CN103491943A - 包含榕树、莲属植物和三叶草浆液级分的组合物(老化) - Google Patents

包含榕树、莲属植物和三叶草浆液级分的组合物(老化) Download PDF

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Abstract

本发明涉及包含榕树、莲属植物和三叶草浆液级分的组合物。改善老化皮肤外观的方法可以包括如下步骤：将包含有效量的榕树浆液级分、莲属植物浆液级分和三叶草浆液级分的组合物应用于皮肤表面的老化征(sign)，其中组合物应用一段时间，足以改善老化皮肤外观。该方法可以包括鉴别面部皮肤表面的老化征的步骤。

Description

包含榕树、莲属植物和三叶草浆液级分的组合物(老化)
发明领域
本发明涉及包含榕树(banyan tree)、莲属植物(lotus)和三叶草(clover)浆液级分的组合物。本发明还涉及应用包含榕树、莲属植物和三叶草浆液级分的组合物改善老化的哺乳动物皮肤的外观的方法。
发明背景
皮肤的最外层表皮包含四层细胞连续区：角质层、颗粒层、棘层(spinouslayer)和基底层。表皮中的每个细胞层代表沿着一个过程的多种阶段，在所述的过程中，基底表皮角质形成细胞经历一种连续的循环：增殖、分化和凋亡，由基底层向上移动，最终产生角化细胞。这些角化细胞形成角化层，被称为角质层。
基底角质形成细胞位于表皮的较下部分。这些分裂活跃的细胞进行增殖循环以产生子细胞，该子细胞在身体上脱位向上至棘层和颗粒层并且进行分化至角化细胞的过程。在通过棘层和颗粒层时，细胞进行形态学改变，使得它们在结构上变平，因为它们失去了它们的细胞活力，进行改变角蛋白表达谱，并且转化为细胞残余物。平均而言，较年轻的表皮在约一个月内更新，遮盖较老的细胞并且用较新的细胞代替它们，但是该过程在较老的皮肤中可以增加至历经40天。
角质层的角化细胞通过蛋白质和脂质保持彼此相连，在机体和其外部环境之间产生保护屏障。这紧密调节的表皮通透性屏障用作对抗化学和生物学刺激的全身和选择性屏障。该屏障的重要功能包括衰减自由基的通透和预防有害照射的通透至更深层，所述的有害照射包括UV照射。角质层还用作通透性屏障并且用于预防机体水分丧失至外部环境。该屏障的功能障碍可以引起慢性皮肤病症、疾病，并且在极端的情况下，甚至可以威胁有机体的生存。
皮肤老化是受内在(年龄老化)和外在(环境)因素驱动的多因素过程，所述的因素包括紫外线(UV)暴露、环境毒素、污染物和吸烟。本领域众所周知的是角质层循环产生皮肤的新层的能力随着年龄降低，以使得角质层更新速率在老化的皮肤中显著降低，角化层逐渐变薄。这引起屏障作用能力的降低，以致于有害的刺激物更容易地通透至角质层，引起例如下面的真皮层的UV-损伤，胶原和弹性蛋白的降解，并且最终在外观上表现为皱纹和皮肤萎缩。角质层被内在和外在老化因素的和变薄增加了可见的细线和皱纹的可见外观。另外，屏障遭受自由基通透性的年龄相关的增加和细胞间基质的脂质量的减少，降低由更深层分散毒素的屏障能力。屏障对环境损伤的恢复能力也随年龄大大降低。
因此，皮肤的屏障功能对于皮肤再生和保护其自身免于老化外观至关重要。因此，希望提供可以改善皮肤屏障功能和改善老化皮肤外观的组合物和治疗方法。
发明概述
本发明涉及包含榕树、莲属植物和三叶草浆液级分及其混合物和/或组合的组合物。在一个实施方案中，本发明的组合物包含榕树、莲属植物和三叶草浆液级分。
改善老化皮肤外观的方法包括以下步骤：给老化皮肤区域应用包含有效量的榕树浆液级分、莲属植物浆液级分和三叶草浆液级分混合物的第一组合物，其中组合物应用一段时间，足以改善老化皮肤的外观。在某些实施方案中，该组合物还包含皮肤病学可接受的载体。
在某些实施方案中，老化皮肤区域是老化的面部皮肤。在特别的实施方案中，改善老化皮肤外观包括改善皱纹、细线、粗糙深线、裂缝、结节性红斑、大孔的外观；增厚角质形成组织(例如建立皮肤的表皮和/或真皮和/或亚真皮层)；增加真皮-表皮边界的卷积(也称为表皮突)；皮肤发光；防止皮肤弹性丧失，例如由于功能性皮肤弹性蛋白的丧失、损伤和/或失活引起的皮肤弹性丧失(引起例如弹性组织变性、下垂、皮肤由变性弹回的丧失的病症)；皮肤颜色的改变，例如眼下圈、大斑(blotchiness)(例如由于例如酒渣鼻引起的不均匀的红色)、灰黄、色素沉着过度引起的变色等；及其组合。
为了对背景中确认的问题做出响应，本发明可以采用其它形式。本发明的进一步的形式在下列详述中描述。
附图简述
相信本发明将从以下描述连同所附的附图更好地理解。涉及的附图不认为限制本发明的范围。
图1是显示在角质形成细胞分析中分别评价榕树、三叶草和莲属植物浆液级分以及作为混合物评价时的水通道蛋白-3(AQP3)和密蛋白-1的上调。
发明详述
除非另外说明，否则本文所用的所有百分数和比例是基于总组合物的重量计算的，并且所有的测量是在25℃进行。所有的数值范围包括更窄的范围；所述的上和下范围限制可互换以产生没有明确描述的其它范围。
本发明的组合物可以包含本文所述的必要组分以及任选的成分，或者基本上由它们组成，或者由它们组成。如本文所用的“基本上由……组成”指组合物或组分可以包括另外的成分，但是只有当另外的成分不显著改变所要求的组合物或方法的基本特性和新特性时才如此。
如针对组合物所用的术语“应用”指将本发明的组合物应用或涂敷在人皮肤表面例如表皮上。
如本文所用的术语“皮肤学可接受的”指所述组合物或组分适用于与人皮肤组织接触而没有过度毒性、不相容、不稳定、变态反应等。
如本文所用的术语“有效量”指的是足以显著诱导阳性外观和/或感觉益处，但足够低以避免严重的副作用(即在技术人员的正确判断范围内提供合理的益处与危险比例)的化合物或组合物的量。当如本文所用的术语“有效量”涉及榕树、莲属植物和三叶草混合物时，其指足以显著诱导阳性外观和/或感觉益处，但足够低以避免严重的副作用(即在技术人员的正确判断范围内提供合理的益处与危险比例)的组合的三种材料的量。
如本文所用的术语“炎性后色素沉着过度”指色素沉着响应于暂时性炎性事件而急性增加至长期增加。炎性后色素沉着过度在深色皮肤个体中是特别普遍的，但不限于此。一旦暂时性炎性事件消失，则炎性后色素沉着过度通常会减退。暂时性炎性事件的实例包括但不限于痤疮损伤、向内生毛、抓伤、虫咬、表面活性剂损伤和短期UV暴露。
如本文所用的“色素沉着过度斑”指其中色素沉着由于黑色素局部的和长期的或者全身性的超量产生而大于皮肤临近区域的色素沉着的限定皮肤区域。色素沉着过度斑的直径通常为约2mm至约10mm之间，但是更小或更大的斑是可能的。色素沉着过度斑可以包括老年斑、晒斑、日光斑、黑素减少性损伤(hypomelanotic lesions)、雀斑和黑斑中的一种或多种。
如本文所用的术语“老年斑”指其中色素沉着归因于由内在的或外在的衰老因素引起的黑色素局部和长期超量产生的老化斑。
如本文所用的术语“调肤色剂(skin tone agent)”指调节黑色素产生信号、黑色素合成、黑色素在黑素细胞和角质形成细胞之间的系统性转移和/或黑色素降解的物质。调肤色剂可以通过充当亮肤或减少色素沉着的美容化妆用物质来改善不均匀肤色的外观。
如本文所用的术语“肤色(skin tone)”指由黑色素的系统性而非短暂性合成黑色素引起的皮肤中黑色素的总体外观。肤色通常在较大的皮肤面积上表征。所述面积理论上可以大于100mm2，但是可以设想更大的面积，例如整个面部皮肤或面部皮肤表面的任意部分。肤色可以通过图像分析来测定。例如，总体亮度可以通过L*a*b*颜色空间(International Commissionon Illumination)中的L*坐标进行测定。可以使用生色团作图例如黑色素作图和黑色素浓度可以作为整体肤色的指示物。可以由生色团作图数据计算黑色素平均值。另外，可以通过黑色素均匀度确定肤色均匀度，黑色素均匀度也可以由生色团作图数据计算。下文实施例中讨论了适宜的生色团作图技术。
如本文所用的术语“面部皮肤表面”指额、眶周、颊、口周围、颏和鼻皮肤表面中的一者或多者。
如本文所用的“皮肤护理活性物”或“活性物”指当应用于皮肤时给该皮肤提供益处或改善的化合物。
“改善老化皮肤外观”指在皮肤外观和/或感觉方面引起在视觉上和/或触觉上可见的阳性改变或益处。如本文所用的“改善老化皮肤外观”还包括防止或延迟老化皮肤外观。可能提供的益处包括但不限于以下一种或多种：减少皱纹和粗糙深线、细线、裂缝、结节性红斑和大孔的外观；增厚角质形成组织(例如建立皮肤的表皮和/或真皮和/或亚真皮层)；增加真皮-表皮边界的卷积(也称为表皮突)；皮肤发光；防止皮肤弹性丧失，例如由于功能性皮肤弹性蛋白的丧失、损伤和/或失活引起的皮肤弹性丧失(引起例如弹性组织变性、下垂、皮肤由变性弹回的丧失的病症)；皮肤颜色的改变，例如眼下圈、大斑(例如由于例如酒渣鼻引起的不均匀的红色)、灰黄、色素沉着过度引起的变色等。
如本文所用的“皮肤老化征”包括但不限于由皮肤老化引起的所有外部的在视觉上和/或触觉上可见的现象，以及任何宏观效应或微观效应。这些征象可以由以下过程产生，所述的过程包括但不限于组织不连续性的发生例如皱纹和粗糙的深皱纹、细纹、皮肤线、裂缝、结节性红斑、大孔、不均匀或粗糙；皮肤弹性的丧失；变色(包括眼下圈)；大斑；灰黄；色素沉着过度的皮肤区域例如老年斑和雀斑；角化病；异常分化；角化过度；弹性组织变性；胶原破坏，和其它组织学变化，所述的组织是角质层、真皮、表皮、血管系统(例如毛细管扩张或蛛网血管)和下面的组织(例如脂肪和/或肌肉)、特别是那些接近皮肤的。
如本文所用的“色素沉着过度”指其中色素沉着大于皮肤临近区域的色素沉着的皮肤区域(例如色素斑、老年斑等)。
如本文所用的“脱皮、表皮剥脱和/或更新”指角质层的上层(包括角质层(horny layers))的除去。
如本文所用的“灰黄”指苍白色、黄色等皮肤病症，其由于皮肤组分的丧失、损伤、改变和/或异常引起，以致于皮肤变色(例如黄色)，这是由于例如蛋白质糖化和脂褐素聚集或通常伴随皮肤老化的外周血流降低的过程引起。
本文所用的“外部溶剂”指不是植物材料中固有存在的任何溶剂，但是与植物材料接触，用于从植物材料中分离(例如提取)化合物的目的。
I.组合物
本发明涉及多种组合物，并且更具体而言，涉及应用于皮肤表面的组合物。组合物可以是多种产品形式，包括但不限于溶液剂、混悬剂、洗剂(lotions)、乳膏剂、凝胶剂、调色剂(toners)、棒状物、笔、喷雾剂、气溶胶、软膏剂、清洁用液体洗涤剂和固体杆状物、洗发香波和头发调理剂、糊剂、泡沫剂、粉末、摩丝、剃须膏、擦拭物、条状物、贴剂、电动贴剂、伤口敷料和粘附绷带、水凝胶剂、成膜产品、面膜和皮肤膜(有和无不溶性片材)、化妆品例如粉底、眼线膏和眼影等。组合物形式可以根据所选择的具体的皮肤学可接受的载体(如果在组合物中存在的话)而定。
A.浆液级分
本发明的组合物包含有效量的榕树浆液级分、莲属植物浆液级分和三叶草浆液级分。
榕树、莲属植物和三叶草浆液级分基本上由分别从孟加拉榕(Ficusbenghalensis)、莲(Nelumbo Nucifera)和三叶草(Trifolium Pratense)获得的花、叶和茎浆液级分组成的。本文优选的浆液级分是通过美国纽约Ossining的Akzo Nobel Surface Chemistry LLC生产，商品名为Ficus BengalensisEnriched Serum FractionTM(INCI名称：印度榕树(Ficus Indica)花/叶/茎汁)、Lotus Enriched Serum FractionTM(INCI名称：莲花/叶/茎汁)和RedClover Enriched Serum FractionTM(INCI名称：三叶草花/叶/茎汁)。
在某些实施方案中，组合物可以包含占总组合物重量的0.001%至15%、或者0.002%至10%、或者0.025%至10%，在其它实施方案中，0.05%至10%，在其它实施方案中，0.05至5%，以及在其它实施方案中，0.1%至5%的榕树浆液级分。组合物可以包含占总组合物重量的0.001%至15%、或者0.002%至10%、或者0.01%至15%、或者0.025%至10%，在其它实施方案中，0.05%至10%，在其它实施方案中，0.05至5%，以及在其它实施方案中，0.1%至5%的莲属植物浆液级分。组合物可以包含占总组合物重量的0.001%至15%、或者0.002%至10%、或者0.01%至15%、或者0.025%至10%，在其它实施方案中，0.05%至10%，在其它实施方案中，0.05至5%，以及在其它实施方案中，0.1%至5%的三叶草浆液级分。
制备浆液级分的方法包括下列步骤：(a)从干净、新鲜、未枯萎的植物物质中分离细胞汁(cell juice)，获得新鲜的细胞汁，其中在所述的分离之前或过程中不添加外源性液体；(b)过滤所述的新鲜的细胞汁，获得无纤维的细胞汁；和(c)分级所述的无纤维细胞汁，获得本文所用的浆液级分。适合的浆液级分制备方法在Koganov的美国专利号7,442,391，“BioactiveBotanical Cosmetic Compositions and Processes for their Production,”和Swanson等人在2010年9月10日提交的共同未决的美国临时申请系列号61/381,748中详细描述的，将其公开内容并入本文作为参考。
相比传统制备的植物提取物，产生的浆液级分具有优良的生物活性。不同于传统提取物，该浆液级分是由新鲜的植物细胞汁制备，所述的植物细胞汁是由剩余的新鲜植物材料机械分离的。重要的是，在细胞汁分离处理过程中不添加外源性溶剂(例如水、己烷、丙酮、乙醇)。产生的细胞汁包含新鲜植物物质中发现的全系列化合物，因此产生的浆液级分包含比传统植物提取物更宽范围的活性化合物，所述的传统植物提取物仅包含可以用特定溶剂分离的窄范围的化合物。
而且，使用新鲜的植物保持新鲜植物物质中固有存在的生物活性组分的完整性。传统植物提取物不是由新鲜植物物质制备的，而是由干植物材料制备的，由于脱水，干植物材料经历降解。在脱水过程中，细胞壁被破坏，导致化合物通过例如水解、氧化、聚合、美拉德反应和异构化的机制而降解。当提取干燥的叶子时，所产生的提取物包含这些降解产物，所述的降解产物不是新鲜植物物质中最初存在的。因此，产生的干叶提取物的组合物非常不同于新鲜细胞汁和产生的浆液级分的组合物。
B.调肤色剂
在某些实施方案中，可以需要在组合物中包含调肤色剂。可以包含的调肤色剂进一步改善了整个肤色。当存在时，本发明的组合物包含占组合物重量的至多约50%、40%、30%、20%、10%、5%或3%的调肤色剂。当存在时，本发明的组合物包含占组合物重量的至少约0.001%、0.01%、0.1%、0.2%、0.5%或1%的调肤色剂。适合的范围包括下限和上限的任何组合，包括适合的范围为占组合物重量的约0.1%至约50%；约0.2%至约20%；或约1%至约10%的调肤色剂。本文所列的量仅用作指导，因为调肤色剂的最佳量取决于所选择的特定活性物，因为活性物的功效变化相当大。
适合的调肤色剂包括但不限于糖胺、维生素B3化合物、熊果苷、脱氧熊果苷、1,3-二羟基-4-烷基苯例如己雷琐辛、蔗糖二月桂酸酯(sucrosedilaurante)、bakuchoil(4-[(1E,3S)-3-乙烯基-3,7-二甲基-1,6-辛二烯基]苯酚或单萜酚(monterpene phenol)、pyrenoine(可从法国Biotech Marine获得)、稷(panicum miliaceum)种子提取物、十八烷基烯二酸(arlatone dioic acid)、肉桂酸、阿魏酸、achromaxyl、甲基烟酰胺、油溶性甘草提取物、叶酸、十一烯酸(即十一碳烯酸)、十一烯酸锌、硫胺(维生素B1)及其盐酸盐、L-色氨酸、向日葵(helianthus annus)和葡萄(vitis vinifera)叶提取物、肌肽(即dragosine)、龙胆酸甲酯、1,2-己二醇和1,2-辛二醇(即，由德国Symrise AG作为Symdiol 68销售的组合)、肌醇、十一碳烯酰基苯丙氨酸(例如由法国Seppic以商品名Sepiwhite销售)、koijic acid、己脒定化合物、水杨酸和类视色素、包括视黄醇和丙酸视黄酯。
在某些实施方案中，另外的调肤色剂选自维生素B3化合物、糖胺、己脒定化合物、水杨酸、1,3-二羟基-4-烷基苯例如己雷琐辛和类视色素。如本文所用的“维生素B3化合物”指具有下式的化合物：
Figure BDA0000398972600000081
其中R是-CONH2(即烟酰胺)、-COOH(即烟酸)或-CH2OH(即烟醇)；其衍生物；及任意前述物质的盐。如本文所用的“糖胺”包括糖胺及其盐(例如HCl盐)和其衍生物的异构体和互变异构体。糖胺的实例包括葡糖胺、N-乙酰基葡糖胺、甘露糖胺、N-乙酰基甘露糖胺、半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、其异构体(例如立体异构体)和它们的盐(例如HCl盐)。如本文所用的“己脒定化合物”指下式化合物：
Figure BDA0000398972600000091
其中R1和R2是任选的或者是有机酸(例如磺酸等)。在一个实施方案中，己脒定化合物是己脒定二羟乙磺酸盐。
C.抗炎剂
色素沉着过度可以由皮肤炎症导致。触发色素沉着过度、更特别是炎性后色素沉着过度的暂时性炎性事件包括但不限于痤疮损伤、向内生毛、抓伤、虫咬、表面活性剂损伤、变应原和短期UV暴露。炎症诱导的色素沉着过度、包括炎性后色素沉着过度可以通过向本发明的组合物中加入抗炎剂来控制。当存在抗炎剂时，本发明的组合物包含占组合物重量的至多约20%、10%、5%、3%或1%的抗炎剂。当存在抗炎剂时，本发明的组合物包含占组合物重量的至少约0.001%、0.01%、0.1%、0.2%、0.3%、0.5%或1%的抗炎剂。适合的范围包括所述下限和上限的任意组合。适合的抗炎剂包括但不限于非甾体抗炎剂(NSAIDS，包括但不限于布洛芬、萘普生、氟芬那酸、依托芬那酯、阿司匹林、甲芬那酸、甲氯芬那酸、吡罗昔康和联苯乙酸)、甘草酸(也称为甘草甜素、glycyrrhixinic acid和甘草亭酸糖苷)及其盐例如甘草酸二钾、甘草次酸(glycyrrhetenic acid)、甘草提取物、没药醇(例如α没药醇)、manjistha(从茜草属(Rubia)植物、特别是茜草(Rubia cordifolia)中提取)和guggal(从没药属(Commiphora)植物、特别是印度穆库尔没药(Commiphora mukul)中提取)、可乐树(kola)提取物、甘菊、三叶草提取物(例如红三叶草提取物)和柳珊瑚提取物(从柳珊瑚目(Gorgonacea)的植物提取)、任意上述物质的衍生物及其混合物。
D.防晒活性物
本发明的组合物可以包含一种或多种防晒活性物(或防晒剂)和/或紫外光吸收剂。在本文中，“防晒活性物”一起包括防晒活性物、防晒剂和/或紫外光吸收剂。防晒活性物包括防晒剂和物理遮光剂二者。防晒活性物可以是有机物或无机物。适合的防晒活性物的实例在个人护理产品协会(Personal Care Product Council)的International Cosmetic IngredientDictionary and Handbook，第13版中作为“防晒剂”公开。特别适合的防晒活性物是对甲氧基肉桂酸2-乙基己基酯(可作为PARSOLTM MCX购买获得)、4,4’-叔丁基甲氧基二苯甲酰基-甲烷(可作为PARSOLTM1789购买获得)、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、辛基二甲基-对-氨基苯甲酸、二棓酰三油酸酯、2,2-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮、4-(二(羟基丙基))氨基苯甲酸乙酯、2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸2-乙基己基酯、水杨酸2-乙基己基酯、对-氨基苯甲酸甘油基酯、水杨酸3,3,5-三甲基环己基酯、邻氨基苯甲酸薄荷基酯、对-二甲氨基苯甲酸或氨基苯甲酸酯、对-二甲基-氨基-苯甲酸2-乙基己基酯、2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、2-(对-二甲基氨基苯基)-5-磺基苯并唑酸、奥克立林(octocrylene)、氧化锌、亚苄基樟脑及其衍生物、二氧化钛及其混合物。
在一个实施方案中，组合物可以包含占组合物重量的约1%至约20%，或者约2%至约10%的防晒活性物。精确量将根据所选的防晒活性物和预期的防晒因子(SPF)而不同，这属于本领域技术人员的知识范围之内。
E.任选的组分
本发明的组合物可以包含多种其它成分，条件是它们不会不可接受地改变本发明的益处。当存在时，本发明的组合物可以包含占组合物重量的约0.0001%至约50%；约0.001%至约20%；或者约0.01%至约10%的任选的组分。本文列出的量仅用作指导，在组合物中使用的任选的组分的最佳量将取决于所选择的特定活性物，因为它们的功效变化相当大。因此，可用于本发明的某些任选组分的量可以在本文列出的范围之外。
任选的组分当掺入组合物中时应当适用于与人皮肤组织接触而没有过度的毒性、不相容性、不稳定性、变态反应等。本发明的组合物可以包含例如以下的任选组分：抗痤疮活性物、剥脱活性物、抗脂肪团剂、螯合剂、类黄酮、晒黑活性物、非维生素抗氧化剂和游离基清除剂、毛发生长调节剂、抗皱活性物、抗萎缩活性物、矿物质、植物甾醇和/或植物激素、N-酰基氨基酸化合物、抗微生物或抗真菌活性物及其它有用的皮肤护理活性物，它们在美国申请公布号US2006/0275237A1和US2004/0175347A1中有进一步详细的描述，将其公开内容并入本文作为参考。
个人护理产品协会的International Cosmetic Ingredient Dictionaryand Handbook，第十三版描述了大量在皮肤护理工业中常用的非限制性的美容化妆用和药用成分，它们是适用于本发明的组合物中的任选组分。这些成分类型的实例包括：磨料、吸附剂、美观性组分例如香料、色素、色料/着色剂、精油、防结块剂、消沫剂、抗微生物剂、粘合剂、生物添加剂、缓冲剂、填充剂、螯合剂、化学添加剂、着色剂、美容化妆用收敛剂、美容化妆用杀生物剂、变性剂、药用收敛剂、柔润剂、外用镇痛剂、成膜剂或膜物质、遮光剂、pH调节剂、防腐剂、抛射剂、还原剂、多价螯合剂、皮肤清凉剂、皮肤保护剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素及其组合。
F.皮肤学上可接受的载体
本发明的组合物还可以包含用于组合物的皮肤学上可接受的载体(其可以称为“载体”)。如本文所用的短语“皮肤学上可接受的载体”指所述载体适于局部应用于角质组织、具有良好美观性质、与组合物中的活性物相容并且将不会引起任何不合理的安全或毒性问题。在一个实施方案中，载体以占组合物重量的约50%至约99%、约60%至约98%、约70%至约98%或者约80%至约95%的水平存在。
载体可以是多种形式。非限制性实例包括简单的溶液(例如水溶液、有机溶剂溶液或油基)、乳剂和固体形式(例如凝胶剂、棒状物、可流动固体或无定形物质)。在某些实施方案中，皮肤学上可接受的载体为乳剂形式。乳剂通常可以分为具有连续水相(例如水包油型和水包油包水型)或连续油相(例如油包水型和油包水包油型)。本发明的油相可以包含硅氧烷油、非硅氧烷油例如烃油、酯、醚等及其混合物。
水相通常包含水。然而，在其它实施方案中，水相可以包含除水之外的组分，包括但不限于水溶性保湿剂、调理剂、抗微生物剂、湿润剂和/或其它水溶性皮肤护理活性物。在一个实施方案中，组合物的非水组分包括湿润剂例如甘油和/或其它多元醇。然而，应当认识到所述组合物可以是基本上无水的(即低于1%水)或者是完全无水的。
选择适合的载体产生预期的产品形式。而且，组分(例如提取物、防晒活性物、另外的组分)的溶解性或可分散性可以确定载体的形式和特性。在一个实施方案中，水包油型或油包水型乳剂是优选的。
乳剂可以进一步包含乳化剂。所述组合物可以包含足以乳化载体的任意适合百分比的乳化剂。适合的重量范围包括基于组合物重量的约0.1%至约10%或约0.2%至约5%的乳化剂。乳化剂可以是非离子的、阴离子的或阳离子的。适合的乳化剂在例如美国专利3,755,560、美国专利4,421,769和McCutcheon’s Detergents and Emulsifiers,北美版,第317-324页(1986)中有公开，将其公开内容并入本文作为参考。适合的乳剂可以具有宽范围的粘度，这取决于预期的产品形式。
载体可以进一步包含本领域熟知的增稠剂以提供具有适合粘度和流变学特性的组合物。
II.治疗方法
多种治疗、应用、调节或改善的方法可以用于上述组合物。老化皮肤区域的鉴别可以发生在机体的任何皮肤表面。大多数关注的皮肤表面倾向于通常没有被衣服遮盖的那些，例如面部皮肤表面，手和手臂皮肤表面，脚和腿皮肤表面，以及颈和胸皮肤表面(例如低胸)。特别的是，鉴别的老化皮肤区域可以是面部皮肤表面，包括额、口周围、颏、眶周、鼻和/或颊皮肤表面。
该方法可以包括给先前鉴别的老化皮肤区域或试图防止老化外观的区域应用组合物的步骤。存在多种应用组合物的方案。在治疗期内，组合物可以至少每天应用一次，每天应用两次或每天多次。当每天应用两次时，第一次和第二次应用间隔至少1至约12小时。组合物通常在早晨和/或晚上上床前应用。
治疗期理论上是在老化皮肤的外观上提供改善所需的足够时间。治疗期可以是至少约1周，并且在某些实施方案中，治疗期可以持续约4周或约8周。在某些实施方案中，治疗期将延长超过数月(即3-12个月)或数年。在一个实施方案中，在至少约4周或至少约8周的治疗期间每天应用至少一次组合物。在一个实施方案中，在至少约4周或8周的治疗期间每天应用两次组合物。
应用组合物的步骤可以通过局部应用来完成。对于组合物的应用，术语“局部”指组合物被递送至目标区域(例如老年斑)同时最小化递送至无需治疗的皮肤表面。可以将组合物应用并且轻轻按摩至老化皮肤区域。应当选择便于局部应用的组合物的形式或皮肤病学可接受的载体。当本发明的某些实施方案考虑将组合物局部应用于区域时，应当理解本发明的组合物可以更普遍或广泛地应用于一个或多个皮肤表面。
在某些实施方案中，组合物可以通过适合于局部和全身应用的多种涂药器递送。这些涂药器可以包括滴管、涂布棒、棉签或任何其它适合的装置。其它适合的涂药器包括台湾Shya Hsin Plastic Works,Inc.可获得的SH-0127笔涂药器和中国SwabPlus,Inc.可获得的Xpress Tip或装满液体的药签。涂药器可以配置成易于将组合物应用于老年斑，适合的直径在约2mm至约10mm之间，并且组合物的给药量在约1至约50uL/cm2之间或约1至约5uL/cm2之间。在另一个实施方案中，组合物应用于一个或多个老化斑，并且同时更普遍地应用于一个或多个面部皮肤表面(即历经小于30分钟，或更通常小于5分钟)。
当本文描述的某些方法考虑用涂药器应用本发明的组合物时，应当理解的是涂药器是不需要的，并且本发明的组合物还可以用手指或以其它常规方式直接应用。
在一个实施方案中，该方法包括给皮肤表面应用包含有效量的榕树浆液级分、莲属植物浆液级分和三叶草浆液级分的第一组合物和在第一组合物之前或之后给皮肤表面应用第二组合物的步骤。第一和第二组合物可以是本文描述的任何组合物；然而，第二组合物可以任选包含第一组合物中存在的有效量的浆液级分。第二组合物可以包含一种或多种调色剂、防晒活性物、抗炎剂或任选组分。第一组合物可以广泛或局部应用，同时第二组合物可以广泛或局部应用于皮肤表面，包括第一组合物应用的老化皮肤。在某些实施方案中，皮肤表面是面部皮肤表面，其包括额、口周围、颏、眶周、鼻和颊皮肤表面的一者或多者。在另一个实施方案中，第一和第二组合物同时应用于至少颊、额和颏/口周围皮肤表面。对于普遍应用于皮肤表面，并且特别是面部皮肤表面，第一或第二组合物的给药量可以是每次应用(即每次单个应用于皮肤表面)约1至约50uL/cm2。
适合的方法可以包括任何一个或多个上述步骤。所有上述步骤可应用于应用、治疗、调节和/或改善老化皮肤外观。改善老化皮肤外观的一个适合的方法包括给老化皮肤表面局部应用包含有效量的榕树浆液级分、莲属植物浆液级分和三叶草浆液级分混合物的组合物的步骤，其中组合物应用足够时间，为了浆液级分混合物改善老化皮肤外观。
III.作用机制
角质层是紧密调节的表皮通透性屏障并且用作对抗化学和生物学刺激的全身的和选择性的屏障，以及用作防止机体水分丧失至外部环境的通透性屏障。角质层的细胞通过调节水、离子和蛋白质通过它们而控制这些屏障。细胞之间离子和分子的流动(通常指的是细胞旁通透性通道)通过紧密连接部调节。(Koval,Michael.Claudins-Key Pieces in the Tight JunctionPuzzle.Cell Communication and Adhesion.13:127-138,2006)
紧密连接部是细胞-细胞接触部位，其由多种跨膜和外周蛋白质组成，装配至连接至细胞骨架的复合物。在这些跨膜蛋白质中，被鉴别为“密蛋白”的那些是细胞通透性的主要决定因素。密蛋白在保持屏障功能中发挥若干作用。密蛋白是丝条的主要组分，其构成通透屏障以限制细胞之间的蛋白质和其它大分子的扩散，并且它们还形成特别的细胞旁通道，调节细胞间离子分散。密蛋白-1突变与多个类型的鱼鳞病(一类引起干燥、增厚、鳞屑或鳞状皮肤的皮肤障碍)相关，并且研究显示密蛋白-1缺陷小鼠的表皮屏障功能被破坏以致于它们的细胞不能锁住水分，引起皮肤干燥并且一天内引起死亡(M.Furuse等人，The Journal of Cell Biology,156(No.6):1099-1111,2002)。
水通道蛋白-3(AQP3)是在表皮角质形成细胞的基底层中表达的水和甘油的膜转运体。与年轻的未损伤的皮肤相比，老化的人皮肤已经显示经历AQP3表达的降低，其也与降低的角质层含水量和弹性相关。在涉及AQP3-敲除小鼠的研究中，在AQP3-缺陷表皮中降低的AQP3-依赖性甘油转运已经显示为脱水的无弹性的皮肤负责(“Aquaporin-3functions as aglycerol transporter in mammalian skin,”Hara-Chikuma M,Biol Cell.2005Jul;97(7):479-86);(“Roles of Aquaporin-3 in the Epidermis”,Hara-Chikuma,M.,J Invest Dermatol.2008Sep;128(9):2145-51.Epub2008Jun12);(“Glycerol replacement corrects defective skin hydration,elasticity,and barrier function in aqaporin-3-deficient mice,”Hara M.,Proc Natl Acad Sci U S A.2003 Jun 10;100(12):7360-5.Epub 2003 May27)。
榕树、三叶草和莲属植物浆液级分的混合物引起水分和屏障功能的阳性增加，如下面实施例3的密蛋白-1和水通道蛋白-3(“AQP3”)的统计学显著上调所证明的。
在实施例2中，混合物对9种不同的与老化皮肤相关的基因的作用进行了评价。这9种基因以及它们相关的功能在实施例2的表1中描述。对于老化相关的基因，相对于对照表达增加/降低的倍数在两个不同的浓度水平测定。在两种情况中，如表2a和2b所示，混合物在所有9种基因中均引起阳性倍数增加，这表明基因的希望的上调，从而获得阳性的抗老化益处。
实施例
实施例1-示例性的组合物
表1列出了本发明的组合物的非限制性实例。这些实例仅用于说明目的，而不能理解为本发明的限制，因为其很多变通实施方案是可能的而没有脱离本发明的精神和范围，其将被本领域技术人员理解。在这些实例中，除非另外说明，否则所有浓度是以重量百分数列出的，并且可以排除较少的物质例如稀释剂、填充剂等。因此，所列的配方包括所列的组分以及与这些组分相关的任何较少的物质。对于本领域技术人员显而易见的是，这些较少的物质的选择将取决于实施本文描述的本发明所选的具体成分的物理和化学特性而不同。
所有实例可以用于治疗或改善一个或多个老化征的外观。本发明可以进一步涉及这样的方案，所述的方案包括通过第一组合物(例如实例A或B)局部治疗一个或多个老化征以及通过第二组合物(例如实例C或D)治疗更广泛或普遍的面部皮肤治疗，其可以在局部治疗之前或之后应用，以改善特别的老化征(例如穿越整个面部)。
表1
示例性组合物
Figure BDA0000398972600000161
Figure BDA0000398972600000171
**由美国纽约Akzo Nobel Surface Chemistry LLC of Ossining生产。
本发明组合物通常是通过常规方法(例如本领域制备局部组合物已知的方法)制备的。这些方法通常包括在一个或多个步骤中混合成分至相对均匀状态，加热或不加热、冷却、采用真空等。通常，乳剂是通过首先将水相材料与脂相材料分开混合，然后适合地合并两相，得到所需的连续相。优选将组合物制成例如优化稳定性(物理稳定性、化学稳定性、光稳定性)和/或递送活性材料。优化可以包括适合的pH(例如小于7)，排除可以与活性剂结合从而对稳定性或递送产生不利影响的材料(例如排除污染的铁)，使用防止复合物形成的方法(例如适合的分散剂或二元隔室包装)，使用适合的光稳定性方法(例如掺入防晒剂/遮光剂，使用不透明包装)等。
实施例2-离体组织分析
根据本文描述的方法在两种不同的浓度下评价单个榕树、莲属植物和三叶草浆液级分以及它们的混合物。对于老化相关的基因，测定了相对于对照表达增加/降低的倍数，列于下表2。阳性倍数增加表明该基因的希望的上调，从而获得阳性的抗老化益处。
离体组织方法：从外科废弃物中收集皮肤移植体并且用在介质中的活化物处理。对照皮肤是未处理的。7天后，进行打孔活组织检查用于RNA分离和PCR分析。
RT-PCR方法：应用Quanta iScriptTM将纯化的RNA转化为cDNA。将500ng的RNA与iScript混合并且根据试剂盒说明书在thermocycler上运行。然后根据说明书将1uL产生的cDNA与Quanta PerfectaMasterTM混合物混合并且等份穿过SAbiosciencesTM定制阵列板。然后将该板密封并且在来自Applied BiosystemsTM的Step-one PlusTM仪器上运行。数据分析通过将原始数据上传至SAbiosciencesTM的数据分析软件进行。
表2
关于皮肤老化，具有降低的表达的代表性基因
基因 相关的功能
肌原纤蛋白-1(FBN1) 微纤维的结构组分，其与弹性蛋白相关存在
纤连蛋白-1(FN1) 与创伤愈合有关的粘附
胶原3，a1(COL3A1) 真皮的主要胶原
表2a
样品浓度1
表2b
样品浓度2
Figure BDA0000398972600000192
实施例3-密蛋白1和AQP-3表达的角质形成细胞分析
角质形成细胞培养：进行多种mRNA分析。从新生儿人角质形成细胞分离RNA。新生儿人角质形成细胞(Cascade Biologics # C-001-5C)在6-孔组织培养板中生长至40%汇合，然后用化合物处理24小时(每个处理3次重复)。处理包括几个浓度的榕树+三叶草+莲属植物混合物以及单个的汁液。另外，应用载体对照。
用Panomics QuantiGene Plex Assay试剂盒测定几个靶标，基于多个分析物定量珠的分析。对于水通道蛋白3和密蛋白1，显示了对于产生显著RNA的那些样品，Bio-Rad Bio-Plex 100仪器测量的荧光强度值。
图1的图显示密蛋白-1和AQP3希望地上调响应于本文的榕树+三叶草+莲属植物混合物。
实施例4-治疗方法
试验个体在整个面部局部应用实施例1的组合物A，每天一次，连续8周。结果，个体的面部皮肤感觉并且表现出比第0周更具有水分，并且个体注意到细纹和皱纹的外观的减少。
本文公开的尺寸和数值不应当理解为严格限制于所列的准确数值。除非另外说明，否则每个尺寸旨在表示所列的数值和围绕该值的功能上相当的范围。例如，公开尺寸为“40mm”旨在表示“约40mm”。
将本文引用的每个文件(包括任何交叉引用或相关的专利或申请)的全部内容并入本文作为参考，除非另外明确排除或限制。任何文件的引用并不接受其是本文公开的或要求的任何发明的现有技术或其单独或与任何其它参考文献的任何组合教导、建议或公开了任何发明。而且，在本文件中术语的任何含义或定义与并入作为参考的文件中相同术语的任何含义或定义冲突的情况下，应当以本文件中术语所指定的含义或定义为准。
当说明和描述本发明的具体实施方案时，对于本领域技术人员显而易见的是可以进行多种其它改变和修饰而不脱离本发明的精神和范围。因此，意欲在所附的权利要求中覆盖在本发明范围内的所有这类改变和修饰。

Claims (7)

1.适合用于配制局部应用的皮肤组合物的浆液级分混合物，所述的混合物包含：
a.榕树浆液级分；
b.莲属植物浆液级分；和
c.三叶草浆液级分。
2.权利要求1的浆液级分混合物，其中每种所述的榕树、莲属植物和三叶草浆液级分是通过以下方法制备的，包括：
a.从干净、新鲜、未枯萎的植物物质中分离植物细胞汁，获得新鲜的植物细胞汁，其中在所述的分离之前或过程中不添加外源性液体；
b.过滤所述的新鲜的植物细胞汁，获得无纤维的细胞汁；和
c.分级所述的无纤维的细胞汁，获得所述的浆液级分。
3.权利要求1的浆液级分混合物，其包含：
a.0.001%至15%的榕树浆液级分；
b.0.001%至15%的莲属植物浆液级分；和
c.0.001%至15%的三叶草浆液级分。
4.权利要求1的浆液级分混合物，其包含：
a.0.002%至10%的榕树浆液级分；
b.0.002%至10%的莲属植物浆液级分；和
c.0.002%至10%的三叶草浆液级分。
5.权利要求1的浆液级分混合物，其包含：
a.0.025%至10%的榕树浆液级分；
b.0.025%至10%的莲属植物浆液级分；和
c.0.025%至10%的三叶草浆液级分。
6.权利要求1的浆液级分混合物，其包含：
a.0.05%至5%的榕树浆液级分；
b.0.05%至5%的莲属植物浆液级分；和
c.0.05%至5%的三叶草浆液级分。
7.权利要求1的浆液级分混合物，其中所述的混合物有效阳性增加水分和屏障功能，如人表皮中密蛋白-1和水通道蛋白-3的统计学显著上调所证明的。
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