KR20140031905A

KR20140031905A - 다발성 골수종 환자에 대한 bcma-기본 계층화 및 치료법

Info

Publication number: KR20140031905A
Application number: KR1020137030684A
Authority: KR
Inventors: 에릭 보르게스; 야스민 바르바라 헤바이스
Original assignee: 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하
Priority date: 2011-04-21
Filing date: 2012-04-20
Publication date: 2014-03-13
Also published as: PE20140612A1; CN103608039A; CA2832510A1; US20160131655A1; EP2699259A1; TN2013000412A1; CL2013003031A1; MA35056B1; EA201301180A1; AU2012244676A1; SG194500A1; JP2014520248A; EP2699259B1; IL228701A0; MX2013012167A; CO6801644A2; AP2013007178A0; US20140193433A1; US20130101599A1; WO2012143498A1

Abstract

본 발명은 B-세포, 바람직하게는 상기 환자의 악성 B-세포가 상기 B-세포의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시키는지에 대해 측정함을 특징으로 하는 다발성 골수종(MM) 환자의 계층화 방법에 관한 것이다. 또한, 항체-기본 다발성 골수종(MM) 치료법을 선택하는 방법은 BCMA가 B-세포, 바람직하게는 환자의 악성 B-세포의 세포 표면상에서 발현되지는 여부를 기본으로 한다. 추가로, BCMA 포지티브 악성 B-세포를 갖고 있는 환자에 대한 항체-기본 치료법이 제공된다.

Description

다발성 골수종 환자에 대한 BCMA-기본 계층화 및 치료법{BCMA-BASED STRATIFICATION AND THERAPY FOR MULTIPLE MYELOMA PATIENTS}

본 발명은 B-세포, 바람직하게는 다발성 골수종(MM) 환자의 악성 B-세포가 이들의 표면에서 BCMA 단백질을 발현시키는지 아닌지를 측정함을 특징으로 하는 다발성 골수종(MM) 환자의 계층화 방법에 관한 것이다. 또한, 항체-기본 다발성 골수종(MM) 치료법에 대한 선택 방법은 BCMA가 B-세포, 바람직하게는 환자의 악성 B-세포의 세포 표면상에서 발현되는지의 여부를 기본으로 한다. 추가로, BCMA 포지티브 악성 B-세포를 갖고 있는 환자에 대한 항체-기본 치료법이 제공된다.

혈장 B-세포의 불치의 악성종양인 다발성 골수종(MM)은 새로 진단되는 모든 혈액암의 14% 정도를 차지한다 (Colson et al., (2004) Clin J Oncol Nurs 8(5):473-480). MM은 이질적 질병(heterogenous disease)으로 대부분 염색체전좌, 그중에서도 t(11;14), t(4;14), t(8,14), del(13), del(17) (Drach et al., (1998) Blood 92(3):802-809; Gertz et al., (2005) Blood 106(8):2837-2840; Facon et al., (2001) Blood 97(6):1566-1571). MM-에 걸린 환자는 뼈 파괴, 골수 침윤, 신부전, 면역결핍, 및 암진단의 심리사회적 부담으로 인하여 다양한 질병-관련 증상을 경험할 수 있다. 화학요법 및 줄기세포 이식 방법과 같이 흥미진진한 새로운 치료법이 이용가능하게 되고 있으며 생존율은 개선시켰으나 흔히 원치않는 부작용을 일으켜, MM은 여전히 불치인 상태로 남아 있다 (Lee et al., (2004) J Natl Compr Canc Netw 8(4):379-383).

MM은 혈장 B-세포의 악성종양에 의해 발병된다. 상기 악성 혈장 B-세포를 최종적으로 확인하기 위하여, 수 종의 단백질이 혈장 B-세포의 표면상에 존재하는 것으로 밝혀졌다 (Harada et al., (1993) Blood 81(10);2658-2663; Robillard N et al., Blood (2003) 102(3):1070-1071). 예를 들어, CD38은 골수종 세포 (악성 혈장 B-세포), 즉 CD38 ⁺⁺의 표면상에서 강력하게 발현시키며 따라서 혈장 B-세포가 골수중의 다른 조혈세포와 구별되는 것으로 밝혀졌다. 또한, 하라다(Harada) 등은 정상적인 혈장 B-세포는 7명의 건강한 공여체로부터의 골수에서 VLA-4⁺ VLAS-5⁺ MPC-1⁺ CD44⁺ CD19 ⁺ CD56 ^- 인 반면, 성숙 골수종 세포 (20개의 케이스중 12개)는 VLA-4⁺ VLAS-5⁺ MPC-1⁺ CD19 ⁺ CD56 ⁺ 이고 골수종 세포 중 CD19⁺Cd56^- 인 것은 하나도 없음을 알았다. 또한, CD20의 발현은 작은 성숙 혈장 B-세포 형태와 t(11,14)가 있는 MM환자와 관련있는 것으로 보고되어 있다.

BLyS (B 림프구 자극인자)(이는 BAFF, TALL-1, 또는 THANK로도 언급된다)는 종양 괴사 인자(TNF) 슈퍼족 일원이다. 이는 타입 II 막관통 단백질로 정상적인 B-세포의 발달 및 항상성을 유지하는데 있어서 확실한 역할을 하며 악성 B 세포의 생존을 촉진한다. BLyS에 대한 수용체 3종, 즉, BCMA (B cell maturation antigen: B 세포 성숙 항원), BAFF 수용체 (BAFF-R), 및 TACI (transmembrane activator and calcium modulator cyclophilin ligand interactor: 경막 활성화인자 및 칼슘 조절인자 사이클로필린 리간드 상호작용인자)가 확인되었다. 이들 3종의 수용체는 타입 I 단일막 수용체이며 TNF 수용체 족에 속한다. BCMA와 BAFF-R은 주로 B 림프구상에서 발현되는 반면, TACI는 B 세포상에서 발견될 수 있으며 T 세포를 활성화시킨다. 또한, BCMA와 TACI는 BLyS의 가장 근접한 구조적 동족체인 APRIL (a proliferation-inducing ligand: 증식-유도 리간드)에 결합할 수 있다.

노바크(Novak)등은 BLyS (BAFF)에 대한 3종의 수용체가 MM 환자의 B-세포의 세포 표면상에서 발현됨을 발견하였다 (Novak et al., (2004) Blood 103(2):689-694).

BLyS에 대한 수용체 중 하나인 BCMA는 성숙 B 세포에서 우선적으로 발현되는 것으로 알려져 있다 (Gras et al., (1995) Int Immunol 7:1093-1106; Thompson et al., (2000) J Exp Med 192:120-135). 또한, BDMA mRNA로서 BCMA의 발현은 정상적인 B-세포 분화의 후기 단계 중에 상향-조절되며 MM 세포에서 고도로 발현되는 것으로 밝혀졌다 (Tarte et al., (2002) Blood 100:1113-1122; Tarte et al., (2003) Blood 102:592-600; Claudio et al., (2002) Blood 100:2175-2186). 또한, 벨루치(Bellucci) 등은 BCMA의 발현, 즉 BCMA mRNA가 B-세포 성숙의 후기 단계에서 선택적인 발현을 나타냄을 확인하였다 (Bellucci et al., (2005) Blood 105:3945-3950). 그러나, 리 (Li) 등은 BCMA의 발현, 즉 BCMA mRNA가 환자로부터의 MM 세포에서 항상 검출가능한 것이 아님을 확인하였다 (Li et al., (2010) Med Oncol 27:439-445). 이것 때문에, BCMA 발현이 형질세포와 배아중심 B 세포에서만으로 제한되지만, BCMA+ 집단은 또한 말초혈로부터의 미경험 및 메모리 B 세포에서도 관찰되었다 (US2009/0325196). BCMA+ B 세포의 평균은 미경험 B 세포에서는 24%이고 메모리 B 세포에서는 20.8%인데, 이는 형질아세포의 것(37.9%)보다 낮다. 그러나, BCMA는 주로 형질아세포에서 발현되는 것 같다.

t(4;16)(q26;p13.1) 염색체 전좌가 T 세포 림프종 환자로부터의 종양 세포에서 발견되었으며, 이에 따라 BCMA 유전자와 인터류킨 2 유전자의 융합이 발생하게 되며, t(16;18)(p13;q21.3) 염색체 전좌가 여포성 림프종을 앓고 있는 남성 환자에서 발견되었으며, 이에 따라 BCMA 유전자, HLA-D 유전자 및 수개의 조혈 신생물-관련 유전자, 예로서 MHC2TA와 BCL2 유전자의 융합이 발생하게 됨을 발견하였다고 보고된 바 있다 (Laabi et al., (1992) J EMBO 11(11):3897-3904; Mahmoodi et al., (2004) Can Genet Cytogenet 154(2):160-162). 이들 염색체 전좌가 MM을 일으키는 것으로 보고되진 않았지만, 전좌 하나는 여포 중심 B 세포의 림프종으로 정의되는 여포성 림프종과 관련있다.

추가로, 노바크(Novak) 등은 MM 세포주와 방금 단리된 MM 세포가 BCMA 단백질과 TACI 단백질을 이들의 세포 표면에서 발현시키며 BAFF-R 단백질의 가변적 발현을 이들의 세포 표면에 갖고 있음을 발견하였다 (Novak et al., (2004) Blood 103(2):689-694).

또한 BCMA 단백질이 원래 인간 성숙 B 림프구의 골지체중의 내재막 단백질로 보고되어 있지만, BCMA 단백질이 MM 세포/세포주의 세포 표면상에서 발현된다고 보고되었는데 (Gras et al., (1995) International Immunol 7(7):1093-1105), 이는 BCMA가 B-세포 발달 및 항상성에 있어서 중요한 역할을 하는 것 같음을 제시하는 것이다. 그라스(Gras) 등의 발견은 그라스 등에 기재된 BCMA 단백질이 염색체 전좌로 인하여, BCMA와 IL-2 사이에 융합 단백질이 된다는 사실과 관련있을 수 있다. 그러나, BCMA는 그동안 아마도 BAFF와 APRIL과의 이의 필수적인 상호작용으로 인하여 B-세포 발달과 항성성에 있어서 필수적인 B-세포 마커인 것으로 확립되어 있다 (Schliemann et al., (2001) Science 293(5537):2111-2114).

이제 까지는, 다발성 골수종 환자에 대해 가장 전망있는 치료법 선택권 2종은 탠덤 고용량 화학요법(tandem high-dose chemotherapy)에 이은 자가 줄기세포 주입법 또는 골수-탈격 치료(myelo-ablative therapy) 또는 감소된-강도 컨디셔닝(reduced-intensity conditioning) 후 동종 조혈 줄기세포 이식법이 있다. 그러나, 최소의 잔여 질병의 지속성으로 인하여 치료가 거의 성취되지 않는다. 따라서, 잔여 종양 세포를 안정화시키거나 심지어 근절시키기 위한 혁신적인 치료법이 시급하게 요구되고 있다.

암 표적 항원의 발견 및 분자적 특징화에 있어서, 통상적인 탈격치료 후 잔여 암 세포를 인식하여 제거하기 위하여 환자의 면역 시스템을 조정하기 위한 더욱 집중적인 방식이 이용가능해질 수 있다. 따라서 항체-기본 치료법이 MM의 치료에 있어서 매력적인 선택이다. MM 세포는 이들의 "전환"전에 B-세포였기 때문에, 통상적으로 알려져 있으며 특이적인 B-세포 표면 단백질은 CD20과 같은 항체에 대한 표적으로 사용된다. 정상적인 B-세포도 항-CD20 항체에 의해 표적화될 수 있지만, 정상적인 B-세포는 회복될 수 있는 것으로 관찰된 반면, 악성 B-세포는 회복될 수 없는 것으로 추정되기(및 관찰되었기) 때문에, 항-CD20 항체 치료법이 환자에게 적용된다. 지금까지는, 당업자들은 일단 악성 B-세포가 BCMA, PIM2, MUM1/IRF4 또는 XBP1과 같은 당해 표적을 mRNA 수준으로 발현시킨 다음(Claudio et al.(2002), Blood 100:2175-2186), 그러한 세포를 항체-기본 치료법으로 처리할 수 있다는 추정으로부터 시작한다.

그러나, 지금까지는 특히 항-BCMA 항체를 사용한 MM에 대해 가능한 치료법을 평가하는데 있어서 MM 환자에서 뿐만 아니라 MM 세포주에서 BCMA mRNA와 BCMA 단백질의 상관관계가 있는지 없는지에 대해 아직 보고된 바 없다. 오히려, DNA가 RNA를 만들고 RNA가 단백질을 만든다는 통상적으로 채택되는 개념에 따라서, 일단 BCMA mRNA가 MM 세포에서 검출가능하다면, BCMA 단백질이 상기 세포의 세포 표면에 존재하여 수용체로서 작용한다고 바로 추정하였다. 이는 BCMA가 B-세포 면역성 발달 및 B-세포 항상성에 있어서 (Mackay and Browning (2002) Nat Rev Immunol.(2):465-475) 뿐만 아니라 MM 세포의 증식에 있어서 (Novak et al., 상기 언급; Bellucci et al., (2005) Blood 105:3945-3950) 중요한 역할을 한다는 여러가지 보고서와 긴밀히 연관된다.

몇몇 최근의 연구에서 악성 뿐만 아니라 정상적인 형질세포에서 BCMA의 발현이 기록되었으며 BCMA를 통한 BAFF 시그날화로 골수종 세포가 증식되는 것으로 나타났다 (Shu et al., (2000) Proc Natl Acad Sci USA 97:9156-9161; O'Connor et al., (2004) J Exp Med. 199:91-98; Novak et al., 상기 언급; Avery et al., (2003) J Clin Invest. 112:286-297). 합쳐서 생각하면, 이들 연구는 BCMA가 통상적으로 골수종에서 발현되며 BCMA를 통한 시그날화는 또한 생체내에서 골수종 세포가 확장되는데 기여할 수 있음을 제시하였다 (Bellucci et al., 상기 언급).

따라서, DNA가 RNA를 만들고 RNA가 단백질을 만든다는 통상적으로 채택되는 개념을 기본으로 BCMA가 MM 증식에 있어서 중요한 역할을 하여, MM B-세포의 세포 표면상에 이들이 존재함을 암시한다는 것을 고려할 때, 다발성 골수종 치료법이 자동적으로 개시될 것이다 (Ryan et al., (2007) Mol Cancer Ther 6:3009-3018).

그 결과, BCMA가 세포 표면에 정말로 존재하는지 안하는지 의심할 여지 없이, mRNA가 검출될 수 있다면, 다발성 골수종으로 고통받는 환자에게 반드시 유익하지 않다 하더라도, BCMA가 세포 표면에 존재하지 않을 경우, 항체-기본 치료법이 개시되었을 것이다.

본 발명자들은, BCMA가 정상적인 B-세포 발달 및 악성 B-세포 증식 (다발성 골수종) 둘 다에서 중요할 것이라고 알고 있었음에도 불구하고, BCMA가 중요한 역할을 하는지 안하는지에 대해 스스로에게 질문하였지만, 또한 MM에서 BCMA의 중요한 역할에도 불구하고, DNA가 RNA를 만들고 RNA가 단백질(이는 아마도 세포 표면상에 존재할 것이다)을 만든다는 도그마는 BCMA mRNA 데이타만을 기본으로 할 경우 유효할 것이다. 달리 표현하면, 검출가능한 mRNA에도 불구하고, BCMA가 MM 세포의 세포 표면상에 존재하지 않을 수 있어, 항체-기본 치료법에 대한 표적으로서 이용할 수 없다는 것이 당해 분야에 인식되어 있지 않다 (Ryan et al., 상기 언급). 따라서, DNA가 RNA를 만들고 MM 세포의 표면상에 존재하는 단백질을 만든다고 생각하기 때문에 악성 B-세포 발달 및 증식에 있어서 BCMA의 중요한 역할을 유념하여, MM을 치료 또는 회복시키기 위한 항-BCMA 항체 기본 치료법을 맞춤화한다는 생각을 갖는 당해 분야의 사람은 한명도 없다. 따라서, 항-BCMA 항체 치료법을 맞춤화할 필요성이 존재한다.

그러므로, 본 발명의 근간이 되는 기술적 문제점은 상기한 필요성에 응하는 것이다.

본 발명은 항-BCMA 항체를, 바람직하게는 MM의 치료 또는 회복용으로 사용되는 다른 항체 또는 화합물과 함께 사용하는 치료법을 제공함으로써 이러한 요구를 충족시키는 것으로, 상기 치료법은 BCMA mRNA가 검출가능한 단백질이라면, 그렇게 말하기 위해서는, 각 환자 및 모든 환자에 대해 반드시 정확한 것은 아니지만 MM 세포의 표면상에 자동적으로 존재한다는 추정에 대한 본 발명자들의 인식을 기본으로 한다. 정말로, 본 발명자들은 단백질 수준의 BCMA 발현의 존재 또는 부재, 각각에 대해, 즉, MM 세포의 세포 표면상에서의 이의 존재 또는 부재, 각각에 대해 MM 환자를 선별하는 것이 매우 중요함을 발견하였다.

따라서, 본 발명은 항-BCMA 항체 치료법에 대해 유리하게 반응하는 경향이 있는 다발성 골수종(MM) 환자의 계층화 방법을 제공하는 것으로, 이 방법은 다발성 골수종 환자의 B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포 (MM 세포 또는 MM B-세포)가 상기 B-세포의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시키는지에 대해 측정함을 포함하며, 여기서 상기 환자는 상기 B-세포가 이들의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시킬 경우, 상기 항-BCMA 항체 치료법에 유리하게 반응하는 경향이 있음을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 BCMA 네가티브 다발성 골수종(MM) 환자의 진단법을 제공하는 것으로, 이 방법은 상기 환자의 B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포가 이들의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시키는지에 대해 측정함을 포함하며, 상기 환자는 BCMA 단백질이 상기 B-세포의 표면상에서 검출될 수 없는 경우인, BCMA 네가티브 MM을 앓고 있음을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 항체-기본 다발성 골수종(MM) 치료법을 선택하는 방법을 제공하는 것으로, 이 방법은 환자의 B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포가 상기 B-세포의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시키는지에 대해 측정함을 포함하며, 여기서, 상기 B-세포가 BCMA 포지티브인 경우, 상기 환자는 항-CD20 항체 치료법 및/또는 항-CD38 항체 치료법 및/또는 항-BCMA 항체 치료법 및/또는 항-CS1 항체 치료법으로 치료할 수 있으며, 또는, 상기 B-세포가 BCMA-네가티브인 경우, 상기 환자는 항-CD20 항체 치료법 및/또는 항-CD38 항체 치료법 및/또는 항-CS1 항체 치료법으로 치료한다.

본 발명의 추가적인 양태는 B-세포가 BCMA 포지티브인 경향을 갖는 다발성 골수종(MM) 환자의 치료 또는 회복에 사용하기 위한 항-BCMA 항체 치료법, 본 발명의 방법(들)에 따라서 진단된 다발성 골수종(MM) 환자의 치료 또는 회복에 사용하기 위한 항-BCMA 항체, 및 B-세포가 BCMA 네가티브인 다발성 골수종(MM) 환자의 치료 또는 회복에 사용하기 위한 항-CD20 항체 및/또는 항-CD38 항체 및/또는 항-CS1 항체 치료법에 관한 것이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 단수 형태 "a", "an", 및 "the"는 달리 문맥이 명확하게 표시하지 않는 한 복수 언급도 포함함을 알아야 한다. 따라서, 예를 들어, "발현 카셋"에 대한 언급은 본 명세서에 개시된 발현 카셋 1종 이상을 포함하며 "방법"에 대한 언급은 본 명세서에 개시된 방법을 개량하거나 대체할 수 있는, 당해 분야의 숙련가에게 알려져 있는 대등한 단계 및 방법을 포함한다.

본 개시 내용에 인용된 모든 공보 및 특허는 전문 참고로 포함된다. 참고 문헌에 의해 포함되는 물질이 본 명세서와 모순되거나 부조화되는 정도로, 본 명세서는 그러한 임의의 물질을 대체할 것이다. 달리 표시되지 않는 한, 일련의 원소의 모두에 사용되는 용어 "적어도"는 상기 계열내 모든 원소를 언급하는 것으로 이해되어야 한다. 당해 분야의 숙련가들은 본 명세서에 기재되어 있는 본 발명의 특정의 실시양태에 대해 수많은 등가물을 통상의 실험만을 사용하여 인식하거나 알아낼 수 있다. 그러한 등가물은 본 발명에 포함시키고자 한다.

본 명세서 및 이후의 특허 청구의 범위를 통하여, 문맥이 달리 필요로 하지 않는 한, 단어 "포함하다" 및 "포함하다", 및 "포함하는"과 같은 변형체는 언급된 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 그룹의 포함을 암시하지만 임의의 다른 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 그룹의 배제를 의미하는 것은 아닌 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에서 사용될 때, 용어 "포함하는"은 용어 "함유하는" 또는 때로는 본 명세서에서 사용되는 경우 용어 "갖는"으로 대체될 수 있다. 본 명세서에서 사용될 때, 용어 "으로 이루어진"은 특허 청구의 범위 요소에 명시되지 않은 임의의 원소, 단계, 또는 성분을 배제시킨다. 본 명세서에서 사용될 때, 용어 "으로 필수적으로 이루어진"은 특허 청구의 범위의 기본적이고 신규한 특징에 실질적으로 영향을 주지 않는 물질 또는 단계는 배제시키지 않는다. 각 경우 본 명세서에서 임의의 용어 "포함하는", "으로 필수적으로 이루어진" 및 "으로 이루어진"은 다른 두 용어 중 하나로 대체될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은, 다수의 인용된 원소간의 연결 용어 "및/또는"은 개별적 및 혼합된 선택을 둘 다 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 2종의 원소가 "및/또는"으로 연결될 때, 제1 옵션은 두번째 없이 첫번째 원소의 적용가능성을 언급한다. 두번째 옵션은 첫번째 없이 두번째 원소의 적용가능성을 언급한다. 세번째 옵션은 첫번째 및 두번째 원소를 함께 적용할 수 있음을 언급한다. 이들 옵션 중 임의의 하나가 상기 의미에 속하는 것이며, 따라서 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "및/또는"의 요구조건을 만족시키는 것으로 이해된다. 상기 옵션 중 1종 이상의 동시 적용가능성 또한 상기 의미에 속하며, 따라서 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "및/또는"의 요구조건을 만족시키는 것으로 이해된다.

본 명세서의 텍스트를 통하여 수종의 문서가 인용된다. 위에서 또는 아래에서, 본 명세서에서 인용된 각각의 문서 (모든 특허, 특허출원, 과학 출판물, 제조업자의 설명서, 설명서 등을 포함)는 이들의 전문이 참고로 포함된다. 여기에서 본 발명이 선행 발명 때문에 그러한 개시내용이 선행하는 것으로 자격이 주어지지 않는다는 인정으로 간주되는 것은 하나도 없다.

도 1: OPM-2 세포에서 FACS에 의한 OPM-2 세포로의 항-BCMA 항체의 결합
도 2: 10개의 상이한 MM 세포주의 BCMA 단백질(A) 및 BCMA mRNA(B) 발현 수준.
도 3: 원발성 MM 세포의 발현 분석 - 포지티브 및 네가티브 BCMA 발현시키는 환자 샘플의 예시적 결과.

본 발명의 목적은 환자의 B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포의 표면상에서의 BCMA 발현을 기준으로 MM 환자를 계층화하는 방법 및 B-세포, 바람직하게는 MM 환자의 악성 B-세포의 표면상에서 BCMA 유전자의 발현, 즉 BCMA mRNA와 BCMA 단백질의 발현의 상관관계를 기준으로 항-BCMA 항체를, 바람직하게는 항-CD38, 항-CD20 및/또는 항-CS1 항체와 함께 사용하는 MM 환자에 대한 새로운 치료법을 제공한다.

BCMA가 각각 및 모든 환자의 건강한 B-세포상에서 발현되지 않거나 반드시 발현되지는 않지만, 환자의 악성 B-세포에서는 발현된다는 사실을 고려할 때, 상기 환자가 본 발명의 방법에 의해 BCMA 포지티브인 것으로 진단된다면, CD20은 각각 및 모든 B-세포상에서 발현되는 것으로 판단되기 때문에, 항-BCMA 항체 치료법이 항-CD20 항체 치료법과 비교하여 우수할 수 있다. 따라서, 모든 B-세포는 제거되지만, 이론에 얽매이지 않고도, BCMA가 발달 및/또는 항성성 중에 각각 및 모든 건강한 B-세포상에서는 발현되지 않거나 반드시 발현되는 것이 아니기 때문에, 항-BCMA 항체 치료법이 환자의 모든 건강한 B-세포를 반드시 제거할 수 있는 것은 아니다.

따라서, 본 발명의 첫번째 양태로 항-BCMA 항체 치료법에 유리하게 반응하는 경향이 있는 다발성 골수종(MM) 환자의 계층화 방법을 제공하는데, 이 방법은 B-세포, 바람직하게는 상기 환자의 악성 B-세포가 상기 B-세포의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시키는지 여부를 측정함을 특징으로 하며, 이때 상기 B-세포가 이들의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시킨다면, 상기 환자는 상기 항-BCMA 항체 치료법에 대해 유리하는 반응하는 경향이 있는 것이다.

또한 또는 상기한 양태에 대한 대안책으로서, 본 발명은 BCMA 네가티브 다발성 골수종(MM) 환자를 진단하는 방법을 제공하며, 이 방법은 B-세포, 바람직하게는 상기 환자의 악성 B-세포가 이들의 표면에서 BCMA 단백질을 발현시키며, 이때, 상기 B-세포의 표면에서 BCMA 단백질을 검출할 수 없다면, 상기 환자는 BCMA 네가티브 MM을 앓고 있는 것이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "계층화(stratification)"는 MM 환자의 집단을 BCMA 유전자의 전사물, 즉, mRNA의 발현 뿐만 아니라 상기 번역된 유전자 생성물, 즉, 세포 표면상에 편재되어 있는 BCMA 단백질의, 예를 들면, 항-BCMA 항체에 의한 검출을 기준으로 하여, MM 환자에 대해 항-BCMA 항체를 사용한 치료법이 유익할 수 있는지에 대해 판단하기 위하여 BCMA를 갖는 MM 환자의 서브집단으로 통계적으로 분류하는 것을 포함한다. B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포의 세포 표면상에서의 BCMA의 검출이 바람직하다. 그러나, 그럼에도 불구하고, mRNA 수준에서의 BCMA 발현은 추가로 시험/측정될 수 있다. 또한, 상기 용어는 환자를 다발성 골수종의 치료 또는 회복을 위한 항-BCMA 항체 기본 치료법으로부터 유익할 수 있는 환자와 그렇지 않을 수 있는 환자로 분류하는 것을 언급한다. 특히, 환자를 계층화하는 것은 BCMA가 B-세포, 바람직하게는 MM을 앓고 있는 환자의 악성 B-세포의 표면상에서 발현되는지 안되는지에 대해 측정하는 것을 포함한다. B 세포가 B 세포의 세포 표면상에서 BCMA를 발현시키는 환자는 상기 치료법이 유리하지만, B 세포가 상기 세포 표면상에서 BCMA를 발현시키지 않는 환자는 상기 항-BCMA 항체 치료법이 유리하지 않을 수 있다. 그러나, 그러한 BCMA 네가티브 환자는 항-CD20, 항-CD38 및/또는 항-CS1 항체 치료법 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 MM의 치료 또는 회복을 위해 적용되는 기타 항체 치료법이 유리할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "B-세포"는 체액성 면역 반응 (T 세포에 의해 통제되는 세포-매개된 면역 반응과는 반대임)에 있어서 중요한 역할을 하는 림프구를 의미한다. B 세포의 주요 기능은 항원에 대한 항체를 만들어, 항원-제시세포 (APCs)의 역할을 수행하고 궁극적으로는 항원 상호작용에 의해 활성화된 후 메모리 B 세포로 발달하는 것이다. 상기 단계 (항체 생산)에서, B-세포는 때로는 본 명세서에서 "혈장 B-세포"로도 언급되는 "형질세포"를 포함한다. 이들 형질세포 또는 혈장 B-세포가 또한 본 명세서에 사용될 때 용어 "B 세포"에 포함된다. 그러나, 전구체 B-세포 뿐만 아니라 B 세포의 발달 및/또는 노화 과정(lineage commitment)의 모든 단계에서의 B-세포도 상기 용어 "B 세포"에 포함된다. B 세포는 적응 면역 시스템의 필수적 성분이다. 용어 "B-세포"가 정상적인 (즉, 건강한) B-세포도 포함하지만, 바람직하게는 악성 B-세포, 특히 MM과 관련된 악성 B-세포 (즉, MM B-세포)를 포함한다.

따라서, MM 환자의 문맥에서 용어 "B 세포"는 정상적인 B-세포 및 악성 B-세포 둘 다를 포함하며; 악성 B-세포인 것이 바람직하다 (즉, MM B-세포). "악성"이란 급진적으로 악화되는 질병, 특히 본 명세서에 기재되는 바와 같은 MM에 기여하는 림프구 (특히 B 세포)를 설명한다. 상기 용어는 대개 암, 여기서는 MM의 설명으로 익숙하다. 악성 BCMA 포지티브 B 세포는 이들의 성장에 있어서 자가적-제한되지 않는 것으로, 인접한 조직으로 침범할 수 있으며, 떨어져 있는 조직으로 퍼질 수도 있다 (전이: metastasizing). 본 명세서에서 사용될 때 악성은 암과 아주 밀접하다. 이들 악성 B-세포는 항체, 특히 항-BCMA 항체에 의해 표적화되어야 하기 때문에 본 발명의 문맥에서 이들이 주요 관심사이며, 상기 표적화의 목적은 이들 B-세포를 본 명세서에 기재된 바와 같이 이들의 세포 표면에서 BCMA의 발현에 대해 분석하는 것이다. 본 발명의 방법 및/또는 항체-기본 치료법을 수행할 MM 환자가 악성 B-세포를 갖고 있는 것이 바람직하며; 상기 악성 B-세포는 다발성 골수종 세포인 것이 바람직하다. 물론, 상기 환자는 정상적인 B-세포도 (또는 여전히) 갖고 있다. 악성 B-세포는 이후 본 명세서에 설명되는 수단 및 방법에 의해 측정, 검출 및/또는 단리되는 것이 바람직할 수 있다. 간략하면, 환자의 악성 B-세포는 본 명세서에 기재되어 있으며, 특히, 특허 청구의 범위에 구체화된 바와 같이 특이적 (즉, 특징적인) B-세포 표면 마커(들) 1종 이상에 의해 측정, 검출 및/또는 단리될 수 있다 (CD38 포지티브, CD56 포지티브 또는 네가티브, CD45 포지티브 및/또는 CD19 포지티브).

형질세포 골수종 또는 카흘러 질병(Kahler's disease; 이후 Otto Kahler)로도 알려져 있는 상기 용어 "다발성 골수종(MM)"은 기질세포와 밀접하게 접촉하는, 골수내에 악성 혈장 B-세포의 축적으로 특징되는 불치의 클론성 B-세포 종양형성이다.

MM은 그중에서도 예를 들어, 다중 유전자 삽입(insults)에 의해 발생되는, 즉, 전구체 혈장 B-세포로 t(11;14), t(4;14), t(8;14)와 같은 전좌, 또는 del(13), 및 del(17)과 같은 결실에 의해 주로 발생되는 염색체 전좌에 의해 발생하며 종양 세포를 급격하게 증식시켜 세포자살 내성이 되는 급진적인 질병이다.

B 림프구는 골수에서 시작하여 림프절로 이동한다. 이들이 진행함에 따라, 이들이 성숙해지고 이들의 세포 표면상에서 상이한 단백질을 표출시킨다. 이들이 활성화되어 항체를 분비할 때, 이들은 형질세포로 알려져 있다. 다발성 골수종은 이들이 배아중심으로 알려져 있는 림프절의 일부에 남겨진 후 B 림프구에서 발달한다.

면역 시스템은 B 세포의 증식과 엄격한 조절하에서 항체의 분비를 유지한다. 염색체 및 유전자가 손상되었을 때, 흔히 재배열을 통하여, 이의 조절이 소실된다. 흔히, 프로모터 유전자는 과생산되도록 항체 유전자를 자극하는 경우에 염색체로 이동한다(또는 전좌된다).

상기 언급한 바와 같이, 면역글로불린 중쇄 유전자 (14번째 염색체, 좌 14q32 상)와 암유전자 (흔히 11q13, 4p16.3, 6p21, 16q23 및 20q11[10]) 사이의 염색체 전좌가 종종 다발성 골수종 환자에서 관찰된다. 이런 돌연변이로 암유전자의 조절장애가 발생하게 되는데, 이는 골수종의 발병과정(pathogenesis)에서 중요한 개시일 것으로 생각된다. 상기 결과는 형질세포 클론의 증식 및 추가의 돌연변이와 전좌를 일으키는 게놈 불안정성이다. 염색체 14번의 비정상은 모든 골수종 케이스의 약 50%에서 관찰된다. 13번째 염색체(의 일부)의 결실은 케이스의 약 50%에서 관찰된다.

따라서, 본 발명의 방법 및/또는 항체-기본 치료법을 수행하는 MM 환자는 본 명세서에 언급된 임의의 염색체 전좌(들) 및/또는 결실(들)을 갖는 것이 바람직하다. 형질세포에 의한 사이토킨 (특히 IL-6)의 생산은 골다공증과 같이, 이들의 편재된 손상을 크게 일으키며, 악성 세포가 번창하는 미세환경을 생성시킨다. 혈관형성 (새로운 혈관의 공격)이 증가된다. 상기 생산된 항체는 다양한 기관에 침착되어, 신부전, 말초신경병증(polyneuropathy) 및 다양한 기타 골수종-관련 증상을 일으킨다. 본 발명의 문맥에서, MM은 국제 단계화 시스템(International Staging System: Greipp et al. (2005), J. Clin. Oncol. 23(15):3412-3420)에 따라서 및/또는 듀리-살몬 단계화 시스템 (Durie-Salmon Staging System: Durie et al. (1975), Cancer 36(3):842-854)에 따라 단계화하는 것이 바람직하다.

국제 단계화 시스템(International Staging System):

·단계 I: β₂-마이크로글로불린 (β2M) < 3.5 ㎎/ℓ, 알부민 >=3.5 g/㎗

·단계 II: β2M < 3.5 ㎎/ℓ및 알부민 < 3.5 g/㎗; 또는 혈청 알부민과는 상관없이 β2M 3.5 ㎎/ℓ- 5.5 ㎎/ℓ

·단계 III: β2M >= 5.5 ㎎/ℓ

듀리-살몬 단계화 시스템 (Durie-Salmon Staging System):

·단계 I: 하기 조건 모두

○ Hb > 10 g/㎗

○ 정상적인 칼슘

○ 골격 조사: 정상 또는 단독 형질세포종 또는 골다공증

○ 혈청 파라단백질 수준 IgG일 경우 < 5 g/㎗, IgA일 경우 < 3 g/㎗

○ 소변의 경쇄 배출 < 4 g/24시간

·단계 II: I 또는 III의 기준을 어느 것도 충족시키지 못함

·단계 III: 하기 조건 중 하나

○ Hb < 8.5 g/㎗

○ 높은 칼슘 > 12 ㎎/㎗

○ 골격 조사: 3개 이상의 용해성 골 병소

○ 혈청 파라단백질 IgG일 경우 > 7 g/㎗, IgA일 경우 > 5 g/㎗

○ 소변의 경쇄 배출 > 12 g/24시간

듀리-살몬 단계화 시스템의 단계 I, II 및 III은 혈청 크레아티닌에 따라서 A 또는 B로 나눌 수 있다:

·A: 혈청 크레아티닌 < 2 ㎎/㎗ (< 177 umol/ℓ)

·B: 혈청 크레아티닌 > 2 ㎎/㎗ (> 177 umol/ℓ)

따라서, 본 발명의 방법 및/또는 항체-기본 치료법을 행할 MM 환자는 국제 단계화 시스템에 따라서 및/또는 듀리-살몬 단계화 시스템에 따라서 단계화하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 방법 및/또는 항체-기본 치료법을 행할 MM 환자는 국제 단계화 시스템에 따라서 및/또는 듀리-살몬 단계화 시스템에 따르는 단계 I, II 또는 III MM을 가질 수 있다.

MM 환자는 뼈 파괴, 골수 침윤, 신부전, 면역결핍, 및 암진단의 심리사회적 부담으로 인하여 다양한 질병-관련 증상을 경험할 수 있다. 흥미진진한 새로운 치료법 및 치료 방식이 이용가능하게 되었으나 흔히 원치않는 부작용을 일으킨다. 대부분의 경우의 골수종은 또한 신장 문제를 일으킬 수 있는 비정상적 항체인 파라단백질의 생산으로 특징되며 정상적인 항체의 생산을 방해하여 면역결핍에 이르게 한다. 고칼슘혈증 (높은 칼슘 농도)은 자주 마주치게 된다. 골수종은 혈액 시험 (예로서 단백질 전기영동, 모세혈 스미어), 골수의 현미경 조자 (골수 생검), 및 통상적으로 관련되는 뼈의 X-선으로 진단한다.

수많은 기관이 골수종에 의해 영향을 받을 수 있기 때문에, 증상과 징후가 크게 변한다. 다발성 골수종의 통상적인 4분자(tetrad)를 기억하기 위하여 때때로 사용되는 연상기호(mnemonic)는 CRAB이다: C = 칼슘 (상승된), R = 신부전, A = 빈혈증, B = 골 병소. 골수종은 수많은 가능한 증상을 가지며, 모든 증상은 다른 원인에 기인할 수 있다. 이들은 본 발명에서 발생율, 뼈 통증, 감염증, 신부전, 빈혈증, 신경학적 증상의 감소 순으로 제시된다.

본 명세서에서 사용될 때 상기 용어 "BCMA"는 천연 BCMA와 BCMA 변이체 (이는 본 명세서에서 추가로 정의된다)를 포함한다. BCMA는 쥐 또는 인간 조직 타입 또는 다른 공급원과 같은, 다양한 공급원으로부터 단리되거나, 재조합 또는 합성적 방법으로 제조될 수 있다. "BCMA"는 B 세포(cell) 성숙(maturation) 항원(antigen)의 약자이다. BCMA는 BAFF, THANK, TALL-1, TNFSF13, zTNF4로도 불리워지는, BLys (B Lymphocyte stimulator; Humen Genome Science Rockville, MD의 등록상표)에 대한 수용체로 단리되었다.

BCMA는 타입 I 단일 막관통 수용체이며 TNF 족 수용체에 속하고, B 림프구상에서 대부분 발현된다. 본 발명에서 사용되는 BCMA는 또한 천연 서열 BCMA와 BCMA 변이체 (이는 본 명세서에서 추가로 정의된다)를 포함하며, 쥐 또는 인간 조직 타입 또는 다른 공급원과 같은, 다양한 공급원으로부터 단리되거나, 재조합 또는 합성적 방법으로 제조될 수 있다.

"천연 서열 BCMA"는 자연으로부터 유래되는 BCMA와 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 그러한 천연 서열 BCMA는 천연으로부터 단리될 수 있거나 재조합 또는 합성적 수단에 의해 생산될 수 있다. 천연의 절단된 또는 분비된 형태의 BCMA (예를 들어, 세포외 도메인 서열을 함유하는 가용성 형태), 천연 변형체 형태 (예, 달리 스플라이싱된 형태) 및 BCMA의 천연 대립형질 변이체. 본 발명의 실시양태 중 하나로, 천연 서열 BCMA가 SEQ ID NO:1의 아미노산 1 내지 184를 포함하는 성숙 또는 전장 천연 서열 BCMA 폴리펩티드 또는 이의 단편이다. 그러한 단편은 생물학적으로 활성인 것이 바람직하다.

Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser

1 5 10 15

Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr

20 25 30

Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser

35 40 45

Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu

50 55 60

Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile

65 70 75 80

Ser Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu

85 90 95

Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu

100 105 110

Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys

115 120 125

Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe

130 135 140

Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys

145 150 155 160

Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu

165 170 175

Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg (SEQ ID NO:1)

180

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "생물학적으로 활성"은 직접적으로 또는 간접적으로 수행할 수 있는 생체내 또는 시험관내 활성을 갖는 것을 의미한다. BCMA의 생물학적 활성 단편은 예를 들어, 상기 수용체의 활성 부위와 70% 아미노산 상동성, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 가장 바람직하게는 적어도 90% 상동성을 가질 수 있다. 수용체에 대한 동일성 또는 상동성은 본 명세서에서 SEQ ID NO:1에서의 BCMA 잔기와 동일하거나, SEQ ID NO:1에서의 아미노산 잔기의 구획된 부분과 동일한 후보 서열중의 아미노산 잔기의 퍼센트로 정의된다. 생물학적 활성은 APRIL 및/또는 BAFF와의 상호작용 방식으로 시험할 수 있다.

"BCMA 세포외 도메인" 또는 "BCMA ECD"는 BCMA의 막관통 및 세포질 도메인이 필수적으로 없는 BCMA의 형태를 언급한다. 원래, BCMA 세포외 도메인은 그러한 막관통 및 세포질 도메인을 1% 미만으로 가지며 바람직하게는 그러한 도메인을 0.5% 미만으로 갖는다. 선택적으로, BCMA ECD는 SEQ IN NO:1의 아미노산 잔기 8 내지 41, 또는 SEQ IN NO:1의 아미노산 잔기 4 내지 51, 또는 SEQ IN NO:1의 아미노산 잔기 1 내지 53을 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시양태로, 상기 BCMA ECD가 SEQ IN NO:1의 아미노산 잔기 1 내지 51을 포함한다. 본 발명의 BCMA 폴리펩티드에 대해 확인된 막관통 도메인은 소수성 도메인의 타입을 확인하기 위하여 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 기준에 따라 확인된다는 것을 숙련가는 이해할 것이다. 막관통 도메인의 정확한 경계는 변화될 수 있지만 대개 본 명세서에서 상세하게 언급되는 도메인의 말단에서 약 5개 이하의 아미노산으로 변화될 수 있는 것 같다. 따라서, BCMA ECD는 아미노산 8-41 (SEQ ID NO:1)을 임의로 포함할 수 있다.

"BCMA-변이체"는 전장 천연 서열 BCMA에 대한 SEQ ID NO:1에 나타낸 추론된 아미노산 서열을 갖는 BCMA 또는 BCMA 서열과 적어도 약 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 하기 정의된 바와 같은 활성 BCMA를 의미한다. 그러한 BCMA 변이체로는 예를 들어, SEQ ID NO:1의 서열의 말단 또는 C-말단에서 아미노산 잔기 1개 이상이 첨가되거나 결실되어 있는 BCMA 폴리펩티드가 있다. 원래, BCMA 변이체는 SEQ ID NO:1의 아미노산 서열과 적어도 약 80% 또는 85% 아미노산 서열 동일성, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90% 아미노산 서열 동일성, 더더욱 바람직하게는 적어도 약 95% 아미노산 서열 동일성을 갖는다.

본 명세서에서 확인된 BCMA 서열에 대해 "아미노산 서열 동일성 퍼센트(%)"는 후보 서열을 정렬하고 갭(gap)을 도입한 후, 필요에 따라, 최대 퍼센트 서열 동일성을 성취하기 위하여, 서열 동일성의 일부로서 어떠한 보존적 치환도 고려하지 않고, BCMA 서열중의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열중의 아미노산 잔기의 퍼센트로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 측정할 목적의 정렬은 당해 분야의 기술 범위내에 있는 다양한 방법으로, 예를 들면, BLAST, ALIGN, 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 수행할 수 있다. 당업자들은 비교할 서열의 전장(full length)에 걸쳐 최대 정렬을 성취하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함한, 정렬 측정에 적절한 변수를 측정할 수 있다.

본 발명의 문맥에서 사용될 때 용어 "유리하게 반응하는 경향이 있는"이란 항체-기본 치료법, 특히 항-BCMA 항체 치료법을 투여하는 환자로부터의 MM B-세포가 상기 항체에 더욱 민감할 것 같은 것을 의미한다. MM B-세포 (바람직하게는 환자로부터 수득한 것)가 유리하게 반응할 공산(likelihood)은 본 명세서에 기재된 바와 같이 MM B-세포의 세포 표면상에서의 BCMA의 발현에 따른다. 더욱 상세하게, MM B-세포는 MM B-세포의 세포 표면상에서의 BCMA의 발현 수준이 본 명세서에 기재된 바와 같은 참고용 세포의 것보다 더 높을 경우 상기 항체에 유리하게 반응할 수 있다. MM B-세포의 세포 표면상에서의 BCMA의 발현 수준은 본 명세서에 기재된 바와 같이 측정된다.

BCMA의 표면 발현은 예를 들면, 적절한 항-BCMA 항체를 사용한 형광 활성화된 세포 분류법(Fluorescence Activated Cell Sorting: FACS)에 의해 수행될 수 있다. 항-BCMA 항체는 당해 분야에 통상적으로 알려져 있는 수단 및 방법에 의해 발생될 수 있거나 상업적으로 입수가능하다.

특히, 본 발명은 BCMA와 특이적으로 반응성인 항체를 포함한다. 항단백질/항-펩티드, 항혈청 또는 모노클로날 항체가 표준 프로토콜에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어, Antibodies: A Laboratory Manual ed. by Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press: 1988)을 참조). 마우스, 햄스터 또는 토끼와 같은 포유동물을 상기 펩티드로부터의 면역원성 형태로 면역시킬 수 있다. 단백질 또는 펩티드에 면역원성을 부여하는 기술은 캐리어로의 접합, 또는 당해 분야에 숙지되어 있는 기타 기술을 포함한다. BCMA의 면역원성 부분은 애주번트의 존재하에서 투여될 수 있다. 면역화의 진행은 혈장 또는 혈청중 항체 역가를 검출함으로써 모니터할 수 있다. 표준 ELISA 또는 기타 면역검정법을 항원으로서 상기 면역원과 함께 사용하여 항체의 수준을 평가할 수 있다.

바람직한 실시양태로, 상기 항체는 BCMA의 항원성 결정기(determinant) 또는 이의 보조-수용체, 예를 들면, SEQ ID NO:1의 폴리펩티드, 또는 밀접하게 연관된 인간 또는 비-인간 포유동물 상동체 (예를 들면, 70, 80 또는 90 퍼센트 상동성, 더욱 바람직하게는 적어도 95 퍼센트 상동성)의 항원성 결정기에 대해 면역특이적이다. 본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태로, 상기 항-BCMA 항체가 예를 들어 SEQ ID NO:1과의 상동성이 80% 미만; 바람직하게는 SEQ ID NO:1과의 상동성이 90% 미만; 가장 바람직하게는 SEQ ID NO:1과의 상동성이 95% 미만인 단백질과 실질적으로 교차 반응하지 않는다 (즉, 특이적으로 반응한다). "실질적으로 교차 반응하지 않는다"란, 항체가 SEQ ID NO:1의 단백질에 대한 결합 친화도의 10% 미만, 더욱 바람직하게는 5% 미만, 더더욱 바람직하게는 1% 미만인 비-상동성 단백질에 대한 결합 친화도를 갖는 것을 의미한다.

상기 언급한 바와 같이, BCMA는 세포외 도메인을 함유한다. 상기 세포외 도메인은 바람직하게는 본 발명의 방법 및 항체-기본 치료법에 적용되는 항체에 의해 표적화된다. 바람직한 항-BCMA 항체는 래트 항-인간 BCMA 항체, 마우스 항-인간 BCMA 항체, 낙타과 항-인간 BCMA 항체, 양 항-인간 BCMA 항체와 같은 항-인간 BCMA 항체이다. 물론, 인간 이외의 포유동물, 예를 들어, 고양이 또는 개로부터의 BCMA가 환자의 표면상에서 검출될 경우, 진단할 종 이외의 종으로부터의 항체가 적용된다. 예를 들어, 환자가 개 또는 고양이일 경우, 마우스, 래트, 양, 낙타과 항-개 또는 항-고양이 BCMA 항체가 적용된다.

항-BCMA에 대한 대안으로서, 안티칼린(anticalin), 즉, BCMA, 바람직하게는 인간 BCMA에 대해 지시된 눈물 리포칼린 뮤테인(tear lipocalin mutein), 세균성 리포칼린 뮤테인 또는 hNGAL 리포칼린 뮤테인과 같은 리포칼린 뮤테인이 또한 적용될 수 있다.

본 발명의 방법에서 적용되는 특히 바람직한 항체는 항-인간 항체 Vicky-1 및/또는 MAB 193 (클론 335004)이다. Vicky-1은 래트 IgG1 이소타입이며 GeneTex로부터, 카탈로그 번호 #GTX17323으로 입수할 수 있다. MAB 193은 래트 IgG2a 이소타입이며 R&D Systems로부터, 카탈로그 번호 #MAB193으로 입수할 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법에서는, BCMA, 바람직하게는 MM B-세포의 표면에서 발현된 BCMA가 Vicky-1 또는 MAB 193으로 검출가능하다. 유사하게, MM으로 고생할 수 있거나 이로부터 고생하기 쉬운, 본 명세서에 기재된 바와 같은 환자가 Vicky-1 또는 MAB 193으로 검출할 수 있는 MM B-세포를 갖는 것이 바람직하다. 달리, 상기 환자 (더욱 특이적으로는 상기 환자의 B-세포, 특히, MM B-세포)가 말하자면, Vicky-1 및/또는 MAB 193 포지티브인 것이 바람직하다.

BCMA의 표면 발현은 또한 표면 Biacore와 같은 표면 플라스몬 공명(SPR) 기술에 의해 시험될 수 있다.

본 발명의 방법의 문맥에서, 대조 세포, 바람직하게는 BCMA 네가티브 세포, 더욱 바람직하게는 BCMA 네가티브 B-세포, 더더욱 바람직하게는 BCMA 네가티브 MM B-세포 위에 있는 (또는 이의 시그날을 능가하는) 검출가능한 시그날을 나타낼 경우, MM B-세포는 이의 표면에서 BCMA를 발현시키는 것 같다 (즉, 이는 BCMA 포지티브이거나 특정의 BCMA 발현 수준을 갖는다). 바람직한 BCMA 네가티브 MM B-세포는 U266B1, JJN-3 또는 LP-1이며, U266B1과 JJN-3이 바람직하다. 특히, 그러한 BCMA 네가티브 세포주는 그럼에도 불구하고 검출가능한 BCMA mRNA를 가질 수 있다. 숙련가는 당해 B-세포상에서의 BCMA 발현에 기인한 검출가능한 시그날이 대조 세포의 검출가능한 시그날 위에 있는지에 대해 용이하게 결정할 입장에 있게 된다. 검출가능한 시그날의 문맥에서 "위에 있는"이란 당해 B-세포의 표면상에서의 BCMA의 발현에 기인한 검출가능한 시그날이 환자로부터의 B-세포 1개 이상이 BCMA 네가티브 대조 세포로부터의 시그날보다 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100% 또는 그 이상 더 높은 것을 의미한다. 상기 언급한 바와 같이, MAB 193 또는 Vicky-1 항체가 B-세포, 바람직하게는 환자, 바람직하게는 MM 환자의 악성 B-세포의 표면상에서의 BCMA 발현을 검출/단리/측정하기 위하여 사용된다.

"시그날" 또는 "검출가능한 시그날"은 항체-항원 반응의 결과를 반영한다. 본 발명의 문맥에서 항체-항원 반응은 항-BCMA 항체와 BCMA와의 반응이 바람직하다.

시그날은 항체, 특히 본 명세서에 기재된 BCMA에 대한 항체의 시그날 발생군(signal generating group)에 의해 제공되는 시그날 방식으로 측정될 수 있다. 상기 시그날은 예를 들어, 하기 본 명세서에 기재되는 바와 같은 분광학, 광화학, 생화학, 면역화학, 또는 화학적 수단으로 검출할 수 있는 임의의 시그날일 수 있다. 시그날은 또한 하기 본 명세서에서 기재되는 항원-특이적 수용체의 시그날 발생기에 의해 제공되는 시그날 방식으로 측정될 수 있다.

시그날 발생군이란 분광학, 광화학, 생화학, 면역화학, 또는 화학적 수단으로 검출할 수 있는 조성물을 언급한다. 예를 들어, 유용한 표지물(labels)로는 ³²P, ³⁵S, 또는 ¹²⁵I와 같은 방사선표지물; 형광 염료 (예, Cy-3, Cy-5); 발색단(chromophore), 고전자밀도(electron-dense) 시약; 검출가능한 시그날을 발생시키는 효소 (예, ELISA에서 통상적으로 사용되는 바와 같은 것); 또는 스핀 표지물(spin labels)이 있다. 상기 표지물 또는 검출가능한 잔기는 샘플중에 결합된 검출가능한 잔기의 양을 정량하는데 사용될 수 있는, 방사성, 발색성, 또는 형광 시그날과 같은, 측정가능한 시그날을 갖거나 발생시킨다.

상기 검출가능한 잔기는 시그날 발생군에 혼입되거나 공유결합에 의해, 또는 이온, 반 데르 바알스 또는 수소 결합을 통하여 시그날 발생군에 부착될 수 있으며, 예를 들어, 방사성 뉴클레오티드의 혼입, 또는 스트렙타비딘(streptavidin)에 의해 인식되는 바이오티닐화된 뉴클레오티드가 있다. 상기 표지물 또는 검출가능한 잔기는 직접 또는 간접적으로 검출할 수 있다. 간접적인 검출법은 상기 검출가능한 잔기에 직접 또는 간접적으로 검출할 수 있는 제2의 잔기를 결합시키는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 검출가능한 잔기는 바이오틴과 같은, 결합 파트너의 리간드일 수 있으며, 이는 특이적으로 하이브리드화시킬 수 있는, 상보적 서열에 대한 결합 파트너이다. 상기 결합 파트너는 자체가 직접 검출될 수 있는 것일 수 있어, 예를 들면, 항체를 형광 분자로 자체적으로 표지시킬 수 있다. 상기 결합 파트너는 또한 간접적으로 검출할 수 있다.

항체-특이적 수용체가 "시그날 발생군에 결합할 수 있는"것일 경우, 이는 시그날 발생군에 결합할 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 상기 항체-특이적 수용체는 시그날 발생군에 결합할 수 있는 작용기를 수반할 수 있다. 작용기는 바이오틴에 결합하는 스트렙타비딘/아비딘, tag와 같은 항원, 예를 들면, 항체에 결합하는 GST 또는 히스티딘 잔여기, 렉틴 또는 공지의 Dig/항-Dig 시스템을 결합시키는 당(sugar)일 수 있다. 작용기에 결합하는 잔기는 시그날 발생군을 수반한다.

항원으로의 항체의 결합 또는 항체로의 항원의 결합을 면역학적으로 검출하기 위하여 당해 분야에 알려져 있는 임의의 면역검정법을 사용할 수 있다. 면역검정법은 숙련가에게 숙지되어 있다. 그러한 검정법을 수행하는 방법 뿐만 아니라 실제적인 적용 및 절차가 관련 교재에 요약되어 있다. 관련 교재의 예는 다음과 같다: Tijssen, P., In: Practice and theory of enzyme immunoassays, Burdon, R.H. and v. Knippenberg, P. H. (eds.), Elsevier, Amsterdam (1990), pp. 221-278, 및 면역학적 검출법을 다루고 있는 다양한 볼륨의 Colowick, S. P. and Caplan, N.O. (eds.), Methods in Enzymology, Academic Press, 특히 볼륨 70, 73, 74, 84, 92 및 121.

면역검정법의 예로는, 침전법 (특히 면역침전법), 전기화학발광 (전기-발생된 화학발광), RIA (방사성면역검정법), ELISA (효소결합면역흡착검사), 샌드위치 효소 면역 테스트, 전기화학발광 샌드위치 면역검정법 (ECLIA), 해리-증진된 란탄계 플루오로 면역 검정법(dissociation-enhanced lanthanide fluoro immuno assay: DELFIA), 섬광 근접 측정법(scintillation proximity assay: SPA), 비탁분석법(turbidimetry), 혼탁분석법(nephelometry), 라텍스-증진된 비탁분석법 또는 혼탁분석법, 고체상 면역 테스트, 및 SELDI-TOF, MALDI-TOF, 또는 모세관 전기영동-질량 분석법(CE-MS)와 같은 질량 분석법이 있다. 또한, 적합한 면역검정법으로는 미세판 ELISA-기본 방법, 완전-자동화 또는 로보트 면역검정법 및 라텍스 응집반응 검정법이 있다.

전형적으로, 본 발명에서는 면역검정법으로, 항체가 항원에 특이적으로 결합하여 항체의 검출 및/또는 정량화를 제공하는 검정법 또는 항원이 항체에 결합하여 상기 항원의 검출 및/또는 정량화를 제공하는 검정법이다. 본 발명의 문맥에서 상기 항원은 바람직하게는 BCMA 또는 이의 단편이며, 상기 단편은 바람직하게는 면역학적으로 검출가능한 것이고, 상기 항체는 바람직하게는 항-BCMA 항체이다. 본 명세서에서 사용될 때 "면역학적으로 검출가능한"이란 본 명세서에 기재된 바와 같이 항체가 항원에 결합함으로써 또는 항원이 항체에 결합함으로써 발생되는 시그날이 당해 분야에 통상적으로 알려져 있으며 적용되는 수단 및 방법에 의해 검출할 수 있음을 의미한다. 본 발명의 문맥에서, "면역학적으로 검출가능한"은 바람직하게는 항-BCMA 항체 및 BCMA 또는 이의 단편의 반응에 의해 발생되는 시그날이 본 명세서에 기재된 바와 같은 대조 세포 보다 위에 있는 (또는, 대조 세포의 시그날을 초과하는) 것, 즉, 당해 MM B-세포가 BCMA 포지티브임을 의미한다.

본 명세서에서 사용될 때 "면역학적으로 검출할 수 없다"란 본 명세서에 기재된 바와 같이 항체가 항원에 결합함으로써 또는 항원이 항체에 결합함으로써 발생되는 시그날이 당해 분야에 통상적으로 알려져 있으며 적용되는 수단 및 방법에 의해 검출할 수 없음을 의미한다. 본 발명의 문맥에서, "면역학적으로 검출불가능한"은 바람직하게는 항-BCMA 항체 및 BCMA 또는 이의 단편의 반응에 의해 발생되는 시그날이 본 명세서에 기재된 바와 같은 대조 세포와 대등하거나 이 보다 아래에 있는 것, 즉, 당해 MM B-세포가 BCMA 네가티브임을 의미한다.

"당해 MM B-세포"는 B-세포, 바람직하게는 MM을 앓고 있거나 MM을 앓고 있는 것으로 의심되는 환자로부터 수득한 악성 B-세포를 의미한다. 본 발명의 방법에 따라서 당해 MM B-세포를 분석하기 전에, 상기 B-세포가 BCMA 각각 포지티브인지 네가티브인지에 대해 말할 수 없다.

또한 또는 MM B-세포와 BCMA 네가티브 세포의 세포 표면상에서의 BCMA 발현 수준의 비교에 대한 대안으로서, BCMA 포지티브 세포주가 또한 대조 세포로 제공될 수 있다. 본 발명의 의미에서(즉, 본 명세서에 기재된 바와 같이) 적합한 BCMA 포지티브 세포주는 NCI-H929, MOLP-2, OPM-2, MOLP-8, RPMI8226, KMS-12BM 또는 L-363이다. 상세하게, 당해 MM B-세포는 대조 세포주와 적어도 대등한 BCMA 발현 수준을 가질 경우 BCMA-포지티브인 것으로 간주된다. 발현은 본 명세서에 기재된 바와 같이 (즉, 세포에 의해 발생된 시그날에 의해) 측정하는 것이 바람직하다.

유사하게, 본 발명의 방법의 문맥에서, 대조 세포, 바람직하게는 BCMA 네가티브 B-세포, 더더욱 바람직하게는 BCMA 네가티브 MM B-세포보다 위에 있는 검출가능한 시그날을 본질적으로 나타내지 않는 경우 MM B-세포는 이의 표면상에서 BCMA를 발현시키지 않는다 (즉, 이는 BCMA 네가티브이다). 바람직한 BCMA 네가티브 MM B-세포는 U266B1, JJN-3 또는 LP-1이며, U266B1과 JJN-3이 바람직하다. 특히, 상기와 같은 BCMA 네가티브 세포주는 그럼에도 불구하고 검출가능한 BCMA mRNA를 갖는다. 숙련가는 당해 B-세포상에서의 BCMA 발현에 기인한 검출가능한 시그날이 대조 세포의 검출가능한 시그날 위에 있지 않은지(즉, 대등하거나 아래에 있는지)에 대해 용이하게 결정할 입장에 있게 된다. 검출가능한 시그날의 문맥에서 "대등한"이란 당해 B-세포의 표면상에서의 BCMA의 발현에 기인한 검출가능한 시그날이 환자로부터의 B-세포 1개 이상이 BCMA 네가티브 대조 세포로부터의 시그날과 동일함을 의미한다. 검출가능한 시그날의 문맥에서 "아래에 있는"은 환자로부터의 B-세포 1개 이상이 BCMA 네가티브 대조 세포로부터의 시그날보다 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 심지어 100%보다 더 낮은 것을 의미한다.

본 발명자들의 발견은 또한 숙련가에게 항체-기본 다발성 골수종(MM) 치료법을 선택하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 환자의 B-세포가 상기 혈장 B-세포의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시키는지 여부를 측정함을 특징으로 하며, 이때, 상기 혈장 B-세포가 BCMA 포지티브라면, 환자는 항-CD20 항체 치료법 및/또는 항-CD38 항체 치료법 및/또는 항-BCMA 항체 치료법으로 치료할 수 있으며, 또는 상기 B-세포가 BCMA-네가티브라면, 상기 환자는 항-CD20 항체 치료법 및/또는 항-CD38 항체 치료법으로 치료한다.

사실, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 환자의 B-세포가 BCMA 단백질을 발현시킬 경우, 상기 환자는 잠재적으로 항-BCMA 항체 치료법에 유리하게 반응한다. 그러나, 환자의 B-세포가 BCMA에 대해 네가티브 (BCMA-네가티브)라 하더라도, 상기 환자는 항-CD20 항체-기본 치료법 및/또는 항-CD38 항체 기본 치료법으로 치료할 수 있다. 따라서, 본 발명은 MM의 치료 또는 방지를 위하여 1종 이상의 항체-기본 치료법을 선택하는 방법 및 수단을 제공한다.

치료 효과의 문맥에서 사용될 경우 상기 용어 "잠재적으로"는 항-BCMA 항체-그러한 항체가 본 발명의 방법의 성과를 기본으로 치료 효과를 가질 것으로 추정되지만-가 반드시 치료 효과를 갖는 것은 아님을 의미한다. 이는 -자체 해석 그대로- MM B-세포의 표면상에서의 BCMA의 발현 외에, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 다이어트, 약물간 상호반응 등과 같은 개별적 인자가 환자가 그러한 항체에 감응성인지 아닌지에 대해 영향을 줄 수 있기 때문에, 본 발명의 방법이 환자가 그러한 항체에 감응성일 수 있는지 없는지 100% 안전한 예측을 제공할 수 없기 때문이다. 그러나, 환자로부터의 MM B-세포가 본 명세서에 기재된 바와 같이 BCMA 포지티브일 경우, 항-BCMA 항체가 치료 효과를 가질 공산이, MM B-세포가 BCMA의 세포 표면 발현을 나타내지 않는 환자와 비교하여 50% 이상이다. 바람직하게는, 그럴 공산이 60% 이상, 70%, 80% 또는 90% 이상이며, 더욱 바람직하게는 95% 이상이다.

물론, 항-CD20 항체 및/또는 항-CD38 및/또는 CS1 항체-기본 치료법을 수행하기 전에 BCMA-네가티브 MM 환자가 CD2 및/또는 CD38-포지티브 및/또는 CS1-포지티브일 수 있는지여부에 대해 측정할 것이 권장된다. 항-BCMA 항체-기본 치료법 외에 (환자가 BCMA 포지티브 일 경우)(즉, 조합으로서) 또는 항-BCMA 항체-기본 치료법의 대안으로서(환자가 BCMA 네가티브일 경우), 본 발명에 포함되는, 추가의 항체-기본 치료법 (즉, 항체-기본 치료법 1종 이상)은 이후 제시되는 바와 같이 표의 외부 좌측 컬럼에 표시된 표적을 기본으로 할 수 있다. 외부 좌측 컬럼에 나타낸 바와 같은 표적에 대해 지시된 항체가 독소와 접합되는 경우, 그러한 접합체도 상기 추가적인 항체-기본 치료법에 포함된다.

B-세포는 B-세포 표면 마커에 의해 선택되고/되거나 동정될 수 있다. 본 명세서에서 "B 세포 표면 마커" 또는 "B 세포 표면 항원"은 B 세포의 표면에서 발현된 항원으로 이는 여기에 결합하는 길항체로 표적화할 수 있다. B 세포 표면 마커의 예로는, 비제한적으로, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD40, CD52, D53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85, CD86, CDl 80 (RP105), FcRH2 (IRTA4), CD79A, C79B, CR2, CCR6, CD72, P2X5, HLA-DOB, CXCR5 (BLRl), FCER2, BR3 (aka BAFF-R), TACI, BTLA, NAG14 (aka LRRC4), SLGC16270 (aka LOC283663), FcRHl (IRTA5), FcRH5 (IRTA2), ATWD578 (aka MGC15619), FcRH3 (IRTA3), FcRH4 (IRTAl), FcRH6 (aka LOC343413) 및, 특히 BCMA가 있다.

MM B-세포는 상기한 바와 같은 B-세포 표면 마커에 의해 검출, 선택 및/또는 동정될 수 있다. 그러나, 바람직하게는 MM B-세포는 하기와 같은 마커에 의해 선택되고/되거나 동정된다: CD19, CD56, CD117, CD20, CD28, CD27, CD81 및/또는 CD200 (또한, Rawston et al. (2008), Haematologica 93(3):431-438의 표 2를 참조). 본 발명의 MM B-세포는 바람직하게는 적어도 CD38 포지티브, CD56 포지티브 또는 네가티브, CD45 포지티브, 및 CD19 포지티브인 것으로 특징된다.

본 발명의 방법으로 치료할 B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포는 환자로부터 수득하는 것이 바람직하다. 본 발명에 따르는 환자는 포유동물, 바람직하게는 MM을 앓고 있거나 MM을 앓고 있는 것으로 의심되는 환자 또는 포유동물이다. 치료 목적에 있어서 "포유동물"은 인간, 가정 및 농장의 동물, 비인간 영장류, 및 유선 조직을 갖는 임의의 다른 동물을 포함한, 포유동물로 분류되는 임의의 동물을 언급한다. 포유동물에는 인간, 마우스, 래트 또는 래비트와 같은 설치류, 개, 고양이, 침팬지, 말, 돼지 등이 포함되며, 인간 환자가 바람직하다. 환자에는 또한 인간 및 수의과 환자가 포함되며, 인간 환자가 바람직하다. 상기 방법 각각에서, 포유동물은 다발성 골수종을 앓고 있는 개체일 수 있다. 치료의 "필요가 있는" 포유동물로는, 비제한적으로, 다발성 골수종을 갖고 있거나 다발성 골수종을 갖고 있는 것으로 의심되는 포유동물이 있다.

본 명세서에서 사용될 때 "개체(subject)"는 포유동물 및 비-포유동물 개체를 포함한다.

환자로부터 수득한 B-세포는 샘플중에 포함되는 것이 바람직하다. 본 발명에 따르면 상기 용어 "샘플"은 개체, 세포주, 조직 컬쳐, 또는 적어도 B-세포를 함유하는 기타 공급원으로부터 수득한 임의의 생물학적 샘플이다. 생물학적 샘플은 체액 (예로서, 혈액, 혈청, 혈장, 오줌, 타액, 활액 및 척수액) 및 B-세포를 함유하는 것으로 밝혀진 조직 공급원을 포함한다. 개체로부터 조직 생검 및 체액을 수득하는 방법은 당해 분야에 잘 알려져 있다. 일반적으로, 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs), 특히 B 세포 및 T 세포를 포함하는 생물학적 샘플이 공급원으로서 바람직하다. 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs), 특히 B 세포 및 T 세포를 포함하는 샘플을 인간 환자의 말초혈액으로부터 취하는 것이 바람직하다. 다른 바람직한 샘플은 전혈, 혈청, 혈장 또는 활액이며, 혈장 또는 혈청이 가장 바람직하다. 그러나, 인간 환자의 말초혈액으로부터의 샘플이 특히 바람직하다.

환자를 항-BCMA 항체로 치료하는 것이 본 발명의 방법의 바람직한 실시양태이다. 환자의 치료용으로 적용되는 항체 뿐만 아니라 항체-기본 MM 치료법을 계층화, 진단 또는 선택 방법에 적용되는 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 키메릭 항체, 인간화된 항체, 이중특이적 항체, 도메인 항체(dAb) 또는 나노바디(nanobody)인 것이 바람직하다.

상기 용어 "항체"는 또한 비제한적으로 폴리클로날, 모노클로날, 단일특이적, 이중특이적과 같은 다중특이적, 비-특이적, 인간화된, 인간의, 단일쇄, 키메릭, 합성, 재조합, 하이브리드, 돌연변이된, 이식된, 도메인(VHH) 및 시험관내 발생된 항체 뿐만 아니라 낙타류 항체 및 인간화된 낙타류 항체를 포함하는 나노바디를 포함한다. 따라서, 상기 용어 "항체"는 또한 정제된 혈청, 즉, 정제된 폴리클로날 혈청에 관한 것이다. 따라서, 상기 용어는 바람직하게는 혈청, 더욱 바람직하게는 폴리클로날 혈청, 가장 바람직하게는 정제된(폴리클로날) 혈청에 관한 것이다. 또한, 본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "항체"는 기재된 항체와 동일한 특이성을 나타내는, 본 명세서에 기재된 항체의 유도체 또는 변이체에 관한 것이다. "항체 변이체"의 예로 비-인간 항체의 인간화된 변이체, "친화성 성숙된" 항체 (예를 들어, Hawkins et al. J. Mol. Biol. 254, 889-896 (1992) 및 Lowman et al., Biochemistry 30, 10832-10837 (1991) 참조) 및 변화된 효과기 기능(들)을 갖는 항체 돌연변이체 (예를 들어, 미국 특허 제5,648,260호 참조)가 있다. 본 명세서에서 사용될 때 용어 "항원-결합 도메인", "항원-결합 단편" 및 "항체 결합 영역"은 항체와 항원간의 특이적 결합에 관여하는 아미노산을 포함하는 항체 분자의 일부를 언급한다. 항체에 의해 특이적으로 인식되어 결합되는 항원의 일부를 상기 명세서에 기재된 바와 같이 "에피토프"라 칭한다. 상기 언급된 바와 같이, 항원-결합 도메인은 전형적으로 항체 경쇄 가변 영역(VL)과 항체 중쇄 가변 영역(VH)를 포함할 수 있지만; 둘을 모두 포함해야 하는 것은 아니다. 예를 들어, Fd 단편은 2개의 VH 영역을 가지며 흔히 본래(intact)의 항원-결합 도메인 중 일부의 항원-결합 기능을 보유한다. 항체의 항원-결합 단편의 예로는 (1) VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 갖는 1가 단편인, Fab 단편; (2) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결되어 있는 2개의 Fab 단편을 갖는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (3) 2개의 VH와 CH1 도메인을 갖는 Fd 단편; (4) 항체의 단일 암(arm)의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편; (5) VH 또는 VL 도메인을 갖는, dAb 단편(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); (6) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR), 및 (7) 단일쇄 Fv(scFv)가 있다. Fv 단편의 2개의 도메인, VL과 VH>가 별개의 유전자에 의해 암호화되지만, 이들은 재조합 방법을 사용하여, VL과 VH 영역이 쌍을 이뤄 1가 분자(단일쇄 Fv(scFv)로 알려져 있음; 예를 들어, Bird et al.(1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al.(1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA 85:5879-5883 참조)를 형성하도록 이들을 단일 단백질 쇄로 만들 수 있는 합성 링커에 의해 결합될 수 있다. 이들 항체 단편은 당업자에게 알려져 있는 통상의 기술을 사용하여 수득하며, 상기 단편들은 본래의 항체에서와 동일한 방법으로 기능에 대해 평가한다. 용어 "면역글로불린"(Ig)은 본 명세서에서 "항체"와 상호교환적으로 사용된다.

본 발명의 추가적인 양태는 혈장 B-세포가 BCMA 포지티브인 경향이 있는 다발성 골수종(MM) 환자의 치료에 사용하기 위한 항-BCMA 항체 치료법이다.

본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 방법으로 진단된 다발성 골수종(MM) 환자의 치료에 사용하기 위한 항-BCMA 항체이다.

본 발명의 또 다른 양태는 B-세포가 BCMA 네가티브인 다발성 골수종(MM) 환자의 치료에 사용하기 위한 항-CD20 항체 및/또는 항-CD38 항체이다.

본 발명의 실시양태 중 하나로, 항-BCMA 항체가 MM 환자에서 악성 혈장 B-세포에 대해 독성인 화학요법제를 포함한 독소에 접합되어 있다. 적합한 화학요법제는 보르테조미브(Bortezomib; Velcade), 탈리도미드(Thalidomide; Thalomid), 레날리도미드(Lenalidomide; Revlimid)와 같이 WO 2010/121093에 개시되어 있다.

용어 "치료하다" 또는 "치료"는 둘다 치료적 처리와 예방적 또는 방지적 조치 둘다를 언급하며, 여기서 목적은 암, 특히 MM의 발달 또는 확산과 같이, 바람직하지못한 생리학적 변화 또는 질환을 방지하거나 둔화(경감)시키는 것이다. 본 발명의 목적에 있어서, 유리하거나 목적하는 임상적 결과는, 비제한적으로, 검출가능하든 검출불가능하든지, 증상의 완화, 질병 정도의 축소, 질병의 안정화된(즉, 악화되지 않는) 상태, 질병 진행의 지연 또는 둔화, 질병 상태의 회복 또는 완화, 및 차도 (부분적이든 전체적이든)를 포함한다. "치료"는 또한 치료를 받지 않았을 경우 기대되는 생존과 비교하여 연장된 생존을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 것들에는 이미 상태 또는 질환을 갖고 있는 것들 뿐만 아니라 상태 또는 질환을 갖고 있는 것으로 증명된 것들 또는 상태 또는 질환을 방지하고자 하는 것들을 포함한다.

항-BCMA 항체, 항-CD20 항체, 항-CD38 항체 및/또는 항-CS1 항체는 "유효량"으로 투여하는 것이 바람직하다. "유효량"은 특이적으로 언급된 목적을 수행하기에 충분한 양이다. "유효량"은 언급된 목적과 관련하여 경험적으로 그리고 알려져 있는 방법으로 결정할 수 있다. 상기 용어 "치료적 유효량"은 포유동물 (aka 환자)에서 MM을 "치료" 또는 "회복"시키는데 효과적인 본 발명의 치료제의 양을 언급한다. 일례로, 상기 치료적 유효량은 성장 억제량 또는 세포독성량 일 수 있다. MM의 경우, 다음과 같은 것들 중 어느 하나에 대해 활성인 약물의 치료 유효량: 암세포 수를 감소시킴; 악성 MM B-세포 수, 종양 크기를 감소시킴; 주변 기관으로 암세포가 침윤되는 것을 억제함 (즉, 어느 정도 완화시키거나 바람직하게는 중단시킴); 종양 전이를 억제함 (즉, 어느 정도 완화시키거나 바람직하게는 중단시킴); 종양 성장을 어느 정도 억제함; 및/또는 암과 관련한 증상 중 하나 이상을 어느 정도 경감시킴. 약물이 암세포 성장을 방지하고/하거나 존재하는 암세포를 사멸시키는 정도로, 세포정지성(cytostatic) 및/또는 세포독성일 수 있다. "치료" 또는 "치료적 유효량"은 치료제의 투여 과정을 언급하며, 이 과정은 목적하는 효과를 성취하기 위한 기간에 걸친 몇가지 복용량 스프레드를 포함한다.

B 세포 제거 물질(depleting agent: 즉, 항-BCMA 항체, 항-CD20 항체, 항-CD38 항체 또는 CS1과 같이 B 세포의 표면에서 발현되는 표적에 대해 지시된 임의의 다른 항체)은 예를 들어, 볼러스(bolus) 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입에 의해서와 같은 정맥 투여에 의해, 피하, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 관절내, 활액내, 척추강내 또는 흡입 경로에 의한 것과 같은, 다양한 방법으로 환자에게 투여할 수 있다.

이들 항체는 약제학적 조성물의 형태로 투여하는 것이 바람직하다. 투여량 요법은 주치의와 임상 인자에 의해 결정된다. 의과 분야에 잘 알려져 있는 바와 같이, 임의의 환자에 대한 투여량은 환자의 크기, 체표면적, 연령, 투여할 특정 화합물, 성별, 투여 시간 및 경로, 일반적인 건강 상태, 및 동시에 투여될 다른 약물을 포함한, 수많은 인자에 따른다. 비경구 투여용 제제로는 멸균 수성 또는 비-수성 용액제, 현탁제, 및 유제가 있다. 비-수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 예로서 올리브 오일, 및 주사용 유기 에스테르, 예로서 에틸 올레에이트가 있다. 수성 담체는 물, 염수 및 완충된 매질을 포함하여, 알코올성/수성 용액, 유액 또는 현탁액을 포함한다. 비경구적 비히클은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로오스, 덱스트로오스와 염화나트륨, 젖산 링거, 또는 고정된 오일을 포함한다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양소 보충제(replenishers), 전해질 보충제 (예로서, 링거 덱스트로오스를 기본으로 하는 것들) 등을 포함한다. 예를 들어, 항미생물제, 항산화제, 킬레이트화제, 및 불활성 가스 등과 같은 방부제 및 기타 첨가제가 또한 존재할 수 있다. 또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 본 발명의 다른 곳에 예시된 바와 같이 추가적인 종양치료제와 같은 추가의 약제를 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 실시양태는 본 발명의 방법을 수행하는 방법에 따른 특정 지시에서 사용하기 위한, 항-BCMA 항체와 지시서를 포함하는 키트이다.

상기 키트는 적어도 하나의 용기와 상기 용기위에 또는 이와 관련한 표지물 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기의 예로, 병, 바이알, 시린지 등이 있다. 상기 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로부터 형성될 수 있다. 상기 용기는 치료제를 추출하기 위한 멸균 접속 포트를 가질 수 있다 (예를 들어 상기 용기가 피하주사용 바늘로 뚫을 수 있는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 표지물 또는 패키지 삽입물은 상기 조성물이 MM 치료용으로 사용되는 것임을 표시할 수 있다.

추가로, 상기 키트는 주사용 정균수(BWFI), 인산염-완충된 염수, 링거액 및 덱스트로오스 용액과 같은, 약제학적으로-허용되는 완충액을 포함하는 제2의 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 또한 기타 완충제, 희석제, 충전제, 바늘, 및 주사기를 포함하여, 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 기타 물질을 포함할 수 있다.

실시예

항체의 ALEXA Fluor®488 표지화

항-BCMA IgGs와 적합한 이소타입 대조용 IgGs를 ALEXA Fluor® 488로 ALEXA Fluor® 488 모노클로날 항체 표지화 키트 (Invitrogen, #A20181)을 사용하여 표지화시켰다. 표지화 및 표지화 정도의 계산은 제조업자의 지시에 따라 수행하였다.

[표 1]: ALEXA Fluor® 488 표지화에 사용되는 항-BCMA 모노클로날 항체

골수 흡입물로부터 원발성 악성 혈장 B-세포 염색

MM 환자로부터의 골수 흡입물을 70 ㎛ 세포 스트레이너 (BD, 352350)을 통하여 여과하였다. 형질세포수를 먼저 측정하고 이를 기준으로 하여, 염색용 흡입물 용적을 계산하였다:

CD45 네가티브 집단에서 1 내지 10% 형질세포 180 ㎕;

CD45 네가티브 집단에서 11 내지 20% 형질세포 120 ㎕;

CD45 네가티브 집단에서 21 내지 31% 형질세포 60 ㎕;

적합한 용적의 흡입물을 1.5 ㎕의 각각의 하기 항체: CD38-APC (BD, 클론: HIT2, #555462), CD56-PE-Cy-7 (BD, 클론: NCAM16.2, #335791), CD45-APC-Cy7 (BD, 클론:2D1; #557833) 및 6 ㎕의 CD19-PerCP-Cy5.5 (BD,클론:HIB19, #561295)와 함께 배양시켰다. 진단용의 경우 염색 세포를 고정 및 침투 키트 (Invitrogen, #GAS-003)를 사용하여 고정시켜 침투시킨 다음, 각각 6 ㎕의 항-Ig 카파-FITC (BD, 클론:G20-193, #555791) 및 항-Ig 람다-PE (BD, 클론:JDC-12, #555797)와 함께 배양시켰다. BCMA 검출의 경우, 10 ㎍/㎖의 Vicky-1-Alexa488 또는 MAB193-Alexa488과 10 ㎍/㎖의 이소타입 대조물 래트 IgG1-Alexa488 및 래트 IgG2a-Alexa488을 사용하여 샘플을 15분간 4℃에서 배양시켰다. 세포를 FACS Lyse/Wash Assistant, LWA(BD)를 사용하여 세척하고 적혈구 세포를 용해시켰다. FACSCanto 유세포 분석기(BD)를 사용하여 시그날을 분석하였다.

CD45 낮은, CD38 높은, CD19 낮은 집단 및, 형질세포에서 CD56을 발현시키는 환자의 경우, CD56 높은 집단으로 게이팅(gating)시킴으로써 형질세포를 동정하였다. 참고용으로 비 형질세포를 CD45 높은, CD38 낮은, CD56 낮은 집단으로 게이팅시켰다. Alexa488의 형광 강도를 두 집단, 예를 들어 Vicky-1 및 래트 IgG1에 대해 측정하였다. 특이적 항체 및 이소타입 대조물 형광 시그날로부터 유래되는 히스토그램은 오버레이되며(overlaid) 차이가 확실해진다. 환자의 비-형질세포가 Vicky-1 및 Mab193 및 이소타입 대조물에 대한 형광 강도에 있어서 차이를 나타내지 않을 뿐만 아니라 각각 래트 IgG1 또는 IgG2a에 대해 측정된 형광치와 비교하여 Vicky-1 및 MAB193에 대한 형질세포상에서의 형광치에서 명백한 증가가 있다면 환자는 BCMA 포지티브인 것으로 인정된다.

Flow Jo를 사용하여 초기 데이타를 분석하였다. 데이타 수집에 부여된 샘플 번호 외에 확인을 위한 연속 번호를 환자에게 부여하였다.

상이한 항-BCMA 항체를 사용한 OPM-2 세포의 FACS 염색

BCMA 단백질이 인간의 것인 OPM-2 세포주의 세포 표면에서 발현되지는 여부를 조사하기 위하여, 다발성 골수종 세포로부터 유래되는 말초혈인, Vicky-1 뿐만 아니라 MAB193을 FACS 분석용으로 사용하였다 (도 1). 그 결과로, 둘다 OPM-2 세포의 표면에서의 BCMA 단백질 발현에 대해 충분한 염색 효과를 나타냈다. 그러나, Vicky-1은 MAB193과 비교하여 더 강력한 FACS 이동치를 나타냈는데 (도 1), 이는 Vicky-1 및 MAB193의 평균 형광 시그날인 것으로 입증되었다 (표 2). 따라서, 항-BCMA 항체로서 Vicky-1도 본 명세서에서 수행되는 추가적인 실험용으로 사용되었다.

[표 2]: 평균 형광 시그날

MM 세포주에서 단백질과 mRNA 발현 수준과의 상관관계

다음 단계로, 본 발명자들은 FACS와 인간 엑손 유전자 칩(Affymetrix)을 각각 10개의 상이한 MM 세포주에서 사용하여 BCMA 단백질 뿐만 아니라 BCMA mRNA의 수준을 조사하였다 (도 2).

mRNA 발현 수준은 문헌: Li et al (Med Oncol (2010) 27:439-445)에 기재되어 있는 프라이머를 사용하여 RT-PCR로 분석하였다. 상세하게 설명하면, 전체 세포의 RNA를 당해 분야에서 통상적으로 수행하는 바와 같이 MM 세포로부터 단리시켰다. 상기 단리된 RNA를 역전사법(RT)에 의해 제1 스트랜드 cDNA 합성을 위한 주형으로 적용시키고, cDNA는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)용 주형으로 사용하였다. 다음과 같은 프라이머가 사용되었다: BCMA 5´-TTA CTTGTCCTTCCAGGCTGTTCT-3´ (센스) (SEQ ID NO:2) and 5´CATAGAAACCAAGGAAGTTTCTACC-3´ (안티센스) (SEQ ID NO:3).

도 2(A)에는 10개의 MM 세포주에서 Vicky-1을 사용한 FACS에 의한 BCMA 단백질 수준의 결과가 나타나 있다. 흥미로운것은, 세포 표면상에서의 BCMA 단백질 수준이 각 세포주에서 변화되었다는 것이다. 특히, NCI-H929(표 3에 +++으로 표시된 매우 강력함), MOLP-2, OPM-2 뿐만 아니라 KMS-12-BM(표 3에서 ++로 표시된 강력함)은 상기 세포주의 세포 표면에서 매우 강력한 또는 강력한 발현을 나타낸 것으로 밝혀졌다. 한편, U226B1, JJN-3 및 LP-1은 상기 세포주의 세포 표면에서 BCMA 단백질 발현을 나타내지 않았다.

도 2(B)에는 10개의 상이한 MM 세포주의 BCMA mRNA 수준이 표시되어 있다. 상대적인 발현 수준은 GAPDH mRNA 수준에 의한 정상화(normalization)로부터 발생된 것이다. BCMA mRNA 수준은 예를 들어, 높은 단백질 수준을 나타냈던 것과 같이 NCI-H929 세포주에서 매우 높은 것으로 밝혀졌다. U266B1, JJN-3 뿐만 아니라 LP-1의 세포 표면에서 BCMA 단백질의 발현이 검출될 수 없는 것으로 밝혀졌지만, 상기 세포주에서 BCMA mRNA는 검출될 수 있었으며, JJN-3 및 LP-1 세포주의 BCMA mRNA 수준은 오히려 더 높은 것으로 나타났음을 알 수 있다. 따라서, 본 발명자들은 세포 표면에서의 BCMA 단백질과 MM 세포주에서의 BCMA mRNA간에 확실한 상관관계는 없는 것으로 결론지었다.

[표 3]: 10개의 상이한 MM 세포주에서 단백질과 mRNA 발현 수준의 요약

MM 환자의 골수 형질세포상에서의 BCMA 단백질 발현

추가로, 본 발명자들은 BCMA 단백질이 23명의 MM 환자로부터의 MM 세포 (악성 혈장 B-세포)의 세포 표면에서 발현되는지에 대해 조사하였으며 Vicky-1 또는 MAB193으로 검출하였다. 23명의 환자의 골수 흡입물을 FACS에서 BCMA 발현에 대해 분석하였다. 그 결과로, MM 환자의 52% (12/23)이 MM 세포의 세포 표면상에서 BCMA 포지티브인 것으로 나타났지만, MM 환자의 48% (11/23)는 BCMA 네가티브인 것으로 나타났다 (표 4). 도 3에서, FACS 시그날 이동치는 원발성 형질세포에서 검출되었다. 한편, 비-형질세포에서는 시그날 이동치가 관측되지 않았다 (도 3).

[표 4]

n.a. 적용시킬 수 없음

+ 포지티브 염색

- 네가티브 염색

SEQUENCE LISTING <110> Boehringer Ingelheim International GmbH <120> BCMA-based stratification and therapy for multiple myeloma patients <130> 12-0333-pct <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 184 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu 50 55 60 Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile 65 70 75 80 Ser Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu 85 90 95 Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu 100 105 110 Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys 115 120 125 Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe 130 135 140 Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys 145 150 155 160 Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu 165 170 175 Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg 180 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic oligonucleotide derived from the human BCMA gene <400> 2 ttacttgtcc ttccaggctg ttct 24 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic oligonucleotide derived from the human BCMA gene <400> 3 catagaaacc aaggaagttt ctacc 25

Claims

다발성 골수종(MM) 환자의 B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포가 상기 B-세포의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시키는지를 측정하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 상기 B-세포가 이들의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시킬 경우, 상기 항-BCMA 항체 치료법에 유리하게 반응하는 경향이 있음을 특징으로 하는, 항-BCMA 항체 치료법에 대해 유리하게 반응하는 경향이 있는 다발성 골수종(MM) 환자의 계층화 방법.
다발성 골수종(MM) 환자의 B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포가 이들의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시키는지를 측정하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 BCMA 단백질이 상기 B-세포의 표면상에서 검출될 수 없는 경우, BCMA 네가티브 MM을 앓고 있는 것을 특징으로 하는, BCMA 네가티브 다발성 골수종(MM) 환자의 진단법.
다발성 골수종(MM) 환자의 B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포가 상기 B-세포의 표면상에서 BCMA 단백질을 발현시키는지를 측정하는 것을 포함하며, 여기서, 상기 B-세포가 BCMA 포지티브인 경우, 상기 환자는 항-CD20 항체 치료법 및/또는 항-CD38 항체 치료법 및/또는 항-BCMA 항체 치료법 및/또는 항-CS1 항체 치료법에 적용될 수 있거나, 또는, 상기 B-세포가 BCMA-네가티브인 경우, 상기 환자는 항-CD20 항체 치료법 및/또는 항-CD38 항체 치료법 및/또는 항-CS1 항체 치료법에 적용되는 항체-기본 다발성 골수종(MM) 치료법의 선택 방법.
제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, B-세포가 상기 환자로부터 수득한 것인 방법.
제1항 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서, B-세포가 CD38 포지티브, CD56 포지티브 또는 네가티브, CD45 포지티브, 및 CD19 포지티브임을 특징으로 하는 방법.
제1항 또는 2항에 있어서, 환자가 항-BCMA 항체 치료법으로 치료되는 방법.
제1항 내지 6항 중 어느 한 항에 있어서, 항-BCMA 항체가
모노클로날 항체,
키메릭 항체
인간화된 항체, 또는
이중특이적(bispecific) 항체인 방법.
제6항에 있어서, 항-BCMA 항체가 독소에 접합되어 있는 방법.
B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포가 BCMA 포지티브인 경향이 있는 다발성 골수종(MM) 환자의 치료 또는 회복에 사용하기 위한 항-BCMA 항체 치료법.
제1항 내지 9항 중 어느 한 항의 방법으로 진단된 다발성 골수종(MM) 환자의 치료 또는 회복에 사용하기 위한 항-BCMA 항체.
B-세포, 바람직하게는 악성 B-세포가 BCMA 네가티브인 다발성 골수종(MM) 환자의 치료 또는 회복에 사용하기 위한, 항-CD20 항체 및/또는 항-CD38 항체 및/또는 항-CS1 항체.
제1항 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서, BCMA 단백질이 Vicky-1 또는 MAB193으로 검출가능한 방법.
제1항 내지 7항 중 어느 한 항의 방법을 수행하기 위한, 항-BCMA 항체와 설명서를 포함하는 키트.