CN103509858B - 一种人细胞色素酶p450基因多态性检测试剂盒 - Google Patents

一种人细胞色素酶p450基因多态性检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种人细胞色素酶P450基因多态性检测试剂盒，该试剂盒采用从外周血细胞中提取基因组DNA的方法，用CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异引物进行PCR扩增后，将带生物素标记的扩增产物与固定在醛基片上的相应基因型检测探针进行特异杂交反应，洗去未结合产物后加入标记液，反应一段时间再清洗后对芯片进行扫描，得到样品DNA扩增产物与每个相应基因位点的野生型和突变型探针杂交形成的杂交图像，经过软件分析图像，判断待检品的基因型。上述试剂盒提供的利用基因芯片法检测基因多样性，操作过程简单，包含的信息量大，具有良好的市场前景。

Description

一种人细胞色素酶P450基因多态性检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测人细胞色素酶P450基因多态性的试剂盒。
背景技术
人细胞色素P450酶（CYP）是定位在内质网膜（微粒体）上的一类结合有亚铁血红素的蛋白。CYP酶系是由超基因家族编码的一组结构与功能相关的同工酶，该酶系能够催化许多不同类型的氧化反应，包括羟基化、环氧化、杂环原子氧化、杂环原子脱烷基化、氧化基团迁移、脱酯化和脱氢反应。因此该酶家族是人体中重要的一类单氧化酶,在体内发挥着许多功能,特别在药物代谢过程中具有重要作用,是人体内主要的药物代谢酶。
大量的研究结果表明，细胞色素P450酶系的基因多态性在个体对药物的代谢及处置、对环境毒物的敏感性、以及与代谢相关的疾病发生等方面都有着重要的影响。细胞色素P450酶系也已经成为了临床上指导个体化给药，研究毒物暴露引起的疾病，以及遗传代谢相关疾病的重要生物标记物。
CYP有多个亚家族，其中CYP2C9是第二亚家族中的一个重要成员，占肝微粒体P450蛋白总量的20%。CYP2C9能羟化代谢许多不同性质的药物，主要是酸性底物。据统计，目前约有16%的的临床药物由CYP2C9负责代谢。CYP2C9的基因频率在不同人种和不同民族之间差异很大。在中国人口中,除了野生型CYP2C9*1，已发现的最主要的基因型是CYP2C9*3，其基因频率约为3.3%。CYP2C19也是CYP450酶第二亚家族中的重要成员，是人体重要的药物代谢酶，在肝脏中有很多表达。CYP2C19具有很多基因多态（SNP)位点，最常见的是CYP2C19*2和CYP2C19*3。
因此，分析CYP2C9和CYP2C9基因多态性可推断代谢表型，从而预测解毒能力和患病风险，在临床研究上意义重大。可见，寻求一种能够快速检测识别CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因的方法在实现上述目的时尤为重要。
发明内容
为实现上述目的，本发明提供了一种用于快速检测人细胞色素酶P450（CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3）基因多态性的试剂盒。
本发明的另一个目的是上述试剂盒在检测CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因多态性上的应用。
为了实现以上目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供一种基因芯片，该基因芯片上连接有CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异检测探针。
上述基因芯片上连接的CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异检测探针是：
CYP2C9*3野生型  ACTCATCACGCAGCTCATTTTTTTTTTTTT；
CYP2C9*3突变型  ACTCATCATGCAGCTCATTTTTTTTTTTTT；
CYP2C19*2野生型  GATGGCCAGCGTGGACAATTTTTTTTTTTT；
CYP2C19*2突变型  GATGGCCATCGTGGACAATTTTTTTTTTTT；
CYP2C19*3野生型  CAACCCCCACGTGTGCCGTTTTTTTTTTT；
CYP2C19*3突变型  ACCCCCACCACGTGTGCCGTTTTTTTTTTT。
上述基因芯片上还连接有质控探针，该质控探针是：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT。
本发明还提供包含上述基因芯片的一种用于人细胞色素酶P450基因多态性的检测试剂盒。
本发明的试剂盒还包括以下部分：PCR反应液，酶混合物（Emix），野生型质控品，突变型质控品，阴性对照，杂交液，标记液，洗涤母液A，洗涤母液B，洗涤母液C，显色液A，显色液B。
上述试剂盒各部分的组分与配比如下：
PCR反应液：KCl，Tris-HCl缓冲液，MgCl2，NTP,CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异引物对的混合液
酶混合物（Emix）：Taq酶
野生型质控品：含CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3野生型基因的重组DNA片段
突变型质控品：含CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3突变型基因的重组DNA片段
阴性对照：TE缓冲液
杂交液：8×SSC，0.2%SDS，甲酰胺
标记液：辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素复合物
洗涤母液A：10%SDS
洗涤母液B：20×SSC
洗涤母液C：磷酸盐吐温缓冲液
显色液A：鲁米诺溶液
显色液B：过氧化氢水溶液
上述PCR反应液中的CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异引物对是：
CYP2C9*3上游引物  ATCGCATTCATGCGTCTTCA；
CYP2C9*3下游引物  ATCCCCATGGCAAACTCTTG；
CYP2C19*2上游引物  GACTGAATATAAACTTGTGG；
CYP2C19*2下游引物  CTGTATCAAAGAATGGTCCT；
CYP2C19*3上游引物  GACTGTGTTTCTCCCTTCT；
CYP2C19*3下游引物  TGGCAAATACACAAAGAAAG。
本发明试剂盒检测人细胞色素酶P450基因多态性，包括如下步骤：
1、核酸提取
DNA的浓度应达到10-60ng/ul，A260/A280比值在1.5～2.0之间，如果DNA必须稀释，使用PH7.6的TE缓冲液作为稀释液。
2、PCR反应
在分别包含有野生型质控品、突变型质控品，PCR反应液和酶混合物的体系中进行目的基因的扩增，扩增后进行杂交反应。
3、芯片杂交
（1）预处理芯片：首先在洗涤母液A漂洗30s，再在纯化水中漂洗30s。甩去芯片表面的纯化水，于室温晾干备用；
（2）配置杂交液：将PCR产物置95℃中热变性5min后，立即置于冰水浴中5min后，取变性的扩增产物4μl，与4μl杂交液充分混匀。
（3）杂交反应：立即吸取全部杂交混合液加入芯片反应区中，使其分布均匀，然后将芯片平置于湿盒或杂交盒中，于45℃水浴中杂交1小时。
（4）配置洗液：在杂交反应过程中，按下述配方配制洗涤液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，将洗涤液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别盛于三个250ml烧杯中。
洗涤液Ⅰ：4ml洗涤母液A、10ml洗涤母液B，加蒸馏水稀释至200ml；
洗涤液Ⅱ：2ml洗涤母液B加蒸馏水稀释至200ml；
洗涤液Ⅲ：1ml洗涤母液B加蒸馏水稀释至200ml；
洗涤液Ⅳ：5ml洗涤母液C加超纯水稀释至100ml；
（5）清洗芯片：杂交反应结束后，将杂交反应区中的杂交混合液吸出；芯片依次置于洗涤液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗30s，其间不断搅动。取出芯片，甩去残留在芯片上的液体，室温避光晾干。
（6）标记显色：在芯片的每个杂交区加入标记液10μl，37℃温育25min，取出后用洗涤液Ⅳ清洗3次，每次20s，轻轻甩去芯片上的洗液，再用超纯水清洗3次后置于室温晾干后在芯片的每个杂交区加入混合液25μl。
（7）芯片扫描。
本发明选取检测相应基因的SNP位点作为增靶区域，设计特异性引物及各型特异型探针，采用PCR体外扩增法结合DNA杂交技术，可同时用于检测细胞色素酶中的CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因多态性，此方法检测基因多样性，操作相对简单，包含的信息量大。本发明的试剂盒可用于有相应基因主导的药物代谢能力的辅助诊断，检测结果可供临床参考，具有良好的市场前景和应用价值。
附图说明
图1是基因芯片扫描图；其中白色实框内是CYP2C19*3基因检测结果，白色虚框内是CYP2C9*3基因检测结果。
图2是基因芯片扫描图；其中白色实框内是CYP2C19*3基因检测结果，白色虚框内是CYP2C9*3基因检测结果。
图3是是基因芯片扫描图；其中白色实框内是CYP2C19*3基因检测结果，白色虚框内是CYP2C9*3基因检测结果。
具体实施方式
以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的前提下，对本发明所作的修饰或者替换，均属于本发明的范畴。
实施例1 人细胞色素酶P450基因多态性基因芯片法检测试剂盒的建立
1、引物
将合成好的引物结合PCR缓冲液和酶系，以企业工作参考品中最低检出量参考品为样本，在适用的仪器上，严格按照试剂盒说明书进行操作。检测结果表明：最低检出量参考品检测能区分相应的基因型。
2、探针
取每条探针1OD分别溶于探针buffer，配制成终浓度分别为100μmol/L，-20±5℃保存。将保存浓度的探针用探针buffer稀释成工作浓度，分别点制在芯片的相应位置上。将制备好的芯片结合质检合格的细胞色素酶P450(CYP)基因多态性基因芯片法检测试剂盒的其它组分，以企业工作参考品中最低检出量参考品为样本，在适用的仪器上，严格按照试剂盒说明书进行操作。检测结果表明：最低检出量参考品检测能区分相应的基因型。
3、分型阴性质控品的制备
为无DNA的TE缓冲溶液，按每管20μl分装，制备成分型阴性质控品，-20±5℃保存。
在确定无任何外源性污染的条件下，用人细胞色素酶P450(CYP450)基因多态性基因芯片法检测试剂盒，以分型阴性质控品为样本，在适用的仪器上，严格按照试剂盒说明书操作。检测结果显示为阴性，无DNA扩增。
4、野生型质控品的制备
为人工构建的质粒提取的DNA样本，样本经测序证实为CYP2C9*3野生型、CYP2C19*2野生型、CYP2C19*3野生型，用TE缓冲液稀释约至104copies/ul,按每管20μl分装，-20±5℃保存。
在确定无任何外源性污染的条件下，用人细胞色素酶P450(CYP)基因多态性基因芯片法检测试剂盒，以野生型质控品为样本，在适用的仪器上，严格按照试剂盒说明书操作。检测结果显示为CYP2C9*3野生型、CYP2C19*2野生型、CYP2C19*3野生型。
5、突变型质控品的制备
为人工构建的质粒提取的DNA样本，样本经测序证实为CYP2C9*3突变型、CYP2C19*2突变型、CYP2C19*3突变型，用TE缓冲液稀释约至104copies/ul,按每管20μl分装，-20±5℃保存。
在确定无任何外源性污染的条件下，用人细胞色素酶P450(CYP450)基因多态性基因芯片法检测试剂盒，以突变型质控品为样本，在适用的仪器上，严格按照试剂盒说明书操作。检测结果显示为CYP2C9*3突变型、CYP2C19*2突变型、CYP2C19*3突变型。
6、PCR反应液
将配制好的PCR反应液（购自天根生物）结合质检合格的人细胞色素酶P450(CYP)基因多态性基因芯片法检测试剂盒的其它组分，以企业工作参考品中最低检出量参考品为样本，在适用的仪器上，严格按照试剂盒说明书进行操作。检测结果表明：最低检出量参考品检测能区分相应的基因型。
7、酶系的配制
配制好的酶系（购自天根生物）结合PCR反应液及质检合格的人细胞色素酶P450(CYP)基因多态性基因芯片法检测试剂盒的其它组分，以企业工作参考品中最低检出量参考品为样本，在适用的仪器上，严格按照试剂盒说明书进行操作。检测结果表明：最低检出量参考品检测能区分相应的基因型。
8、杂交试剂的配制
杂交试剂由杂交液、洗涤母液A、洗涤母液B组成。
杂交液：成分为8×SSC、0.2%SDS和4%甲酰胺。
洗涤母液A：10%SDS。
洗涤母液B：20×SSC。
将杂交液、洗涤母液A、洗涤母液B配制成工作液后，结合质检合格的人细胞色素酶P450(CYP)基因多态性基因芯片法检测试剂盒的其它组分，以企业工作参考品中最低检出量参考品为样本，在适用的仪器上，严格按照试剂盒说明书进行操作。检测结果表明：最低检出量参考品检测能区分相应的基因型。
9、基因芯片制备
按设计好的分隔膜贴在醛基片上，然后按规定的阵列点上探针，经过固定后装入芯片盒中完成基因芯片的制备。
将制备好的基因芯片结合质检合格的人细胞色素酶P450(CYP)基因多态性基因芯片法检测试剂盒的其它组分，以企业工作参考品中最低检出量参考品为样本，在适用的仪器上，严格按照试剂盒说明书进行操作。检测结果表明：最低检出量参考品检测能区分相应的基因型。
10、试剂盒重复性试验
分别用野生型企业参考品和突变型企业参考品重复检测5次，用信号值计算变异系数(CV)均不大于20%。
11、试剂盒保存后敏感性试验
试剂盒到达效期后一个月，用企业灵敏度参考品检测，灵敏度符合产品标准要求。
实施例2 人细胞色素酶P450基因多态性基因芯片法检测试剂盒的组装
本发明的试剂盒由以下部分组成：基因芯片，PCR反应液，酶混合物（Emix），野生型质控品，突变型质控品，阴性对照，杂交液，标记液，洗涤母液A，洗涤母液B，洗涤母液C，显色液A，显色液B。
上述试剂盒各部分的组分与配比如下：
基因芯片：连接有CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异检测探针和质控探针的醛基芯片。
PCR反应液：KCl，Tris-HCl缓冲液，MgCl2，NTP,CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异引物对的混合液
酶混合物（Emix）：Taq酶
野生型质控品：含CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3野生型基因的重组DNA片段
突变型质控品：含CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3突变型基因的重组DNA片段
阴性对照：TE缓冲液
杂交液：8×SSC，0.2%SDS，甲酰胺
标记液：辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素复合物
洗涤母液A：10%SDS
洗涤母液B：20×SSC
洗涤母液C：磷酸盐吐温缓冲液
显色液A：鲁米诺溶液
显色液B：过氧化氢水溶液
该试剂盒，上述组分的量为：PCR反应液：450μl；酶混合物Taq酶6μl野生型质控品：20μl；突变型质控品：20μl；阴性对照：20μl；杂交液：60μl；标记液：120μl；洗涤母液A：5ml；洗涤母液B：6.5ml；洗涤母液C：6.5ml；PBST：5ml；显色液A：120μl；显色液B：120μl。
实施例3 人细胞色素酶P450基因多态性基因芯片法检测试剂盒的检测程序
3.1 测定步骤
3.1.1 核酸提取
1．按照血液基因组DNA提取试剂盒使用说明书提取和纯化DNA，进行样本基因组DNA提取时，尤其是大样本量提取时，应采用必要的标记方法，避免试剂漏加。
2．DNA的浓度应达到10-60ng/μl，A260/A280比值在1.5～2.0之间，如果DNA必须稀释，使用PH7.6的TE缓冲液作为稀释液，样品DNA提取后－20℃冰箱保存或直接进入下一步。
3．-20℃冷藏的DNA样品使用前置于室温待融后混匀，且反复冻融不超过5次。
3.1.2 PCR反应
1.取出PCR反应液放置室温待冻融后，漩涡振荡混匀片刻，离心，放置在冰上；
2.取0.2ml的PCR反应管，每管加入19.5ul PCR反应液，做好标记、编号；
3.加入5μl核酸模板，0.5ul酶混合物（Emix），盖紧离心管盖，混匀；
4.质控品使用：取PCR反应液分别加入5μl的野生型质控品、突变型质控品，0.5ul酶混合物（Emix），做好标记后盖紧离心管盖，混匀；
5.阴性对照：取PCR反应液加入5μl的TE缓冲液，再加0.5ul酶混合物（Emix），做好标记后盖紧离心管盖，混匀；
6.离心：6000rpm，离心片刻。
7.扩增：放入基因扩增仪，按以下条件进行PCR反应。
预变性：95℃，15min
延伸：72℃，5min
保持：4℃,----
扩增完成后立即进行杂交反应或者4℃暂时保存。
3.1.3 芯片杂交
1.将试剂盒中的杂交液、洗涤母液A、洗涤母液B置于45℃水浴中，至其中析出的晶体或沉淀全部溶解，摇匀。
2.取4ml洗涤母液A加纯水至200ml作为芯片预洗液，盛于250ml烧杯中，取另一250ml烧杯盛装纯化水；取出基因芯片，先在芯片预洗液中漂洗30s后，再在纯化水中漂洗30s。甩去芯片表面的纯化水，于室温晾干备用。
3.将PCR产物置95℃中热变性5min后，立即置于冰水浴中5min，以形成单链便于杂交反应(注意：热变性过程中将反应管封好，以免液体蒸发)。
4.取变性的扩增产物4μl，与4μl杂交液充分混匀（共8μl），配制杂交混合液；立即吸取全部杂交混合液加入芯片反应区中，使其分布均匀（以杂交混合液覆盖杂交反应区且不溢出为准）。
5.将芯片平置于湿盒或杂交盒中，于45℃水浴中杂交1小时。
注意：杂交反应时应防止冷凝水滴落在芯片上；移动杂交盒时应充分注意，以防各反应区的反应液交叉污染。
6.在杂交反应过程中，按下述配方配制洗涤液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，将洗涤液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别盛于三个250ml烧杯中。
洗涤液Ⅰ：4ml洗涤母液A、10ml洗涤母液B，加蒸馏水稀释至200ml；
洗涤液Ⅱ：2ml洗涤母液B加蒸馏水稀释至200ml；
洗涤液Ⅲ：1ml洗涤母液B加蒸馏水稀释至200ml；
洗涤液Ⅳ：5ml洗涤母液C加超纯水稀释至100ml；
7.杂交反应结束后，将杂交反应区中的杂交混合液吸出；芯片依次置于洗涤液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗30s，其间不断搅动。取出芯片，甩去残留在芯片上的液体，室温避光晾干。注意：洗涤过程应连续进行，避免在洗涤过程中芯片干燥。
8.在芯片的每个杂交区加入标记液10μl，37℃温育25min，取出后用洗涤液Ⅳ清洗3次，每次20s，轻轻甩去芯片上的洗液，再用超纯水清洗3次后置于室温晾干；
9.取130μl显色液A和130μl显色液B混匀后，在芯片的每个杂交区加入混合液25μl。
10.芯片扫描
3.2 结果分析
芯片扫描结束后进行数据化处理并导出、保存扫描数据文件，应用结果分析判读软件对检测结果进行自动判读分析。
3.2.1 质控结果有效性
1）引物互补序列探针信号值≥10；
2）基片质控信号值≥10；
3）内阴性对照信号值<10；
4）野生型质控品检测结果为CYP2C9*3野生型(CYP2C9*1/*1)、CYP2C19野生型(CYP2C19*1/*1)；
5）野生型质控品检测结果为CYP2C9*3突变型(CYP2C9*3/*3)、CYP2C19*2突变型(CYP2C19*2/*2)、CYP2C19*3突变型（CYP2C19*3/*3）；
6）阴性对照检测结果为阴性：所有检测的野生型探针和突变型探针的信号值<100；
7）野生型、突变型检测探针的信号值均<100时，无目的基因扩增，需重新检测。
3.2.2 CYP2C9*3基因型判定：
1）基因芯片上CYP2C9*3野生型、突变型检测探针的均值之比≥1.0，实验结果判定为野生型基因(CYP2C9*1/*1)；
2）基因芯片上CYP2C9*3野生型、突变型检测探针的均值之比为0.4-1.0，实验结果判定为杂合型基因(CYP2C9*1/*3)；
3）基因芯片上CYP2C9*3野生型、突变型检测探针的均值之比≤0.4，实验结果判定为突变型基因(CYP2C9*3/*3)。
3.2.3 CYP 2C19*2基因型判定：
1）基因芯片上CYP 2C19*2野生型、突变型检测探针的均值之比≥1.0，实验结果判定为野生型基因(CYP2C19*1/*1)；
2）基因芯片上CYP 2C19*2野生型、突变型检测探针的均值之比为0.2-1.0，实验结果判定为杂合型基因(CYP2C19*1/*2)；
3）基因芯片上CYP 2C19*2野生型、突变型检测探针的均值之比≤0.2，实验结果判定为突变型基因(CYP2C19*2/*2)；
3.2.4 CYP 2C19*3基因型判定：
1）基因芯片上CYP 2C19*3野生型、突变型检测探针的均值之比≥1.0，实验结果判定为野生型基因（CYP2C19*1/*1）；
2）基因芯片上CYP 2C19*3野生型、突变型检测探针的均值之比为0.2-1.0，实验结果判定为杂合型基因（CYP2C19*1/*3）；
3）基因芯片上CYP 2C19*3野生型、突变型检测探针的均值之比≤0.2，实验结果判定为突变型基因（CYP2C19*3/*3）。
实施例3 人细胞色素酶P450基因多态性基因芯片法检测试剂盒的应用
用本发明制备的人细胞色素酶P450基因多态性基因芯片法检测试剂盒对送检血清样品进行检测，图1-3为80个血清样本的检测结果，检测结果发现本批样品中存在一定的检出率。其中CYP2C19*3野生型样品为28份，CYP2C19*3杂合型样品为26份，CYP2C19*3突变型样品为26份；且在本批样本中CYP2C9*3全部都是野生型。随机抽取每个基因型内的20个样本进行测序，结果证实本发明方法检测正确率为100%。可见，本发明制备的人细胞色素酶P450基因多态性基因芯片法检测试剂盒可用于对血清样品的检测，这将为基因多态性的快速检测提供有力的数据参考。

Claims (5)

1.一种基因芯片，其特征在于，该芯片上连接有CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异检测探针；
其中，所述的CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异检测探针分别是：
CYP2C9*3野生型   ACTCATCACGCAGCTCATTTTTTTTTTTTT；
CYP2C9*3突变型   ACTCATCATGCAGCTCATTTTTTTTTTTTT；
CYP2C19*2野生型  GATGGCCAGCGTGGACAATTTTTTTTTTTT；
CYP2C19*2突变型  GATGGCCATCGTGGACAATTTTTTTTTTTT；
CYP2C19*3野生型  CAACCCCCACGTGTGCCGTTTTTTTTTTT；
CYP2C19*3突变型  ACCCCCACCACGTGTGCCGTTTTTTTTTTT。
2.根据权利要求1所述的基因芯片，其特征在于，该芯片上还连接有质控探针。
3.根据权利要求2所述的基因芯片，其特征在于，芯片上的质控探针是：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT。
4.一种人细胞色素酶P450基因多态性基因芯片法检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的基因芯片和PCR反应液；所述PCR反应液是KCl，Tris-HCl缓冲液，MgCl2，NTP，CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异引物对的混合液；所述CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因特异引物对是：
CYP2C9*3上游引物   ATCGCATTCATGCGTCTTCA；
CYP2C9*3下游引物   ATCCCCATGGCAAACTCTTG；
CYP2C19*2上游引物  GACTGAATATAAACTTGTGG；
CYP2C19*2下游引物  CTGTATCAAAGAATGGTCCT；
CYP2C19*3上游引物  GACTGTGTTTCTCCCTTCT；
CYP2C19*3下游引物  TGGCAAATACACAAAGAAAG。
5.根据权利要求4所述的基因芯片法检测试剂盒，其特征在于，其还包括酶混合物，野生型质控品，突变型质控品，阴性对照，杂交液，标记液，洗涤母液A，洗涤母液B，洗涤母液C，显色液A，显色液B的其中一种或多种；
其中，所述酶混合物是Taq酶；所述野生型质控品含CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3野生型基因的重组DNA片段；所述突变型质控品含CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3突变型基因的重组DNA片段；所述阴性对照是TE缓冲液；所述杂交液是8×SSC，0.2％SDS，甲酰胺的混合液；所述标记液是辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素复合物；所述洗涤母液A是10％SDS；所述洗涤母液B是20×SSC；所述洗涤母液C是磷酸盐吐温缓冲液；所述显色液A是鲁米诺溶液；所述显色液B是过氧化氢水溶液。
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