CN103493680B - 一种银耳液体栽培种培养方法及栽培种专用培养基 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种银耳液体栽培种培养方法及栽培种专用培养基，其中，银耳液体栽培种培养方法包括以下步骤：1）分别用斜面培养基培养香灰菌和银耳菌；2）将香灰菌和银耳菌的菌种分别移入液体培养：3）将香灰菌的液体菌种按1-5%的体积百分比混合到银耳菌液体菌种中，并接种到栽培瓶中培养，制备得到栽培种；本方法解决了传统的栽培种制种困难的问题，同时液体菌种菌丝发菌更快，能够有效的实现和共生菌的配合生长，才用本方法制备的液体栽培种生产的银耳产量比采用传统栽培种提高20%以上。

Description

一种银耳液体栽培种培养方法及栽培种专用培养基

技术领域

本发明涉及一种真菌培殖方法，具体的说涉及一种银耳液体栽培种培养方法及栽培种专用培养基。

技术背景

银耳又名白木耳，雪耳，学名Tremella fuciformis Beyk，是我国传统的食药用真菌。银耳代料栽培后，生产周期短，从接种到收成仅仅35-40天，适合代料栽培的银耳菌种，有效期一般较短，大约15天，栽培种的质量直接影响到银耳的栽培质量。因此银耳制种技术是诸多食用菌中最难的一个品种。银耳属于中温型菌种，在自然气候条件下，栽培季节主要集中在春秋两季，菌种使用的高峰期比较集中。从80年代规定栽培种菌龄17-20天已经逐渐的驯化，提高，缩短到了15天，但是在银耳生产的高峰期，常常出现菌种供应不能满足菇农的要求，形成供求矛盾。在春末，供种时间拖延，菇农栽培的季节延误，常在原基分化子实体时由于气温过高，超过25℃么人出现接种穴吐黑水的现象，导致烂耳朵，而在秋末，因为供种不适时，气温降低以后，接种后穴口分泌白色粘液，导致原基分化不良，影响子实体的生长发育。此外常见的银耳栽培种的制备都是采用固体接种法，在制种过程中常常考经验进行，对栽培种的质量控制良莠不齐，如何快速制备高质量的银耳栽培种，并选择最适菌龄成为了当前亟待解决的问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种银耳液体栽培种培养方法及栽培种专用培养基，其中，银耳液体栽培种培养方法包括以下步骤：

1）分别用斜面培养基培养香灰菌和银耳菌；

2）将香灰菌和银耳菌的菌种分别移入液体培养培养：

3）将香灰菌的液体菌种按1-5%的体积百分比混合到银耳菌液体菌种中，并接种到栽培瓶中培养，制备得到栽培种。

步骤2）所述的香灰菌液体菌种接种后，培养的时间是4天；银耳菌液体接种后，培养时间是5-10天。

所述种接种后200rmp/min，25℃恒温培养，银耳液体菌种培养最适龄为6-7天。

银耳液体菌种培养最适龄为7天。

斜面培养基培养香灰菌的时间是4天。

步骤2）所述的香灰菌的液体菌种的比例是1-5%的。

香灰菌的液体菌种的添加比例是3%的。

所述专用培养基的碳氮比为27-31:1。

所述专用栽培种培养基的碳氮比为29:1。

所述栽培种专用培养基为栎木屑，麦麸，蔗糖，石膏粉，料水比，pH5.8-6.2。

本发明的有益技术效果是：本发明提供了一种银耳液体栽培种培养方法和及其专用培养基，本方法解决了传统的栽培种制种困难的问题，同时液体菌种菌丝发菌更快，能够有效的实现和共生菌的配合生长，才用本方法制备的液体栽培种生产的银耳产量比采用传统栽培种提高20%以上。

具体实施方式

实施例1银耳液体栽培种培养方法的考察

一、菌种材料：银科1号

液体培养基配方：土豆200g，葡萄糖20g，水1L，装液量100ml/250ml三角瓶；

栽培种培养基配方：木屑，麦麸，蔗糖，石膏粉，料水比，pH5.8-6.2；

培养袋培养料配方：棉籽壳，麸皮，石膏粉，硫酸镁，磷酸二氢钾；

二、栽培种的培养步骤

1.液体种子制备：将液体培养基制备后121℃灭菌30min。每瓶接入银耳菌4块（1×2cm），200rmp/min，25℃恒温培养5-10d，在银耳菌培养3天后，取新培养基接入一铲香灰菌，同等条件下培养3-5天；

2.栽培种的制备：按照栽培种配方将上述原辅料搅拌均匀后装入种子瓶，高压灭菌121℃，保持2个小时；

3.接种：选取5-8天银耳液体菌种，4天的香灰液体菌种，1-5%比例混合液体种，每个种子瓶接种10ml，每个种龄和比例接种10瓶；

4.培养：种子瓶接种后培养温度为23-25℃，培养14-20天以备栽培种使用；

5.培养袋制备：按照培养袋配方将上述原辅料搅拌均匀后转入12×55cm低压聚乙烯袋，常压灭菌达到100℃，保持24小时；

6.选取每个条件的栽培种接种至培养袋，每个条件各接种100袋，接种后，菌袋培养温度23-25℃，培养16天，撕去穴口胶布不扩穴，再经过6天培养后扩穴；

7.对照组采用现有的固体接种法，先培养一级种，然后扩繁获得栽培种，与液体培养的栽培种同时接种栽培袋，培养，以做比较。

银耳液体种子最适合菌龄在5-8天，香灰菌4天，比例1-3%，具体如表1所示。

表1银耳液体中不同种龄用于生产试验比较

从表1可见，银耳液体种菌龄6-7天，香灰菌的比例2-3%，银耳栽培种的活力强，分解吸收养分充足，由于采用液体菌种，在接种时，液体浸润，栽培种生产时间相对缩短，能充分提供营养物质为银耳菌所用。由于液体制备的栽培种活力强，香灰菌分解营养物质充足，生殖能力强，所以长了比对照略高。由于液体菌种的生长速度明显快于固体菌种，因为液体菌种的菌龄明显影响栽培种的质量，液体培养时间过短，菌种活力强，但是菌丝体含量低，菌种培养时间过长，菌种老化，明显影响着栽培种种银耳白毛团的生长。香灰菌丝两的多少，直接制约着银耳菌丝的生长，香灰菌丝少，分解营养物质缺乏，不利于银耳菌的生长，香灰菌丝过多，营养物质消耗多，造成菌之间的竞争，也干扰银耳菌的生长。

整体液体母种制备的栽培种，银耳的出耳的速度与对照相当，但是银耳的常量略高于对照，其中最适种龄6-7天，最适比例2-3%情况下，出耳速度快1天，产量比对照组15天菌龄的略增加10%，而5天和8天菌龄的菌种，出耳时间比对照组忙2-4天，常量别对照组略高。

银耳母种的最适的银耳菌种龄6-7天，比固体的15天培养缩短了8-9天，香灰菌液体菌比例2-3%比例，缩短了栽培种培养的时间2-3天，从而加快了菌种供应时间和增加菌种生产数量，有效地解决了银耳生产旺季菌种供求矛盾，满足大生产需求。采用本方法制备的在栽培种生产的银耳的产品比传统的方式提高22%以上。

本申请提供的液体银耳菌种的制备新工艺，能有效控制菌种的质量，能高效，快速获得大量的栽培种，具有如下优点：1）液体菌种操作方便，可控，快速，减少污染；2）加快出耳1-2天；3）银耳的品种高于原有产品。

实施例2不同碳氮比的栽培种培养基配方对银耳栽培的影响

在本实施例中，采用的木屑为栎木屑含碳量为50.2%含氮量为1.10%；麸皮的含碳量为44.7%含碳量为3.3%，蔗糖的含碳量为42.1%。

总碳量=木屑重量×0.502+麸皮重量×0.447+蔗糖×0.421

总氮量=木屑重量×0.011+麸皮重量×0.033

按碳氮比①27:1、②28:1、③29:1、④30:1、⑤31:1、⑥32:1等几组碳氮比制备银耳栽培种培养基。其中，供试配方木屑、麸皮、蔗糖和石膏粉的分别是：①组66:32:2:2，②组69:29:2:2，③组71:27:2:2，④组73:25:2:2，⑤组75:23:2:2，⑥组77:21:2:2。

按常规装瓶。含水量为60%。6组培养基各制作10瓶，培养基分两次装瓶，瓶内下层2/3培养基用蔗糖水拌匀，含水量达70%。瓶内上层培养基1/3用清水拌匀，含水量为55%；经高压灭菌后备用。

在无菌条件下，接人实施例1优选的供试菌株，置于23-25℃下培养，并观察记录菌丝生长情况。具体如表2所示。

表2不同碳氮比培养基上银耳栽培中的生长情况比较

从表1中提供的数据可知，配方的碳氮比为29:1及糖与蛋白质含量均最适合银耳菌种生长，菌丝体可以直接利用培养基中蔗糖、碳水化合物浸出物、肽、氨基酸等有机物质，用于构成银耳菌丝细胞蛋白质、核酸、酶类和能量。含氮量高于29:1后，由于含氮过剩，营养过量，使香灰菌丝超常增殖，造成银耳菌丝和香灰菌丝比例失调，反而影响了栽培后原基分化子实体。

Claims (1)

1.一种银耳液体栽培种培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）分别用斜面培养基培养香灰菌和银耳菌；

2）将香灰菌和银耳菌的菌种分别移入液体培养基培养；

3）将香灰菌的液体菌种按3%的体积百分比混合到银耳菌液体菌种中，并接种到栽培瓶中培养，制备得到栽培种；

步骤2）所述的香灰菌液体菌种接种后，培养的时间是4天；银耳菌液体接种后，银耳液体菌种培养最适龄为7天；菌种接种后200rmp/min，25℃恒温培养； 

步骤1）所述的斜面培养基培养香灰菌的时间是4天；

其中，步骤3）所述的栽培种专用培养基为栎木屑，麦麸，蔗糖，石膏粉，pH5.8-6.2；专用培养基的碳氮比为27-31:1。