CN103494853A - 一种亳菊花的工业提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种亳菊花的工业提取方法，具体步骤为：是以乙醇加热回流提取亳菊花，回收乙醇，浓缩，将亳菊花提取液吸附到大孔树脂上、洗脱、收集洗脱液、浓缩、干燥，得到纯化的亳菊花总黄酮。本发明的优点：操作简便、快捷的方法；大孔树脂具有吸附量大，解吸率大的特点；既价廉又无毒；总黄酮含量可达55％以上，且重现性好，树脂可重复使用。

Description

一种亳菊花的工业提取方法

技术领域

本发明涉及亳菊花技术领域，具体地说，是一种亳菊花的工业提取方法。

背景技术

亳菊主产于淮北平原北纬33.5～33.8度，东经115.7度的安徽亳州、涡阳等地，海拔10～50米，年平均温度14度、年降水量793亳米；无霜期210天，属暖温带气候，秋冬气候干燥。亳菊植株半直立，株高80厘米左右。叶色淡绿。头状花序小，一般在4厘米左右，舌状花10～12层，内外瓣不等长，初开时花色微黄，后渐渐变白，管状花少，花序内有鳞片，气味清香，在药菊中品质最佳，亳菊花总黄酮含量高，然而以往提取方法消耗大得率低，为提倡低耗高效的提取方法，经多次实验发明一种高效提取亳菊花总黄酮的方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种亳菊花的工业提取方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种亳菊花的工业提取方法，其具体步骤为：是以乙醇加热回流提取亳菊花，回收乙醇，浓缩，将亳菊花提取液吸附到大孔树脂上、洗脱、收集洗脱液、浓缩、干燥，得到纯化的亳菊花总黄酮；具体的工艺参数为：

将亳菊花以质量分数为40％的乙醇提取；将亳菊花以乙醇提取为3次；提取亳菊花质量与乙醇溶液的体积比为6～12倍；每次提取的时间为1h；

所述的大孔树脂选用SP70；

亳菊花提取液的上样量(亳菊花质量：树脂体积)为1.5∶1；

洗脱流速为洗脱液流速为2BV／h；

洗脱剂为有机醇，优选为乙醇；洗脱剂的洗脱浓度为45％；洗脱剂的洗脱体积为5倍柱体积；

最终得到的纯化的亳菊花总黄酮含量大于55％。

与现有技术相比，本发明的积极效果是：

(1)本发明的亳菊花总黄酮树脂纯化的方法是一种操作简便、快捷的方法；

(2)本发明选用的大孔树脂具有吸附量大，解吸率大的特点；

(3)本发明的方法以乙醇为溶剂，既价廉又无毒；

(4)本发明的方法纯化亳菊花提取物，总黄酮含量可达55％以上，且重现性好，树脂可重复使用；

具体实施方式

以下提供本发明一种亳菊花的工业提取方法的具体实施方式。

应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

亳菊花总黄酮含量测定方法

①仪器与试药

北京普析通用仪器有限公司TU-1901型紫外可见分光光度仪，联想数字处理中心。木犀草苷对照品(供含量测定用)：购于中国药品生物制品检定所，批号为111720-200501，使用前置五氧化二磷减压干燥器中干燥24小时，使之恒重。甲醇为分析纯(北京化工厂)，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

②检测条件

检测波长：348nm，空白对照：甲醇。

③对照品溶液的制备

精密称取木犀草苷对照品9.4mg，置25ml量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

④工作曲线制作：

精确吸取0.1，0.4，0.8，1.2，1.6ml置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；以甲醇作为空白，于348nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，木犀草苷对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程为：Y=43.098X-0.0117，R₂=0.99990，以浓度(mg／ml)为横坐标，吸光度Y值为纵坐标，进行线性回归，其回归方程为：Y=3590.7X-188.06，Cr=0.9999。

结果表明，木犀草苷浓度在3.76μg／ml～60.16μg／ml范围内呈良好线性关系。

⑤供试品溶液的制备

取亳菊花提取物适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密移取1.0ml至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

⑥含量测定

取样品溶液置348nm处测定吸光度，记录吸光度值，代入工作曲线计算总黄酮含量。

实施例1

(1)亳菊花提取：亳菊花经40％乙醇分别以12倍、8倍、6倍体积加热回流三次，每次1h，合并三次滤液，减压浓缩至药材质量∶体积为1∶2，过滤，备用；

(2)上柱：将亳菊花提取液上柱，控制流出液流速为0.5BV／h，上样量为药材重量∶树脂体积为1.5∶1，至提取液全部进入树脂床；

(3)洗脱：以5BV体积的20％乙醇冲洗树脂床，控制流出液流速为2BV／h，以除去杂质；然后以5BV体积的75％乙醇，控制流速为2BV／h，收集洗脱液，减压浓缩至一定体积，进行喷雾干燥，即得纯化产物。

实施例2

采用本实验提供的方法，选用不同条件进行亳菊花总黄酮提取实验，

1.乙醇用量对提取结果的影响：

分别称取亳菊花药材20g，9份，按表1的因素水平分别进行正交试验，每次提取1小时，提取后滤液合并，减压浓缩至干，真空干燥至恒重，精密称取干膏适量，以甲醇溶于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；移取1.0ml滤液至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述方法测定总黄酮的含量，并对结果进行方差分析，结果见表1，2。

表1菊花提取正交三因素三水平方差分析

序号	A	B	C	D	有效成分含量
						1	1	1	1	1	0.754
2	1	2	2	2	4.201
						3	1	3	3	3	5.262
4	2	1	2	3	4.360
						5	2	2	3	1	5.790
6	2	3	1	2	3.325
						7	3	1	3	2	5.007
8	3	2	1	3	2.551
						9	3	3	2	1	5.014
K1	10.218	10.122	6.631	11.558
						K2	13.475	12.542	13.575	12.534
K3	12.572	13.601	16.060	12.174
						R	3.258	3.480	9.429	0.976

表2正交试验方差分析表

方差来源	离差平方和	自由度	方差	F值	显著性
						A	1.886	2	0.943	11.622	*
B	2.121	2	1.061	13.072	*
						C	15.922	2	7.961	98.127	**
误差	0.162	2	0.081

结果：方差分析结果表明，以提取总黄酮量为指标，因素C有极显著差异，因素A，B有显著性差异，考虑到工业生产乙醇的成本问题，选择低度乙醇，提取3次。由于亳菊花吸取溶媒体积膨胀，首次用醇量加大，因此选择加醇量分别为12倍、8倍、6倍。

结论：选择40％乙醇提取3次，加醇量分别为12倍、8倍、6倍。

2、提取时间对结果的影响

正交实验中，未涉及提取时间，因此作一个以时间为单因素的实验：称取亳菊花10g，共4份，每份分别加入12倍，8倍，6倍40％的乙醇，加热回流三次，每次分别为0min(煮沸后浸泡)、30min，60min，90min，重复2次，结果见表3，4。

表3不同提取时间对菊花总黄酮含量的影响

表4单因素方差分析表

差变来源	平方和SS	自由度f	平均平方和MS	F值	显著性
						组问	0.838	3	0.279	21.557	*
组内	0.0518	4	0.013
						总计	0.890	7

结果：由表3，4可以看出，提取时间对总黄酮含量有显著影响，但60min和90min无明显差别，以节约能耗为主，选择回流60min。

结论：选择每次提取1小时。

3选取树脂种类对结果的影响

①上柱液制备称取亳菊花药材500g，按上述优选提取工艺提取，12倍、8倍、6倍40％乙醇回流3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至总黄酮浓度为4.16mg·ml-1，每5min振摇一次，2h后分别取各树脂吸附后的溶液O.5mI于10ml量瓶中，于349nm处测定吸光度，计算各树脂对毫菊花总黄酮的吸附率。

②静态解析将静态吸附的树脂过滤抽干，加30ml 40％乙醇解吸，每5min振摇一次，2h后分别取各树脂吸附后的溶液0.5mI于10ml量瓶中，按上述方法测定总黄酮浓度，计算各树脂对亳菊花总黄酮的解吸率，见表5。

表55种大孔树脂对菊花总黄酮的吸附与解吸附率

树脂种类	吸附率(％)	解吸率(％)
			HP20	98.15	47.13
SP825	96.13	48.88
			SP850	97.72	60.75
SP700	94.67	58.53
			SP70	96.74	65.51

结果：5种树脂的吸附率都较大(大于90％)，SP850，SP700，SP70的解吸率都将近60％，其中SP70的解析率最大

结论：选取SP70树脂最好。

4、药液浓度对结果的影响：

取亳菊花水溶液(总黄酮浓度为20.8mg·m1^-1)10ml分别稀释0，1.5，2，4，10倍，加入20m1(1cm×13cm)SP70树脂上，以2BV／h的流速进行吸附后，以75％乙醇洗脱，收集洗脱液至100ml，于349nm处测定吸光度，计算总黄酮的含量。结果见表6。

表6菊花药液浓度考察结果

溶液体积(ml)∶生药量(g)	1∶1	1.5∶1	2∶1	4∶1	10∶1
						上柱后总黄酮量(mg)	190.80	194.29	195.35	193.69	172.08
解吸率(％)	91.73	93.41	93.92	93.12	82.73

结果：从表6可以看出，当药液稀释2倍时，解析率最高，稀释1.5倍与稀释2倍相当，且比不稀释要高约2％，综合考虑生产时效因素，选择稀释1.5倍，即溶液体积(m1)∶生药重(g)=1.5∶1。

结论：上柱液浓度为：溶液体积达到生药重的1.5倍。

综上所述按以上条件提取亳菊花得率高在55％以上，且节省能源，排出较少废物，稳定性好，符合大工业生产条件。

最后所应说明的是：以上实施例仅用于说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (4)

1.一种亳菊花的工业提取方法，其特征在于，具体步骤为：是以乙醇加热回流提取亳菊花，回收乙醇，浓缩，将亳菊花提取液吸附到大孔树脂上、洗脱、收集洗脱液、浓缩、干燥，得到纯化的亳菊花总黄酮。

2.如权利要求1所述的一种亳菊花的工业提取方法，其特征在于，将亳菊花以质量分数为40％的乙醇提取；将亳菊花以乙醇提取3次；提取亳菊花质量与乙醇溶液的体积比为6～12倍；每次提取的时间为1h。

3.如权利要求2所述的一种亳菊花的工业提取方法，其特征在于，所述的大孔树脂选用SP70大孔树脂。

4.如权利要求3所述的一种亳菊花的工业提取方法，其特征在于，亳菊花提取液的上样量，为亳菊花质量∶树脂体积为1.5∶1。洗脱流速为洗脱液流速为2BV／h。