CN103570694B

CN103570694B - 淫羊藿素及其衍生物的制备及其在肿瘤治疗中的应用

Info

Publication number: CN103570694B
Application number: CN201310310954.8A
Authority: CN
Inventors: 张震寰; 董环文; 张美�; 洪金省; 张世民; 张鲁榕
Original assignee: Xiamen Lujia Biological Science & Technology Co Ltd
Current assignee: Xiamen Lujia Biological Science & Technology Co Ltd
Priority date: 2012-07-23
Filing date: 2013-07-23
Publication date: 2017-05-03
Anticipated expiration: 2033-07-23
Also published as: CN103570695B; CN103570694A; CN103570695A

Abstract

本发明涉及淫羊藿素及其衍生物的制备及其在肿瘤治疗中的应用。具体地，本发明公开了一类结构如式I所示的淫羊藿素衍生物及其制备方法，还公开了一种淫羊藿素及其衍生物在放射治疗等中的应用，可同时作为放射增敏剂和放射防护剂。

Description

淫羊藿素及其衍生物的制备及其在肿瘤治疗中的应用

技术领域

本发明属于中药制药领域。具体地，本发明涉及淫羊藿素或其衍生物的制备及其医药新用途。

背景技术

恶性肿瘤已成为我国发病率和致死率最高的疾病之一。放射治疗是治疗恶性肿瘤的主要手段之一。放射治疗的理想目的是在根治恶性肿瘤的同时，尽量减少正常组织的损伤，保证患者的长期生存和生存质量。然而，由于肿瘤的异质性和个体差异性的存在，在放射治疗过程中不可避免的给患者带来不同程度的副作用，这也成为制约放射治疗技术应用的瓶颈。

放射增敏剂是指能够增加肿瘤细胞对放射的敏感性，在与射线合并应用时能增加照射致死效应的化学物质。目前已经发现了许多能增强辐射细胞效应的化合物，如卤代嘧啶、硝基咪唑类化合物、修复抑制剂等，但其大多数因为增敏效果有限或者具有较大的毒副作用，而限制其应用。

放射防护剂是指机体或某一生物系统受电离辐射照射前后，早期给予某种化学物质能减轻其辐射损伤，促进其恢复的化合物。最早发现的放射防护剂是硫氢化合物。目前已证实有效的放射防护剂是WR2721，阿米福汀。它能显著减轻放射治疗毒副作用，但是它本身也具有较大的毒副作用。其机理是减少自由基对细胞的损伤。另一类抗放射性副作用的药物是通过抗放射炎症反应来达到减少辐射性副作用的目的。

在放射治疗肿瘤中，如果能使药物的放射防护与放射增敏这两个对立作用统一起来。也就是说，对肿瘤细胞有增敏作用的化合物，同时对正常组织有防护作用。这一双功能药物对提高放射治疗效果将是十分理想的。目前还没有一个化合物，同时具有放射增敏和放射防护作用，而且本身的毒副作用很小。因此,开发既能增加放射治疗的疗效，又能减轻放射副作用的新药物迫在眉捷。

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿、箭叶淫羊藿、粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鲜淫羊藿的干燥地上部分。淫羊藿含多种黄酮类成分，如淫羊藿甘、淫羊藿次苷、淫羊藿素(Icaritin，ICT)等。中医认为其味辛、甘，性温，归肝、肾经，主治功能：补肾阳，强筋骨，祛风湿。

目前有关淫羊藿素的药理活性研究报道较少。有报道淫羊藿素可抑制体外培养的小鼠T淋巴瘤EL-4细胞的增殖并诱导其凋亡(范双翼余英豪中国比较医学杂志2011年21卷06期)；淫羊藿素能够诱导雌激素受体阴性肿瘤细胞凋亡和生长抑制；(2009年第二军医大学硕士学位论文，张妤；导师：殷正丰、吴孟超)；淫羊藿素能以浓度依赖性方式有效地抑制CML原代细胞增殖和诱导CML原代细胞凋亡；(2009年中南大学博士学位论文，朱剑锋；导师：张广森)。中国专利CN1869204A公开了“淫羊藿素在诱导干细胞体外定向分化方面的用途”。中国专利CN1194701C公开了“淫羊藿素或去甲淫羊藿素在制备雌激素受体调节剂的应用”。

迄今尚未见有关于淫羊藿素增加放疗效果或者减轻放疗副作用的报道。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一类结构新颖的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐及其制备方法。

本发明的另一目的在于提供淫羊藿素或其衍生物、或其药学上可接受的盐制备增加放疗效果和减轻放疗副作用的药物的用途。

在本发明第一方面中，提供了一种淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐，淫羊藿素衍生物的结构如式I所示，

式中，Rx、Ry各自独立地为氢、取代或未取代的C_1-6烷基、取代或未取代的C_2-6烯基或取代或未取代的C_2-6炔基，其中所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：C_1-6烷基、-O-或羟基；

Rz为氢或取代或未取代的嘧啶基，其中所述取代基为一个或多个(优选1-3个)选自下组的取代基：羟基、卤素、硝基、氰基、羧基或酯基；或

Rz为-Z-Ar1-Ar2，Z为-(CH₂)_m-(O)_k-(CH₂)_n-，其中，k为0或1，m为0-2的整数，n为0-2的整数，且m＋n≠0；Ar1和Ar2各自独立地为未取代或取代的任选含有1-3个氮原子的C_5-10芳基，其中所述的取代基包括1-5个(较佳地1-3个)选自下组的取代基：卤素、羟基、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_3-6卤代环烷基、C_1-6卤代烷氧基或

R₂为取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的呋喃基或取代或未取代的苯基，其中所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：羟基，C_1-6烷氧基，N’N-二甲基甲酰基，未取代的C_1-6烷基或被选自C_1-4烷基-胺基、N-哌啶基、N-吗啉基、C_1-6烷基-N-哌嗪基的取代基所取代的C_1-6烷基，氨基或被一个或两个选自C_1-6烷基或C_1-4酰基的取代基所取代的胺基；

附加条件是所述当Rx为Ry和Rz为H时，R₂不为对甲氧基苯基。

在另一优选例中，Rx、Ry各自独立地为氢、

在另一优选例中，R₂为选自下组的基团：

在另一优选例中，式I化合物为选自下组的化合物：

上述各式中，R₂为选自下组的基团：

在另一优选例中，式I化合物为选自下组的化合物：

或其中，Rz选自下组的基团：

在本发明第二方面中，提供了一种本发明第一方面所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐的用途，用于制备放射治疗增敏剂，或放射治疗的保护剂、或用于制备减轻放射治疗副作用的药物组合物。

在本发明第三方面中，提供了本发明第一方面所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，

(a)所述方法包括步骤：

(a1)于惰性溶剂中，将化合物IC-O4进行脱保护反应，从而形成化合物ICDE-01；

(a2)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-O1进行氧化反应，从而形成化合物ICDE-02；

和/或(a3)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-O2进行水解反应，从而形成化合物ICDE-03；

(b)所述方法包括步骤：

于惰性溶剂中，在碱存在下，将RyBr和式II化合物反应，从而形成式III化合物；

(c)所述方法包括步骤：

于惰性溶剂中，将RzOH和式III化合物反应，从而形成式I化合物；

(d)所述方法包括步骤：

(d1)于惰性溶剂中，将化合物IC-O8进行脱保护反应，从而形成化合物ICDE-04；

(d2)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-O4进行氧化反应，从而形成化合物ICDE-05；

和/或(d3)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-O5进行水解反应，从而形成化合物ICDE-06；

(e)所述方法包括步骤：

于惰性溶剂中，在碱存在下，将化合物QD-0和RzBr进行反应，从而得到化合物QD-1；

上述各式中，Rx、Ry、Rz、R₂如本发明第一方面中所述，R₁为甲基、苄基或-CH₂OCH₃，且Rz不为氢。

在另一优选例中，所述化合物IC-04按以下方法制得，所述方法包括步骤：

(a1.1)于惰性溶剂中，在碱存在下，将和化合物IC-O1反应，从而形成化合物IC-02；

(a1.2)于惰性溶剂中，在碱存在下，将R₂CHO和化合物IC-O2反应，从而形成化合物IC-03；

(a1.3)于惰性溶剂中，在碱存在下，将化合物IC-O3进行分子内关环反应，从而形成化合物IC-04。

上述各式中，R₂、R₁如上所述。

在另一优选例中，所述化合物IC-08按以下方法制得，所述方法包括步骤：

(d1.1)于惰性溶剂中，在碱存在下，将和化合物IC-O5反应，从而形成化合物IC-06；

(d1.2)于惰性溶剂中，在碱存在下，将R₂CHO和化合物IC-O6反应，从而形成化合物IC-07；

(d1.3)于惰性溶剂中，在碱存在下，将化合物IC-O7进行分子内关环反应，从而形成化合物IC-08。

上述各式中，R₂、R₁如上所述。

在本发明第四方面中，提供了一种药物组合物，包括：

(1)如式I所示的淫羊藿素或其衍生物、或其药学上可接受的盐；

Rz为氢、或取代或未取代的嘧啶基，其中所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：羟基、卤素、硝基、氰基、羧基或酯基；

Rz为-Z-Ar1-Ar2，Z为-(CH₂)_m-(O)_k-(CH₂)_n-，其中，k为0或1，m为0-2的整数，n为0-2的整数，且m＋n≠0；Ar1和Ar2各自独立地为未取代或取代的任选的含有1-3个氮原子的C_5-10芳基，其中所述的取代基包括1-5个(较佳地1-3个)选自下组的取代基：卤素、羟基、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C_3-6卤代环烷基、C_1-6卤代烷氧基或

R₂为取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的呋喃基或取代或未取代的苯基，所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：羟基，C_1-6烷氧基，N’N-二甲基甲酰基，未取代的C_1-6烷基或被选自C_1-4烷基-胺基、N-哌啶基、N-吗啉基、C_1-6烷基-N-哌嗪基的取代基所取代的C_1-6烷基，氨基或被一个或两个选自C_1-6烷基或C_1-4酰基的取代基所取代的胺基；

以及(2)药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一优选例中，所述药物组合物中还含有其他的放射治疗增敏剂或保护剂，

其中所述增敏剂为硝基咪唑类化合物，如N,N-双[(2-甲基-5-硝基-1H-咪唑-1-基)-乙氧羰甲基]甘氨酸钠三水合物；所述保护剂为有机硫化磷酸化合物，如S-2-(3-氨丙基胺)乙基硫代磷酸。

在另一优选例中，用作放射治疗增敏剂，和/或放射治疗的保护剂。

在本发明第五方面中，提供了一种如式I所示的淫羊藿素或其衍生物、或其药学上可接受的盐的用途，用于制备放射治疗增敏剂，或放射治疗的保护剂、或用于制备减轻放射治疗副作用的药物组合物；式I中，Rx、Ry、Rz或R₂的定义如本发明第四方面中所述。

在本发明第六方面中，提供了一种治疗方法，包括步骤：在放射治疗之前、之中或之后，给需要治疗的对象施用如式I所示的淫羊藿素或其衍生物、或其药学上可接受的盐；式I中，Rx、Ry、Rz或R₂的定义如本发明第四方面中所述。

在本发明第七方面中，提供了一种放射治疗的方法，包括步骤：在放射治疗之前或之中，给需要治疗的对象施用如式I所示的淫羊藿素或其衍生物、或其药学上可接受的盐；以及对所述对象进行放射治疗；式I中，Rx、Ry、Rz或R₂的定义如本发明第四方面中所述。

在本发明第八方面中，提供了一种提高放射治疗敏感性的方法，包括步骤：在放射治疗之前或之中，给需要放射治疗的对象施用如式I所示的淫羊藿素或其衍生物、或其药学上可接受的盐；式I中，Rx、Ry、Rz或R₂的定义如本发明第四方面中所述。

在本发明第九方面中，提供了一种减轻放射治疗副作用的方法，包括步骤：在放射治疗之前、之中或之后，给需要放射治疗的对象施用如式I所示的淫羊藿素或其衍生物、或其药学上可接受的盐；式I中，Rx、Ry、Rz或R₂的定义如本发明第四方面中所述。

在本发明第十方面中，提供了一种如式I所示的淫羊藿素或其衍生物、或其药学上可接受的盐的用途，用于制备预防或治疗肿瘤的药物；和/或用于制备抑制肿瘤细胞生长的药物；式I中，Rx、Ry、Rz或R₂的定义如本发明第四方面所述。

在另一优选例中，所述肿瘤包括：乳癌、肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、白血病、淋巴癌、鼻咽癌等。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了淫羊藿素与电离辐射在杀伤小鼠乳腺癌细胞(4T1细胞)具有协同作用。

图2显示了淫羊藿素与电离辐射在杀伤人前列腺癌细胞(DU145细胞)具有协同作用。

图3显示了淫羊藿素与电离辐射在杀伤小鼠恶色素瘤癌细胞(B16细胞)具有协同作用。

图4A是小鼠正常的皮肤情况。

图4B是小鼠右后肢单次照射30Gy后第22天的皮肤情况，可见皮肤明显脱毛，部分结痂样改变。

图4C是小鼠右后肢单次照射30Gy后当日给予淫羊藿素治疗后第22天的皮肤情况：给予淫羊藿素灌胃5mg/kg(以0.1%DMSO助溶)，照射后当日给药，每日一次，给药时间共30天。与图4B相比，给药后情况有所改善：皮肤部分脱毛，无明显炎症性改变。

图5A是模型组：小鼠右后肢单次照射30Gy后，照射后当日以0.1%DMSO灌胃，照射后当日给药，每日一次，给药时间共30天。照射后第142天，受照射右后肢与正常左后肢之间的长度明显差异。

图5B是小鼠右后肢单次照射30Gy后，照射后当日以淫羊藿素5mg/kg(以0.1%DMSO助溶)灌胃给药，照射后当日给药，每日一次，给药时间共30天。照射后第142天，与图5A相比，受照射右后肢与正常左后肢之间的长度差异有所改善。

上述各图中，“IR”是指照射。

图6为淫羊藿素衍生物ICED-01-01对4T1乳癌细胞的杀伤效果；其中，从左至右依次为NC、ICT50μg/ml、D112.5μg/ml、D125μg/ml、D150μg/ml。图6中的D1即ICDE-01-01。

图7为淫羊藿素衍生物ICDE-04-31对4T1乳癌细胞的杀伤效果；其中，从左至右依次为NC、ICT50μg/ml、D912.5μg/ml、D925μg/ml、D950μg/ml。图7中的D9即ICDE-04-31。

图8为淫羊藿素衍生物ICDE-01-23对4T1乳癌细胞的杀伤效果；其中，从左至右依次为NC、ICT50μg/ml、D1712.5μg/ml、D1725μg/ml、D1750μg/ml。图8中的D17即ICDE-01-23。

具体实施方式

本发明人通过长期而深入的研究，意外地发现，淫羊藿素或其衍生物与放射治疗在治疗肿瘤或杀死癌细胞方面具有协同作用，可提高肿瘤放射治疗的敏感性；显著减轻放射治疗引起的副作用，且淫羊藿素或其衍生物施用于哺乳动物后，对动物几乎没有毒性，安全性极高。在此基础上，发明人完成了本发明。

本发明所述“Rx”或“Ry”的定义中，如其中所用的表示上述基团与其他化合物或基团的连接位点。

本发明所述“R₂”的定义中，如其中，所用的表示上述基团与其他化合物或基团的连接位点。

术语

如本文所用，术语“C_1-6烷基”指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。

术语“C_1-6烷氧基”指具有1-6个碳原子的直链或支链的烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、或类似基团。

术语“C_2-6烯基”指具有2-6个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。

术语“C_2-6炔基”是指具有2-6个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基等。

术语“C_3-6环烷基”是指具有3-6个碳原子的环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或环庚基等。

术语“C_5-10芳基”指具有5-10个碳原子的芳族烃基，例如苯基、萘基、或类似基团。本发明所述的“任选含有1-3个氮原子的C_5-10芳基”是指所述芳基可不含杂原子（例如苯基、萘基等），或者可含有1-3个氮原子（例如，吡啶、等）。

术语“卤代的”指被相同或不同的一个或多个上述卤原子取代的基团，例如三氟甲基、五氟乙基、或类似基团。所述“卤原子”指氟、氯、溴、或碘。

术语“C_1-4酰基”是指具有1-4个碳原子的酰基，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基。

活性成分

如本文所用，术语“本发明化合物”指淫羊藿素或其衍生物(如式I所示的淫羊藿素衍生物)。该术语还包括及淫羊藿素或其衍生物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。

制备方法

下面更具体地描述本发明式I结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便的制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易的进行。

本发明所述制备方法中的反应通常在0℃至反应体系处于回流状态下进行，优选地在室温(如20-30℃)至回流下进行。

本发明所述方法包括：

方法(a)所述方法包括步骤：

(a1)于惰性溶剂(如丙酮，四氢呋喃，N’N-二甲基甲酰胺(DMF)或乙醇)中，在碱(如K₂CO₃、Na₂CO₃、DIPEA或Cs₂CO₃)存在下，将和化合物IC-O1反应一段时间(如10小时至30小时)，从而形成化合物IC-02；

(a2)于惰性溶剂(如甲醇，异丙醇或乙醇)中，在碱(如乙醇钠，甲醇钠，钠氢或叔丁醇钠、叔丁醇钾)存在下，将R₂CHO和化合物IC-O2反应一段时间(如10小时至30小时)，从而形成化合物IC-03；

(a3)于惰性溶剂(如甲醇，异丙醇或乙醇)中，在碱(如氢氧化钾，氢氧化钠或叔丁醇钠、叔丁醇钾)存在下，将化合物IC-O3进行分子内关环反应一段时间(如1小时至5小时)，从而形成化合物IC-04。

(a4)于惰性溶剂中，将化合物IC-O4进行脱保护反应，从而形成化合物ICDE-01；

所述脱保护反应可按如下进行：

a4.1当R₁为甲基时：

在惰性溶剂(如二氯甲烷或四氢呋喃)中，将化合物IC-04和氯化铝反应一段时间(如10小时至30小时),反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇/乙酸乙酯重结晶得到产物ICDE-01为黄色固体；和/或

a4.2当R₁为苄基时：

在惰性溶剂(如甲醇或乙醇)中，在催化剂(如10％Pd/C)存在下，将化合物IC-04在氢气氛围条件下反应一段时间(如10小时至30小时)，反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇/乙酸乙酯重结晶得到产物ICDE-01为黄色固体；和/或

a4.3当R₁为-CH₂OCH₃时：

在惰性溶剂(如THF)中，将化合物IC-04和盐酸(浓度为如1～6N，或1～3N)反应一段时间(如3小时至10小时)，反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇/乙酸乙酯重结晶得到产物ICDE-01为黄色固体。

(a5)于惰性溶剂(如二氯甲烷)中，将化合物ICDE-O1进行氧化反应一段时间(如3小时至10小时)，从而形成化合物ICDE-02；

所述氧化反应所采用的氧化剂可以是任何适用于本反应的氧化剂，例如但不限于，间氯过氧苯甲酸。

(a6)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-O2进行水解反应一段时间(如3小时至10小时)，从而形成化合物ICDE-03；

所述水解反应所采用酸性试剂进行反应，例如但不限于盐酸(如0.1～6N的盐酸溶液，或1～6N盐酸溶液)。

方法(b)所述方法包括步骤：

于惰性溶剂中，在碱存在下，将RyBr和式II化合物反应，从而形成式III化合物。

所述方法(b)所采用的惰性溶剂、碱，以及反应时间等条件如上述步骤(a1)所述；

方法(c)所述方法包括步骤：

于惰性溶剂(如四氢呋喃或二氯甲烷)中，将RzOH和式III化合物反应，从而形成式I化合物；

所述方法(c)优选采用的反应条件为在DEAD(或DIAD)和三苯基膦。

方法(d)所述方法包括步骤：

(d1)于惰性溶剂中，在碱存在下，将和化合物IC-O5反应，从而形成化合物IC-06；

所述步骤(d1)所采用的惰性溶剂、碱以及反应时间等条件如上述步骤(a1)所述；

(d2)于惰性溶剂中，在碱存在下，将R₂CHO和化合物IC-O6反应，从而形成化合物IC-07；

所述步骤(d2)所采用的惰性溶剂、碱以及反应时间等条件如上述步骤(a2)所述；

(d3)于惰性溶剂中，在碱存在下，将化合物IC-O7进行分子内关环反应，从而形成化合物IC-08；

所述步骤(d3)所采用的惰性溶剂、碱以及反应时间等条件如上述步骤(a3)所述；

(d4)于惰性溶剂中，将化合物IC-O8进行脱保护反应，从而形成化合物ICDE-04；

所述步骤(d4)所采用的惰性溶剂、脱保护试剂以及反应时间等条件如上述步骤(a4)所述，具体按步骤a4.1、a4.2和a4.3中所述；

(d5)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-O4进行氧化反应，从而形成化合物ICDE-05；

所述步骤(d5)所采用的惰性溶剂、氧化用试剂以及反应时间等条件如上述步骤(a5)所述；

(d6)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-O5进行水解反应，从而形成化合物ICDE-06；

所述步骤(d6)所采用的惰性溶剂、水解所用试剂以及反应时间等条件如上述步骤(a6)所述；

上述各式中，Rx、Ry、Rz、R₂、R₁如上文所述。

方法(e)所述方法包括步骤：

于惰性溶剂(如丙酮，四氢呋喃，DMF或乙醇)中，于一定温度(如50℃～150℃)下，在碱(如K₂CO₃、Na₂CO₃、DIPEA或Cs₂CO₃)的存在下，将化合物QD-0和溴化物(RBr，R如上所示)进行反应一段时间(如10～30小时)，从而得到化合物QD-1。

本发明所述方法的具体步骤在实施例中有详细的说明。

药物组合物和施用方法

由于本发明化合物具有优异的放射增敏作用或放射防护作用，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于提高放射治疗的敏感性或缓解由放射治疗引起副作用。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，

每次剂量的范围，例如对于60kg体重的人而言，日给药(或每次放射治疗给药)剂量通常为100～200mg。具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素。

本发明的主要优点有：

1.本发明所述淫羊藿素或其衍生物与放射治疗对于杀伤癌细胞(如乳腺癌细胞、人前列腺癌细胞、黑色素瘤细胞等)具有协同作用。

2.本发明所述淫羊藿素或其衍生物显著减轻照射引起的副作用(如放射性皮炎、放射性纤维化、放射性肺损伤等)。

3.本发明所述淫羊藿素或其衍生物作为药物，施用于哺乳动物，安全性极高。

下面结合具体实施，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

本发明所用化合物编号如目标化合物ICDE-01-01是指当通式ICDE-01中，R₂为时的化合物，结构如下所示：

实施例1、淫羊藿素衍生物ICT-5-Fu缩合物的制备：

向100毫升的三口瓶中依次加入30毫升四氢呋喃，1mmol原料ICT，1mmol5-氟尿嘧啶(5-Fu)，1.3mmol DEAD和1.3mmol三苯基膦。将该反应液室温搅拌过夜。反应完成后，向反应体系中加入20毫升水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥过滤，浓缩得到粗产品，硅胶柱层析纯化得到纯品ICT-5-Fu，产率67%。

实施例2、淫羊藿素衍生物ICDE-01～ICDE-03(当R₁为甲基，R₂为时)的制备：

2.1中间体IC-02的制备：

其中，R₁为-Me时：

向100毫升的三口瓶中加入50毫升丙酮，然后，在搅拌条件下，依次加入1mmol原料IC-01，1.2mmol烯丙基溴化物和1.5mmolK₂CO₃，将反应液加热到回流状态，搅拌10小时。反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇重结晶得到产物IC-02为黄色固体，产率70%。

2.2中间体IC-03的制备：

其中，R₁为-Me，R₂为时：

向100毫升的三口瓶中加入50毫升甲醇，然后，在搅拌条件下，依次加入1mmol原料IC-02，1.2mmol醛(R₂CHO)和1.5mmol乙醇钠，将反应液加热到回流状态，搅拌10小时。反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇重结晶得到产物IC-03为黄色油状物，产率60%。

2.3中间体IC-04的制备：

其中，R₁为-Me，R₂为时：

在100毫升的三口瓶中加入50毫升甲醇，然后，在搅拌条件下，依次加入1mmol原料IC-03和1.5mmol氢氧化钾，将反应液加热到回流状态，搅拌1小时。然后将反应液降到室温，加入2mmol双氧水和2mmol氢氧化钾。反应液搅拌回流过夜。反应完成后，减压蒸干溶剂，加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥、浓缩得固体粗品，用乙醇/乙酸乙酯重结晶得到产物IC-04为黄色固体，产率45%到76%。

2.4目标化合物ICDE-01的制备：

其中，R₁为-Me，R₂为时：

向100毫升的三口瓶中加入50毫升二氯甲烷，然后，在搅拌条件下，加入1mmol原料IC-04，3mmol氯化铝，将反应液加热到回流状态，搅拌10小时。反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇/乙酸乙酯重结晶得到产物ICDE-01为黄色固体，产率60%。

2.5目标化合物ICDE-02的制备：

其中，R₂为时：

向100毫升的三口瓶中加入50毫升溶剂(二氯甲烷)，然后，依次加入1mmol原料ICDE-01，2mmol间氯过氧苯甲酸，室温下搅拌4小时。反应完成后，过滤去除固体，母液减压蒸干溶剂，用乙醇/乙酸乙酯重结晶得到产物ICDE-02为黄色固体，产率75%。

2.6.目标化合物ICDE-03的制备：

其中，R₂为时：

向100毫升的三口瓶中加入50毫升溶剂(四氢呋喃)，然后，依次加入1mmol原料ICDE-02，10毫升3N盐酸溶液，室温下搅拌3小时。反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇/乙酸乙酯重结晶得到产物ICDE-03为黄色固体，产率50%。

实施例3、淫羊藿素衍生物ICDE-01(当R₁为苄基，R₂为时)的制备：

其中，R₁为苄基，R₂为时：

向100毫升的三口瓶中加入50毫升甲醇，然后，将反应体系用氮气交换三次，依次加入1mmol原料IC-04，10毫克10%Pd/C，氢气氛围条件下，搅拌10小时。反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇/乙酸乙酯重结晶得到产物ICDE-01为黄色固体，产率60%。

实施例4、淫羊藿素衍生物ICDE-01(当R₁为-CH₂OCH₃，R₂为时)的制备：

其中，R₁为-CH₂OCH₃，R₂为时；

向100毫升的三口瓶中加入50毫升溶剂(四氢呋喃)，然后，依次加入1mmol原料IC-04，10毫升3N盐酸，搅拌10小时。反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇/乙酸乙酯重结晶得到产物ICDE-01为黄色固体，产率70%。

实施例5、淫羊藿素衍生物ICDE-01～ICDE-03(当R₁、R₂分别为选自表1中所述基团时)的制备：

表1淫羊藿素衍生物中的基团

5.1中间体IC-02的制备：

制备方法同实施例2的步骤2.1，不同点在于，各式中R₁为选自表1的基团；所用溶剂可由选自下组的溶剂代替：丙酮、四氢呋喃、DMF或乙醇；所用碱可由选自下组的碱代替：K₂CO₃、Na₂CO₃、DIPEA或Cs₂CO₃；反应时间为10小时至30小时；中间体IC-02的产率为60%到80%。

5.2中间体IC-03的制备：

制备方法同实施例2的步骤2.2，不同点在于，各式中R₁、R₂为选自表1的基团；用溶剂可由选自下组的溶剂代替：甲醇、异丙醇或乙醇；所用碱可由选自下组的碱代替：乙醇钠、甲醇钠、钠氢或叔丁醇钠、叔丁醇钾；反应时间为10小时至30小时；中间体IC-03的产率50%到70%。

5.3中间体IC-04的制备：

制备方法同实施例2的步骤2.3，不同点在于，各式中R₁、R₂为选自表1的基团；用溶剂可由选自下组的溶剂代替：甲醇、异丙醇或乙醇；所用碱可由选自下组的碱代替：氢氧化钾、氢氧化钠或叔丁醇钠、叔丁醇钾；中间体IC-04的产率为45%到76%。

5.4目标化合物ICDE-01的制备：

根据R₁基团选择相应的去保护条件：

5.4.1当R₁为甲基时：

制备方法同实施例2的步骤2.4，不同点在于，各式中R₂为选自表1的基团；用溶剂可由选自下组的溶剂代替：二氯甲烷或四氢呋喃；反应时间为10小时至30小时；ICDE-01的产率为60%到70%。

5.4.2当R₁为苄基时：

制备方法同实施例3，不同点在于，各式中R₂为选自表1的基团；用溶剂可由选自下组的溶剂代替：甲醇或乙醇；反应时间为10小时至30小时；ICDE-01的产率为60%到70%。

5.4.3当R₁为-CH₂OCH₃时：

制备方法同实施例4，不同点在于，各式中R₂为选自表1的基团；反应时间为3小时至10小时；ICDE-01的产率为60%到70%。

5.5目标化合物ICDE-02的制备：

制备方法同实施例2的步骤2.5，不同点在于，各式中R₂为选自表1的基团；反应时间为3小时至10小时；ICDE-02的产率为50%到75%。

5.6目标化合物ICDE-03的制备：

制备方法同实施例2的步骤2.6，不同点在于，各式中R₂为选自表1的基团；反应时间为3小时至10小时；ICDE-03的产率为50%到75%。

实施例6淫羊藿素衍生物ICDE-04～ICDE-06的制备：

6.1中间体IC-06的制备

中间体IC-06的制备方法同实施例2的步骤2.1中中间体IC-02的制备方法，不同点在于用IC-05代替IC-01，其中，R₁选组下组基团：甲基(-Me)、苄基(-Bn)或-CH₂OCH₃.

62中间体IC-07的制备

中间体IC-07的制备方法同实施例2的步骤2.2中中间体IC-03的制备方法，不同点在于用IC-06代替IC-02，其中，R₁同步骤6.1的基团，R₂选组下组的基团：

6.3中间体IC-08的制备

中间体IC-08的制备方法同实施例2的步骤2.3中中间体IC-04的制备方法，不同点在于用IC-07代替IC-03，其中，R₁或R₂同步骤6.2。

64化合物ICDE-04的制备

化合物ICDE-04的制备方法同实施例2的步骤2.4、实施例3或实施例4中化合物ICDE-01的制备方法，不同点在于用IC-08代替IC-04，其中，R₂同步骤6.2的基团。

6.5化合物ICDE-05的制备

化合物ICDE-05的制备方法同实施例2的步骤2.5中化合物ICDE-02的制备方法，不同点在于用化合物ICDE-04代替化合物ICDE-01，其中，R₂同步骤6.2的基团。

6.6化合物ICDE-06的制备

化合物ICDE-06的制备方法同实施例2的步骤2.6中化合物ICDE-03的制备方法，不同点在于用化合物ICDE-05代替化合物ICDE-02，其中，R₂同步骤6.2的基团。

实施例7、淫羊藿素衍生物ICDE-07、QD-1的制备

7.1淫羊藿素衍生物ICDE-07的制备

制备方法同实施例2的步骤2.1的中间体IC-02的制备方法。不同点在于用化合物ICDE-01代替原料IC-01，用溴丙基炔代替烯丙基溴化物

R₂选自如下基团：

7.2淫羊藿素衍生物QD-1的制备

7.2.1当Rz为：33时，QD-1的制备：

向100毫升的三口瓶中加入50毫升丙酮，然后，在搅拌条件下，依次加入1mmol化合物QD-0，1.2mmol溴化物(RBr，R为式33所示的结构)和1.5mmol K₂CO₃，将反应液加热到50℃，搅拌10小时。反应完成后，减压蒸干溶剂，用乙醇重结晶得到产物QD-1黄色固体，产率50%。

7.2.2当Rz为选自下组的基团时，QD-1的制备：

制备方法同7.2.1，不同点在于，采用溴化物(RzBr，其中，Rz为式34～式39所示的结构)；溶剂选自丙酮，四氢呋喃，DMF或乙醇；碱选自：K₂CO₃、Na₂CO₃、DIPEA或Cs₂CO₃；反应温度为50℃～150℃；反应时间为10～30小时。产物QD-1为黄色固体，产率30%到50%。

实施例2-7制备的化合物的结构鉴定数据如下：

目标化合物ICDE-01-01～ICDE-01-32结构鉴定数据：

目标化合物ICDE-02-01～ICDE-02-32结构鉴定数据：

目标化合物ICDE-03-01～ICDE-03-32结构鉴定数据：

目标化合物ICDE-04-01～ICDE-04-32结构鉴定数据：

目标化合物ICDE-05-01～ICDE-05-32结构鉴定数据：

目标化合物ICDE-06-01～ICDE-06-32结构鉴定数据：

目标化合物ICDE-07-01～ICDE-07-32结构鉴定数据：

实施例8、淫羊藿素(ICT)与放射治疗协同杀伤小鼠乳腺癌细胞(4T1细胞)的克隆形成实验

实验药物：淫羊藿素(纯度＞98%)购买自上海友思生物技术公司。

细胞株：小鼠4T1乳腺癌细胞，购自美国模式培养物集存库(ATCC)，ATCC序列号为CRL-2539^TM。

照射仪器：加拿大，MDS Nordion公司的40Exactor(137CSγ射线辐射器)，所产生的γ射线的剂量率为1.053Gy/分。

实验方法：

(1)4T1细胞的培养与传代：小鼠乳腺癌细胞4T1加入含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、链霉素的高糖DMEM，置于在含5%CO₂的37℃培养箱中生长，细胞生长至80-90%融合后进行传代，2-3天传代一次。

(2)克隆形成试验：在60mm平皿里接种4T1细胞，

共分成四组：溶剂对照组、单纯用淫羊藿组、单纯照射组以及照射加淫羊藿组。每组3盘，每盘接种4T1细胞1000个。

淫羊藿素用药浓度分为4个水平。分别为：0μmol、1.5μmol、3μmol和6μmol。照射剂量分为5个水平，分别为：0Gy、2Gy、4Gy、6Gy和8Gy。

细胞处理后培养14天，10%甲醛固定，1%结晶紫染色，克隆照相及计数，计算4T1克隆存活分数。结果用Image Pro图像分析软件计算大于50个细胞的克隆数，最后用CompuSyn软件进行计算淫羊藿素与放射治疗在杀伤小鼠4T1乳腺癌细胞克隆的相互作用情况。

结果表明，淫羊藿素与放射治疗在杀伤小鼠4T1乳腺癌细胞克隆具有协同作用。见图1、表2。

表2不同浓度淫羊藿素与照射协同作用杀伤4T1乳腺癌细胞克隆的实验结果

淫羊藿素(μM)	D₀(Gy)	SF2	增益比	联合指数	剂量下降指数
						0	5.5	0.87
1.5	4.8	0.85	1.30	4.95	0.20
						3	4.7	0.83	1.18	0.39	2.51
6	3.7	0.62	1.28	0.19	5.07

注：1.D₀：照射后剩余37％细胞所需要的放射线剂量；结果表明：随着淫羊藿素剂量的增加，细胞对放射线的敏感性也增加。

2.SF2：经2Gy照射后的细胞存活分数；结果表明：随着淫羊藿素剂量的增加，细胞对放射线的敏感性也增加。

3.联合指数＜1，或者，剂量下降指数＞1表示淫羊藿素和照射具有协同作用。

增益比、联合指数、剂量下降指数三个指标都是由CompuSyn软件计算而来的。

实施例9、淫羊藿素(ICT)与放射治疗协同杀伤人前列腺癌细胞(DU145细胞)的实验

实验药物：同实施例8。

细胞株：人前列腺癌细胞(DU145细胞)，购自美国模式培养物集存库(ATCC)，ATCC序列号为HTB-81^TM。

照射仪器：同实施例8。

实验方法：

(1)DU145细胞的培养与传代：细胞的培养与传代方法同实施例8，不同点在于用DU145细胞代替小鼠乳腺癌细胞4T1。

(2)四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法试验(MTT法)：

在微孔板(96孔)里接种前述步骤得到的DU145细胞，每孔3000个细胞。

照射剂量分成四个水平：0Gy、5Gy、10Gy和20Gy；ICT浓度分成6个水平：0μmol、1.6μmol、3.1μmol、6.3μmol、12.5μmol、25μmol。

细胞照射后1小时给ICT，处理后培养72小时，加入MTT溶液继续孵育4小时，用DMSO终止培养。结果用酶联免疫检测仪测定各孔的光吸收值。最后用CompuSyn软件进行计算淫羊藿素与放射治疗在杀伤DU145细胞的相互作用情况。

结果表明，淫羊藿素与放射治疗在杀伤DU145细胞具有协同作用。见图2、表3。

表3不同浓度淫羊藿素与照射协同作用杀伤DU145前列腺癌细胞的实验结果

ICT(umol)	D₀(Gy)	SF2	增益比	联合指数	剂量下降指数
						0	44	0.96
1.6	45	0.96	2.00	2.12	0.73
						3.1	30	0.93	5.29	0.69	1.76
6.3	18	0.80	9.22	0.33	3.32
						12.5	15	0.66	10.80	0.33	3.16
25	15	0.63	10.93	0.60	1.69

实施例10、淫羊藿素(ICT)与放射治疗协同杀伤小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)的实验

实验药物：同实施例8。

细胞株：小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)，购自美国模式培养物集存库(ATCC)，ATCC序列号为CRL-6323。

照射仪器：同实施例8。

实验方法：

(1)B16细胞的培养与传代：细胞的培养与传代方法同实施例8，不同点在于用B16细胞代替小鼠乳腺癌细胞4T1。

(2)四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法试验(MTT法)：

MTT法试验方法同实施例9的MTT法，不同点在于用前述步骤得到的B16细胞代替DU145细胞。

结果表明，淫羊藿素与放射治疗在杀伤B16细胞具有协同作用。见图3、表4。

表4不同浓度淫羊藿素与照射协同作用杀伤B16小鼠恶性黑色素瘤细胞的实验结果

ICT(umol)	D₀(Gy)	SF2	增益比	联合指数	剂量下降指数
						0	44	0.96
1.6	45	0.94	3.55	0.86	1.69
						3.1	30	0.88	6.23	0.48	2.5
6.3	18	0.85	7.25	0.61	1.81
						12.5	15	0.85	7.66	0.99	1.05
25	15	0.85	7.15	2.36	0.43

实施例11、淫羊藿素减轻小鼠放射性皮炎及皮下纤维化的实验

实验药物：同实施例8。

照射仪器：同实施例8。

实验动物：8周龄NIH SWISS雄性小鼠。给药前在饲养观察室内观察3天，动物随机分组，平均每笼4只群养，室温25℃，相对湿度为50-70%，光暗周期为12小时。

采用SPSS13.0统计软件分析，定量资料以均数±标准差表示，采用t检验或方差分析进行比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

11.1淫羊藿素减轻放射性皮炎的实验

动物造模及药物干预：实验动物随机分为3组：空白组、模型组和治疗组。每组8只。

空白组未接受照射。模型组和治疗组接受右后肢单次照射30Gy，照射后当日给药，每日一次，给药时间共30天。

治疗组：将淫羊藿素5mg/kg以DMSO助溶后，灌胃。

空白组和模型组：以同等体积的0.1%DMSO灌胃。

照射后第22天，观察右后肢皮肤炎症情况。

放射性皮炎的分级标准如下：

1分：	正常皮肤；
		1.5分：	轻度水肿；
2分：	明显水肿并伴有脱毛，脱毛面积≤25%；
		2.5分：	脱毛面积＞25%，但≤75%，或伴有干性脱皮；
3分：	干性脱皮，脱毛面积＞75%；
		3.5分：	湿性脱皮，脱毛面积≤25%；
4分：	湿性脱皮，脱毛面积＞25%，但≤50%；
		4.5分：	湿性脱皮，脱毛面积＞50%，并伴有少量坏死；
5分：	大片皮肤坏死，可见皮下组织。

小鼠放射性皮炎的观察结果表明：治疗组的皮肤评分明显低于模型组。淫羊藿素能显著减轻照射引起的放射性皮炎。见图4A、图4B和图4C；表5是照射后的小鼠右后肢皮肤评分。

表5小鼠右后肢单次照射30Gy后第22天的平均皮肤评分比较

分组	空白组	模型组(单次照射30Gy)	治疗组(淫羊藿素5mg/kg)
				皮肤评分	1.00±0.00	2.52±0.84	2.02±0.45^*

*注：与模型组相比P=0.015

11.2淫羊藿素减轻放射性纤维化的实验

动物造模及药物干预：同11.1部分。

照射后第142天，观察右后肢纤维化情况(右后肢挛缩程度)，观察指标为：受照右后肢与正常左后肢长度之间的差值。

小鼠右后肢放射性纤维化的观察结果表明：治疗组的右后肢挛缩程度明显减轻，受照右后肢与正常左后肢长度之间的差值明显低于模型组。说明淫羊藿素能显著减轻照射引起的放射性纤维化改变。见图5A和图5B；表6是小鼠右后肢单次照射30Gy后第142天的受照右后肢与正常左后肢长度之间的差值比较。

表6受照右后肢与正常左后肢长度之间的差值

*注：与模型组相比，P＜0.001

11.3淫羊藿素安全性实验

采用小鼠有效治疗剂量(实验11.1和实验11.2的剂量)的400倍作为急性毒性用量，即2g/kg的淫羊藿素灌胃，小鼠毫无异常反应。半数致死量未能测定出，表明淫羊藿素的安全性极高。

实施例12、淫羊藿素减轻小鼠放射性肺损伤的实验

实验药物：同实施例8。

照射仪器：同实施例8。

CT扫描仪：瑞士，SCANCO Medical AG公司生产，μCT35型号的MicroCT。

实验动物：8周龄C57BL/6雄性小鼠。给药前在饲养观察室内观察3天，动物随机分组，平均每笼4只群养，室温25℃，相对湿度为50-70%，光暗周期为12小时。

动物造模及药物干预：实验动物随机分为3组：空白组、溶剂对照组和治疗组。每组8只。

空白组未接受照射。模型组、治疗组接受全肺单次照射12Gy，照射后当日给药，每日一次，给药时间共30天。

治疗组：将淫羊藿素100mg/kg以DMSO助溶后，灌胃。

空白组和模型组：以同等体积的0.1%DMSO灌胃。

照射12个月后，观察肺部的损伤情况。

肺部损伤情况评价方法如下：用MicroCT测量小鼠肺部的CT值。小鼠肺的CT值测量方法采用文献报道的方法(Plathow C,Li M,Gong P,et al.Computed tomographymonitoring of radiation-induced lung fibrosis in mice.Invest Radiol.2004,39(10):600-609)，由两位技术人员分别测值，再取其平均值。

小鼠放射性肺损伤的观察结果表明：治疗组的肺部平均CT值明显低于模型组，淫羊藿素能显著减轻照射引起的放射性肺损伤。表7是照射后的小鼠肺部平均CT值。

表7小鼠全肺单次照射12Gy后12个月的肺部平均CT值比较

*注：与模型组相比P=0.012

实施例13淫羊藿素衍生物与放射治疗协同杀伤的实验

13.1淫羊藿素衍生物与放射治疗协同杀伤小鼠乳腺癌细胞(4T1细胞)的克隆形成实验

实验方法同实施例8，不同点在于：用实施例1～7制备的淫羊藿素衍生物ICT-5-Fu、ICDE01-01～ICDE07-032(其中R₂为选自01～32所示的基团)、以及QD-1(其中Rz为选自33～39所示的基团)中的任一化合物代替淫羊藿素。

13.2淫羊藿素衍生物与放射治疗协同杀伤人前列腺癌细胞(DU145细胞)的实验

实验方法同实施例9，不同点在于：用实施例1～7制备的淫羊藿素衍生物ICT-5-Fu、ICDE01-01～ICDE07-032(其中R₂为选自01～32所示的基团)、以及QD-1(其中Rz为选自33～39所示的基团)中的任一化合物代替淫羊藿素。

13.3淫羊藿素衍生物与放射治疗协同杀伤小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)的实验

实验方法同实施例10，不同点在于：用实施例1～7制备的淫羊藿素衍生物ICT-5-Fu、ICDE01-01～ICDE07-032(其中R₂为选自01～32所示的基团)、以及QD-1(其中Rz为选自33～39所示的基团)中的任一化合物代替淫羊藿素。

结果表明，本发明所述的淫羊藿素的衍生物与放射治疗在杀伤小鼠4T1乳腺癌细胞、人前列腺癌细胞或鼠黑色素瘤细胞方面具有协同作用。

实施例14淫羊藿素衍生物减轻小鼠放射性皮炎及皮下纤维化的实验

14.1淫羊藿素衍生物减轻小鼠放射性皮炎

实验方法同实施例11的实验11.1，不同点在于：用实施例1～7制备的淫羊藿素衍生物ICT-5-Fu、ICDE01-01～ICDE07-032(其中R₂为选自01～32所示的基团)、以及QD-1(其中Rz为选自33～39所示的基团)中的任一化合物代替淫羊藿素。

结果表明：本发明所述的淫羊藿素衍生物能显著减轻照射引起的放射性皮炎。

14.2淫羊藿素衍生物减轻放射性纤维化的实验

实验方法同实施例11的实验11.2，不同点在于：用实施例1～7制备的淫羊藿素衍生物ICT-5-Fu、ICDE01-01～ICDE07-032(其中R₂为选自01～32所示的基团)、以及QD-1(其中Rz为选自33～39所示的基团)中的任一化合物代替淫羊藿素。

结果表明：本发明所述的淫羊藿素衍生物明显减轻右后肢挛缩程度，受照右后肢与正常左后肢长度之间的差值明显低于模型组。

以上实验结果表明：

1、本发明所述淫羊藿素或其衍生物，与电离辐射具有明显的协同杀伤肿瘤细胞的作用，可作为增加肿瘤细胞对放射敏感性的有效药物，可进一步按常规方法制备含淫羊藿素或其衍生物的口服剂型或静脉注射剂等剂型。

2、本发明所述淫羊藿素或其衍生物，能明显减轻放射性皮炎、下肢纤维化以及放射性肺损伤的程度，可作为减轻放射副作用的有效药物，可进一步按常规方法制备含淫羊藿素或其衍生物的口服剂型或静脉注射剂等剂型。

实施例15淫羊藿素衍生物抑制肿瘤细胞

15.1取上述实施例制备的三种淫羊藿素衍生物:

15.2实验方法;

细胞株:4T1为恶性度极高的BABL/c乳癌细胞；A549为人肺癌细胞；

ABAE为牛动脉血管内皮细胞；NIH3T3为鼠纤维母细胞。

上述四种细胞以每孔3000个细胞的密度种植在96孔细胞培养板中(DMEM培养液+5%新生牛血清,置37℃,5%CO₂孵箱)。见生长至80%满孔时，分别加入3种淫羊藿素衍生物，浓度为0(对照空白，NC)、12.5、25、50ug/ml(实验组)、每组3复孔。淫羊藿素(ICT)50ug/ml为阳性对照。加处理后，继续培养72小时再做MTT增殖实验以见杀伤效应。

MTT增殖实验:增殖及细胞毒性检测可利用MTT可以被处理后的活细胞线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物(formazan)经DMSO溶解后以A570吸光值体现活细胞数量。细胞越多(被杀伤越少)，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

15.3实验结果:

(a)对4T1乳癌细胞的实验结果如图1-3所示。结果表明：淫羊藿素衍生物ICDE-01-01、ICDE-04-31、ICDE-01-23对恶性度极高的4T1乳癌细胞均具有显著的杀伤效果，且对4T1乳癌细胞呈浓度依赖性抑制作用，在50ug/ml浓度下具有比淫羊藿素更强的杀伤效果。ICDE-01-01对4T1乳癌细胞的IC₅₀约为25-50ug/ml，ICDE-04-31对4T1乳癌细胞的IC₅₀约为25-50ug/ml，ICDE-01-23对4T1乳癌细胞的IC₅₀约为25-12.5ug/ml。

(b)ICDE-01-01、ICDE-04-31、ICDE-01-23对A549人肺癌细胞均具有杀伤效果，基本上均呈浓度依赖性抑制作用，IC₅₀大于100ug/ml。

(c)ICDE-01-01、ICDE-04-31、ICDE-01-23对ABAE牛动脉血管内皮细胞均具有杀伤效果，基本上均呈浓度依赖性抑制作用，IC₅₀大于100ug/ml。

(d)ICDE-01-01、ICDE-04-31、ICDE-01-23对NIH3T3鼠纤维母细胞均具有杀伤效果，基本上均呈浓度依赖性抑制作用，IC₅₀约100-200ug/ml。

结论:

A)本发明的淫羊藿素衍生物对癌细胞(如乳癌细胞或肺癌细胞)均有杀伤作用，且呈量效关系，其中，对乳癌细胞抑制效果更为敏感，且效果显著优于淫羊藿素。

B)本发明的淫羊藿素衍生物均对其它细胞(如血管内皮细胞或纤维母细胞)均有杀伤作用，且呈量效关系。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，淫羊藿素衍生物的结构如式I所示，

式中，

Rx、Ry各自独立地为氢、取代或未取代的C_1-6烷基、取代或未取代的C_2-6烯基或取代或未取代的C_2-6炔基，其中所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：C_1-6烷基、-O-或羟基；

Rz为氢；

R₂为取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的呋喃基，其中所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：羟基，C_1-6烷氧基，N’N-二甲基甲酰胺基，未取代的C_1-6烷基或被选自C_1-4烷基-胺基、N-哌啶基、N-吗啉基、C_1-6烷基-N-哌嗪基的取代基所取代的C_1-6烷基，氨基或被一个或两个选自C_1-6烷基或C_1-4酰基的取代基所取代的胺基；

或者

式I化合物为结构式如下的化合物

其中，Rz选自下组的基团：

2.如权利要求1所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，Rx、Ry各自独立地为氢、

3.如权利要求1所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R₂为选自下组的基团：

4.如权利要求1所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，式I化合物为选自下组的化合物：

上述各式中，R₂为选自下组的基团：

5.如权利要求1所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，式I化合物为选自下组的化合物：

其中，Rz选自下组的基团：

6.一种如权利要求4所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，

(a)所述方法包括步骤：

(a1)于惰性溶剂中，将化合物IC-04进行脱保护反应，从而形成化合物ICDE-01；或

(a2)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-01进行氧化反应，从而形成化合物ICDE-02；或

(a3)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-02进行水解反应，从而形成化合物ICDE-03；或

上述各式中，R₂如权利要求4中所述，R₁为甲基、苄基或-CH₂OCH₃。

7.一种如权利要求4所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，

(d)所述方法包括步骤：

(d1)于惰性溶剂中，将化合物IC-08进行脱保护反应，从而形成化合物ICDE-04；或

(d2)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-04进行氧化反应，从而形成化合物ICDE-05；或

(d3)于惰性溶剂中，将化合物ICDE-05进行水解反应，从而形成化合物ICDE-06；

8.一种药物组合物，其特征在于，包括：

(1)如式I所示的淫羊藿素衍生物、或其药学上可接受的盐；

Rz为氢；

R₂为取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的呋喃基，所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：羟基，C_1-6烷氧基，N’N-二甲基甲酰胺基，未取代的C_1-6烷基或被选自C_1-4烷基-胺基、N-哌啶基、N-吗啉基、C_1-6烷基-N-哌嗪基的取代基所取代的C_1-6烷基，氨基或被一个或两个选自C_1-6烷基或C_1-4酰基的取代基所取代的胺基；以及

(2)药学上可接受的载体或赋形剂。

9.一种如式I所示的淫羊藿素衍生物、或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗肿瘤的药物；和/或用于制备抑制肿瘤细胞生长的药物；

式I中，Rx为取代或未取代的C_1-6烷基、取代或未取代的C_2-6烯基或取代或未取代的C_2-6炔基，其中所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：C_1-6烷基、-O-或羟基；

Ry为氢、取代或未取代的C_1-6烷基、取代或未取代的C_2-6烯基或取代或未取代的C_2-6炔基，其中所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：C_1-6烷基、-O-或羟基；

Rz为氢；

R₂为取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的呋喃基，所述取代基为一个或多个选自下组的取代基：羟基，C_1-6烷氧基，N’N-二甲基甲酰胺基，未取代的C_1-6烷基或被选自C_1-4烷基-胺基、N-哌啶基、N-吗啉基、C_1-6烷基-N-哌嗪基的取代基所取代的C_1-6烷基，氨基或被一个或两个选自C_1-6烷基或C_1-4酰基的取代基所取代的胺基。

10.一种如式I所示的淫羊藿素衍生物、或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于制备减轻放射性皮炎、皮下纤维化和/或放射性肺损伤的药物，

Rz为氢；