI-H929、MOLP-2、OPM-2、MOLP-8、RPMI8226、KMS-12-BM或L-363。特定地，如果与参考细胞系具有至少相等的BCMA表达水平，则认为感兴趣的MM B细胞是BCMA阳性的。优选如本文所述的(即通过由细胞所产生的信号的方式)确定所述表达。

同样地，在本发明的方法的背景中，如果它基本上不显示高于参考细胞，优选BCMA阴性细胞，更优选BCMA阴性B细胞，进一步更优选BCMA阴性MM B细胞的可检测信号，则认为MM B细胞在其表面上不表达BCMA(即它是BCMA阴性)。优选的BCMA阴性MM B细胞是U266B1、JJN-3或LP-1，优选U266B1和JJN-3。值得注意的是，这样的BCMA阴性细胞系仍可检测到BCMA mRNA。熟练技术人员很容易确定由于感兴趣的B细胞上的BCMA表达的可检测信号是否不高于(即等于或低于)参考细胞的信号。可检测的信号的上下文中的“等于”是指由于感兴趣的B细胞，例如患者的一个或多个B细胞表面上的BCMA表达的可检测信号与BCMA阴性参考细胞的信号相等。可检测的信号的上下文中的“低于”是指感兴趣的B细胞，例如患者的一个或多个B细胞显示比BCMA阴性参考细胞的信号低5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或甚至100%的信号。

本发明人的发现还为技术人员提供一种选择基于抗体的多发性骨髓瘤(MM)疗法的方法，其包括确定患者的B细胞是否在所述浆B细胞表面上表达BCMA蛋白，其中如果所述浆B细胞是BCMA阳性，那么患者可以进行抗-CD20抗体治疗和/或抗-CD38抗体治疗和/或抗-BCMA抗体治疗，或者如果所述B细胞是BCMA阴性，那么患者进行抗-CD20抗体治疗和/或抗-CD38抗体治疗。

事实上，如本文所述的，如果患者的B细胞表达BCMA蛋白，所述患者将潜在地利于响应抗-BCMA抗体治疗。但是，即使患者的B细胞是BCMA阴性(BCMA阴性)，所述患者可以进行基于抗体的治疗，例如基于抗-CD20的抗体的治疗和/或基于抗-CD38抗体的治疗。因此，本发明提供选择一种或多种合适的基于抗体的治疗以治疗或预防MM的方法和方式。

术语“潜在地”在治疗效果的上下文中使用时是指抗-BCMA抗体(虽然根据本发明的方法的结果，这样的抗体被视为具有治疗效果)不一定必然具有治疗效果。这是因为(不言自明的)本发明的方法无法提供100%安全的预测是否患者可能对这样的抗体易感，因为除了MM B细胞表面上BCMA的表达以外，个人因素，如年龄、体重、一般健康、性别、饮食、药物相互作用等可能影响患者是否将可能对这样的抗体易感。

但是，与MM B细胞不显示BCMA细胞表面表达的患者相比，如果患者的MM B细胞为如本文所述的BCMA阳性，抗-BCMA抗体具有治疗作用的可能性为高于50%。优选地，可能性为高于60%、70%、80%、或90%，更优选高于95%。

当然，在使患者进行基于抗-CD20和/或抗-CD38和/或CS1抗体的治疗前最好是确定BCMA阴性的MM患者是否可能是CD20和/或CD38阳性和/或CS1阳性。

本发明中包括的将基于抗-BCMA抗体的治疗(如果患者是BCMA阳性)与进一步的基于抗体的治疗(即，一种或多种基于抗体的治疗)联合(即，作为组合)，或者作为基于抗-BCMA抗体的治疗(如果患者是BCMA阴性)的替代，可以基于下表外部左栏表示的靶点。如果针对外部左栏表示的靶点的抗体与毒素缀合，则这样的缀合物包括于所述的进一步的基于抗体的治疗中。

可以通过B细胞表面标志物选择和/或确定B细胞。本发明的“B细胞表面标志物”或“B细胞表面抗原”是表达在B细胞表面上的抗原，其被可以与之结合的拮抗剂靶向。示例性的B细胞表面标志物包括，但不限于，CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD52、D53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85、CD86、CDI80(RP105)、FcRH2(IRTA4)、CD79a、C79b、CR2、CCR6、CD72、P2X5、HLA-DOB、CXCR5(BLRI)、FCER2、BR3(也称为BAFF-R)、TACI、BTLA、NAG14(也称为LRRC4)、SLGC16270(也称为LOC283663)、FcRHI(IRTA5)、FcRH5(IRTA2)、ATWD578(也称为MGC15619)、FcRH3(IRTA3)、FcRH4(IRTAI)、FcRH6(也称为LOC343413)，特别是BCMA。

可以通过如上所述的B细胞表面标志物检测、选择和/或确定MM B细胞。然而，优选地通过以下标志物选择和/或确定MM B细胞：CD19、CD56、CD117、CD20、CD28、CD27、CD81和/或CD200(也参见Rawston等人，(2008年),Haematologica93(3):431-438的表2)。

本发明的MM B细胞优选地表征为至少CD38阳性、CD56阳性或阴性、CD45阳性和CD19阳性。

进行本发明的方法处理的B细胞，优选恶性的B细胞优选从患者获得。根据本发明的患者是哺乳动物，优选地所述患者或哺乳动物患有MM或怀疑患有MM。治疗目的的“哺乳动物”是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人类、驯养和农场动物、非人类灵长类动物以及任何其他具有乳腺组织的动物。哺乳动物包括人类、啮齿动物，如小鼠、大鼠或兔、狗、猫、黑猩猩、马、猪等，优选为人类。患者还包括人类和兽医患者，优选为人类患者。在上述的每一种方法中，所述哺乳动物可能患有多发性骨髓瘤。

“需要”治疗的哺乳动物包括，但不限于，患有多发性骨髓瘤或怀疑患有多发性骨髓瘤的哺乳动物。

“受试者”在本文中所用时，包括哺乳动物和非哺乳动物受试者。

获得自患者的B细胞优选包含于样品中。根据本发明的术语“样品”可以是获得自受试者的任意生物样品、细胞系、组织培养物或至少含有B细胞的其他来源。生物样品包括体液(例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、滑液和脊髓液)和发现含有B细胞的组织来源。从受试者获得组织活检和体液的方法是本领域中公知的。一般情况下，包括外周血单核细胞(PBMC)，特别是B细胞和T细胞的生物样品是优选作为来源的。包括外周血单核细胞(PBMC)，特别是B细胞和T细胞的生物样品优选取自人类患者的外周血。其他优选的样品是全血、血清、血浆或滑液，最优选是血浆或血清。然而，特别优选取自人类患者外周血的样品。

将患者用抗BCMA抗体治疗是本发明的方法的一个优选的实施方案。用于治疗患者的抗体以及应用于分层、诊断或选择基于抗体的MM治疗的抗体优选是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体、域抗体(dAb)或纳米抗体(nanobody)。

术语“抗体”也包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、单特异性抗体、多特异性，例如双特异性抗体、非特异性抗体、人源化抗体、人单链抗体、嵌合抗体、合成抗体、重组抗体、杂合抗体、突变抗体、移植抗体、域(VHH)抗体和体外产生的抗体，以及包括骆驼抗体和人源化骆驼抗体的纳米抗体。因此，术语“抗体”还涉及纯化的血清，即纯化的多克隆血清。因此，所述术语优选涉及血清，更优选多克隆血清和最优选纯化的(多克隆)血清。

此外，在本发明中所使用的术语“抗体”还涉及与所描述的抗体显示相同的特异性的本文所述抗体的衍生物或变体。“抗体变体”的例子包括非人类抗体的人源化“变体”、“亲和性成熟的”抗体(参见，例如Hawkins等人，J.Mol.Biol.254,889-896(1992年)和Lowman等人，Biochemistry30,10832-10837(1991年))和具有改变的效应功能的抗体突变体(参见，例如US专利5,648,260)。

本文所用的术语“抗原结合结构域”、“抗原结合片段”和“抗体结合区”是指抗体分子的部分，其包含负责抗原与抗体之间特异性结合的氨基酸。抗体特异性识别和结合的抗原部分是指如上文所述的“表位”。如上文所述，该抗原结合域典型地包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH);但是，其不是必然包含两者。Fd片段，例如，具有两个VH区并经常保留完整抗原结合区的一些抗原结合功能。抗体的抗原结合片段的例子包括：(1)Fab片段，具有VL、VH、CL和CH1结构域的单价片段；(2)F(ab')2片段，具有在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(3)具有两个VH和CH1结构域的Fd片段；(4)具有抗体单臂的VL和VH结构域的Fv片段；(5)dAb片段(Ward等人，(1989年)Nature341:544-546)，其具有一个VH或VL结构域；(6)分离的互补决定区(CDR)，和(7)单链Fv(scFv)。虽然Fv片段的两个结构域，VL和VH>是由单独的基因编码的，可通过能够使得它们作为单一蛋白链的合成接头，使用重组的方法将它们连接，在所述单一蛋白链中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人(1988年)Science242:423-426；和Huston等人，(1988年)Proc.Natl.Acad.Sci USA85:5879-5883)。使用本领域技术人员已知的传统技术获得这些抗体片段，并以完整抗体相同的方式评价片段的功能。

在本文中，术语“免疫球蛋白”(Ig)与“抗体”可互换使用。

本发明的另一个方面是抗-BCMA抗体疗法，其用于治疗浆B细胞倾向于为BCMA阳性的多发性骨髓瘤(MM)患者。

本发明的另一个方面是抗-BCMA抗体，其用于治疗用本发明的方法诊断的多发性骨髓瘤(MM)患者。

本发明还有的另一个方面是抗-CD20抗体和/或抗-CD38抗体，其用于治疗B细胞为BCMA阴性的多发性骨髓瘤(MM)患者。

在本发明的一个实施方式中，抗BCMA抗体与包含对MM患者的恶性浆B细胞有毒的化疗剂的毒素缀合。合适的化疗剂公开于WO2010/121093中，如硼替佐米(Bortezomib，Velcade)、沙利度胺(Thalidomide，Thalomid)、来那度胺(Lenalidomide，Revlimid)。

术语“治疗”或“疗法”是指治愈性治疗和预防或防止措施，其目的是防止或减缓(减轻)不希望的生理变化或紊乱，例如癌症，特别是MM的发展或扩散。为了本发明的目的，有益的或所需的临床结果包括，但不限于，症状的减轻、疾病程度的减轻、疾病稳定的(即不恶化)的状态、病情恶化的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和和缓解(不论部分或全部)，无论可检测或不可检测。“处理”也意味着与如果不接受治疗预计的生存期相比，延长的存活。需要治疗的患者包括那些已经患病或紊乱的，以及那些易于患病或紊乱的或那些患病或紊乱可以防止的人。

抗-BCMA抗体、抗CD20抗体、抗-CD38抗体和/或抗-CS1抗体优选地以“有效量”给药。“有效量”是足够实现特定声称的目的的剂量。“有效量”可以凭经验确定和通过与声称的目的有关的已知的方法确定。

术语“治疗有效量”是指在哺乳动物(也称为患者)中有效“治疗”或“改善”MM的本发明的治疗剂的量。在一个实施方案中，所述治疗有效量可以是MM情况下的生长抑制量或细胞毒性量、对下列任一项有活性的药物治疗有效量：癌细胞数量的减少、恶性MM B细胞数量、肿瘤大小的减少；抑制(即缓慢到一定程度并优选停止)肿瘤细胞浸润到外周器官；抑制(即缓慢到一定程度并优选停止)肿瘤细胞的转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或将一种或多种癌症相关的症状减轻到一定程度。药物能够在一定程度上防止生长和/或杀灭现有的癌细胞，其可以是抑制细胞生长的和/或细胞毒性的。“治疗”或“治疗有效量”是指给药治疗剂的过程，该过程可以在一段时间内包括不同剂量以达到理想的疗效。

可以通过多种方法，例如通过静脉给药，例如，在一段时间内以丸剂或连续输注、皮下、肌内、腹膜内、脑脊液内、关节内、滑液内、鞘内或吸入途径将B细胞消耗剂(即抗-BCMA抗体、抗-CD20抗体、抗-CD38抗体或任何任意其他针对B细胞表面上表达的靶点，如CS1的抗体)施用给患者。

优选地以药物组合物的形式给药这些抗体。由主治医师和临床因素确定剂量方案。正如是医药领域众所周知的，任一患者的剂量取决于多种因素，包括患者的大小、体表面积、年龄、待施用的特定化合物、性别、时间和给药途径、一般健康状况和同时施用的其它药物。用于肠胃外给药的制剂包括无菌的水性或非水性溶液、悬浮液和乳剂。非水性溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油，如橄榄油和可注射的有机酯，如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括生理盐水和缓冲液。肠胃外的载体包括氯化钠溶液、Ringer氏右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸Ringer氏或固定油。静脉注射的载体包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(例如基于Ringer氏右旋糖的那些)等。也可以存在防腐剂和其它添加剂，例如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。此外，本发明的药物组合物可进一步包括试剂，例如如本文其他地方所列举的额外的抗肿瘤制剂。

本发明的另一个实施方式是包含抗-BCMA抗体和使用说明(特别是关于如何进行本发明的方法的说明)的试剂盒。

所述试剂盒包括至少一个容器和一个在容器上或与容器相关联的标签或包装插页。合适的容器包括例如，瓶、小瓶、注射器等。所述容器可以形成自多种材料，例如玻璃或塑料。该容器可以带有一个无菌的接入口用于提取治疗剂(例如，该容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的止动件的静脉溶液袋或小瓶)。该标签或包装插页可以表明所述组合物是用于治疗MM的。

此外，所述试剂盒还可以包括一个第二容器，其包含药学上可接受的缓冲液，如抑菌的注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲液、Ringer氏溶液和右旋糖(dextrose)溶液。其可以进一步包括从商业和用户的角度来看需要的其他材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。

实施例

抗体的

488标记

使用

488单克隆抗体标记试剂盒(Invitrogen，#A20181)用

488标记抗-BCMA IgG和合适的同种型对照IgG。根据制造商的说明进行标记并计算标记程度。

表1：用于488标记的抗-BCMA单克隆抗体

IgG	克隆	同种型	产品目录号
				抗-BCMA	Vicky-1	大鼠IgG1	GeneTex,#GTX17323
抗-BCMA	335004	大鼠IgG2a	R&D Systems,#MAB193
				大鼠IgG1同种型对照	43414	大鼠IgG1	R&D Systems,#MAB005
大鼠IgG2a同种型对照	54447	大鼠IgG2a	R&D Systems,#MAB006

来自骨髓穿刺物的原代恶性浆B-细胞的染色

通过70μm细胞过滤器(BD，352350)过滤MM患者的骨髓穿刺物。之前已经确定了浆细胞数目并在此基础上计算了染色的穿刺物体积：

在180μl CD45阴性群中1-10%浆细胞；

在120μl CD45阴性群中11-20%浆细胞；

在60μl CD45阴性群中21-31%浆细胞；

将适当体积的穿刺物与1.5μl下述每种抗体温育：CD38-APC(BD，克隆：HIT2，＃555462)，CD56-PE-Cy-7(BD，克隆：NCAM16.2，＃335791)，CD45-APC-Cy-7(BD，克隆：2D1；＃557833)和6μl CD19-PerCP-Cy5.5(BD，克隆：HIB19，＃561295)。对于诊断性染色，使用固定和透化试剂盒(Invitrogen,#GAS-003)固定并透化细胞，接着用6μl每种抗-Igκ-FITC(BD,克隆:G20-193,#555791)和抗-Igλ-PE(BD,克隆:JDC-12，＃555797)。为了检测BCMA，使用10μg/ml的Vicky-1-Alexa488或MAB193-Alexa488和同种型对照大鼠IgG1-Alexa488和大鼠IgG2a Alexa488并将样品在4℃下温育15分钟。洗涤细胞并用FACS裂解/清洗助剂(lyse/Wash Assistant)，LWA(BD)裂解红细胞。使用FACSCanto流式细胞仪(BD)分析信号。

通过对CD45低、CD38高、CD19低群体，且在患者在其浆细胞上表达CD56的情况中，对CD56高门控确定浆细胞。对非浆细胞门控CD45高、CD38低、CD56低作为参考。两个群体，例如Vicky-1和大鼠lgG1均测定Alexa488的荧光强度。将来自于特定抗体和同种型对照的荧光信号的柱状图重叠并标注区别。如果非浆细胞在Vicky-1和Mab193和同种型对照的荧光强度上显示没有差异，以及分别与针对大鼠IgG1或IgG2a测定的荧光相比，浆细胞上针对Vicky-1和MAB193的荧光明显增加，则认为患者是BCMA阳性。

使用Flow Jo分析原始数据。除了其在数据收集日分配的样品号外，给予患者用于鉴定的连续号码。

使用不同抗-BCMA抗体对OPM-2细胞进行FACS染色

为了检测BCMA蛋白是否表达于OPM-2细胞系(一种源自多发性骨髓瘤的人类外周血细胞)的细胞表面上，使用Vicky-1和MAB193进行FACS分析(图1)。结果是，对于OPM-2细胞的表面上BCMA蛋白的表达，两者均显示出充分的染色效果。然而，发现与MAB193相比，Vicky-1显示出更强的FACS移位(图1)，这意味着也证明了Vicky-1和MAB193的荧光信号(表2)。

因此，将Vicky-1作为抗-BCMA抗体用于本发明所进行的的进一步实验。

表2：平均荧光信号

单抗	平均荧光信号
		Vicky-1	609
MAB193	371

MM细胞系中蛋白和mRNA表达水平的相关性

作为下一个步骤，发明人通过FACS和人外显子基因芯片(Affymetrix)分别在10种不同的MM细胞系中检测了BCMA蛋白以及BCMA mRNA的水平(图2)。

使用Li等人(Med Oncol(2010年)27:439-445)描述的引物在RT-PCR中分析了mRNA的表达水平。详细地，如本领域中经常做的那样从MM细胞分离总细胞RNA。分离的RNA用作通过反转录(RT)合成第一链cDNA的模板，和cDNA用作聚合酶链反应(PCR)的模板。使用下列引物：BCMA5'-TTACTTGTCCTTCCAGGCTGTTCT-3'(有义)(SEQ ID NO：2)和5'-CATAGAAACCAAGGAAGTTTCTACC-3'(反义)(SEQ ID NO：3)。

图2(A)显示在10种MM细胞系中使用Vicky-1用FACS测定的BCMA蛋白水平的结果。有趣的是，在每个细胞系中，细胞表面上的BCMA蛋白水平是变化的。特别地，发现NCI-H929(在表3中非常强用+++表示)、MOLP-2、OPM-2以及KMS-12-BM(在表3中强用++表示)在所述的细胞系的细胞表面上显示非常强或强的表达。另一方面，U226B1、JJN-3和LP-1在所述的细胞系的细胞表面上未显示BCMA蛋白的表达。

图2(B)显示10种不同MM细胞系的BCMA mRNA表达水平。相对表达水平是与GAPDH mRNA水平归一化的结果。

发现例如在NCI-H929细胞系中，BCMA mRNA水平是非常高的，因为它也显现出高的蛋白水平。虽然发现在U266B1、JJN-3以及LP-1细胞表面上没有检测到BCMA蛋白表达，但是在所述细胞系中检测到BCMA的mRNA，而且应当指出JJN-3和LP-1细胞系的BCMA mRNA水平表现为相当高。因此，发明人得出的结论是在MM细胞系中在细胞表面的BCMA蛋白和BCMA mRNA没有固定的相关性。

表3：在10种不同的MM细胞系中蛋白和mRNA表达水平的总结

	mRNA水平	蛋白水平
			NCI-H929	+++	+++
MOLP-2	++	++
			OPM-2	++	++
MOLP-8	++	+
			RPMI8226	+	+
KMS-12-BM	+	++
			L-363	++	+
U266B1	+	-
			JJN-3	++	-
LP-1	++	-

MM患者的骨髓浆细胞上BCMA蛋白的表达

此外，发明人检测了BCMA蛋白是否表达在来自23例MM患者的MM细胞(恶性浆B细胞)的细胞表面上并且是用Vicky-1或MAB193检测的。用FACS分析了23例患者的骨髓穿刺物的BCMA表达。其结果是，发现52%(12/23)的MM患者显示在MM细胞的细胞表面上为BCMA阳性，但是48%(11/23)的MM患者显示BCMA阴性(表4)。在图3中，FACS信号移位是在原代浆细胞中检测到的。另一方面，在非浆细胞中没有观察到信号移位(图3)。

表4

n.a.未检测

+阳性染色

-阴性染色

Claims

1.一种对倾向于有利地响应抗-BCMA抗体治疗的多发性骨髓瘤(MM)患者进行分层的方法，所述方法包括确定所述患者的B细胞、优选恶性B细胞是否在所述B细胞的表面上表达BCMA蛋白，其中如果所述B细胞在其表面上表达BCMA蛋白，则所述患者倾向于有利地响应所述抗-BCMA抗体治疗。

2.一种用于诊断BCMA阴性多发性骨髓瘤(MM)患者的方法，所述方法包括确定所述患者的B细胞、优选恶性B细胞是否在其表面上表达BCMA蛋白，其中如果在所述B细胞的表面上没有检测到BCMA蛋白，则所述患者患有BCMA阴性MM。

3.一种用于选择基于抗体的多发性骨髓瘤(MM)疗法的方法，所述方法包括确定患者的B细胞、优选恶性B细胞是否在所述B细胞的表面上表达BCMA蛋白，其中如果所述B细胞是BCMA阳性，则所述患者可以进行抗-CD20抗体治疗和/或抗-CD38抗体治疗和/或抗-BCMA抗体治疗和/或抗-CS1抗体治疗，或者，如果所述B细胞是BCMA阴性，则所述患者进行抗-CD20抗体治疗和/或抗-CD38抗体治疗和/或抗-CS1抗体治疗。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述B细胞获自所述于患者。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述B细胞的特征在于其为CD38阳性、CD56阳性或阴性、CD45阳性，和CD19阳性。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述患者将利用抗-BCMA抗体疗法治疗。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗-BCMA抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或双特异性抗体。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗-BCMA抗体与毒素缀合。

9.抗-BCMA抗体疗法，其用于治疗或改善B细胞、优选恶性B细胞倾向于为BCMA阳性的多发性骨髓瘤(MM)患者。

10.抗-BCMA抗体，其用于治疗或改善用前述权利要求中任一项所述的方法诊断的多发性骨髓瘤(MM)患者。

11.抗-CD20抗体和/或抗-CD38抗体和/或抗-CS1抗体，其用于治疗或改善B细胞、优选恶性B细胞为BCMA阴性的多发性骨髓瘤(MM)患者。

12.根据前述权利要求中的任一项，其中所述BCMA蛋白可用Vicky-1或MAB193检测到。

13.试剂盒，其包括抗-BCMA抗体和关于实施权利要求1-7中任一项所述的方法的说明书。