CN103602632A - 孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法 - Google Patents

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103602632A
CN103602632A CN201310568708.2A CN201310568708A CN103602632A CN 103602632 A CN103602632 A CN 103602632A CN 201310568708 A CN201310568708 A CN 201310568708A CN 103602632 A CN103602632 A CN 103602632A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
fetal nucleated
centrifugal
blood
minutes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201310568708.2A
Other languages
English (en)
Inventor
吴超群
徐晓丽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HANDAN KANGYE BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Original Assignee
HANDAN KANGYE BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HANDAN KANGYE BIOTECHNOLOGY CO Ltd filed Critical HANDAN KANGYE BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority to CN201310568708.2A priority Critical patent/CN103602632A/zh
Publication of CN103602632A publication Critical patent/CN103602632A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，包括以下步骤（1）富集有核细胞：①采全血；②离心，收集细胞沉淀物；③制备细胞悬液：在细胞沉淀物中加入细胞培养液，混匀制得稀释的细胞悬液；④离心管中预置细胞分离液，加入稀释的细胞悬液于分层液面上；⑤离心，得到细胞层；⑥吸取细胞层，加入Hank，s液，混匀、室温离心、洗涤细胞；⑦重悬细胞；（2）母血中胎儿有核细胞筛选；⑨分选出胎儿有核红细胞；⑩分选得到的胎儿有核红细胞图片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞，用于提取胎儿的全基因组DNA。本发明方法从孕妇外周血中分离纯化获得胎儿有核红细胞的纯度和回收率高。

Description

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法
技术领域
本发明涉及胎儿有核红细胞的分离方法，属于遗传工程技术领域。
背景技术
出生缺陷指婴儿出生时就存在的各种包括身体结构、智力或代谢等方面的异常。我国是世界上缺陷新生儿的高发国家之一，全国每年出生的2000万名新生儿有5%存在出生缺陷，每30秒就有一个缺陷儿出生。出生缺陷可由染色体畸变、基因突变等遗传因素或环境因素引起,也可由这两种因素交互作用或其他不明原因所致。现有的科研成果显示基因突变在出生缺陷及遗传病发生中发挥重要性，所以对胎儿染色体与DNA的产前筛查是降低出生缺陷及遗传病的重要手段。
    胎儿染色体与DNA检测的材料必须来自胎儿自身，传统的产前诊断是建立在羊膜腔穿刺、绒毛吸取等侵入性基础上进行的细胞遗传学诊断，虽然诊断准确，但因其操作有创伤性，易引起宫内感染、流产、甚至对胎儿有一定的影响，属于侵入性检查。非侵入性产前诊断已经成为常规产前诊断的一个主要目标，特别是通过富集孕妇外周血中的胎儿有核细胞进行产前诊断，对于以染色体异常和DNA变异为病因的遗传性疾病的早期防治和干预具有重大的意义。可以用于胎儿遗传病产前筛查，安全而易于推广，有着良好的应用前景。 
    目前产前胎儿出生缺陷及遗传病的非侵入性检测方法主要是以孕妇外周血胎儿游离DNA检测和孕妇外周血胎儿有核细胞检测两类。但是孕妇外周血胎儿游离DNA检测有一定的固有局限， 例如游离于母血中的胎儿DNA为短片断，一般小于200bp，无法检测染色体数量与移位异常导致的严重遗传性疾病。而分离得到的胎儿有核红细胞可以检测染色体数量与移位异常的同时，还可以从单个胎儿有核红细胞分离全基因组DNA用于检测，不受DNA长度的限制。因此孕妇外周血胎儿有核细胞检测具有独特的优势, 特别是以母血中的游离胎儿DNA检测作为胎儿遗传病筛查后可疑阳性的受检者需要以孕妇外周血胎儿有核细胞检测结果作为确定诊断的依据。
胎儿细胞能够越过胎盘屏障进入母体血液循环。其中适于做遗传分析的细胞是有核细胞, 即含有DNA、RNA 遗传物质的细胞， 主要包括滋养细胞、淋巴细胞、有核红细胞。研究表明胎儿有核红细胞在孕妇外周血中持续存在，怀孕5周即可分离到足够的胎儿有核红细胞，易于通过形态学辨别，含有胎儿全部基因组等特点，因此是用于产前诊断的最佳细胞类型。
    但是由于通常孕妇外周血中胎儿有核细胞与孕妇有核细胞的比例约为1：106，想使用如此稀少的胎儿有核红细胞进行产前诊断就必须首先将其从母血中分离、纯化出来。目前密度梯度离心法、单克隆抗体标记结合流式细胞分离法等仍处于实验阶段，稳定性和准确性有待改进，还难以广泛应用于临床。
    同时目前国内外各实验室报道的孕妇外周血中胎儿有核细胞的分离技术多种多样,分离和检测效果参差不齐,必需建立敏感性高、特异性强、结果稳定的分离检测技术,以提高鉴定单个有核红细胞的胎源性，为进一步改进和发展无创性产前基因诊奠定基础。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，本发明方法从孕妇外周血中分离纯化获得胎儿有核红细胞的纯度和回收率高。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，包括以下步骤（1）富集有核细胞：
①采全血；
②离心，收集细胞沉淀物；
③制备细胞悬液：在细胞沉淀物中加入等体积的36～38℃的RPMI1640细胞培养液，RPMI1640细胞培养液中含有质量分数为10%的胎牛血清，充分混匀制得稀释的细胞悬液；
④离心管中预置细胞分离液，加入稀释的细胞悬液于分层液面上；
细胞分离液的组成为：质量分数为9％的聚蔗糖 20～30份、质量分数为33.9％的泛影葡胺5～15份。测比重，用G5漏斗过滤除菌或114.3℃高压灭菌15min，4℃冰箱保存备用。
⑤离心，得到细胞层；
⑥吸取细胞层，转移到另一个离心管中，加入Hank，s液，混匀、室温离心、洗涤细胞；
⑦在步骤⑥的离心管中加入等体积的平衡盐缓冲液，混匀，离心，用平衡盐缓冲液重悬细胞；
（2）母血中胎儿有核细胞筛选：
⑧取步骤⑦重悬后得到的细胞悬液，加入鼠抗人的单克隆抗体试剂，充分混匀，在4℃冰箱中避光反应30分钟；
⑨离心，弃上清液，用平衡盐缓冲液洗涤，离心，弃上清液，收集细胞，分选出胎儿有核红细胞；
⑩分选得到的胎儿有核红细胞图片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞。
步骤②中800g水平离心10分钟。
步骤④中每3mL细胞分离液中加入4mL稀释的细胞悬液。
步骤⑤中水平转子700～800g，离心20～30min。
步骤⑥中Hank，s液的加入量为核细胞层体积的5倍以上，室温400g离心10分钟。
步骤⑦中平衡盐缓冲液为PBS缓冲液，400g离心10分钟。
步骤⑧在细胞悬液中加入细胞悬液体积1/10的带荧光标记的鼠抗人的单克隆抗体CD45试剂。
步骤⑨第一次400g离心5分钟，用平衡盐缓冲液洗涤后，再400g离心5分钟。
细胞分离液的组成为：9％的聚蔗糖 25份、33.9％的泛影葡胺11份。测比重，用G5漏斗过滤除菌或114.3℃高压灭菌15min，4℃冰箱保存备用。
Hank's液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。Hank's液是生物医学实验中最常用的无机盐溶液和平衡盐溶液（Balanced Salt Solution,BSS ），简称H。主要用于配制培养液，稀释剂和细胞清洗液，而不能单独作为细胞组织培养液。
PBS缓冲液为Phosphate Buffered Saline的简称；含0.05%吐温－20的pH7.4的磷酸盐缓冲液(简称为PBS－T)，配制方法为：称取磷酸二氢钾(KH2PO4)，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，氯化钠(NaCl)，氯化钾(KCl)，吐温－20，加水。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明方法从孕妇外周血中分离纯化获得胎儿有核红细胞的纯度可达95%；本发明所用细胞分离液密度为1.082±0.001，可有效清除红细胞、血小板、单核巨核细胞，更好地富集白细胞和有核红细胞；采用本发明方法分离得到的胎儿有核红细胞的数量是采用常规人淋巴细胞分离液的1.6倍，从孕妇外周血分离纯化获得胎儿有核红细胞的回收率达到90%以上。
具体实施方式
实施例1
孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，包括以下步骤：
一、富集有核细胞
（1）无菌操作用15mL真空EDTA抗凝采血管采全血10mL，避免溶血。 
（2）室温水平800g离心10 分钟，弃上清液（可用于血清DNA的抽提），收集细胞沉淀物。
（3）在上述细胞沉淀物中加入等体积的37℃预热的RPMI1640细胞培养液，RPMI1640细胞培养液中含有质量分数为10％的胎牛血清，温柔而充分混匀得到稀释的细胞悬液。
（4）在预置细胞分离液3 mL的离心管中，用滴管沿管壁缓慢加入4mL稀释的细胞悬液于分层液面上；
细胞分离液的组成为：质量分数为9％的聚蔗糖 25份、质量分数为33.9％的泛影葡胺11份。
测比重，用G5漏斗过滤除菌或114.3℃高压灭菌15min，4℃冰箱保存备用。
（5）室温，水平转子700 g离心30min，得到细胞层。
（6）吸取细胞层，移到另外的一个离心管。加入５倍以上体积的Hank's液，轻轻混匀，室温400 g离心10分钟，洗涤细胞；此步骤中核细胞层下的分离液中有可能含有核细胞，因此在吸取核细胞层时可以同时吸取少量其下的分离液层。
（7）加入等体积的平衡盐缓冲液（PBS），轻轻混匀，室温下，400 g离心10分钟，然后用10mL平衡盐缓冲液（PBS）重悬细胞。
二、母血中胎儿有核细胞筛选
（8）取步骤（7）重悬后得到的细胞悬液, 加入1/10体积带荧光标记的鼠抗人的单克隆抗体CD45试剂，充分混匀，在4℃冰箱中避光反应30分钟。
（9）400 g离心5分钟，弃上清液，用平衡盐缓冲液（PBS）洗1 遍，400 g离心5分钟，弃上清液，收集细胞，上机检测分选胎儿有核红细胞。
（10）分选得到的胎儿有核红细胞涂片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞，用于提取胎儿的全基因组DNA。
实施例2
孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，包括以下步骤：
一、富集有核细胞
（1）无菌操作用15mL真空EDTA抗凝采血管采全血10mL，避免溶血。 
（2）室温水平800g离心10 分钟，弃上清液（可用于血清DNA的抽提），收集细胞沉淀物。
（3）在上述细胞沉淀物中加入等体积的37℃预热的RPMI1640细胞培养液，RPMI1640细胞培养液中含有质量分数为10％的胎牛血清，温柔而充分混匀得到稀释的细胞悬液。
（4）在预置细胞分离液3 mL的离心管中，用滴管沿管壁缓慢加入4mL稀释的细胞悬液于分层液面上；
细胞分离液的组成为：质量分数为9％的聚蔗糖 25份、质量分数为33.9％的泛影葡胺11份。
测比重，用G5漏斗过滤除菌或114.3℃高压灭菌15min，4℃冰箱保存备用。
（5）室温，水平转子800 g离心30min，得到细胞层。
（6）吸取细胞层，移到另外的一个离心管。加入５倍以上体积的Hank's液，轻轻混匀，室温400 g离心10分钟，洗涤细胞；此步骤中核细胞层下的分离液中有可能含有核细胞，因此在吸取核细胞层时可以同时吸取少量其下的分离液层。
（7）加入等体积的平衡盐缓冲液（PBS），轻轻混匀，室温下，400 g离心10分钟，然后用10mL平衡盐缓冲液（PBS）重悬细胞。
二、母血中胎儿有核细胞筛选
（8）取步骤（7）重悬后得到的细胞悬液, 加入1/10体积带荧光标记的鼠抗人的单克隆抗体CD45试剂，充分混匀，在4℃冰箱中避光反应30分钟。
（9）400 g离心5分钟，弃上清液，用平衡盐缓冲液（PBS）洗1 遍，400 g离心5分钟，弃上清液，收集细胞，上机检测分选胎儿有核红细胞。
（10）分选得到的胎儿有核红细胞涂片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞，用于提取胎儿的全基因组DNA。
实施例3
孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，包括以下步骤：
一、富集有核细胞
（1）无菌操作用15mL真空EDTA抗凝采血管采全血10mL，避免溶血。 
（2）室温水平800g离心10 分钟，弃上清液（可用于血清DNA的抽提），收集细胞沉淀物。
（3）在上述细胞沉淀物中加入等体积的38℃预热的RPMI1640细胞培养液，RPMI1640细胞培养液中含有质量分数为10％的胎牛血清，温柔而充分混匀得到稀释的细胞悬液。
（4）在预置细胞分离液3 mL的离心管中，用滴管沿管壁缓慢加入4mL稀释的细胞悬液于分层液面上；
细胞分离液的组成为：质量分数为9％的聚蔗糖 30份、质量分数为33.9％的泛影葡胺11份。
测比重，用G5漏斗过滤除菌或114.3℃高压灭菌15min，4℃冰箱保存备用。
（5）室温，水平转子700 g离心25min，得到细胞层。
（6）吸取细胞层，移到另外的一个离心管。加入５倍以上体积的Hank's液，轻轻混匀，室温400 g离心10分钟，洗涤细胞；此步骤中核细胞层下的分离液中有可能含有核细胞，因此在吸取核细胞层时可以同时吸取少量其下的分离液层。
（7）加入等体积的平衡盐缓冲液（PBS），轻轻混匀，室温下，400 g离心10分钟，然后用10mL平衡盐缓冲液（PBS）重悬细胞。
二、母血中胎儿有核细胞筛选
（8）取步骤（7）重悬后得到的细胞悬液, 加入1/10体积带荧光标记的鼠抗人的单克隆抗体CD45试剂，充分混匀，在4℃冰箱中避光反应30分钟。
（9）400 g离心5分钟，弃上清液，用平衡盐缓冲液（PBS）洗1 遍，400 g离心5分钟，弃上清液，收集细胞，上机检测分选胎儿有核红细胞。
（10）分选得到的胎儿有核红细胞涂片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞，用于提取胎儿的全基因组DNA。
实施例4
孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，包括以下步骤：
一、富集有核细胞
（1）无菌操作用15mL真空EDTA抗凝采血管采全血10mL，避免溶血。 
（2）室温水平800g离心10 分钟，弃上清液（可用于血清DNA的抽提），收集细胞沉淀物。
（3）在上述细胞沉淀物中加入等体积的36℃预热的RPMI1640细胞培养液，RPMI1640细胞培养液中含有质量分数为10％的胎牛血清，温柔而充分混匀得到稀释的细胞悬液。
（4）在预置细胞分离液3 mL的离心管中，用滴管沿管壁缓慢加入4mL稀释的细胞悬液于分层液面上；
细胞分离液的组成为：质量分数为9％的聚蔗糖 20份、质量分数为33.9％的泛影葡胺11份。
测比重，用G5漏斗过滤除菌或114.3℃高压灭菌15min，4℃冰箱保存备用。
（5）室温，水平转子700 g离心20min，得到细胞层。
（6）吸取细胞层，移到另外的一个离心管。加入５倍以上体积的Hank's液，轻轻混匀，室温400 g离心10分钟，洗涤细胞；此步骤中核细胞层下的分离液中有可能含有核细胞，因此在吸取核细胞层时可以同时吸取少量其下的分离液层。
（7）加入等体积的平衡盐缓冲液（PBS），轻轻混匀，室温下，400 g离心10分钟，然后用10mL平衡盐缓冲液（PBS）重悬细胞。
二、母血中胎儿有核细胞筛选
（8）取步骤（7）重悬后得到的细胞悬液, 加入1/10体积带荧光标记的鼠抗人的单克隆抗体CD45试剂，充分混匀，在4℃冰箱中避光反应30分钟。
（9）400 g离心5分钟，弃上清液，用平衡盐缓冲液（PBS）洗1 遍，400 g离心5分钟，弃上清液，收集细胞，上机检测分选胎儿有核红细胞。
（10）分选得到的胎儿有核红细胞涂片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞，用于提取胎儿的全基因组DNA。
实施例5～9
细胞分离液组成见下表，其余步骤和参数同实施例1。 
Figure 86788DEST_PATH_IMAGE001

Claims (8)

1.一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）富集有核细胞
①采全血；
②离心，收集细胞沉淀物；
③制备细胞悬液：在细胞沉淀物中加入等体积的36～38℃的RPMI1640细胞培养液，RPMI1640细胞培养液中含有质量分数为10%的胎牛血清，充分混匀制得稀释的细胞悬液；
④离心管中预置细胞分离液，加入稀释的细胞悬液于分层液面上；
细胞分离液的组成为：质量分数为9％的聚蔗糖 20～30份、质量分数为33.9％的泛影葡胺5～15份；
⑤离心，得到细胞层；
⑥吸取细胞层，转移到另一个离心管中，加入Hank，s液，混匀、室温离心、洗涤细胞；
⑦在步骤⑥的离心管中加入等体积的平衡盐缓冲液，混匀，离心，用平衡盐缓冲液重悬细胞；
（2）母血中胎儿有核细胞筛选
⑧取步骤⑦重悬后得到的细胞悬液，加入鼠抗人的单克隆抗体试剂，充分混匀，在4℃冰箱中避光反应30分钟；
⑨离心，弃上清液，用平衡盐缓冲液洗涤，离心，弃上清液，收集细胞，分选出胎儿有核红细胞；
⑩分选得到的胎儿有核红细胞图片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞。
2.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤②中800g水平离心10分钟。
3.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤④中每3mL细胞分离液中加入4mL稀释的细胞悬液。
4.、如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑤中水平转子700～800g，离心20～30min。
5.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑥中Hank，s液的加入量为核细胞层体积的5倍以上，室温400g离心10分钟。
6.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑦中平衡盐缓冲液为PBS缓冲液，400g离心10分钟。
7.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑧在细胞悬液中加入细胞悬液体积1/10的带荧光标记的鼠抗人的单克隆抗体CD45试剂。
8.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑨第一次400g离心5分钟，用平衡盐缓冲液洗涤后，再400g离心5分钟。
CN201310568708.2A 2013-11-15 2013-11-15 孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法 Pending CN103602632A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310568708.2A CN103602632A (zh) 2013-11-15 2013-11-15 孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310568708.2A CN103602632A (zh) 2013-11-15 2013-11-15 孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103602632A true CN103602632A (zh) 2014-02-26

Family

ID=50120901

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310568708.2A Pending CN103602632A (zh) 2013-11-15 2013-11-15 孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103602632A (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105063181A (zh) * 2015-07-03 2015-11-18 石莹 从孕妇外周循环血中分离胎儿有核红细胞用于无创产前诊断
CN106119189A (zh) * 2016-07-11 2016-11-16 山东亚大药业有限公司 胎儿有核红细胞的分离纯化方法及试剂盒
CN106537144A (zh) * 2014-08-05 2017-03-22 富士胶片株式会社 有核红血球的分选方法
CN106754691A (zh) * 2016-12-12 2017-05-31 扬州大学 一种从家禽全血样本快速分离高纯度红细胞的方法
CN106868148A (zh) * 2017-03-08 2017-06-20 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 聚集状态可控且能够长期保存的细胞核的制备方法
CN113514639A (zh) * 2021-07-05 2021-10-19 深圳市第三人民医院 精液白细胞群流式定量检测试剂、试剂盒及检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1615437A (zh) * 2001-12-11 2005-05-11 株式会社奈特克 血细胞分离体系
CN103382469A (zh) * 2012-05-04 2013-11-06 上海绿宇生物科技有限公司 一种纯净的胎儿完整基因组dna的分离获取方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1615437A (zh) * 2001-12-11 2005-05-11 株式会社奈特克 血细胞分离体系
CN103382469A (zh) * 2012-05-04 2013-11-06 上海绿宇生物科技有限公司 一种纯净的胎儿完整基因组dna的分离获取方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PONGSRITASANA T ET AL: "Isolation of fetal nucleated red blood cell from maternal blood using immunomagnetic beads for prenatal diagnosis", 《ASIAN PACIFIC JOURNAL OF ALLERGY AND IMMUNOLOGY》, 31 March 2006 (2006-03-31) *
谢建生 等: "母血中胎儿有核红细胞的分离及无创性产前基因诊断研究", 《中华血液学杂志》, vol. 21, no. 10, 31 October 2000 (2000-10-31) *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106537144A (zh) * 2014-08-05 2017-03-22 富士胶片株式会社 有核红血球的分选方法
CN105063181A (zh) * 2015-07-03 2015-11-18 石莹 从孕妇外周循环血中分离胎儿有核红细胞用于无创产前诊断
CN106119189A (zh) * 2016-07-11 2016-11-16 山东亚大药业有限公司 胎儿有核红细胞的分离纯化方法及试剂盒
WO2018010632A1 (zh) * 2016-07-11 2018-01-18 山东亚大药业有限公司 胎儿有核红细胞的分离纯化方法及试剂盒
CN106754691A (zh) * 2016-12-12 2017-05-31 扬州大学 一种从家禽全血样本快速分离高纯度红细胞的方法
CN106868148A (zh) * 2017-03-08 2017-06-20 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 聚集状态可控且能够长期保存的细胞核的制备方法
CN113514639A (zh) * 2021-07-05 2021-10-19 深圳市第三人民医院 精液白细胞群流式定量检测试剂、试剂盒及检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103602632A (zh) 孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法
CN104711226B (zh) 一种胎盘造血干细胞的制备方法
EP1349918B1 (en) Method of collecting placental stem cells
CN108795869A (zh) 一种循环肿瘤细胞阳性富集方法
AU2002220209A1 (en) Method of collecting placental stem cells
CN106399250A (zh) 一种分离外泌体的方法及其试剂盒
CN101144070A (zh) 骨髓脐带血干细胞体外分离试剂盒及其应用方法
CN106119189A (zh) 胎儿有核红细胞的分离纯化方法及试剂盒
CN100485029C (zh) 一种有核细胞体外分离试剂盒及其应用方法
CN104962520A (zh) 一种快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法
Revencu et al. Collection, isolation and characterization of the stem cells of umbilical cord blood
CN104789525A (zh) 一种异体外周血单个核细胞体外分离试剂盒及使用方法
CN102604890A (zh) 脐带血间充质干细胞分离液及分离流程
CN101624579A (zh) 分离人骨髓或脐带血干/祖细胞的试剂盒及其应用
CN104152405A (zh) 从胎盘中分离提取造血干细胞的方法
CN104818280A (zh) 单链核酸适配体及其应用
CN103103161A (zh) 胎儿有核红细胞分离纯化方法及唐氏综合症筛查试剂盒
CN104774806B (zh) 一种胎盘造血干细胞的制备方法
CN106635769A (zh) 细胞分离装置以及细胞分离方法
CN110191951A (zh) 基于外泌体dna进行无创产前诊断的方法及其应用
CN205687938U (zh) 一种脂肪干细胞分离装置
CN102492654A (zh) 一种分离人脐带血干细胞的试剂盒及其使用方法
CN102250839A (zh) 一种通用型细胞处理试剂盒及其应用方法
CN104762262A (zh) 一种脐血干细胞的体积离心分离方法
CN106350489A (zh) 人骨髓、脐带血、外周血干细胞分离试剂盒及其分离方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20140226