CN102440980A

CN102440980A - 天然白藜芦醇二聚体类似物在制备细胞保护药物中的用途

Info

Publication number: CN102440980A
Application number: CN2010105093536A
Authority: CN
Inventors: 孙逊; 程杰飞; 钟晨; 昌军; 谢程; 杨青
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2010-10-15
Filing date: 2010-10-15
Publication date: 2012-05-09

Abstract

本发明属于药物化学和医药技术领域，涉及式（Ⅰ）的天然白藜芦醇二聚体类似物在制备细胞保护药物中的用途。本发明经巨噬细胞系RAW264.7细胞体外试验，结果表明，所述的化合物对谷氨酸介导的PC12细胞凋亡具有良好的恢复作用，效果与经典的抗帕金森药物美金刚胺接近。本发明的化合物具有明显细胞保护作用以及良好的剂量依赖关系，可进一步制成包含安全有效量天然白藜芦醇的二聚体及药用载体的各种制剂。

Description

天然白藜芦醇二聚体类似物在制备细胞保护药物中的用途

技术领域

本发明属于药物化学和医药技术领域，涉及天然白藜芦醇二聚体类似物在制药中的新用途。具体涉及天然白藜芦醇二聚体类似物在制备细胞保护药物中的用途。

背景技术

现有技术公开了天然活性化合物白藜芦醇（Resveratrol）是一种天然的抗氧化剂，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝结和血管舒张，保持血液畅通，可预防癌症的发生及发展，具有抗动脉粥样硬化和冠心病，缺血性心脏病，高血脂的防治作用，抑制肿瘤的作用和具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌等疾病。目前以天然存在的以白藜芦醇为代表的二苯乙烯类化合物在国内外已成为抗骨质疏松症的研究热点，其尽管没有类似雌激素的甾体结构，但结构与己烯雌酚相似，且具有雌激素样活性。白藜芦醇的二聚体Pallidol是一种具有雌激素样活性的天然活性化合物，但在天然植物中含量很低。中国专利ZL200410067215.1公开了一种制备如下式（Ⅰ）结构的Pallidol的全合成路线。中国专利申请号：201010138216.6公开了如下式（Ⅰ）结构的一系列天然白藜芦醇二聚体类似物的制备方法，

（Ⅰ）。

发明内容

本发明的目的是提供上述式（Ⅰ）结构的天然白藜芦醇二聚体类似物在制药中的新用途，具体涉及所述的天然白藜芦醇二聚体类似物在制备细胞保护药物中的用途。

本发明进行了巨噬细胞系RAW264.7 细胞体外试验，结果表明，所述的式（Ⅰ）结构的天然白藜芦醇二聚体类似物对谷氨酸介导的PC12细胞凋亡具有良好的恢复作用，效果与经典的抗帕金森药物美金刚胺接近。说明了本发明的化合物具有潜在的细胞保护作用。

实验结果证实，所示的式（Ⅰ）结构的天然白藜芦醇二聚体类似物具有明显细胞保护作用以及良好的剂量依赖关系。

进一步，本发明的天然白藜芦醇的二聚体可制成包含安全有效量天然白藜芦醇的二聚体及药用载体的各种制剂。

“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。安全有效量根据治疗对象的年龄、病情、疗程等来确定。

“药用载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质,它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有糖（如葡萄糖、蔗糖、乳糖等），淀粉（如玉米淀粉、马铃薯淀粉等），纤维素及其衍生物（如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等），明胶，滑石，固体润滑剂（如硬脂酸、硬脂酸镁），硫酸钙，植物油（如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等），多元醇（如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等），乳化剂（如吐温??）、润湿剂（如十二烷基硫酸钠），着色剂，调味剂，稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水等。

本发明的优点有：

1，通过体外细胞试验，证实了式（Ⅰ）结构的天然白藜芦醇二聚体类似物在制药中的新用途，尤其是所述的天然白藜芦醇二聚体类似物在制备细胞保护药物中的用途。

2，能进一步制备包含安全有效量天然白藜芦醇的二聚体及药用载体的各种制剂。

为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明的新用途进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。

具体实施方式

实施例1：天然白藜芦醇的二聚体对谷氨酸(Glu) 诱导的PC12细胞凋亡的保护

实验方法：将处于对数生长期的PC12 细胞接种于预先用多聚赖氨酸处理过的96 孔培养板，细胞完全贴壁、铺满单层后弃去原培养液,用D-Hank’s 液轻轻荡洗2 次，加入无糖Earle’s 液作用30 min，荡洗后正常对照组和损伤对照组加入无血清培养液，阳性对照组加入终浓度为10^-6 mol/ L 的美金刚胺，天然白藜芦醇的二聚体设3 个剂量组分别为10^-5，10^-6，10^-7 mol/ L，于37 ℃培养30 min，荡洗后加入终浓度为0.3 mmol/ L 的谷氨酸继续培养20 min，正常对照组不加谷氨酸。D-Hank’s液洗2 次，加入不完全DMEM 培养基(不含小牛血清) 100μl/ 孔继续培养20 h。凋亡细胞DNA 断裂成不同大小的寡聚核苷酸片段(凋亡相关的内源性核酸酶激活的结果)，在FCM的DNA 直方图中表现为G0/ G1峰前形成特征性亚二倍体峰(Sub-G1 ,亚-G1)，根据该峰所占比例,可进行凋亡的定量分析。采用PI 单染色法，样本制备步骤如下：收集(1～5) ×10⁶个已处理好的细胞，离心(1 000 r/ min ,5 min)，弃上清液；3 ml PBS洗1 次，离心去上清液，加入冰冷的乙醇于4 ℃条件下固定24 h；离心弃去固定液，3 ml PBS 重悬细胞5 min，1 500 r/ min 离心5 min 去上清，0.01 %RNA 酶消化10 min，离心去上清液，加入0.005 %PI，4 ℃避光染色30 min，300 目的筛网过滤1 次，即可上机分析。流式细胞仪检测和仪器分析步骤如下：PI 用氩离子激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630 nm，产生红色荧光。使用Cellquest 软件采集样本后，用Mod Fit LT 软件进行分析。

表1 天然白藜芦醇的二聚体对谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

	细胞活力
		1 (100 μM)	40.63±0.7
2 (100 μM)	45.44±3.24
		3 (100 μM)	48.79±0.9
4 (100 μM)	34±6.48
		5 (100 μM)	39.31±2.55
6 (100 μM)	41.03±0.98
		7 (100 μM)	41.6±1.45
memantine (100 μM)	40.99±3.48
		glutamate (3.5 mM)	17.05±0.74

结果表明：天然白藜芦醇的二聚体（1 - 7）对谷氨酸介导的PC12细胞凋亡均具有良好的恢复作用，具有细胞保护作用，尤其是神经细胞保护作用，效果与美金刚胺接近。所述的美金刚胺是一种经典的抗帕金森药物，其可以拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡，具有一定的神经保护作用。

实施例2

实验方法：采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7 细胞，待细胞生长至融合状态后分别加入LPS 和不同浓度的天然白藜芦醇的二聚体（1 - 7），于37 ℃、5 %CO₂ 条件下共同孵育24 h，设立空白对照组。采用硝酸还原酶法检测细胞上清液中炎性介质一氧化氮(NO) 的含量。

实验结果：化合物1-7均对1400W抑制谷氨酸介导的RAW264.7细胞释放NO具有良好的恢复作用，其中化合物1，2，3甚至可以恢复到比1400W抑制前更高的水平，说明了本发明所述的化合物具有潜在的细胞保护作用。

Claims

1.式（Ⅰ）结构的天然白藜芦醇二聚体类似物在制备细胞保护药物中的用途，

Figure 2010105093536100001DEST_PATH_IMAGE001

（Ⅰ）。

2.式（Ⅰ）结构的天然白藜芦醇二聚体类似物在制备神经细胞保护药物中的用途。

3.一种细胞保护药物制剂，其特征在于，其包含安全有效量天然白藜芦醇的二聚体及药用载体。