CN103461125A - 一种胡桃的组培快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胡桃的组培快速繁殖方法。包括无菌外植体的获得、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤。采用本发明所提供的成套技术方法对胡桃进行组织培养和微繁，解决了胡桃易变异，品质退化，繁殖率低等技术难题，达到了增殖系数高，成活率高，遗传性状稳定等要求，可以为胡桃的产业化生产提供一种周期短、繁殖率高的人工培育方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种胡桃的组培快速繁殖方法，属于生物技术领域。
背景技术
胡桃，别名核桃，落叶乔木，栽培历史悠久，是世界上具有重要经济价值的树种之一，也是常用药材之一，果仁用来入药，关于其繁殖技术，胡桃实生繁殖苗木，易发生变异，不能保持原有品种的优良性状，扦插不易生根，嫁接繁殖易褐变，成活率低，因此，利用组培技术研究胡桃的离体繁殖，大力提高繁殖速度，提高苗木的质量，对于大面积推广优选单株具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种胡桃的组培快速繁殖方法，由该方法所制备得到的胡桃组培幼苗生长周期短，增殖系数高，生根率高，遗传性状稳定，可以规模化的进行产业化生产。
本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：
取胡桃带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分钟，流水冲洗1小时，使用75%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒8min，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于WPM+10mg/L青霉素中，培养一段时间后，加入WPM+NAA0.1mg/L+6-BA0.3mg/L+5g/L牛血清蛋白进行诱导培养，培养条件采用150lx低光强下培养，PH值调到5.8，温度23℃，诱导出来的胡桃丛生芽转接于WPM+2，4-D2mg/L+NAA0.2mg/L+GA31-3mg/L上进行丛生芽增殖培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度1000lx，温度25℃，湿度70-80%，增殖后的无根芽苗栽种于蛭石：沙土=6：4配制的基质中，加入1/2MS+NAA0.4mg/L+IBA0.6mg/L营养液浇灌，置于苗床上，湿度90%，温度30℃，并遮盖三层薄膜，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境，移栽入大田进行大规模栽种，温度控制在20-25℃，定期喷施600倍的多菌灵溶液防止病虫害，喷施500PPM的PP333促进幼苗生长。
采用本发明制备的胡桃组培幼苗生产周期短、繁殖率高，增殖系数8.79，生根率95%，成活率90%。
下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
实施例1
取胡桃带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分钟，流水冲洗1小时，使用75%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒8min，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于WPM+10mg/L青霉素中，培养一段时间后，加入WPM+NAA0.1mg/L+6-BA0.3mg/L+5g/L牛血清蛋白进行诱导培养，培养条件采用150lx低光强下培养，PH值调到5.8，温度23℃，诱导出来的胡桃丛生芽转接于WPM+2，4-D1mg/L+NAA0.1mg/L+GA32mg/L上进行丛生芽增殖培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度1000lx，温度25℃，湿度70-80%，增殖后的无根芽苗栽种于蛭石：沙土=6：4配制的基质中，加入1/2MS+NAA0.2mg/L+IBA0.3mg/L营养液浇灌，置于苗床上，湿度90%，温度30℃，并遮盖三层薄膜，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境，移栽入大田进行大规模栽种，温度控制在20-25℃，定期喷施600倍的多菌灵溶液防止病虫害，喷施500PPM的PP333促进幼苗生长，增殖系数6.68，生根率85%，成活率80%。
实施例2
取胡桃带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分钟，流水冲洗1小时，使用75%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒8min，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于WPM+10mg/L青霉素中，培养一段时间后，加入WPM+NAA0.1mg/L+6-BA0.3mg/L+5g/L牛血清蛋白进行诱导培养，培养条件采用150lx低光强下培养，PH值调到5.8，温度23℃，诱导出来的胡桃丛生芽转接于WPM+2，4-D3mg/L+NAA0.3mg/L+GA32mg/L上进行丛生芽增殖培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度1000lx，温度25℃，湿度70-80%，增殖后的无根芽苗栽种于蛭石：沙土=6：4配制的基质中，加入1/2MS+NAA0.4 mg/L+IBA1mg/L营养液浇灌，置于苗床上，湿度90%，温度30℃，并遮盖三层薄膜，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境，移栽入大田进行大规模栽种，温度控制在20-25℃，定期喷施600倍的多菌灵溶液防止病虫害，喷施500PPM的PP333促进幼苗生长，增殖系数7.04，生根率89%，成活率82%。
实施例3
取胡桃带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分钟，流水冲洗1小时，使用75%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒8min，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于WPM+10mg/L青霉素中，培养一段时间后，加入WPM+NAA0.1mg/L+6-BA0.3mg/L+5g/L牛血清蛋白进行诱导培养，培养条件采用150lx低光强下培养，PH值调到5.8，温度23℃，诱导出来的胡桃丛生芽转接于WPM+2，4-D2mg/L+NAA0.1mg/L+GA32mg/L上进行丛生芽增殖培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度1000lx，温度25℃，湿度70-80%，增殖后的无根芽苗栽种于蛭石：沙土=6：4配制的基质中，加入1/2MS+NAA0.2 mg/L +IBA1mg/L营养液浇灌，置于苗床上，湿度90%，温度30℃，并遮盖三层薄膜，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境，移栽入大田进行大规模栽种，温度控制在20-25℃，定期喷施600倍的多菌灵溶液防止病虫害，喷施500PPM的PP333促进幼苗生长，增殖系数8.12，生根率93%，成活率87%。
实施例4
取胡桃带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分钟，流水冲洗1小时，使用75%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒8min，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于WPM+10mg/L青霉素中，培养一段时间后，加入WPM+NAA0.1mg/L+6-BA0.3mg/L+5g/L牛血清蛋白进行诱导培养，培养条件采用150lx低光强下培养，PH值调到5.8，温度23℃，诱导出来的胡桃丛生芽转接于WPM+2，4-D3mg/L+NAA0.2mg/L+GA32mg/L上进行丛生芽增殖培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度1000lx，温度25℃，湿度70-80%，增殖后的无根芽苗栽种于蛭石：沙土=6：4配制的基质中，加入1/2MS+NAA0.2 mg/L +IBA0.6mg/L营养液浇灌，置于苗床上，湿度90%，温度30℃，并遮盖三层薄膜，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境，移栽入大田进行大规模栽种，温度控制在20-25℃，定期喷施600倍的多菌灵溶液防止病虫害，喷施500PPM的PP333促进幼苗生长，增殖系数8.23，生根率93%，成活率88%。
Claims (8)
1.一种胡桃的组培快速繁殖方法，其步骤如下：
（1）外植体的处理：采用常规的组织培养方法对胡桃带芽的茎段进行消毒处理；
（2）诱导培养：使用WPM+NAA0.1mg/L+6-BA0.3mg/L+5g/L牛血清蛋白，作为诱导培养基，将步骤（1）获得的无菌的带芽茎段接种于上述培养基中；
（3）增殖培养：步骤（2）中诱导出来的胡桃丛生芽转接于WPM+2，4-D1-3mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+GA32mg/L上进行丛生芽增殖培养；
（4）试管外生根诱导：将步骤（3）增殖的丛生芽处理后接入含1/2MS+NAA0.2-0.4mg/L+IBA0.3-1mg/L营养液的基质中进行野外生根诱导和驯化培养；
（5）炼苗移栽到大田进行大规模培养。
2.根据权利要求1所述的一种胡桃的组培快速繁殖方法，其特征在于：外植体的灭菌方法为取胡桃带芽的茎段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分钟，流水冲洗1小时，使用75%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒8min，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于WPM培养基中。
3.根据权利要求1所述的一种胡桃的组培快速繁殖方法，其特征在于：培养基中加入10mg/L的青霉素，对胡桃内部的细菌进行杀灭。
4.根据权利要求1所述的一种胡桃的组培快速繁殖方法，其特征在于：诱导培养基中加入5g/L牛血清蛋白防止诱导过程中褐化现象严重。
5.根据权利要求1所述的一种胡桃的组培快速繁殖方法，其特征在于：诱导培养条件采用150lx低光强下培养，PH值调到5.8，温度23℃，降低多酚氧化酶的活性，减轻材料的褐变。
6.根据权利要求1所述的一种胡桃的组培快速繁殖方法，其特征在于：增殖培养中加入GA3，促进茎的伸长；诱导增殖的培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度1000lx，温度25℃，湿度70-80%。
7.根据权利要求1所述的一种胡桃的组培快速繁殖方法，其特征在于：本发明采用野外生根诱导的方法，采用蛭石：沙土=6：4配制基质，加入1/2MS+NAA0.2-0.4mg/L+IBA0.3-1mg/L营养液浇灌，置于苗床上，湿度90%，温度30℃，并遮盖三层薄膜，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境。
8.根据权利要求1所述的一种胡桃的组培快速繁殖方法，其特征在于：室内培养数周后，幼苗生长健壮，根系发达，移栽入大田进行大规模栽种，温度控制在20-25℃，定期喷施600倍的多菌灵溶液防止病虫害，喷施500PPM的PP333促进幼苗生长。
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| CN 201310423685 CN103461125A (zh) | 2013-09-17 | 2013-09-17 | 一种胡桃的组培快速繁殖方法 |
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| CN (1) | CN103461125A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107418828A (zh) * | 2017-09-21 | 2017-12-01 | 界首市靳莓果酒有限责任公司 | 一种富含黄酮的海棠果果酒酿造方法 |
| CN109220806A (zh) * | 2018-11-06 | 2019-01-18 | 云南省红河热带农业科学研究所 | 一种番木瓜组培苗生根及移栽的方法 |
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2013
- 2013-09-17 CN CN 201310423685 patent/CN103461125A/zh active Pending
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| CN109220806A (zh) * | 2018-11-06 | 2019-01-18 | 云南省红河热带农业科学研究所 | 一种番木瓜组培苗生根及移栽的方法 |
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