CN103565906B - 治疗消化性溃疡的中成药及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗消化性溃疡的中成药及其制备方法，所述中成药主要包括黄芪、三七、红参、珍珠层粉和人工牛黄，是通过制备提取液、分离浓缩、超微粉碎珍珠层粉、制备干膏、制成制剂等步骤制备而成。采用上述方法制备的药物与采用原工艺制备的药物相比，服用量减少，提高了药物的疗效。

Description

治疗消化性溃疡的中成药及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是涉及一种治疗消化性溃疡的中成药及其制备方法。

背景技术

胃乃安制剂由黄芪，三七，红参，珍珠层粉和人工牛黄五味药材为原料制成，具有补气健脾，宁心安神，行气活血，消炎生肌的功效，是一种用于治疗胃及十二指肠溃疡，慢性胃炎等的中成药。中国专利号ZL200510037077.7，发明名称为“一种治疗消化性溃疡的中成药及其制备方法”的发明专利公开了其组合物及其制备方法，公开的具体制备方法为：将黄芪加水煎煮两次，第一次三小时，第二次二小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏；将稠膏与红参粉、三七粉、珍珠层粉混合均匀，粉碎成80-120细粉，过筛，加入人工牛黄，混合均匀，得到药粉，加入常规的辅料，制备成各种剂型。然而，由于原生产工艺中用原药材红参、三七直接磨粉入药，导致药物服用量大、携带及服用不方便、吸收慢、影响了药物的疗效，亟待通过现代的提取分离及制剂技术，减少服用量，提高药物的疗效。

发明内容

本发明提供了一种治疗消化性溃疡的中成药的制备方法。

一种治疗消化性溃疡的中成药的制备方法，所述中成药主要包括黄芪、三七、红参、珍珠层粉和人工牛黄，通过以下步骤制备而成：

(1)制备提取液

取黄芪、三七和红参，加入6-10倍体积水，提取2-3次，每次1.5-2.5h，滤过，合并滤液，得提取液；

(2)分离浓缩

将步骤(1)所得提取液进行分离后，减压浓缩至相对密度为1.20-1.25的浸膏；

(3)超微粉碎珍珠层粉

取珍珠层粉，用气流粉碎机超微粉碎；

(4)制备干膏

将步骤(3)的珍珠层粉与步骤(2)的浸膏混匀，真空干燥，打粉，过筛，得到干膏粉；

(5)制成制剂

加入人工牛黄、辅料进行制粒，制成片剂或胶囊剂。

在其中一个实施例中，所述步骤(1)中取黄芪、三七和红参，加入6倍体积的水，提取2次，每次1.5h，滤过，合并两次滤液，得提取液。

在其中一个实施例中，步骤(2)中所述分离浓缩步骤为：将步骤(1)所得提取液用孔径200nm的陶瓷膜进行分离透析，操作压力1.5-2.5bar、料液温度25-50度，将所得透析液减压浓缩至相对密度为1.20-1.25的浸膏。

在其中一个实施例中，步骤(2)中所述分离浓缩步骤为：将步骤(1)所得提取液加入乙醇，使溶液中的乙醇浓度为50％，混匀后放置12小时，离心取上清液，80℃水浴挥发乙醇，减压浓缩至相对密度为1.20-1.25的浸膏。

在其中一个实施例中，步骤(3)中所述气流粉碎机的分级频率为25HZ，粉碎时间为35min。

采用上述方法制备的药物与采用原工艺制备的药物相比，服用量减少，提高了药物的疗效。

具体实施方式

以下结合具体实施例来详细说明本发明。

本发明中治疗消化性溃疡的中成药的原料药为：黄芪700-1400份，红参粉20-40份，人工牛黄10-20份，三七70-140份，珍珠层粉100-200份。

实施例1一种治疗消化性溃疡的中成药的制备方法

本发明的治疗消化性溃疡的中成药的制备方法包括以下步骤：

(1)制备提取液

按组方比例取黄芪、三七和红参，加入6倍体积水，提取2次，每次1.5h，滤过，合并两次滤液，得提取液；

(2)分离浓缩

将步骤(1)所得提取液用200nm的陶瓷膜进行透析，分离透析参数为操作压力2.0bar即进膜压力2.5bar，出膜压力1.5bar，料液温度25-50度；将透析液于70-85℃、0.09Mpa减压浓缩至相对密度为1.20-1.25的浸膏；

(3)超微粉碎珍珠层粉

取组方量的珍珠层粉，气流粉碎机超微粉碎，其中气流粉碎机的分级频率为25HZ，粉碎时间为35min；超微粉碎后将珍珠层粉于70℃、-0.1Mpa条件下干燥；

(4)制备干膏

将步骤(3)的珍珠层粉与步骤(2)的浸膏混匀，于70℃、-0.01～-0.1MPa条件下真空干燥，打粉，过80目筛，得到干膏粉；

(5)制成制剂

加入组方量的人工牛黄、辅料(乳糖∶微晶纤维素＝1∶2)，置于流化床中制粒，以进风温度120℃、沸腾压力0.2bar预热10min，物料干燥并充分混合后设置进风温度120℃，沸腾压力0.28bar，喷嘴压力0.33bar，以7mL/min的流速喷射3％的pvp-k90溶液进行流化床制粒。待制粒结束后，进风温度调为90℃，干燥5min，使颗粒含水量控制在3％-5％。干燥；加入1％的硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即得。

采用实施例1的生产方法进行三批中试，投料量见表1，投料结果见表2所示。

表1三批中试投料量

中试结果表明制剂的硬度及崩解度均符合药用制剂要求。

实施例2一种治疗消化性溃疡的中成药的制备方法

本发明的治疗消化性溃疡的中成药的制备方法包括以下步骤：

(1)制备提取液

按组方比例取黄芪、三七和红参，加入10倍体积水，提取2次，每次2.5h，滤过，合并两次滤液，得提取液；

(2)分离浓缩

将步骤(1)所得提取液加入乙醇，使溶液中的乙醇浓度为50％，混匀后放置12小时，离心取上清液，80℃水浴挥发乙醇，减压浓缩至相对密度为1.20-1.25的浸膏。

(3)超微粉碎珍珠层粉

取组方量的珍珠层粉，气流粉碎机超微粉碎，其中气流粉碎机的分级频率为25HZ，粉碎时间为35min；超微粉碎后将珍珠层粉于70℃、-0.1Mpa条件下干燥；

(4)制备干膏

将步骤(3)的珍珠层粉与步骤(2)的浸膏混匀，于70℃、-0.01～-0.1MPa条件下真空干燥，打粉，过80目筛，得到干膏粉；

(5)制成制剂

加入组方量的人工牛黄、辅料(乳糖∶微晶纤维素＝1∶2)，置于流化床中制粒，以进风温度120℃、沸腾压力0.2bar预热10min，物料干燥并充分混合后设置进风温度120℃，沸腾压力0.28bar，喷嘴压力0.33bar，以7mL/min的流速喷射3％的pvp-k90溶液进行流化床制粒。待制粒结束后，进风温度调为90℃，干燥5min，使颗粒含水量控制在3％-5％。干燥；装胶囊，即得。

以下通过实验说明各工艺参数确定的依据，进一步阐述本发明制备方法的有益效果，这些试验例包括各制备方法的筛选试验和疗效对比实验。

实验一：采用盐酸乙醇致大鼠急性胃溃疡模型，比较水提和醇提两种方法所得药液的抗溃疡药效，为确定较优的提取溶媒提供依据。

(一)材料与方法

1、药材

黄芪：产地甘肃，批号080901；红参：产地吉林，批号080501；三七：产地云南，批号071201。参照2005年药典的要求，对黄芪、三七、红参、人工牛黄等进行药材质量标准的研究，均符合2005年版药典要求。

2、药物制备

按处方比例称取黄芪378g，红参12.5g，三七38g，加水回流提取两次，第一次3h，第二次2h，合并提取液，浓缩为500mL药液(称为三药药液，以下均同)，其含生药量为0.857g/mL；同上方法加1.6L的70％乙醇回流提取2次，每次1.5h，合并滤液，滤纸抽滤，60℃减压回收乙醇，转移至500mL容量瓶中，热水水洗转移回收瓶3次，定容至刻度，即得三药醇提药液。

3、药效考察

采用盐酸乙醇致大鼠急性胃溃疡模型考察不同溶媒提取物的药效。动物正常饲养一周后，体重在180±20g，按体重随机分成3个组别(模型组、水提组、醇提组)。动物禁食不禁水36h，按1mL/100g给药，模型组给自来水灌胃；1.5h后，平行给盐酸乙醇1.5mL/只；1h后处死动物，打开腹腔，结扎贲门与幽门后将胃取出，由幽门向胃内注入1％福尔马林溶液10mL，并将胃浸入同一浓度福尔马林中10分钟，固定内外层。沿胃大弯剪开胃，用自来水洗出胃内容物，将胃平铺于白纸上，展平，观察并测量溃疡损伤长度计算溃疡指数，以1mm计1分，不足1mm计0.5分，特别粗的加倍计算，每只动物的溃疡指数总和作为动物的溃疡指数。

(二)结果

结果表明，水提和醇提两组对模型大鼠胃溃疡指数均有明显抑制作用(p＜0.05)，其中水提液效果较好，但两者差异无统计学意义，结果见表1.1。

表1.1不同溶媒提取液对盐酸乙醇急性胃溃疡模型药效比较

注：剂量以生药材量计算；**p＜0.01、*p＜0.05，与模型组比较。

(三)结论

根据实验结果，并结合生产实际，确定采用水提法进行提取工艺优化研究。

实验二：药物水提取溶媒比和提取时间条件研究

以总皂苷含量为考察指标，进行单因素水平考察以选取较优的溶媒比和提取时间水平，供正交实验设计选取合理的因素水平。

(一)材料与方法

1、仪器：

UV-2102C紫外分光光度计：尤尼柯(上海)仪器有限公司；BS224S电子天平：北京赛多科斯仪器系统有限公司；电热恒温不锈钢水浴锅DIKW-4北京光明医疗仪器厂。

2、溶媒比的选择

称取黄芪37.8g，三七3.8g，红参1.25g共5份。分别按照溶媒比(即水与药材的倍量比)4，6，8，10，12倍量加水冷凝回流提取1h，药液浓缩定容至100mL，精密量取20ul药液，按照黄芪甲苷标准品制备的标准曲线项下测定总皂苷含量。(N＝3表示同一提取药液平行取3个样品进行检测，结果取平均值。)

3、提取时间选择

称取黄芪37.8g，三七3.8g，红参1.25g共5份。分别按照1h，1.5h，2h，2.5h，3h的提取时间水平进行提取，各水平均加10倍水冷凝回流提取1次，药液浓缩定容至100mL，同上述方法测定总皂苷含量。(N＝3表示同一提取药液平行取3个样品进行检测。)

(二)结果

1、溶媒比对总皂苷得率的影响

实验结果见表2.1，根据结果，选取8、10、12倍的溶媒最佳且10倍和12倍的得率较为接近得率未随溶媒比增加而明显递增，说明当溶媒比增至10倍得率已基本达到平台水平。10倍和12倍得率之间的差异不显著，但10倍与12倍的溶媒量对于生产操作差异非常显著，结合生产节能考虑选取6、8、10倍的溶媒倍数为较优的单因素水平。

表2.1溶媒比各因素水平的总皂苷得率比较

注：总皂苷得率＝药液总皂苷含量/提取药液所用药材总质量×1((％(以下均同)

2、提取时间对总皂苷得率的影响

结果见表2.2，提取时间在2.5h总皂苷得率达高峰，3h明显下降。选取1.5h、2h、2.5h为较到理想的提取时间水平。

表2.2各提取时间水平的总皂苷得率对比

(三)结论

建议选取6、8、10倍的溶媒比和1.5h、2h、2.5h的提取时间作为优选单因素水平，准备进一步正交实验研究。

实验三：正交实验优化提取工艺方案

以总皂苷、总多糖和干膏得率为考察指标，优选溶媒比、提取时间和提取次数。

(一)材料与方法

1、正交设计方案

参考上述单因素水平选择结果，进一步进行三因素三水平正交实验设计。

称取黄芪37.8g，三七3.8g，红参1.25g共27份(即N＝3表示同一个实验平行做3次实验，结果取平均值)。正交实验主要以总皂苷、总多糖得率和干膏得率作为考察指标，优化提取工艺。

(二)结果

1、紫外分光光度法检测不同因素和水平提取对总皂苷、总多糖和干膏得率的影响

结果提示，在实验5和实验3三水平条件下，提取液各考察指标的得率均较高，综合评分分别排第一、二位，见表3.1。

表3.1正交设计各水平设计及检测结果

注：1).综合评分＝总皂苷得率×0.25+总多糖得率×0.25+干膏得率×0.5

2).得率为每克原生药材中总皂苷或总多糖总量或干膏重量(mg/g)

3).结果中的数据均为三次平行实验数据的均值

对上述实验结果进行方差分析，结果提示仅提取次数差异具有统计学意义，见表3.2。

表3.2正交设计实验结果的方差分析结果

因素	偏差平方和	自由度	F比值	F临界值	显著性
						溶媒比/倍	13.828	2	1.558	19.000
提取时间/h	16.736	2	1.885	19.000
						提取次数/次	415.268	2	46.775	19.000	*
综合评分	8.878	2	1.000	19.000
						误差	8.88	2

2、高效液相法检测不同因素和水平提取对总皂苷、总多糖和干膏得率的影响

(1)高效液相法检测总皂苷得率

结果提示，实验5条件下提取药液总皂苷得率最高，见表3.3。

表3.3高效液相法检测皂苷得率

(2)高效液相法检测总黄酮得率

检测结果提示，实验9和实验7条件提取药液总黄酮得率排第一、二位，见表3.4。

表3.4高效液相法检测黄酮得率

(3)结合紫外分光光度法和高效液相法结果分析正交设计各水平实验结果

结果提示，实验5和实验9条件下提取药液综合评分排第一、二位，见表3.5。

表3.5正交设计各水平设计及检测结果

注：1).综合评分＝总皂苷得率×0.2+总黄酮得率×0.2+总多糖得率×0.3+干膏得率×0.3

2).总皂苷和总黄酮得率均为高效液相法检测结果，总多糖为前述紫外分光光度法检测结果.

对上述各因素水平的综合评分进行方差，结果提示提取次数差异具有统计学意义，见表3.6。

表3.6正交设计实验结果的方差分析结果

因素	偏差平方和	自由度	F比	F临界值	显著性
						溶媒比/倍	62.681	2	2.492	19.000
提取时间/h	25.152	2	1.000	19.000
						提取次数	585.166	2	23.265	19.000	*
误差	25.15	2

(三)结论

据上述检测结果，提取次数有显著性差异，余两个因素无统计学意义。正交实验结果提示，较佳提取工艺为，每次用6倍水提取1.5h，提取3次，合并药液。

实验四：提取次数进一步优化实验

以总皂苷、总多糖和干膏得率为考察指标，对提取次数进一步优化。

(一)材料与方法

1、供试品：

采用实验三建议的提取方法，提取药材(黄芪37.8g，三七3.8g，红参1.25g共3份)，6倍水提取，每次1.5h，提取3次，合并提取液。每次提取所得药液定容到100mL。

2、检测方法

总皂苷、总多糖采用紫外分光光度法检测和干膏得率测定方法均同上述。平行三次实验(N＝3)，结果取平均值。

(二)结果

结果提示，第三次提取药液综合评分仅占三次综合评分的15.54％，而前两次提取综合评分占较大比例，可保证较高综合评分，如从节能省时的角度综合考虑，可考虑将提取次数确定为两次，见表4.1。

表4.1各次提取药材有效成分得率比较

(三)结论

结合能耗和生产成本等因素综合考虑，提取优化方案为：三药合煎水提，6倍水，每次1.5h，2次提取，合并药液。

实验五三药混合水提方案药效学验证实验

一、实验目的

采用急、慢性胃溃疡动物模型对三药药液提取方案进行药效实验，通过不同药效模型下药效结果来验证三药合提方案的有效性和可行性。

二、实验方法

1.样品制备

1.1模拟胃乃安组：

按前述的三药提取方案提取药液，浓缩药液浸膏至每1mL含0.857g药材；取药液25mL按原处方比例加入超微珍珠层粉2.525g和人工牛黄粉0.325g，混匀制成药液(每1mL含0.971g药材)，备动物实验用。

1.2.胃乃安胶囊组：

取市售胃乃安胶囊25粒，拆开胶囊，并加蒸馏水25mL，混匀备用(即得每1mL含0.971g药材)，备动物实验用。

2.药效模型

2.1盐酸乙醇急性胃溃疡动物模型

2.2.冰醋酸涂抹慢性胃溃疡动物模型及给药方案

采用醋酸涂抹法致慢性胃溃疡模型，即用直径为0.6cm沾冰醋酸的滤纸贴在胃小弯浆膜处30s两次，3-4天形成胃溃疡。

造模后，第二天按动物体重给药1mL/100g，模型组给等量自来水，7d后处死取动物胃观测溃疡大小。胃溃疡面积大小测量方法：游标卡尺量取溃疡的长直径和短直径，并按椭圆面积的计算公式获取溃疡面积，评价药效结果。

椭圆面积公式S＝圆周率×a×b，a为长直径半轴，b为短直径半轴。

三、实验结果

1.盐酸乙醇急性胃溃疡实验结果

表5.1模拟胃乃安组与胃乃安胶囊组溃疡指数比较

注：**P＜0.01，与模型组比较。

模拟胃乃安组和胃乃安胶囊组均有抗胃溃疡的效果(P＜0.01)；且模拟胃乃安组治疗效果有比胃乃安胶囊组好的趋势，未达到统计学意义(P＝0.178)。这表明按照正交设计优化工艺下模拟胃乃安有良好的抗胃溃疡效果，该新工艺是可行有效的。

2.慢性胃溃疡实验结果

2.1.造模后给药七天体重变化：

三组动物的体重曲线无明显差异，保持较好的一致趋势，提示造模后7d从动物体重指标上观察未见显著差别。

2.2.胃溃疡面积测量结果

结果提示，模拟胃乃安组具有较好的抗慢性胃溃疡效果，药效优于胃乃安胶囊组。说明经过三药合提方案提取药材后，可以较好保证抗胃溃疡的药效，结果见表5.2。

表5.2各组的胃溃疡面积测量结果(单位：mm²)

注：当胃溃疡愈合或形成疤痕，记为0.

表5.3各组溃疡面积统计结果

注：**P＜0.01，而胃乃安胶囊组P＝0.052与模型组比。

四、实验结论

从上述两种动物模型实验结果，按三药合提方案提取药液后模拟胃乃安具有较好的治疗急性和慢性胃溃疡效果，且均优于原胃乃安胶囊药效。

实验六：水提醇沉工艺考察

以总皂苷、总黄酮和干膏得率，抗溃疡药效作用为指标，考察水提醇沉工艺的效果。

(一)材料与方法：

1、样品制备：

胃乃安三药药液：按胃乃安原处方配比称取黄芪(3024g)、三七(304g)、红参(100g)，加6倍水提取1.5h，水煮提取两次，合并滤液，再水浴浓缩至4000mL(即0.857g药材/mL)

2、醇沉液配配制：

(1)不同醇沉液浓度设置：50％、60％、70％乙醇浓度

(2)不同醇沉液浓度配制：

分别量取500mL胃乃安三药药液，加入相应的无水乙醇体积量，配制相应的醇沉液浓度后，再静置过夜(12h左右)；再倒出上清液用滤纸过滤收集滤液作为醇沉上清部位，将沉淀部位用纯水充分溶解混匀；将上清部位和沉淀部位进行80℃水浴挥发乙醇并各自浓缩至体积为500mL(即上清部位、沉淀部位生药量均为0.857g药材/mL)

按V＝500×P/(100％-P)配制各样品体积

注：V：加入无水乙醇的体积量；P：所选取的醇沉浓度(即50％、60％、70％三个浓度)

表6.1各醇沉液浓度配制后的溶液总体积量

(N＝3平行三份样品进行实验)

3、干膏得率检测

精密吸取各供试品溶液20mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却0.5小时后，迅速精密称定干膏重量。

4、化学成分含量检测

紫外分光光度法检测总皂苷、总多糖和总黄酮，高效液相色谱法检测黄芪甲苷、Rg1-Re-R1、毛蕊异黄酮和芒柄花素。

5、药效模型：盐酸乙醇大鼠胃溃疡模型

(二)结果

1、各浓度醇沉干膏得率

结果提示，三个醇沉液浓度的上清部位干膏重量均明显高于沉淀部位；其中，50％、70％上清的干膏得率较接近且低于60％上清，70％醇沉上清总固体去除率较高能较好地去除药液固体物质；醇沉沉淀部位的大部分固体物质均被去除，其总固体去除率均高于70％。结果如表6.2。

表6.2醇沉上清和沉淀部位的干膏得率和纯化率比较

注：干膏得率＝干膏重量/相应原液药材重量×100％；相应原液药材重量：500mL原液为428.5g药材提取所得；总固体去除率＝(原液干膏重量-上清或沉淀部位干膏重量)/原液干膏重量×100％

2、含量测定结果

2.1.黄酮类物质测定结果

2.1.1紫外分光光度法测定样品总黄酮结果

实验结果见表6.3，50％醇沉浓度上清的总黄酮转移率最高，而70％最低。

表6.3总黄酮样品紫外测定表

2.1.2.高效液相样品测定黄酮类物质结果

实验结果见表6.4，结果提示，70％醇浓度转移率明显高于其他两个醇浓度，而50％、60％两者间转移率较为接近。

表6.4样品黄酮高效液相测定表

2.2总皂苷含量测定

2.2.1紫外测定样品结果

取醇沉样品，精密移取1mL至50mL容量瓶中，用纯水定容至50mL，精密量取供试溶液0.3或0.4mL，照标准曲线的制备项计算得黄芪甲苷量。

实验结果表明不同浓度醇沉后总皂苷之间差异不大，见表6.5。

表6.5总皂苷样品紫外测定表

2.2.2高效液相样品皂苷测定结果

实验结果(表6.6)提示，不同醇浓度的皂苷转移率较为接近，无明显差异。其中，转移率大于100％与人参皂苷类物质在碱性条件下发生皂化反应而相互转化有一定的关系，因为测定几种皂苷的含量而不是总皂苷的含量。醇沉并没有造成所测皂苷的含量损失，只是相互之间发生了转化，醇沉后三七皂苷R1含量降低了，人参皂苷Re人和参皂苷Rb1含量提高了，而人参皂苷Rg1的变化不大。

表6.6样品皂苷高效液相测定表

2.3.总多糖含量测定

实验测定结果(见表6.7)，不同醇浓度的上清多糖转移率较为接近；上清液中的多糖远高于沉淀中的多糖，说明沉淀下来的物质以蛋白质、大分子多糖、纤维和粉尘颗粒等物质为主。

表6.7多糖紫外检测结果

3、盐酸乙醇急性胃溃疡药效结果

两批结果提示，三个醇沉浓度上清部位和原液组均具有显著治疗急性胃溃疡的效果(P＜0.001)，而沉淀部位未见有治疗急性胃溃疡效果。各醇沉浓度上清部位治疗急性胃溃疡药效结果之间差异无统计学意义。

表6.8醇沉药效实验各组溃疡指数比较

注：**P＜0.001与模型组比较。

表6.9重复药效实验各组溃疡指数比较

注：**P＜0.001与模型组比较。

(三)结论

结合耗能和经济成本因素考虑，建议采用50％醇沉工艺。

70％醇浓度总固体去除率稍高于50％，但化学成分转移率方面较为接近，差异不大；上述药效结果可知，50％、60％、70％醇沉上清部位均具有治疗急性胃溃疡效果，但各醇沉浓度上清部位药效之间差异无统计学意义。从节省乙醇用量和乙醇回收等角度考虑，选用50％醇沉浓度更优。

实验七微滤陶瓷膜孔径筛选和超滤透析的实验考察

(一)材料与方法

1、膜分离微滤、超滤样品制备：

称取黄芪4536g、三七456g、红参150g，加6倍水(30860mL)提取1.5h，提取2次。合并滤液48800mL，量取其中1000mL药液备检测用。分别取12L原液进料过膜(50、200、500nm)收集8L透析液(作为微滤透析液备测)(约3L残留液)。取200nm膜透析液12L过10Kda超滤膜收集透析液3L(因透析液到后期几乎流不出，故停止透析)，即10KDa透析液。

2.主要成分含量测定

参照《中国药典》2005年版，黄芪、三七、红参含量测定项下内容，分别以黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、Rb1和Re为标准品测量皂苷含量，以毛蕊异黄酮、芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素苷为标准品测量黄酮含量。以黄芪甲苷为标准品测量总皂苷含量，以葡萄糖为标准品测量总多糖含量，以芦丁为标准品测量总黄酮含量。

转移率＝供试品成分含量/对应原料液成分含量×100％

3.干膏重量测定(参照药典方法)

(三)结果

1、膜通量考察

50nm和200nm两种孔径陶瓷膜的膜通量保持较为平稳，50nm平均膜通量稍高于200nm；而500nm孔径的膜通量下降比较明显。

2.化学成分转移率

2.1总皂苷测定

2.1.1紫外分光光度法检测样品皂苷结果

实验结果表明膜过滤对总皂苷的含量有一定的影响。其中过200nm后的10KDa超滤膜对总皂苷的截留量最大，200nm膜透析液保持较高的转移率。

2.1.2.高效液相测定样品皂苷结果

实验结果表明膜过滤对所测定的皂苷的含量有一定的影响，过200nm后的10KDa超滤膜对皂苷截留效果最大，200nm膜透析液保持较高的转移率，高于另外两种膜。三类人参皂苷中影响最大的是人参皂苷Rb1。

2.1.3高效液相测定样品黄芪甲苷结果

用于测定的黄芪甲苷的原液量不足，所以用原液过400目后的溶液进行比较，膜过滤对黄芪甲苷有较大的影响，但从实验结果来看，过200nm后的10KDa超滤膜对皂苷截留效果最大，另外三种膜对黄芪甲苷的转移率没有太大的差别，均保持较高的水平。

2.2、总黄酮测定结果

2.2.1.紫外分光光度法测定样品总黄酮结果

膜分离对三药合提药液的总黄酮含量有较大的影响，其中过200nm后的10KDa超滤膜对皂苷截留效果最大，200nm转移率高于50nm、500nm的水平。

2.2.2.高效液相测定样品黄酮结果

过400目后转移率下降到80.61％，降低得比较大，可能是上述结果是通过紫外检测并且反映的是总黄酮含量有关；测定200nm膜转移率并未如与上述结果一致，可能与该结果反映的是几种单体的含量有关。

2.3总多糖测定

实验结果表明三种孔径的膜对多糖的截留较为接近。

3.三种孔径陶瓷膜的紫外检测化学成分转移率及总固体去除率

表7.150nm、200nm、500nm膜紫外检测化学成分收率及干膏得率、膜通量比较

200nm陶瓷膜的黄酮转移率高于其他两种膜，200nm的多糖、皂苷转移率保持较高水平；膜通量也保持较高水平；200nm总固体去除率高于其他两种膜。选取200nm陶瓷膜作为膜分离的膜较为合适。

将经过200nm陶瓷膜预处理过的药液直接进10KDa有机膜超滤处理，结果发现干膏纯化率明显降低，但有效成分收率、膜通量也明显减低，不利于药效和工艺生产效率的保证，并且增加超滤技术之后，整个工艺条件变得更为复杂，所消耗能源、时间将大大增加，综合考虑后，考虑仅选用200nm陶瓷膜进行药液分离纯化处理，暂不选取超滤工艺。

(三)结论

选取200nm孔径的陶瓷膜作为膜分离工艺的膜。

实验八、陶瓷膜压力条件的实验考察

为优化陶瓷膜工艺条件，在前期实验选好陶瓷膜孔径后，对过膜压力条件进行比较考察，以干膏转移率、有效成分转移率和膜通量衰减为指标进行筛选。

(一)材料与方法：

1.材料：同前述

2.进料药液制备：按正交优化方法提取药液，合并两次滤液过400目筛网后直接进料，即药液质量体积为0.0857g/mL。

2.2.操作压力条件设置：以进料压力和透析液出膜压力的均值为考察指标，设置四个操作压力水平，分别为：1.0bar(进压1.4bar，出压0.6bar，频率31.3HZ，流量48)、1.5bar(进压2.0bar，出压1.0bar，频率39HZ，流量60)、2.0bar(进压2.5bar，出压1.5bar，频率43HZ，流量60)、2.5bar(进压3.0bar，出压2.0bar，频率46HZ，流量60)。

2.3.操作步骤：四等份三药药液分别以12L进料过200nm陶瓷膜，调试好压力后分每0.5L收集8L透析液，计算瞬时膜通量，并检测样品的有效成分和干膏含量。

2.4干膏、膜通量和化学成分测定方法，具体如前述。

3、实验结果：

3.1.膜通量及洗膜时间比较：

结果发现，2.0bar膜通量整体水平较高，1.0bar、2.0bar的膜通量衰减较慢，比较稳定；1.5bar、2.5bar的膜通量衰减较快；1.0bar压力下，因膜通量过低导致膜堵塞厉害，透析液无法流出。2.0bar洗膜时间为75min，1.5bar和2.5bar洗膜分别为88min、100min，1.0bar用时最长达250min.。综上考虑，2.0bar为较理想的陶瓷膜压力操作条件。

3.2.化学成分收率和总固体去除率测定

四种压力条件下，2.0bar总固体去除率及综合评分最高，化学成分收率较为接近。

表8.1四种操作压力透析液化学成分收率、总固体去除率和综合评分

注：化学成分收率＝各压力下化学成分浓度/原液相应浓度×100％；

综合评分＝(皂苷收率+多糖收率+黄酮收率)×20+总固体去除率×40

4、实验结论：

综上，比较四种操作压力下的透析液的综合评分、洗膜通量及洗膜时间结果可知，2.0bar明显高于其他三种操作压力，表明该操作压力可以保证较高有效成分收率、较好去除杂质效果。

综上，建议采用200nm的陶瓷膜在2.0bar压力下进行过膜处理，作为三药药液分离纯化的工艺方案。

实验九、膜分离温度考察

(一)实验目的：

有研究报道，进料药液不同温度对于膜分离的膜通量和透析液化学成分含量有一定的影响，为此，进行进料药液不同温度(25°和50°)过陶瓷膜透析三药药液，考察膜通量和化学成分含量筛选较优的膜分离温度。

(二)实验方法

1.三药药液制备：

按正交优化方法提取药液，合并两次滤液过400目筛网后直接进料，即药液质量体积为0.0857g/mL。

2.膜设备操作条件设置：

利用恒温回流装置将药液保持25°、50°的恒温备进料，将设置200nm陶瓷膜分离设备为：2.0bar(进压2.5bar，出压1.5bar，频率40.15HZ，流量60)，进行透析收集透析液。

3.操作步骤：

两等份三药药液分别以17L进料过200nm陶瓷膜，调试好压力后分每0.5L收集，共收集12.5L透析液，计算瞬时膜通量，并检测样品的有效成分和干膏含量。

4干膏、膜通量和化学成分测定方法，具体如前述。

(三)实验结果

1.不同温度的膜通量实验显示，50°的膜通量明显高于25°，并且两个温度的膜通量较为稳定。

2.干膏重量和总固体去除率测量

实验结果显示，两种温度下总固体去除率较为接近，25度膜分离后其略高于50度。

表9.1不同温度干膏重量及总固体去除率结果

3.化成成分含量检测

3.1紫外检测多糖结果

两种温度下，多糖收率差别不大，25度稍高于50度。

表9.2不同温度多糖收率结果

3.2紫外检测皂苷结果

由结果可知，两种温度下，皂苷收率差别不大，50度的皂苷收率稍高于25度。

表9.3紫外检测皂苷收率结果

(四)、结论

两种温度下，总固体去除率、皂苷和多糖收率均较为接近，故在生产实际过程中可以选取25-50度的操作温度。50度膜通量高于25度可使工作效率提高；原药液提取后需降温后方可进料过膜，需耗费一定时间；另外，膜分离过程中因循环会产热，使温度上升，需采用冷却设备。综合考虑，选取50度作为膜分离工艺的温度较为合适。

膜分离工艺研究的结论

在上述实验结果的基础上，将三药水煎合提的药液过400目筛后直接过200nm的陶瓷膜在2.0bar压力(即进膜压力2.5bar，出膜压力1.5bar)、料液温度(50度)下进行透析，收集透析液，最后浓缩、冷冻干燥制成干膏备制剂学工艺考察，实现药液的提取分离纯化的工艺。

实验十珍珠层粉超微粉碎工艺参数的筛选与优化

以样品的出粉率、粒度为指标，优化气流粉碎工艺参数。

(一)材料与方法

1.材料：粉碎设备TC-10型流化床超音速气流粉碎分级机，南京天目科技有限公司

2.粉碎工艺参数的筛选与优化

2.1正交试验设计根据影响珍珠层粉粉碎的因素，以进料粒度(A)、进气压力(B)、分级频率(C)、粉碎时间(D)作为考察因素，设计3个水平，以出粉率和粒度为考察指标，设计L₉(3⁴)正交试验，筛选珍珠层粉超微粉碎的最佳工艺条件。

表10.1珍珠层粉超微粉的制备工艺因素水平表

2.2根据正交试验制备样品。

2.3测定样品的出粉率及粒度。

2.4对筛选结果进行中试实验

(三)结果

1.筛选结果

经实验，两个频率所得微粉的粒径相近，但25HZ的收率高于40HZ的收率；粉碎时间35min和45min的收得率和粉体的粉碎粒径差别不大。结果如表10.2，10.3。

表10.2珍珠层粉气流粉碎不同频率筛选试验结果(n＝3)

表10.3珍珠层粉气流粉碎不同时间筛选试验结果(n＝3)

2.中试研究

采用气流粉碎机，粉碎频率为25Hz，粉碎时间35min，投料3000g，进行中试样品粉碎。

结果与筛选实验结果较一致，说明该研究结果较为可信。

(三)结论

确定分级频率为25HZ，粉碎时间为35min。

实验十一超微珍珠层粉药效学研究

(一)材料与方法

1.动物分组

分成四个组：模型组、胃乃安胶囊组、原珍珠层粉组、超微珍珠层粉组；每组各10只动物，雌雄各半，体重180±20g。

2给药样品制备

2.1三药合煎水提液组：

按处方比例称取黄芪378g红参12.5g三七38g，共428.5g，加6BV的水，煎煮1.5h得滤液；再加6BV水，1.5h煎煮，得滤液，两次滤液混合再浓缩，定容至500mL，即得三药合煎水提液，生药量为0.857g/mL。

2.2原珍珠层粉组：

三药合煎水提液25mL按原方比例加入珍珠层粉(原方使用)2.525g和人工牛黄粉0.325g，混匀制成药液备用(生药量为0.971g/mL)。

2.3超微珍珠层粉组：

三药合煎水提液25mL按原方比例加入超微粉萃珍珠层粉2.525g和人工牛黄粉0.325g，混匀制成药液(生药量为0.971g/mL)

2.4胃乃安胶囊组：

取胃乃安胶囊(国药Z44020043，广州中一药业提供)25粒，拆开胶囊，并加蒸馏水25mL，混匀备用(即得每1mL含0.971g药材)。

3动物实验方法：盐酸乙醇急性胃溃疡动物模型

(二)实验结果

分析结果可知，胃乃安胶囊组、原珍珠层粉组、超微珍珠层粉组均有抗胃溃疡的效果(p＜0.01)；超微珍珠层粉组抗胃溃疡效果优于胃乃安胶囊组(p＜0.05)；超微珍珠层粉组抗胃溃疡效果有比原珍珠层粉组好的趋势，结果见表11.1。

表11.1急性溃疡模型溃疡指数

注：**p＜0.01，与模型组比较；△p＜0.05，与超微珍珠层粉组比较。

(三)结论

综合前期的原珍珠层粉与超微珍珠层粉药效比较结果(超微珍珠层粉组抗胃溃疡效果优于原珍珠层粉组(p＜0.05)，超微珍珠层粉抗溃疡效果较优。建议采用超微粉粹技术处理珍珠层粉。

实验十二分离纯化工艺平行筛选比较研究

对前期工艺进行平行放大考察，比较干膏得率、化学成分转移率和药效学的结果，筛选膜分离工艺、50％醇沉工艺，并优选其中一种工艺作为中试研究的分离纯化工艺。

一、材料与方法

1.药材与试剂：

黄芪(090902，广州中一药业提供)30.24kg，三七(081101，广州中一药业提供)3.04kg，红参(080501，广州中一药业提供)1.0kg。

胃乃安胶囊(100303，国药Z44020043，广州中一药业有限公司)；消炎痛(090901，广东华南药业集团有限公司)；氢氧化钠(广州试剂有限公司)；浓盐酸、95％乙醇、冰乙酸为AR分析醇。

2.仪器：

多功能提取罐(武汉制药机械厂，型号1M3)；GQ105高速管式离心机(上海离心机械研究所)；陶瓷膜小试设备(CeraMem-0100，厦门世达膜科技有限公司)；离心机eppendorfcentrifuge5810R；恒温水浴箱(DK-S26型)；比重仪等。

3.提取工艺与供试样品制备

3.1三药水煎合提药液制备

上述三药混合后填装至多能提取罐中，加6倍体积水(约194.88L)，提取1.5h，倒出药液至沉降罐中，重复操作提取一次，合并两次滤液，过400目滤布，收得滤液共319.9kg，比重仪测得其比重为1.005，计算体积得318.3L，所得药液生药量为0.102g/mL。称取192.2kg药液，用52℃、0.1mbar下浓缩至14.8kg，比重仪测得比重为1.15，体积即为12.87L，生药量为1.6g/mL备醇沉工艺实验用。

3.2.膜分离工艺药液的制备

量取上述药液进行高速管式离心机1.6×10⁴高速离心，收得滤液126.4kg，其比重等同于原药液。量取滤液72.5kg进料，调膜设备至41.5HZ、进压2.0bar、出压1.0bar、LPM：65、温度50℃，收集透析液62.41kg，残留液为9.08kg，其平均膜通量为3.6mL/s。量取透析液60kg，浓缩至7.11L，即含生药量为0.857g/mL，测定主要化学成分含量、干膏含量，计算转移率。

膜分离工艺药效实验供试品(简称膜分离供试品)制备：量取25mL该浓缩液按原处方比例加入超微珍珠层粉2.525g、人工牛黄0.325g，核计含总生药量为0.971g/mL，充分混匀，备药效实验用。

3.350％醇沉工艺药液的制备

量取1070mL上述三药合提药液，加入0.93L纯水稀释至0.857g/mL，缓慢加入2222mL95％乙醇，混匀后放置过夜，离心取上清液，80°水浴挥发浓缩定容至2000mL，即含生药量0.857g/mL，测定主要化学成分含量、干膏含量，计算转移率。

醇沉工艺药效实验供试品(简称醇沉供试品)制备：量取25mL该浓缩液按原处方比例加入超微珍珠层粉2.525g、人工牛黄0.325g，核计含总生药量为0.971g/mL，充分混匀，备药效实验用。

3.4胃乃安胶囊组

取胃乃安胶囊20粒，加入20mL纯水充分摇匀溶解后备用。即含生药量为0.971g/mL。

3.5消炎痛组

取消炎痛25mg，加入10mL纯水充分摇匀溶解后备用。即剂量为2.5mg/mL3.60.6％冰乙酸

取0.3mL冰乙酸，加纯水定容至50mL，备腹腔注射造模用。

3.71.2％NaOH

取1.2gNaOH，加纯水定容至100mL，备灌胃用。

3.8盐酸乙醇样品

量取1.7mL浓盐酸，60mL无水乙醇，加纯水定容至100mL

4.干膏得率、化学含量测定

以黄芪甲苷为标准品香草醛-高氯酸法检测总皂苷含量，葡萄糖为标准品硫酸苯酚法检测总多糖含量，芦丁为标准品检测总黄酮含量。

干膏得率＝供试品干膏质量/供试品生药量×100％，

干膏转移率＝供试品干膏质量/三药合提药液干膏质量×100％

(注：供试品与三药合提药液的体积、对应生药量是相同)

5.药效实验

5.1盐酸乙醇急性胃溃疡实验

采用盐酸乙醇致大鼠急性胃溃疡模型考察不同溶媒提取物的药效。动物正常饲养一周后，体重在180±20g，按体重随机分成组。动物禁食不禁水36h，按1mL/100g给药，空白组给自来水灌胃；1.5h后，平行给盐酸乙醇1.5mL/只；1h后处死动物，打开腹腔，结扎贲门与幽门后将胃取出，由幽门向胃内注入1％福尔马林溶液10mL，并将胃浸入同一浓度福尔马林中10分钟，固定内外层。沿胃大弯剪开胃，用自来水洗出胃内容物，将胃平铺于白纸上，展平，观察并测量溃疡损伤长度计算溃疡指数，以1mm计1分，不足1mm计0.5分，特别粗的加倍计算，每只动物的溃疡指数总和作为动物的溃疡指数。并计算溃疡抑制率来评价药效，溃疡抑制率＝(模型组溃疡指数-给药组溃疡指数)/模型组溃疡指数×100％

5.2NaOH致大鼠胃损伤实验

动物正常饲养一周后，体重在180±20g，按体重随机分成5个组别。动物禁食不禁水24h，按1mL/100g给药，空白组给自来水灌胃；1.5h后，平行给1.2％NaOH1.5mL/只；1h后处死动物，打开腹腔，结扎贲门与幽门后将胃取出，由幽门向胃内注入1％福尔马林溶液10mL，并将胃浸入同一浓度福尔马林中10分钟，固定内外层。沿胃大弯剪开胃，用自来水洗出胃内容物，将胃平铺于白纸上，展平，观察并测量溃疡损伤长度计算损伤指数，以1mm计1分，不足1mm计0.5分，特别粗的加倍计算，每只动物的溃疡指数总和作为动物的损伤指数。并计算损伤抑制率来评价药效。损伤抑制率＝(模型组损伤指数-给药组损伤指数)/模型组损伤指数×100％

5.3冰乙酸致大鼠慢性胃溃疡实验

采用醋酸涂抹法致慢性胃溃疡模型，即用直径为0.6cm沾冰醋酸的滤纸贴在胃小弯浆膜处30s两次，3-4天形成胃溃疡。

造模后，第二天按动物体重给药1mL/100g，模型组给等量自来水，7d后处死取动物胃观测溃疡大小。胃溃疡面积大小测量方法：游标卡尺量取溃疡的长直径和短直径，并(按长、短径之和除以2)计算公式，结果来衡量溃疡面积，并计算溃疡抑制率来评价药效结果。溃疡抑制率＝(模型组溃疡面积-给药组溃疡面积)/模型组溃疡面积×100％

二、结果：

1.干膏得率测定

二种工艺的干膏测定及干膏得率换算的具体结果，如表12.1。

表12.1干膏含量及干膏得率结果

注：二种工艺平行3份进行实验，每份分别记为1、2、3。

50％醇沉工艺上清液的干膏得率较高，转移率也高于膜分离组，结果如表12.2。

表12.2二种工艺干膏得率及干膏转移率结果

注：干膏得率取表1中3次相应检测结果的均值

2.化学成分测定

2.1皂苷转移率结果

醇沉、膜分离工艺的皂苷转移率两种工艺间差别不大。

表12.3紫外检测皂苷含量及转移率结果

注：吸光度值A为三次测量的平均值。

2.2紫外检测多糖结果

由结果可知，膜分离、醇沉工艺的多糖转移率无较大差别。

表12.4紫外检测多糖结果

注：吸光度值A为三次测量的平均值。

2.3黄酮测定结果

由结果可知，醇沉工艺黄酮转移率最高，其次是膜分离工艺。

表12.5紫外检测黄酮含量结果

注：吸光度值A为三次测量的平均值

紫外分光光度法检查各样品结果提示，50％醇沉与膜分离工艺的化学成分转移率整体比较接近，结果如表12.6。

表12.6各工艺皂苷、多糖和黄酮转移率结果

3.药效学结果

3.1盐酸乙醇急性胃溃疡实验

实验结果显示，各组均有良好的抗胃溃疡效果(与模型组比较，差异有统计学意义)，其他各组间差异无统计学意义；膜分离工艺、50％醇沉工艺的供试品模拟胃乃安胶囊的溃疡指数低于胃乃安胶囊组。

表12.7盐酸乙醇致急性溃疡指数结果比较

注：SPSS13.0统计，**P＜0.01与模型组比较。

3.2NaOH致大鼠胃粘膜损伤实验

实验结果显示，各组均有良好的抗胃溃疡效果(与模型组比较，差异有统计学意义)，其他各组间差异无统计学意义；膜分离工艺、50％醇沉工艺的供试品模拟胃乃安胶囊的胃损伤指数低于胃乃安胶囊组，膜分离、醇沉工艺的胃损伤抑制率较为接近。

表12.8各组胃粘膜损伤指数结果比较

注：SPSS13.0统计，方差检验结果方差齐；**P＜0.01与模型组比较。

3.3冰乙酸致大鼠慢性胃溃疡实验

实验结果提示，原提取药液组具有良好的抗胃溃疡效果，且溃疡愈合率较高；膜分离组也具有一定的抗胃溃疡效果，其溃疡愈合率高于50％醇沉工艺组；膜分离溃疡抑制率高于50％醇沉工艺，结果如表12.9，12.10。

表12.9冰乙酸致大鼠慢性胃溃疡实验结果比较

注：与模型组比较，**P＜0.01，*P＜0.05

表12.10冰乙酸致大鼠慢性胃溃疡实验溃疡抑制率

4.上述实验结果汇总表

结果提示，50％醇沉工艺、膜分离工艺的化学成分转移率较为接近，而膜分离的干膏得率稍低于50％醇沉工艺。

表12.11二个工艺干膏得率、干膏及化学成分转移率

综上药效结果，扭体实验结果提示醇沉工艺优于膜分离，慢性胃溃疡实验结果提示膜分离抗慢性溃疡效果优于醇沉工艺组。

表12.12二个工艺镇痛率、溃疡抑制率和溃疡愈合率结果(单位：％)

注：与模型组比较，**P＜0.01，*P＜0.05

5.二个工艺的经济节能考察比较

表12.13三个工艺的生产优劣比较

三、结论

由上述结果，二个工艺中，50％醇沉、膜分离，其干膏得率较低，化学成分转移率较高，并保持良好的药效；若从生产实际的角度考虑，50％醇沉工艺较简单、耗能较少并可以回收乙醇，选取该工艺可收到节能省时的效果。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (4)

1.一种治疗消化性溃疡的中成药的制备方法，其特征在于，所述中成药主要包括以下重量份的原料药：黄芪700-1400份，红参粉20-40份，人工牛黄10-20份，三七70-140份，珍珠层粉100-200份，通过以下步骤制备而成：

(1)制备提取液

取黄芪、三七和红参，加入6-10倍体积水，提取2-3次，每次1.5-2.5h，滤过，合并滤液，得提取液；

(2)分离浓缩

将步骤(1)所得提取液进行分离后，减压浓缩至相对密度为1.20-1.25的浸膏；

(3)超微粉碎珍珠层粉

取珍珠层粉，用气流粉碎机超微粉碎，所述气流粉碎机的分级频率为25HZ，粉碎时间为35min；

(4)制备干膏

将步骤(3)的珍珠层粉与步骤(2)的浸膏混匀，真空干燥，打粉，过筛，得到干膏粉；

(5)制成制剂

加入人工牛黄、辅料进行制粒，制成片剂或胶囊剂。

2.根据权利要求1所述的治疗消化性溃疡的中成药的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述分离为采用陶瓷膜进行透析分离，所述陶瓷膜的孔径为200nm，操作压力1.5-2.5bar、料液温度25-50℃。

3.根据权利要求1所述的治疗消化性溃疡的中成药的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述分离为采用乙醇进行分离：将步骤(1)所得提取液加入乙醇，使溶液中的乙醇浓度为50％，混匀后放置12小时，离心取上清液，80℃水浴挥发乙醇。

4.权利要求1-3任一项所述的制备方法制备得到的治疗消化性溃疡的中成药。