CN103444537A - 一种天南星的组培快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种天南星的组培快速繁殖方法。包括无菌外植体的获得、诱导培养、增值培养、生根培养、炼苗移栽等步骤。采用本发明所提供的成套技术方法对天南星进行组织培养和微繁，解决了天南星生长局限性，繁殖率低等技术难题，达到了增值系数高，成活率高的要求。可以为天南星的工业化生产提供一种周期短、繁殖率高的人工培育方法。
Description
一种天南星的组培快速繁殖方法
技术领域
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种天南星的组培快速繁殖方法。
背景技术
[0002] 天南星属天南星科，天南星属，多年生草本植物，主要分布在四川、吉林、黑龙江，云南贵州、辽宁、河南等地，除新疆、内蒙古其他大部分省区均有分布，属于阴生植物，需光照强度弱，生于林下、灌丛或荒地、草坡的阴湿地。是我国重要的中药材，主要功能主治咳嗽、眩晕、中风、癫痫、破伤风等疾病。天南星作为中国药典上品药物，目前在医药市场上发展前景广阔。
发明内容
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种天南星的组培快速繁殖方法，由该方法所制备得到的天南星组培幼苗生长周期短，增值系数高，生根率高，成活率高，可以规模化的进行大田生产。
[0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
一种天南星组培苗快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、诱导培养、增值培养、生根培养、炼苗移栽等，其主要步骤如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗洁精侵泡3分钟，流水冲洗30分钟，使用70%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于诱导培养基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，将诱导出来的天南星芽转接于MS+2，4-D (0.3mg/L)+KT (0.3mg/L)+GA3 (lmg/L)上进行丛生芽增值培养。培养条件为光期10小时，暗期14小时 ，光照强度lOOOlx，温度23°C，湿度70-80%，将增值的丛生芽接A 3/4MS+NAA (0.5 mg/L) +6-BA (0.4mg/L)培养基中进行生根诱导，培养条件调整为光期14小时，暗期10小时，光照强度40001x。待组培苗生长大约5cm大小时，掀开封口膜，培养10天左右，将腐殖土与沙子以1:1的比例混匀，121°C高压灭菌I h后，待用，将培养10天后的生根苗直接从瓶中取出，取出后用清水除去根部的培养基，栽培于灭过菌的土壤中，并遮盖三层薄膜，用1/2 MS大量元素水浇灌，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境。
[0005] 采用本发明制备的天南星组培幼苗生产周期短、繁殖率高，增值系数8.79，生根率95%，成活率80%。
[0006] 下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0007] 实施例1
一种天南星组培苗快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、诱导培养、增值培养、生根培养、炼苗移栽等，其主要步骤如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗洁精侵泡3分钟，流水冲洗30分钟，使用70%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于诱导培养基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，将诱导出来的天南星芽转接于MS+2，4-D (0.2mg/L)+KT (0.2mg/L)+GA3 (0.5mg/L)上进行丛生芽增值培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度10001X，温度23°C，湿度70-80%。将增值的丛生芽接入3/4MS+NAA (0.2 mg/L) +6-BA (0.2mg/L)培养基中进行生根诱导，培养条件调整为光期14小时，暗期10小时，光照强度40001X。待组培苗生长大约5cm大小时，掀开封口膜，培养10天左右，将腐殖土与沙子以1:1的比例混匀，121°C高压灭菌I h后，待用。将培养10天后的生根苗直接从瓶中取出，取出后用清水除去根部的培养基，栽培于灭过菌的土壤中，并遮盖三层薄膜，用1/2 MS大量元素水浇灌，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境。增值系数7.63，生根率87%，成活率70%。
[0008] 实施例2
一种天南星组培苗快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、诱导培养、增值培养、生根培养、炼苗移栽等，其主要步骤如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗洁精侵泡3分钟，流水冲洗30分钟，使用70%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于诱导培养基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，将诱导出来的天南星芽转接于MS+2，4-D (0.4mg/L)+KT (0.3mg/L)+GA3 (lmg/L)上进行丛生芽增值培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度lOOOlx，温度23°C，湿度70-80%，将增值的丛生芽接A 3/4MS+NAA (0.4 mg/L) +6-BA (0.4mg/L)培养基中进行生根诱导，培养条件调整为光期14小时，暗期10小时，光照强度40001x。待组培苗生长大约5cm大小时，掀开封口膜，培养10天左右，将腐殖土与沙子以1:1的比例混匀，121°C高压灭菌I h后，待用。将培养10天后的生根苗直接从瓶中取出，取出后用清水除去根部的培养基。栽培于灭过菌的土壤中，并遮盖三层薄膜，用1/2 MS大量元素水浇灌，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境。增值系数7.61，生根率87%，成活率78%。
[0009] 实施例3
一种天南星组培苗快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、诱导培养、增值培养、生根培养、炼苗移栽等，其主要步骤如`下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗洁精侵泡3分钟，流水冲洗30分钟，使用70%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于诱导培养基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，将诱导出来的天南星芽转接于MS+2，4-D (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)+GA3 (1.5mg/L)上进行丛生芽增值培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度lOOOlx，温度23°C，湿度70-80%。将增值的丛生芽接入3/4MS+NAA (0.5 mg/L) +6-BA (0.6mg/L)培养基中进行生根诱导。培养条件调整为光期14小时，暗期10小时，光照强度40001x。待组培苗生长大约5cm大小时，掀开封口膜，培养10天左右，将腐殖土与沙子以1:1的比例混匀，121°C高压灭菌I h后，待用，将培养10天后的生根苗直接从瓶中取出，取出后用清水除去根部的培养基，栽培于灭过菌的土壤中，并遮盖三层薄膜，用1/2 MS大量元素水浇灌，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境。增值系数7.93，生根率90%，成活率72%。
[0010] 实施例4
一种天南星组培苗快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、诱导培养、增值培养、生根培养、炼苗移栽等，其主要步骤如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗洁精侵泡3分钟，流水冲洗30分钟，使用70%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于诱导培养基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，将诱导出来的天南星芽转接于MS+2，4-D (0.3mg/L)+KT (0.4mg/L) +GA3 (1.5mg/L)上进行丛生芽增值培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度10001X，温度23°C，湿度70-80%，将增值的丛生芽接入3/4MS+NAA (0.4 mg/L) +6-BA (0.6mg/L)培养基中进行生根诱导，培养条件调整为光期14小时，暗期10小时，光照强度40001x，待组培苗生长大约5cm大小时，掀开封口膜，培养10天左右，将腐殖土与沙子以1:1的比例混匀，121°C高压灭菌I h后，待用，将培养10天后的生根苗直接从瓶中取出，取出后用清水除去根部的培养基，栽培于灭过菌的土壤中，并遮盖三层薄膜，用1/2 MS大量元素水浇灌，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境。增值系数7.74，生根率89%，成活率74%。
[0011] 实施例5
一种天南星组培苗快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、诱导培养、增值培养、生根培养、炼苗移栽等，其主要步骤如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗洁精侵泡3分钟，流水冲洗30分钟，使用70%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于诱导培养基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，将诱导出来的天南星芽转接于MS+2，4-D (0.4mg/L)+KT (0.3mg/L)+GA3 (1.5mg/L)上进行丛生芽增值培养，培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度lOOOlx，温度23°C，湿度70-80%。将增值的丛生芽接入3/4MS+NAA (0.5 mg/L) +6-BA (0.4mg/L)培养基中进行生根诱导，培养条件调整为光期14小时，暗期10小时，光照强度40001X，待组培苗生长大约5cm大小时，掀开封口膜，培养10天左右，将腐殖土与沙子以1:1的比例混匀，121°C高压灭菌I h后，待用。将培养10天后的生根苗直接从瓶中取出，取出后用清水除去根部的培养基。栽培于灭过菌的土壤中，并遮盖三层薄膜，用1/2 MS大量元素水浇灌，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境。增值系数8.24，生根率91%，`成活率76%。
Claims (7)
1.一种天南星的组培快速繁殖方法，其特征在于: (1)外植体的处理:采用常规的组织培养方法对天南星的芽进行消毒处理； (2)诱导培养:使用MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)作为诱导培养基，将无菌的芽接种于上述培养基中； (3)增值培养:步骤2中诱导的天南星芽转接于MS+2，4-D (0.2-0.4mg/L) +KT(0.2-0.4mg/L) +GA3 (0.5-1.5mg/L)上进行丛生芽增值培养； (4)生根诱导:将增值的丛生芽接入3/4MS+NAA (0.2-0.5)+6_BA (0.2-0.6mg/L)培养基中进行生根诱导； (5)炼苗移栽到大田进行大规模培养。
2.根据权利要求1所述的一种天南星的组培快速繁殖方法，其特征在于:外植体的灭菌方法为取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗洁精侵泡3分钟，流水冲洗30分钟，使用70%酒精处理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，无菌水冲洗5遍，切去切口，接种于培养基中。
3.根据权利要求1所述的一种天南星的组培快速繁殖方法，其特征在于:诱导增值的培养条件为光期10小时，暗期14小时，光照强度lOOOlx，温度23°C，湿度70-80%。
4.根据权利要求1所述的一种天南星的组培快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)诱导培养中，天南星芽容易产生褐化现象，在培养基中附加维生素C和活性炭。
5.根据权利要求1所述的一种天南星的组培快速繁殖方法，其特征在于:步骤(3)中设置了不同浓度的GA3促进 丛生芽的生长，GA3能促进小植株茎节伸长。
6.根据权利要求1所述的一种天南星的组培快速繁殖方法，其特征在于:步骤(4)中生根诱导需要较强的光照强度，培养条件调整为光期14小时，暗期10小时，光照强度40001x。
7.根据权利要求1所述的一种天南星的组培快速繁殖方法，其特征在于:炼苗移栽采用下述过程:在无菌培养室内，待组培苗生长大约5cm大小时，掀开封口膜，培养10天左右，将腐殖土与沙子以1:1的比例混匀，121°C高压灭菌I h后，待用，将培养10天后的生根苗直接从瓶中取出，取出后用清水除去根部的培养基，栽培于灭过菌的土壤中，并遮盖三层薄膜，用1/2 MS大量元素水浇灌，逐层揭开薄膜，直至幼苗能够适应外界环境。
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