CN103463201A - 一种双黄连提取物的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种双黄连提取物的提取方法，以金银花、黄芩、连翘为原料，通过水提醇沉法及大孔树脂精制，得到双黄连提取物。本发明得到的双黄连提取物可制成各种剂型，优选口服液和注射液。采用本发明的提取方法，有效提高双黄连提取物的纯度，降低总固体量，提高有效成分含量。

Description

一种双黄连提取物的提取方法

技术领域

本发明涉及一种双黄连提取物的提取方法，具体涉及金银花、连翘、黄芩提取物的提取方法。

背景技术

双黄连是由金银花（又名双花）、黄芩和连翘三味药组成的，取这三种中药名的第一个字，故叫做双黄连。金银花，性寒味甘、气味芒香、既可清风温之热，又可解血中之毒，适用于温病发热、斑疹、咽痛。黄芩味苦性寒，泻心中之余火，清肠中湿热，适用于心火旺盛，肠胃湿热、湿热瘟毒。连翘性凉味苦，清心泻火，去上焦各种热症，适用于温病初起、头痛、发热、烦渴，以及热毒郁结引起的痈疮肿痛、丹毒、斑疹等。根据现代药理研究和动物实验证实，这三种中药都有抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、溶血性链球菌、痢疾杆菌等有一定的抑制作用。三药合用制成双黄连，可以清热解毒、轻宣透邪，用于治疗风湿邪在肺卫或风热闭肺引起的发热、微恶风寒或不恶寒、咳嗽气促、咯痰色黄、咽红肿痛等症，以及上呼吸道感染、急性支气管炎、急性扁桃腺炎、轻型肺炎等。

双黄连有多种剂型，包括：口服液、片剂、胶囊剂、注射剂、糖浆剂、颗粒剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、滴眼液等等。如今双黄连已成为家喻户晓的百姓常用药，所以提高产品的质量及安全性，减少不良反应已经成为首要问题。也因此，必须提高药品的纯度，减少杂质，以保证百姓的用药安全。

目前，双黄连提取的方法大多数采用金银花、连翘合提，水提醇沉；黄芩单提，水提醇沉的方法；也有采用金银花、连翘、黄芩分别水提醇沉法。

CN101040915A公开了一种双黄连注射液的制备方法，其先分别对黄芩、金银花和连翘进行提取,然后再进行注射液的制备。CN1546095A公开了一种用于生产浓缩型双黄连口服液的制备方法，主要采用的是现代分离、精制技术,采用酸沉、醇沉、利用不同pH调节、萃取、高速离心等方法,且对药料的深度加工,使药料的有效成分能够得到充分利用,药物浓度增大、有效成分含量提高;缩短生产周期,降低生产成本。CN101933967A公开了一种金银花提取物的制备方法，运用超高压提取和大孔吸附树脂分离技术提取纯化金银花的活性成分；CN101085043A公开了一种连翘提取物的制备方法，先将连翘加水煎煮提取,醇沉法初步纯化,最后采用水饱和正丁醇萃取法进一步精制。

上述双黄连的提取方法得到的提取物大都纯度不高，杂质多。因而提供一种纯度高、杂质少的双黄连提取物的制备方法，具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种双黄连提取物的提取方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种双黄连提取物的提取方法，以金银花、黄芩、连翘为原料，通过水提醇沉法及大孔树脂精制，得到双黄连提取物。

其中，金银花、连翘采用水提醇沉法和大孔树脂精制法提取；黄芪采用水提醇沉法提取；

上述提取方法具体包括如下步骤：

一、金银花的提取物的精制

1）取金银花适量，先加入6～10倍体积量纯化水，70～80℃温浸60～120分钟，过滤，滤液备用，滤渣再加入4～8倍体积量纯化水，70～80℃温浸60～120分钟，过滤，合并两次滤液，浓缩滤液至相对密度1.18～1.22(80℃±5℃测)，冷至室温，加入乙醇至含醇量75～80%，搅拌均匀后，静置14～18小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再将滤液浓缩至相对密度1.16～1.20(80℃±5℃测)，得到浓缩膏1；

2）向上述浓缩膏1中加入3～5倍体积量纯化水，搅拌，静置14～20小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.18～1.22(80℃±5℃测)，滤液中再加入乙醇至含醇量80～85%，边加边搅拌，静置14～18小时，取上清液，用40%NaOH溶液测调pH值8.5～9.0，静置25～30小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再浓缩滤液至相对密度1.16～1.20(80℃±5℃测)，得到浓缩膏2；

3）向上述浓缩膏2中加入3～5倍体积量的纯化水，边加边搅拌，加水完成后继续搅拌30～60分钟,静置1～2小时，过滤，将滤液以1.0～1.5BV/h流速过大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将2～4倍体积量的20～25%乙醇以1.0～1.5BV/h流速过大孔树脂柱洗脱，合并两次洗脱液，回收洗脱液中的乙醇至洗脱液无醇味，浓缩洗脱液至相对密度1.12～1.14（80℃测），即得精制的金银花提取物。

二、连翘的提取物的制备

1）取连翘适量，加入6～10倍体积量纯化水，浸泡30分钟后，煮沸1.5～2小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入4～6倍体积量纯化水，煮沸1.5小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入4～6倍体积量纯化水，煮沸1.5小时，过滤，合并三次滤液，浓缩滤液至相对密度1.18～1.22（80℃±5℃测），冷至室温，加入乙醇至含醇量75～80%，边加边搅拌，静置14～20小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再将滤液浓缩至相对密度1.16～1.20(80℃±5℃测)，得到浓缩膏3；

2）向上述浓缩膏3中加入3～5倍体积量纯化水，搅拌，静置14～20小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.18～1.22(80℃±5℃测)，滤液中再加入乙醇至含醇量达到75～85%，边加边搅拌，静置14～20小时，取上清液，用20%氢氧化钠溶液测调PH值8.5～9.0，静置25～35小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再浓缩滤液至相对密度1.15～1.20(80℃±5℃测)，得到浓缩膏4；

3）向上述浓缩膏4中加入3～5倍体积量的纯化水，边加边搅拌，静置30～60分钟，过滤，将滤液以1.0～1.5BV/h流速过大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将3～4倍体积量的10～15%乙醇以1.0～1.5BV/h流速过大孔树脂柱洗脱，洗脱液弃去，再用3～4倍体积量的70～75%乙醇过大孔树脂柱洗脱，洗脱流速为1.0～1.5BV/h，与第一次洗脱液合并，回收合并洗脱液中乙醇并浓缩至1.16～1.20（80℃测），即得精制的连翘提取物。

三、黄芩的提取物的制备

1）取黄芩适量，加入6～10倍体积量纯化水，浸泡30～60分钟，煎煮2小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入4～8倍体积量纯化水，煎煮1.5～2.5小时，过滤，合并滤液；用浓盐酸调合并滤液pH值至1.5～2.5，并在75℃条件下保温1.5～2.5小时，静置14～18小时，过滤，滤渣再加入4～6倍体积量纯化水，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至6.5～7.0，搅拌使滤渣溶解，得到滤渣溶解液；

2）向上述滤渣溶解液中加入其体积0.5%的药用炭吸附15～20分钟，最后加入滤渣溶解液等体积的90～95%的乙醇溶液，搅拌均匀，静置12～24小时，过滤，滤液用浓盐酸调节pH值至2.0，缓慢搅拌至完全均匀，静置12～24小时，抽滤，滤渣用乙醇洗涤后，干燥得黄芩提取物。

作为本发明的一个优选实施方式，上述双黄连提取物的提取方法包括如下步骤：

1、金银花的提取物的精制

取金银花浓缩膏，加入4倍体积量的纯化水，边加边搅拌，加水完成后继续搅拌30分钟,静置1小时，过滤，滤液搅拌均匀，将过滤后药液加入大孔树脂柱，以1.0～1.5BV/h流速过柱吸附，再加入3倍体积量的20%乙醇以1.0～1.5BV/h流速洗脱，合并洗脱液。回收乙醇并浓缩至1.12～1.14（80℃测），即得精制的金银花提取物。

2、连翘的提取物的精制

取连翘浓缩膏，加入4倍体积量的纯化水，边加边搅拌，静置30分钟，滤过，滤液以1.0BV/h流速上大孔树脂柱，然后用三倍柱体积10%乙醇洗脱，洗脱流速为1.0BV/h，洗脱液弃去，再用三倍柱体积70%乙醇洗脱，洗脱流速为1.0BV/h，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至1.16～1.20（80℃测），即得精制的连翘提取物。

金银花提取物制备过程中所述的大孔树脂为：ADS-F8、ADS-17、HPD-750、HPD-100、HPD-450或DM-130。

连翘提取物制备过程中所述的大孔树脂为：ADS-F8、ADS-17、HPD-750、D-101、HPD-100、HPD-450或DA-201。

本发明得到的双黄连提取物制成双黄连口服剂型、注射剂型或外用剂型。

所述口服剂型为口服液、片剂、胶囊剂、糖浆剂、颗粒剂、合剂、滴丸，优选为口服液。

所述注射剂型为注射液、冻干粉针、滴注液，优选为注射液。

本发明将经过大孔树脂精制得到的金银花提取物和连翘提取物按比例加入黄芩提取物黄芩苷中，配制成双黄连的各种剂型，优选口服液和注射液。

本发明通过对双黄连各成分的初提工艺进行调整，并结合大孔树脂进行精制，从多个方面对双黄连提取工艺进行优化，在保证有效成分及各项质量指标合格的前提下，大幅减少总固体，有效去除了无机杂质、非极性大分子无效杂质等的量，提高了制剂的品质及安全性。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1双黄连提取物的制备方法

一、金银花提取物的制备

1）取金银花适量，先加入8倍体积量纯化水，80℃温浸60分钟，过滤，滤液备用，滤渣再加入6倍体积量纯化水，80℃温浸60分钟，过滤，合并两次滤液，浓缩滤液至相对密度1.20(80℃±5℃测)，冷至室温，加入乙醇至含醇量75%，搅拌均匀后，静置14小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再将滤液浓缩至相对密度1.18(80℃±5℃测)，得到浓缩膏1；

2）向上述浓缩膏1中加入4倍体积量纯化水，搅拌，静置14小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20(80℃±5℃测)，滤液中再加入乙醇至含醇量85%，边加边搅拌，静置14小时，取上清液，用40%NaOH溶液测调pH值8.5，静置25小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再浓缩滤液至相对密度1.18(80℃±5℃测)，得到浓缩膏2；

3）向上述浓缩膏2中加入4倍体积量的纯化水，边加边搅拌，加水完成后继续搅拌30分钟,静置1小时，过滤，将滤液以1.0BV/h流速过HPD-450大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将3倍量（V/V)的20%乙醇以1.0BV/h流速过HPD-450大孔树脂柱洗脱，合并两次洗脱液，回收洗脱液中的乙醇至洗脱液无醇味，浓缩洗脱液至相对密度1.12（80℃测），即得精制的金银花提取物。

二、连翘提取物的制备

1）取连翘适量，加入8倍体积量纯化水，浸泡30分钟后，煮沸1.5小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入6倍体积量纯化水，煮沸1.5小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入6倍体积量纯化水，煮沸1.5小时，过滤，合并三次滤液，浓缩滤液至相对密度1.20（80℃±5℃测），冷至室温，加入乙醇至含醇量75%，边加边搅拌，静置14小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再将滤液浓缩至相对密度1.18(80℃±5℃测)，得到浓缩膏3；

2）向上述浓缩膏3中加入4倍体积量纯化水，搅拌，静置14小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20(80℃±5℃测)，滤液中再加入乙醇至含醇量达到85%，边加边搅拌，静置14小时，取上清液，用20%氢氧化钠溶液测调PH值8.5，静置30小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再浓缩滤液至相对密度1.20(80℃±5℃测)，得到浓缩膏4；

3）向上述浓缩膏4中加入4倍体积量的纯化水，边加边搅拌，静置30分钟，过滤，将滤液以1.0BV/h流速过D-101大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将3倍量（V/V)的10%乙醇以1.0BV/h流速过D-101大孔树脂柱洗脱，洗脱液弃去，再用3倍量V/V)的70%乙醇过D-101大孔树脂柱洗脱，洗脱流速为1.0BV/h，与第一次洗脱液合并，回收合并洗脱液中乙醇并浓缩至1.20（80℃测），即得精制的连翘提取物。

三、黄芩提取物的制备

1）取黄芩适量，加入8倍体积量纯化水，浸泡30分钟，煎煮2小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入6倍体积量纯化水，煎煮2小时，过滤，合并滤液；用浓盐酸调合并滤液pH值至2.0，并在75℃条件下保温2小时，静置14小时，过滤，滤渣再加入5倍体积量纯化水，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，搅拌使滤渣溶解，得到滤渣溶解液；

2）向上述滤渣溶解液中加入其体积0.5%的药用炭吸附15分钟，最后加入滤渣溶解液等体积的95%的乙醇溶液，搅拌均匀，静置12小时，过滤，滤液用浓盐酸调节pH值至2.0，缓慢搅拌至完全均匀，静置12小时，抽滤，滤渣用乙醇洗涤后，干燥得黄芩提取物。

实施例2双黄连提取物的制备方法

一、金银花提取物的制备

1）取金银花适量，先加入6倍体积量纯化水，70℃温浸60分钟，过滤，滤液备用，滤渣再加入4倍体积量纯化水，70℃温浸60分钟，过滤，合并两次滤液，浓缩滤液至相对密度1.18(80℃±5℃测)，冷至室温，加入乙醇至含醇量75%，搅拌均匀后，静置14小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再将滤液浓缩至相对密度1.18(80℃±5℃测)，得到浓缩膏1；

2）向上述浓缩膏1中加入3倍体积量纯化水，搅拌，静置14小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.18(80℃±5℃测)，滤液中再加入乙醇至含醇量80%，边加边搅拌，静置14小时，取上清液，用40%NaOH溶液测调pH值8.5，静置25小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再浓缩滤液至相对密度1.18(80℃±5℃测)，得到浓缩膏2；

3）向上述浓缩膏2中加入3倍体积量的纯化水，边加边搅拌，加水完成后继续搅拌30分钟,静置1小时，过滤，将滤液以1.0BV/h流速过DM-130大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将2倍量（V/V)的20%乙醇以1.0BV/h流速过DM-130大孔树脂柱洗脱，合并两次洗脱液，回收洗脱液中的乙醇至洗脱液无醇味，浓缩洗脱液至相对密度1.12（80℃测），即得精制的金银花提取物。

二、连翘提取物的制备

1）取连翘适量，加入6倍体积量纯化水，浸泡30分钟后，煮沸1.5小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入4倍体积量纯化水，煮沸1.5小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入4倍体积量纯化水，煮沸1.5小时，过滤，合并三次滤液，浓缩滤液至相对密度1.18（80℃±5℃测），冷至室温，加入乙醇至含醇量75%，边加边搅拌，静置14小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再将滤液浓缩至相对密度1.18(80℃±5℃测)，得到浓缩膏3；

2）向上述浓缩膏3中加入3倍体积量纯化水，搅拌，静置14小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.18(80℃±5℃测)，滤液中再加入乙醇至含醇量达到85%，边加边搅拌，静置14小时，取上清液，用20%氢氧化钠溶液测调PH值8.5，静置25小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再浓缩滤液至相对密度1.15(80℃±5℃测)，得到浓缩膏4；

3）向上述浓缩膏4中加入3倍体积量的纯化水，边加边搅拌，静置30分钟，过滤，将滤液以1.0BV/h流速过HPD-100大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将3倍量（V/V)的10%乙醇以1.0BV/h流速过HPD-100大孔树脂柱洗脱，洗脱液弃去，再用3倍量V/V)的70%乙醇过HPD-100大孔树脂柱洗脱，洗脱流速为1.0BV/h，与第一次洗脱液合并，回收合并洗脱液中乙醇并浓缩至1.16（80℃测），即得精制的连翘提取物。

三、黄芩提取物的制备

1）取黄芩适量，加入6倍体积量纯化水，浸泡30分钟，煎煮2小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入4倍体积量纯化水，煎煮1.5小时，过滤，合并滤液；用浓盐酸调合并滤液pH值至2.0，并在75℃条件下保温1.5小时，静置16小时，过滤，滤渣再加入4倍体积量纯化水，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至6.5，搅拌使滤渣溶解，得到滤渣溶解液；

2）向上述滤渣溶解液中加入其体积0.5%的药用炭吸附20分钟，最后加入滤渣溶解液等体积的90%的乙醇溶液，搅拌均匀，静置12小时，过滤，滤液用浓盐酸调节pH值至2.0，缓慢搅拌至完全均匀，静置12小时，抽滤，滤渣用乙醇洗涤后，干燥得黄芩提取物。

实施例3双黄连提取物的制备方法

一、金银花提取物的制备

1）取金银花适量，先加入10倍体积量纯化水，80℃温浸120分钟，过滤，滤液备用，滤渣再加入8倍体积量纯化水，80℃温浸120分钟，过滤，合并两次滤液，浓缩滤液至相对密度1.22(80℃±5℃测)，冷至室温，加入乙醇至含醇量80%，搅拌均匀后，静置18小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再将滤液浓缩至相对密度1.20(80℃±5℃测)，得到浓缩膏1；

2）向上述浓缩膏1中加入5倍体积量纯化水，搅拌，静置20小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.22(80℃±5℃测)，滤液中再加入乙醇至含醇量85%，边加边搅拌，静置18小时，取上清液，用40%NaOH溶液测调pH值9.0，静置30小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再浓缩滤液至相对密度1.20(80℃±5℃测)，得到浓缩膏2；

3）向上述浓缩膏2中加入5倍体积量的纯化水，边加边搅拌，加水完成后继续搅拌60分钟,静置2小时，过滤，将滤液以1.5BV/h流速过ADS-F8大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将4倍量（V/V)的25%乙醇以1.5BV/h流速过ADS-F8大孔树脂柱洗脱，合并两次洗脱液，回收洗脱液中的乙醇至洗脱液无醇味，浓缩洗脱液至相对密度1.14（80℃测），即得精制的金银花提取物。

二、连翘提取物的制备

1）取连翘适量，加入10倍体积量纯化水，浸泡30分钟后，煮沸2小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入6倍体积量纯化水，煮沸1.5小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入6倍体积量纯化水，煮沸1.5小时，过滤，合并三次滤液，浓缩滤液至相对密度1.22（80℃±5℃测），冷至室温，加入乙醇至含醇量80%，边加边搅拌，静置20小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再将滤液浓缩至相对密度1.20(80℃±5℃测)，得到浓缩膏3；

2）向上述浓缩膏3中加入5倍体积量纯化水，搅拌，静置20小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.22(80℃±5℃测)，滤液中再加入乙醇至含醇量达到85%，边加边搅拌，静置20小时，取上清液，用20%氢氧化钠溶液测调PH值9.0，静置35小时，过滤，回收滤液中的乙醇至滤液无醇味，再浓缩滤液至相对密度1.20(80℃±5℃测)，得到浓缩膏4；

3）向上述浓缩膏4中加入5倍体积量的纯化水，边加边搅拌，静置60分钟，过滤，将滤液以1.5BV/h流速过DA-201大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将4倍量（V/V)的15%乙醇以1.5BV/h流速过DA-201大孔树脂柱洗脱，洗脱液弃去，再用4倍量V/V)的75%乙醇过DA-201大孔树脂柱洗脱，洗脱流速为1.5BV/h，与第一次洗脱液合并，回收合并洗脱液中乙醇并浓缩至1.20（80℃测），即得精制的连翘提取物。

三、黄芩提取物的制备

1）取黄芩适量，加入10倍体积量纯化水，浸泡60分钟，煎煮2小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入8倍体积量纯化水，煎煮2.5小时，过滤，合并滤液；用浓盐酸调合并滤液pH值至2.5，并在75℃条件下保温2.5小时，静置18小时，过滤，滤渣再加入6倍体积量纯化水，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，搅拌使滤渣溶解，得到滤渣溶解液；

2）向上述滤渣溶解液中加入其体积0.5%的药用炭吸附20分钟，最后加入滤渣溶解液等体积的95%的乙醇溶液，搅拌均匀，静置24小时，过滤，滤液用浓盐酸调节pH值至2.0，缓慢搅拌至完全均匀，静置24小时，抽滤，滤渣用乙醇洗涤后，干燥得黄芩提取物。

实施例4双黄连口服液的制备

1）金银花提取物的制备:制备方法同实施例1

2）连翘提取物的制备:制备方法同实施例1

3）黄芩提取物的制备:制备方法同实施例1

4）双黄连口服液的制备：取金银花提取物3.4kg、连翘提取物3.4kg，黄芩提取物5.6kg，加注射用水稀释至30L，混合均匀，绢布过滤，微孔滤膜过滤，再加注射用水稀释至40L，加入香精0.1ml，调pH值至7.0，定容至50L，搅拌均匀，静置12h，精滤，灌装，115℃灭菌40分钟，即得。

实施例5双黄连注射液的制备

1）金银花提取物的制备:制备方法同实施例1

2）连翘提取物的制备:制备方法同实施例1

3）黄芩提取物的制备:制备方法同实施例1

4）双黄连注射液的制备：分别取金银花提取物、连翘提取物和黄芩提取物按生药比1：2：1，将金银花、连翘提取物加注射用水稀释，混匀后加入黄芩提取物搅拌，溶解得双黄连浓配液；绢布过滤，微孔滤膜过滤，加注射用水稀释至全量的90%，加入处方量的药用炭，煮沸15～30分钟并冷却至70℃以下，调pH值6.8～7.5,定容至全量，搅拌均匀，进行粗滤，粗滤后的药液冷却至10～40℃，精滤，灌装，115～118℃灭菌30分钟，即得。

对比例1双黄连提取物的制备

取实施例1中同批次的金银花、连翘及黄芩按CN101040915A“一种双黄连注射液的制备方法”中实施例1项下方法制备双黄连提取物：

一、金银花浓浸膏的制备：

1）称取金银花，第一遍加10倍量水，于80℃保温浸泡1小时，第二遍加入10倍量水，于80℃保温浸泡40分钟，分次过滤，收取滤液浓缩至相对密度1.20±0.02（80±5℃测），待温度降至40℃以下，加入90%乙醇至含醇量75%，静置12小时，过滤，滤液回收乙醇至无乙醇味，并浓缩至相对密度1.18（80±5℃测），得到浓缩膏1；

2）待冷至40℃以下，向上述浓缩膏1中加入膏重4倍量的纯化水，轻轻搅拌，静置12小时，取上清液过滤，滤液浓缩至相对密度1.20±0.02(80±5℃测)；待冷至40℃以下，边搅拌边加入95%乙醇，使含醇量达到85%，静置12小时，虹吸上清液用20%氢氧化钠调pH值8.5，静置24小时，取上清液过滤，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至相对密度1.15～1.20(80℃±5℃测)，得浓缩膏2，即金银花浓浸膏。

二、连翘浓浸膏的制备：

1）称取连翘，第一遍加入8倍量水，浸泡30分钟，加热煮沸1.5小时，过滤；第二、第三次各6倍量水，煮沸1.0小时，合并药液浓缩至相对密度1.18～1.22（80±5℃测），待温度降至40℃以下，加入90%乙醇至含醇量75%，沉淀12小时，过滤，滤液回收乙醇至无乙醇味，得到浓缩膏3；

2）待冷至40℃以下，向上述浓缩膏3中加入膏重4倍量的纯化水，搅拌，静置12小时，取上清液过滤，滤液浓缩至相对密度1.18～1.22(80±5℃测)；待冷至40℃以下，边搅拌边加95%乙醇，使含醇量达到85%，静置12小时，虹吸上清液用20%氢氧化钠调pH值9.0，静置24小时，取上清液过滤，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至相对密度1.15～1.20(80±5℃测)，得到浓缩膏4，即连翘浓浸膏。

三、黄芩苷的制备：

1）取黄芩片，加入8倍量水，煎煮2小时，过滤，加入6倍量水，煎煮1小时，合并滤液，浓缩至生药量5倍，静置1小时后滤取上清液用2mol/L盐酸调pH值至1.0，80℃保温1小时，静置12小时，滤过，沉淀加8倍量水，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至7.5，再加等量乙醇，搅拌使溶解，过滤，滤液用2mol/L盐酸调pH值至1.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过，沉淀用乙醇洗至pH值为7.5，回收乙醇，离心得沉淀物；取沉淀物加入2倍量（以黄芩苷干品重量计）40℃以下的注射用水，浸润4小时，再加入4倍量（以黄芩苷干品重量计）40℃以下的注射用水，搅拌2分钟后缓缓加入10%氢氧化钠溶液，调pH值至6.5，搅拌使滤渣溶解，得到滤渣溶解液；

2）向上述滤渣溶解液中加入加入0.5%的药用炭，煮沸30分钟，待冷却至60℃后，加入药液体积0.5倍量的90%乙醇，趁热过滤，滤液用10%HCl调pH值至1.5，60±5℃保温30分钟，静置4小时，弃去上清液，沉淀物用95%的乙醇洗涤至pH>4.0，抽干，干燥得黄芩苷。

对比例2双黄连提取物的制备

取实施例1中同批次的金银花、连翘及黄芩按CN1546095A“用于生产浓缩型双黄连口服液的制备方法”中实施例1项下方法制备双黄连提取物：

1、取黄芩，加入10倍量水煎煮2小时，滤过，药渣再加6倍量水煎煮二次，各1小时，滤过，合并三次滤液，滤液浓缩并在80℃时加入盐酸溶液适量调节pH值至2.0，保温1小时，放置过夜，将下部沉淀加8倍量水搅匀，用40%氢氧化钠溶液调节pH至7.0，再加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用浓盐酸调节pH至2.0，在60℃保温30分钟后放置过夜，滤过，沉淀用乙醇洗至pH至7.0，挥尽乙醇得黄芩粗提取物；再用6倍量水混悬，调节pH至7.0，搅拌至溶解，并加入黄芩粗提取物量3%活性炭，搅拌，在80℃以上保温30分钟，过滤，滤液加入稀盐酸，pH调节至7，在搅拌下加入等量95%乙醇，抽滤，用盐酸调至2.8,60℃保温30分钟，放置过夜，经抽干得到精制黄芩苷提取物。

2、取金银花、连翘，按1:2的比例投料，加入生药总量12倍量水温浸半小时后，加热至沸腾保持1.5小时。过滤得滤液，药渣再加8倍量水微沸保持1.5小时，得滤液，弃去药渣；合并两次滤液，蒸发浓缩至相对密度为1.21（在80℃条件下测），放冷，在搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达70%，置冷藏室内静置24小时，虑取上清液，残渣加乙醇适量，搅匀，静置24小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味后放出，得金银花、连翘粗提取物（提取物A）；再用一定量的正丁醇分4次进行萃取，滤清萃取液，减压回收正丁醇，得精制金银花、连翘提取物（提取物B）。

对比例3双黄连提取物的制备

1、取实施例1中同批次的金银花按CN101933967A“一种金银花提取物的制备方法”中实施例1项下方法制备金银花提取物：1）超高压提取：取金银花药材，破碎成长约3mm的小段，放入超高压提取罐，加入7倍量75%乙醇；加压到200MPa，保压15min后，立即泄压，过滤，将滤液浓缩至原体积的30%后，冷藏过夜；将冷藏液用离心机以转速5000r/min离心分离20min；2）纯化：将离心后得到的上清液减压回收乙醇至流浸膏状（提取物A），然后加入生药等量的水溶解，上大孔吸附树脂柱（型号：D-101），依次用5倍树脂柱体积的水洗脱，然后再用8倍树脂柱体积的20%乙醇洗脱，减压回收乙醇洗脱液至无醇味，冷冻干燥，得金银花提取物（提取物B）。

2、取实施例1中同批次的连翘按CN101085043A“一种连翘提取物的制备方法”中实施例1项下方法制备连翘提取物：称取连翘，加入10倍量纯化水煎煮1.5小时，滤过，得药液，药渣再加8倍量水煎煮50min，滤过，得药液，弃药渣，合并两次煎液，浓缩至相对密度1.15（60℃），放凉，搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达70%，冷藏（5℃）24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度1.05（60℃），放凉，冷藏（5℃）48小时，得提取物A；取出提取物A，滤过，用生药2倍量的水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，稠膏加水溶解，冷藏（5℃）48小时，取出，滤过，滤液浓缩至稠膏，60℃减压干燥，粉碎，得连翘提取物（提取物B）。

3、按对比例1中的黄芩制备方法制备黄芩提取物。

实验例1金银花、连翘、黄芩提取物各项指标测定结果

将实施例1-3、对比例1-3所得各提取物进行指标测定，结果见表1。

表1金银花、连翘、黄芩提取物各项指标测定结果

上述结果表明，实施例1-3样品中连翘浓缩膏、金银花浓缩膏经过精制步骤后的纯度明显高于对比例1-3的样品：采用大孔树脂对金银花提取物进行树脂纯化，可使绿原酸纯度提高1倍以上，对连翘提取物进行树脂纯化，可使连翘苷纯度提高3-4倍以上。

与对比例1-3的制备方法相比，本发明通过对双黄连各成分的初提工艺进行调整，并结合大孔树脂进行精制，从多个方面对双黄连提取工艺进行优化，在保证有效成分及各项质量指标合格的前提下，大幅减少总固体，有效去除了无机杂质、非极性大分子无效杂质等的量，提高了制剂的品质及安全性。

实验例2

1、双黄连口服液检测结果

将采用实施例4及市售样品1、2、3进行指标测定(按2010版《中国药典》一部双黄连口服液标准项下方法)，结果见表2。

市售样品1（黑龙江瑞格制药有限公司）；市售样品2（黑龙江金九药业股份有限公司）；市售样品3（黑龙江珍宝岛药业股份有限公司）

表2双黄连口服液检测结果

上述试验结果表明，实施例4样品的各主要成分的含量稍高于其他市售样品，但总固体的量明显低于市售样品，用本发明的提取方法制备的提取物制成制剂后，总固体大幅减少，从而减少了杂质的量，增加了制剂的安全性，使双黄连口服液的品质更优。

2、双黄连口服液稳定性检测结果

对实施例4进行稳定性检测，结果见表3。

表3双黄连口服液稳定性检测结果

上述稳定性试验数据表明，该双黄连口服液在30个月内含量与固形物均无明显变化,用该方法制备的双黄连提取物制成制剂后各项指标稳定，使用本发明提取方法制备的提取物可以用于双黄连口服液制剂的制备。

实验例3

1、双黄连注射液的检测方法

1）金银花的含量测定

照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥD）测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水－冰醋酸（20：80：1）为流动相；检测波长为324nm；流速：1ml/min；柱温：室温。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000。取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含40μg的溶液，即为对照品溶液。精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。

2）连翘的含量测定

照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥD）测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈－水（25：75）为流动相；检测波长为278nm；流速：1ml/min；柱温：室温。理论板数按连翘苷峰计算应不低于2000。取连翘苷对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成每1ml含60μg的溶液，即为对照品溶液。精密量取本品10ml，置中性氧化铝柱（100～120目6g，内径1cm）上，用70%乙醇40ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加50%乙醇适量，温热使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。

3）黄芩的含量测定

照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ D）测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－冰醋酸－水（48：1：52）为流动相；检测波长为276nm，理论板数按黄芩苷峰计算不低于1000。精密称取黄芩苷对照品，加50%甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得对照品溶液。精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各8μl，分别注入液相色谱仪，分别量取峰面积，外标法计算含量，即得。

2、双黄连注射液检测结果

将采用实施例5及市售样品4、5、6进行指标测定，结果见表4。

市售样品4（多多药业有限公司）；市售样品5（哈尔滨珍宝制药有限公司）；市售样品6（黑龙江省格润药业有限责任公司）。

表4双黄连注射液检测结果

上述试验结果表明，实施例5样品在各主要成分的含量稍高于其他市售样品，但总固体的量明显低于市售样品，用本发明的提取方法制备的提取物制成注射液后，总固体大幅减少，从而减少了杂质的量，增加了制剂的安全性，使双黄连注射液的品质更优。

3、双黄连注射液稳定性检测结果

对实施例5进行稳定性检测，结果见表5。

表5双黄连注射液稳定性检测结果

上述稳定性试验数据表明，该双黄连注射液在30个月内含量与固形物均无明显变化,用该方法制备的双黄连提取物制成制剂后各项指标稳定，使用本发明提取方法制备的提取物可以用于双黄连口服液制剂的制备。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.一种双黄连提取物的提取方法，其特征在于，以金银花、黄芩、连翘为原料，通过水提醇沉法及大孔树脂精制，得到双黄连提取物。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述金银花的提取物的精制步骤：

向水提醇沉法得到的浓缩膏中加入3～5倍体积量的纯化水，边加边搅拌，加水完成后继续搅拌30～60分钟,静置1～2小时，过滤，将滤液以1.0～1.5BV/h流速过大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将2～4倍体积量的20～25%乙醇以1.0～1.5BV/h流速过大孔树脂柱洗脱，合并两次洗脱液，回收洗脱液中的乙醇至洗脱液无醇味，浓缩洗脱液至80℃测相对密度1.12～1.14，即得精制的金银花提取物。

3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，在金银花的提取物的精制过程中，所述大孔树脂为ADS-F8、ADS-17、HPD-750、HPD-100、HPD-450或DM-130中的一种。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述连翘的提取物的精制步骤：

向水提醇沉法得到的浓缩膏中加入3～5倍体积量的纯化水，边加边搅拌，静置30～60分钟，过滤，将滤液以1.0～1.5BV/h流速过大孔树脂柱洗脱，洗脱液备用，再将3～4倍量体积的10～15%乙醇以1.0～1.5BV/h流速过大孔树脂柱洗脱，洗脱液弃去，再用3～4倍量体积的70～75%乙醇过大孔树脂柱洗脱，洗脱流速为1.0～1.5BV/h，与第一次洗脱液合并，回收合并洗脱液中乙醇并浓缩至80℃测相对密度1.16～1.20，即得精制的连翘提取物。

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，在连翘的提取物的精制过程中，所述大孔树脂为ADS-F8、ADS-17、HPD-750、D-101、HPD-100、HPD-450或DA-201中的一种。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黄芩的提取物的制备步骤：

1）取黄芩适量，加入6～10倍体积量纯化水，浸泡30～60分钟，煎煮2小时，过滤，滤液备用，滤渣再加入4～8倍体积量纯化水，煎煮1.5～2.5小时，过滤，合并滤液；用浓盐酸调合并滤液pH值至1.5～2.5，并在75℃条件下保温1.5～2.5小时，静置14～18小时，过滤，滤渣再加入4～6倍体积量纯化水，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至6.5～7.0，搅拌使滤渣溶解，得到滤渣溶解液；

2）向上述滤渣溶解液中加入其体积0.5%的药用炭吸附15～20分钟，最后加入滤渣溶解液等体积的90～95%的乙醇溶液，搅拌均匀，静置12～24小时，过滤，滤液用浓盐酸调节pH值至2.0，缓慢搅拌至完全均匀，静置12～24小时，抽滤，滤渣用乙醇洗涤后，干燥得黄芩提取物。

7.一种权利要求1-6任一所述提取方法得到的双黄连提取物。

8.一种权利要求7所述双黄连提取物制得的双黄连口服剂型，其特征在于，所述口服剂型为口服液、片剂、胶囊剂、糖浆剂、颗粒剂、合剂或滴丸。

9.一种权利要求7所述双黄连提取物制得的双黄连注射剂型，其特征在于，所述注射剂型为注射液、冻干粉针或滴注液。