CN103450346A - 一种依替巴肽的液相合成方法 - Google Patents

一种依替巴肽的液相合成方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103450346A
CN103450346A CN2013103901062A CN201310390106A CN103450346A CN 103450346 A CN103450346 A CN 103450346A CN 2013103901062 A CN2013103901062 A CN 2013103901062A CN 201310390106 A CN201310390106 A CN 201310390106A CN 103450346 A CN103450346 A CN 103450346A
Authority
CN
China
Prior art keywords
trt
cys
pro
lys
reaction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2013103901062A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103450346B (zh
Inventor
高秀伟
高秀岩
任孝敏
王朴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Bio Technology Co., Ltd.
Original Assignee
Yantai High Polypeptide Pharmaceutical Research & Development Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yantai High Polypeptide Pharmaceutical Research & Development Co Ltd filed Critical Yantai High Polypeptide Pharmaceutical Research & Development Co Ltd
Priority to CN201310390106.2A priority Critical patent/CN103450346B/zh
Publication of CN103450346A publication Critical patent/CN103450346A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103450346B publication Critical patent/CN103450346B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种液相合成多肽药物依替巴肽的方法，属于多肽的合成技术领域。所述技术方案如下：（1）合成肽段Mpa(R1)-Lys(R2)-Gly-OH；（2）合成肽段H-Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2；（3）将肽段Mpa(R1)-Lys(R2)-Gly-OH和肽段H-Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2缩合得到线性肽Mpa(R1)-Lys(R2)-Gly--Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2；（4）将线性肽Mpa(R1)-Lys(R2)-Gly--Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2环化形成分子内二硫键，得到侧链保护的环肽；（5）脱除环肽的侧链保护基；（6）将环肽Lys的侧链氨基转化为胍基，得到依替巴肽。本发明液相合成依替巴肽的方法，避免使用Fmoc-Har-OH这一特殊氨基酸衍生物为起始原料，建立了将环肽氨基转化为胍基的条件及方法，原料试剂均价廉易得，能有效降低产品成本，显著提高生产效益。

Description

一种依替巴肽的液相合成方法
技术领域
本发明涉及一种依替巴肽的液相合成方法，属于生物化学领域。
背景技术
依替巴肽由美国COR Therapeutic公司研发，1998年在美国上市，用于急性冠脉综合症的治疗。通过抑制凝血因子Ⅰ，与血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体结合，从而抑制血小板聚集。在临床应用中，对不稳定型心绞痛、急性心肌梗死、冠状动脉介入等心血管疾病的治疗均显示了良好疗效。目前，心血管疾病逐年增加已成为现代社会对人类健康威胁严重的常见病之一，依替巴肽做为多肽类心血管系统药物，具有药效高、毒副作用低等优点，得到临床的广泛应用，且需求量逐年增加。
当前依替巴肽的合成方法主要以固相合成法为主，专利CN200,910,104,99公开了一种依替巴肽的固相合成方法，该合成方法以Sieber树脂为固相合成树脂，采用Fmoc/tBu逐一偶联合成侧链全保护线性肽，在进行多肽偶联，将依替巴肽粗品从固相树脂上切除，再分离纯化得到依替巴肽纯品。虽然此法可以有效合成依替巴肽，但原料昂贵，且线性肽合成副产物多，原料利用率较低。
现有的液相合成法也有报道，专利CN200,910,101,674公开了一种新的依替巴肽的全液相合成方法，专利CN200,910,156,804提供了一种依替巴肽的合成液相制备工艺，但是这些液相合成方法中依替巴肽的收率较低，不适合工业化生产。
在目前已知的合成方法中，依替巴肽固相合成做为实验室研究是一种理想的方法，此法高效、迅速，但固相合成法原料利用率低，使用的试剂及溶剂昂贵且不易处理，常用的乙二硫醇、DMF等溶剂毒性大不适合产业化生产。此外该法采用价格昂贵的高精氨酸为起始原料，其在有机溶剂中溶解性差，导致副产物增加，降低了合成效率。此外，在现有的液相合成法中，因收率低只能小规模生产，仅局限在1L左右的反应釜内进行。这些都导致因依替巴肽售价高而增加患者的负担，因此，目前亟需一种新的可以规模化生产的合成方法来降低依替巴肽的成本，降低依替巴肽的售价，减轻患者的经济负担。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能大规模制备依替巴肽的液相合成方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种依替巴肽的液相合成方法，包括以下六个阶段（1）合成肽段Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；（2）合成肽段H-Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2；（3）将肽段Mpa(R1)-Lys(R2)-Gly-OH和肽段H-Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2缩合得到线性肽Mpa(R1)-Lys(R2)-Gly—Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2；（4）将线性肽Mpa(R1)-Lys(R2)-Gly—Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2环化形成分子内二硫键，得到侧链保护的环肽；（5）脱除环肽的侧链保护基；（6）将环肽Lys的侧链氨基转化为胍基，得到依替巴肽。具体步骤如下：
1）合成肽段Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2
将H-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2；然后脱除所述Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基，得到H-Pro-Cys(Trt)-NH2；再将得到的所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
2）合成肽段H-Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2
将Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基脱除，得到H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；然后将所述H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到四肽Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；再将所述Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基脱除，得到四肽H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
3）合成线性肽Mpa(R1)-Lys(R2)-Gly—Asp(R3)-Trp-Pro-Cys(R4)-NH2
首先制备三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH：
将H-Gly-OMe与Cbz-Lys(Boc)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe；然后将所述Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe中的Cbz保护基脱除，得到H-Lys(Boc)-Gly-OMe；再将所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe与Mpa(Trt)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe；再将所述三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe用NaOH溶液水解，然后再依次用水和乙醚浸洗，得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH，其中所述水和乙醚质量比为3:1；
其次将四肽H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到线性七肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
4）合成侧链保护的环肽
将线性七肽环化得到环肽
Figure BDA0000374692450000031
5）脱除环肽侧链保护基
将
Figure BDA0000374692450000041
溶于饱和的HCl和AcOEt溶液，脱除所述
Figure BDA0000374692450000042
侧链β-羧基上的-OtBu和ε-氨基上的-Boc的保护基，得到环七肽盐酸盐
Figure BDA0000374692450000043
6）合成依替巴肽
将环七肽盐酸盐
Figure BDA0000374692450000044
中Lys的侧链氨基在三氧化硫脲作用下转化为胍基，得到所述依替巴肽。
本发明中用到的缩略语如下：
本发明的有益效果是：本发明液相合成依替巴肽的方法，解决了形成分子内二硫键合成环肽过程中导致副产物生成的问题，确立了脱除环肽侧链保护基的相关条件，建立了将环肽氨基转化为胍基的条件及方法，提高了收率；该方法的原料试剂均价廉易得，能有效降低产品成本，显著提高生产效益。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，所述H-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Pro-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时；
所述的溶剂Et2NH和DCM，其两者混合的体积比范围为（1:9）-（3:7）。在比例范围内的溶剂具有脱除Fmoc最佳的环境：PH为9.1-9.8，且溶解能力强，使其脱除率达到98%以上。
所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Trp-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
进一步，所述脱除Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时；
所述H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Asp(OtBu)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时。
进一步，所述H-Gly-OMe与Cbz-Lys(Boc)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Gly-OMe、Cbz-Lys(Boc)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe中的Cbz保护基的具体步骤为：以Pd-C为催化剂，MeOH为溶剂，反应温度为0-35℃的条件下，通入H2进行催化氢化反应，反应时间12小时；其中，所述Pd-C催化剂的重量为所述Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe的10-20%，所述Pd-C催化剂的质量分数为10%；
所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe与Mpa(Trt)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe、Mpa(Trt)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe用NaOH溶液水解的工艺条件为：溶剂为1mol/L的NaOH溶液，反应温度为0～35℃；反应时间为1.5小时。
进一步，所述H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应时间4小时；其中，所述H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2、Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2。
在上述多肽合成过程中，涉及到两种氨基酸与偶和试剂的摩尔比为1:1:1.2，在这种配比下，两种氨基酸的偶合效率高，反应更加充分，采用过量20%的偶和试剂效果最佳，若小于20%，反应不充分，反应时间长，增加能耗；若大于20%反应剧烈，副反应增多，产生的副产物后处理困难，不仅会造成环境污染，还产生资源的浪费。
在上述多肽合成过程中，所述的偶和试剂是DIC、DCC中的一种或两种混合物与HOCt、HOBt中的一种或两种混合物的混合溶液，DIC、DCC中的一种或两种混合物与HOCt与HOBt中的一种或两种混合物体积比为0.1～0.5，其中DIC与DCC及HOCt与HOBt可以任意比例混合。
所述的偶和试剂可以高效合成HOCt活化酯或HOBt活化酯，该活化酯可以促进偶合物高效连接，不仅减少副反应的发生，还使反应更加充分，最终获得高收率的目标产物。
进一步，所述环化的具体步骤为：将所述Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与I2的DCM溶液，在溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下进行反应，反应时间4小时，得到反应液，反应液分别用Na2S2O3溶液和饱和NaCl溶液萃取，再用无水Na2SO4干燥，然后加乙醚析出粗产物，再用DCM和MeOH重结晶，得到环肽
Figure BDA0000374692450000071
其中，所述Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与I2的摩尔数比为1:5。
采用上述进一步方案的有益效果是：采用上述步骤可有效提高线性多肽的环化效率，副反应少，可达到80%以上的环化率，且环肽粗品容易分离提纯、重结晶效果好，后处理简单，降低了成本。
进一步，将所述溶于饱和的HCl/AcOEt溶液的反应条件为：在反应温度为0～35℃的条件下，反应0.5小时。
采用上述进一步方案的有益效果是：在上述条件下，反应条件温和，可使
Figure BDA0000374692450000082
在饱和HCl/AcOEt溶液中达到完全溶解，促进反应的顺利进行。
进一步，将环七肽盐酸盐
Figure BDA0000374692450000083
中Lys的侧链氨基在三氧化硫脲作用下转化为胍基的工艺条件为：在溶剂为MeOH，反应温度为0～35℃的条件下，反应2小时；其中，所述环七肽盐酸盐及三氧化硫脲的摩尔数之比为1:3。
采用上述进一步方案的有益效果是：在上述条件下，上述环七肽盐酸盐中Lys的侧链氨基转化为胍基的效率高，可达到75%以上，反应条件温和，反应时间短仅为2小时，副反应少，后处理简单，降低了成本。
进一步，所述三氧化硫脲的制作步骤为：将浓硫酸、双氧水及二氧化硫脲进行反应，反应温度为4℃，反应时间为12小时，水沉淀出所述三氧化硫脲；其中，所述浓硫酸、双氧水及二氧化硫脲的摩尔比为0.05:1:0.8。
采用上述进一步方案的有益效果是：在上述条件下，三氧化硫脲的合成效率高，副反应少，得到的三氧化硫脲含量高。
进一步，在上述提到的步骤中，所述洗涤步骤均为用NaHCO3溶液、盐酸溶液及饱和NaCl溶液依次进行洗涤；所述干燥剂均为无水Na2SO4干燥剂；所述减压温度均为30～40℃。
采用上述进一步方案的有益效果是：采用上述方法，操作简便，产物分离提纯效果好，后处理简单，产物纯度高。
进一步，所述步骤1）至步骤4）中，脱除所述Fmoc-保护基所用的试剂为含(1-95)%哌啶的DCM溶液或/和含(1-95)%乙二胺的DCM溶液；脱除Cbz-保护基的条件为:金属Pd催化下通入H2或脱除Cbz-保护基的试剂采用HBr/醋酸的混合溶剂，其中HBr与醋酸的体积比范围为：（1:4）-（1:2）。
采用上述进一步方案的有益效果是：采用所述方法，Fmoc-或Cbz-保护基的脱除效率高，达98.0%以上，该方法减少了副反应的发生，最终获得目标产物纯度高，后处理简便。
附图说明
图1是依替巴肽的HPLC图谱。
图2是依替巴肽的MS图谱。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1.Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
将H-Cys(Trt)-NH2（MW362.49，1.812g，5mmol）溶于10ml DCM中，搅拌下加入DIEA（MW129.24，1.1ml，6mmol）；Fmoc-Pro-OH（MW337.37，1.687g，5mmol）与HOCt(MW.157.13,0.943g,6.0mmol)溶于25ml DCM中，搅拌下缓缓滴加DIC(MW126.20,0.91ml,6.0mmol)于上述溶液中，反应15min。然后将此混合溶液滴加至H-Cys(Trt)-NH2/DIEA/DCM混合液中，室温下搅拌4h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M,25ml*2)、盐酸(0.2M,20ml*2)及饱和食盐水(30ml)依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得油状物，加Et2O放置，得白色固体,即是Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW.681.84)，并经HPLC分离纯化（HPLC:16.26min），产物质谱分析：MS=682.9[M+]。
实施例2.H-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
取Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW681.84,3.410g,5mmol)溶于50mlEt2NH/DCM(10%)中，反应6h,TLC进行监测，直至反应完全。反应液于30℃减压抽去DCM和Et2NH，残物用DCM溶解后用盐酸(0.1M)洗至中性，再依次Na2CO3(0.1M)、水及饱和食盐水萃取，无水Na2SO4干燥后，减压浓缩得H-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW.460.14)，并经HPLC分离纯化（HPLC:8.79min），产物质谱分析：MS=462.1[M+]。
实施例3.Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
将H-Pro-Cys(Trt)-NH2（MW459.60，2.298g，5mmol）溶于15ml DCM中，搅拌下加入DIEA（MW129.24，1.1ml，6mmol）；Fmoc-Trp-OH（MW426.46，2.132g，5mmol）与HOCt(MW.157.13,0.943g,6.0mmol)溶于30ml DCM中，搅拌下缓缓滴加DIC(MW126.20,0.91ml,6.0mmol)于上述溶液中，反应15min。然后将此混合溶液滴加至H-Pro-Cys(Trt)-NH2/DIEA/DCM混合液中，室温下搅拌6h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M,25ml*2)、盐酸(0.2M,20ml*2)及饱和食盐水(30ml)依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得油状物，加DCM/Et2O结晶，得白色固体Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW.868.05)，并经HPLC分离纯化（HPLC:11.63min），产物质谱分析：MS=869.1[M+]。
实施例4.H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
取Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW868.05,2.604g,3mmol)溶于50mlEt2NH/DCM(10%)中，反应6h,TLC进行监测，直至反应完全。反应液于30℃减压抽去DCM和Et2NH，残物用DCM溶解后用盐酸(0.1M)洗至中性，再依次Na2CO3(0.1M)、水及饱和食盐水萃取，无水Na2SO4干燥后，减压浓缩得H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW.645.81)，并经HPLC分离纯化（HPLC:10.23min），产物质谱分析：MS=647.4[M+]。
实施例5.Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
将H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW645.81,1.937g,3mmol)溶于15ml DCM中，搅拌下加入DIEA(MW129.24,0.63ml,3.6mmol)；Fmoc-Asp(OtBu)-OH(MW411.45,1.358g,3.3mmol)与HOCt(MW157.13,0.567g,3.6mmol)溶于30ml无水DCM中，搅拌下缓缓滴加DIC(MW126.20,0.54ml,3.6mmol)于上述溶液中，活化15min。然后将此混合溶液滴加至H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2/DIEA/DCM混合溶液中，室温下搅拌6h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M,25ml*2)、盐酸(0.2M,20ml*2)及饱和食盐水(30ml)依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得油状物，加DCM/Et2O4℃放置，得白色固体,即Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW.1039.25)，并经HPLC分离纯化（HPLC:11.10min），产物质谱分析：MS=1040.2[M+]。
实施例6.H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
取Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW1039.25,2.079g,2mmol)溶于50ml Et2NH/DCM(10%)中，反应6h,TLC进行监测，直至反应完全。反应液于30℃减压抽去DCM和Et2NH，残物用DCM溶解后用盐酸(0.1M)洗至中性，再依次Na2CO3(0.1M)、水及饱和食盐水萃取，无水Na2SO4干燥后，减压浓缩得H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW.817.01)，并经HPLC分离纯化（HPLC:9.91min），产物质谱分析：MS=819.1[M+]。
实施例7.Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe的制备
将H-Gly-OMe.HCl（MW125.55，0.628g，5mmol），混悬于10ml DCM中，搅拌下加入DIEA（MW129.24，1.95ml，11.0mmol)；将Cbz-Lys(Boc)-OH（MW125.55，0.63g，5mmol)与HOCt（MW157.13，0.943g，6mmol）溶于25ml DCM中，搅拌下缓慢滴加DIC（MW126.20，0.91ml，6.0mmol），反应15min。然后将此混合溶液滴加至H-Gly-OMe.HCl/DIEA/DCM溶液中，室温下搅拌4h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M，25ml*2)、盐酸（0.2M，20ml*2）及饱和食盐水（30ml）依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得油状物，加乙醚放置，得白色固体,即是Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe（MW.451.51），并经HPLC分离纯化（HPLC:9.21min），产物质谱分析：MS=453.4[M+]。
实施例8.H-Lys(Boc)-Gly-OMe的制备
取Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe（MW.451.51，2.258g，5mmol）溶于60ml MeOH中，加入Pd-C（120mg），通入H2进行催化氢化，12h后TLC检测反应完全，滤除Pd-C，减压浓缩。得胶状固体为H-Lys(Boc)-Gly-OMe(MW.317.38)，并经HPLC分离纯化（HPLC:8.54min），产物质谱分析：MS=318.9[M+]。
实施例9.Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe的制备
将H-Lys(Boc)-Gly-OMe（MW317.38，1.587g，5mmol）溶于15ml无水DCM中，搅拌下加入DIEA（MW129.24，1.1ml，6mmol）；将Mpa(Trt)-OH（MW348.45，1.742g，5mmol）与HOCt(MW.157.13，0.943g，6.0mmol)溶于30mlDCM中，搅拌下缓慢滴加DIC（MW126.20，0.91ml，6.0mmol），活化15min。然后将此混合溶液滴加至H-Lys(Boc)-Gly-OMe/DIEA/DCM中，室温搅拌6h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M，25ml*2)、盐酸（0.2M，20ml*2）及饱和食盐水（30ml）依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得油状物，加DCM/Et2O结晶，得白色固体Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe（MW.647.82），并经HPLC分离纯化（HPLC:11.16min），产物质谱分析：MS=649.7（M+）。
实施例10.Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH的制备
取Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe(MW647.82，1.943g,3mmol)溶解于55mlMeOH中，搅拌下加入NaOH溶液(1M,6ml)，TLC跟踪反应，1.5h反应完全。加1M盐酸3ml，减压抽去溶剂后，加1M盐酸5ml，得白色絮状物，抽滤，水、乙醚浸洗，得白色固体Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH（MW.633.80），并经HPLC分离纯化（HPLC:11.16min），产物质谱分析：MS=635.6[M+]。
实施例11.Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
将H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW817.01,1.634g,2mmol)溶于15ml DCM中，搅拌下加入DIEA(MW129.24,0.42ml,2.4mmol)；Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH(MW633.80，1.268g,2mmol)与HOCt(MW157.13,0.314g,2.4mmol)溶于30ml DCM中，搅拌下缓缓滴加DIC(MW126.20,0.36ml,2.4mmol)于上述溶液中，活化15min。然后将此混合溶液滴加至H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2/DIEA/DCM混合溶液中，室温下搅拌4h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M,25ml*2)、盐酸(0.2M,20ml*2)及饱和食盐水(30ml)依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得油状物，加乙醚超声，得淡黄色固体，DCM/Et2O重结晶，得淡黄色固体Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW.1432.79)，并经HPLC分离纯化（HPLC:8.92min），产物质谱分析：MS=1434.2[M+]。
实施例12.
Figure BDA0000374692450000131
的制备
将Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW1432.79,1.433g,1mmol)溶于1L DCM中，搅拌下缓慢滴加I2(MW253.81,1.269g,5mmol)的DCM溶液200ml，TLC跟踪反应，4h反应完全，反应液用Na2S2O3溶液(0.05M，200ml*2)、饱和NaCl溶液(200ml)萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得到的粗产物用乙醚浸洗，DCM/MeOH重结晶后得白色固体
Figure BDA0000374692450000132
(MW.946.14)，并经HPLC分离纯化（HPLC:6.01min），产物质谱分析：MS=948.6[M+]。
实施例13.的制备
取
Figure BDA0000374692450000141
(MW946.14，0.946g,1mmol)溶解于60ml饱和HCl/AcOEt溶液中，室温反应30min，有不溶物产生，TLC检测反应完全，抽滤，得白色固体，硅胶柱层析，得环七肽盐酸盐
Figure BDA0000374692450000142
(MW.826.38)，并经HPLC分离纯化（HPLC:4.92min），产物质谱分析：MS=791.1[M+]。
实施例14.依替巴肽的制备
取
Figure BDA0000374692450000143
(MW826.38，0.826g,1mmol)，溶于15ml MeOH中，加DIEA(MW129.24，0.70ml,4mmol)，室温搅拌下缓慢加入三氧化硫脲一水合物(MW142.13,0.426g,3mmol)，TLC跟踪反应，2h反应完全，坂口反应检查呈红色(取反应液0.2ml，加甲醇至1ml，再加10%NaOH溶液0.5ml，0.2%α-萘酚2滴，混匀后再加次氯酸钠溶液2滴)，减压抽去溶剂，加2ml MeOH溶解，滤去不溶物，MeOH/DCM结晶，得白色固体为依替巴肽(MW.831.96)，并经HPLC分离纯化（HPLC:4.62min,如附图1），产物质谱分析：如附图2，MS=832.6[M+]。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (11)

1.一种依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将H-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2；然后脱除所述Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基，得到H-Pro-Cys(Trt)-NH2；再将得到的所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
2）将步骤1）中得到的Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基脱除，得到H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；然后将所述H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到四肽Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；再将所述Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基脱除，得到四肽H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2，备用；
3）将H-Gly-OMe与Cbz-Lys(Boc)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe；然后将所述Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe中的Cbz保护基脱除，得到H-Lys(Boc)-Gly-OMe；再将所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe与Mpa(Trt)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe；再将所述三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe用NaOH溶液水解，然后再依次用水和乙醚浸洗，得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH，其中所述水和乙醚质量比为3:1；
4）将步骤2）中得到的四肽H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与步骤3）中得到的三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到线性七肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
5）将步骤4）得到的线性七肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2环化得到环肽
Figure FDA0000374692440000021
6）将步骤5）得到的
Figure FDA0000374692440000022
溶于饱和的HCl和AcOEt溶液，脱除所述侧链β-羧基上的-OtBu和ε-氨基上的-Boc的保护基，得到环七肽盐酸盐
Figure FDA0000374692440000024
7）将环七肽盐酸盐
Figure FDA0000374692440000025
中Lys的侧链氨基在三氧化硫脲作用下转化为胍基，得到所述依替巴肽。
2.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤1）中，所述H-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC、DCC中的一种或两种混合物与HOCt、HOBt、HOAt中的一种或两种混合物的混合溶液，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Pro-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时；
所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Trp-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2。
3.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤2）中，所述脱除Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时；
所述H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Asp(OtBu)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时。
4.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤3）中，所述H-Gly-OMe与Cbz-Lys(Boc)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC、DCC中的一种或两种混合物与HOCt、HOBt、HOAt中的一种或两种混合物的混合溶液，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Gly-OMe、Cbz-Lys(Boc)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe中的Cbz保护基的具体步骤为：以Pd-C为催化剂，MeOH为溶剂，反应温度为0-35℃的条件下，通入H2进行催化氢化反应，反应时间12小时；其中，所述Pd-C催化剂的重量为所述Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe的10-20%，所述Pd-C催化剂的质量分数为10%；
所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe与Mpa(Trt)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe、Mpa(Trt)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe用NaOH溶液水解的工艺条件为：溶剂为1mol/L的NaOH溶液，反应温度为0～35℃；反应时间为1.5小时。
5.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤4）中，所述H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC、DCC中的一种或两种混合物与HOCt、HOBt、HOAt中的一种或两种混合物的混合溶液，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应时间4小时；其中，所述H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2、Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2。
6.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤5）中，所述环化的具体步骤为：将所述Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与I2的DCM溶液，在溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下进行反应，反应时间4小时，得到反应液，反应液分别用Na2S2O3溶液和饱和NaCl溶液萃取，再用无水Na2SO4干燥，然后加乙醚析出粗产物，再用DCM和MeOH重结晶，得到环肽
Figure FDA0000374692440000041
其中，所述Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与I2的摩尔数比为1:5。
7.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤6）中，将所述溶于饱和的HCl/AcOEt溶液的反应条件为：在反应温度为0～35℃的条件下，反应0.5小时。
8.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤7）中，将环七肽盐酸盐
Figure FDA0000374692440000051
中Lys的侧链氨基在三氧化硫脲作用下转化为胍基的工艺条件为：在溶剂为MeOH，反应温度为0～35℃的条件下，反应2小时；其中，所述环七肽盐酸盐及三氧化硫脲的摩尔数之比为1:3。
9.根据权利要求8所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，所述三氧化硫脲的制作步骤为：将浓硫酸、双氧水及二氧化硫脲进行反应，反应温度为4℃，反应时间为12小时，水沉淀出所述三氧化硫脲；其中，所述浓硫酸、双氧水及二氧化硫脲的摩尔比为0.05:1:0.8。
10.根据权利要求1至9任一项所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤1）至步骤4）中，所述洗涤步骤均为用NaHCO3溶液、盐酸溶液及饱和NaCl溶液依次进行洗涤；所述干燥剂均为无水Na2SO4干燥剂；所述减压温度均为30～40℃。
11.根据权利要求1至9任一项所述依替巴肽的合成方法，其特征在于，所述步骤1）至步骤4）中，脱除所述Fmoc-保护基所用的试剂为含(1-95)%哌啶的DCM溶液或/和含(1-95)%乙二胺的DCM溶液；脱除Cbz-保护基的条件为:金属Pd催化下通入H2或脱除Cbz-保护基的试剂采用HBr/醋酸的混合溶剂，其中HBr与醋酸的体积比范围为：（1:4）-（1:2）。
CN201310390106.2A 2012-09-14 2013-08-30 一种依替巴肽的液相合成方法 Active CN103450346B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310390106.2A CN103450346B (zh) 2012-09-14 2013-08-30 一种依替巴肽的液相合成方法

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012103396425 2012-09-14
CN201210339642.5 2012-09-14
CN2012103396425A CN102924569A (zh) 2012-09-14 2012-09-14 一种依替巴肽的液相合成方法
CN201310390106.2A CN103450346B (zh) 2012-09-14 2013-08-30 一种依替巴肽的液相合成方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103450346A true CN103450346A (zh) 2013-12-18
CN103450346B CN103450346B (zh) 2015-06-24

Family

ID=47639518

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012103396425A Pending CN102924569A (zh) 2012-09-14 2012-09-14 一种依替巴肽的液相合成方法
CN201310390106.2A Active CN103450346B (zh) 2012-09-14 2013-08-30 一种依替巴肽的液相合成方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012103396425A Pending CN102924569A (zh) 2012-09-14 2012-09-14 一种依替巴肽的液相合成方法

Country Status (1)

Country Link
CN (2) CN102924569A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106366177A (zh) * 2016-09-07 2017-02-01 烟台海安药物研发有限公司 一种胸腺五肽甲酯偶合物及其制备方法
CN106459150A (zh) * 2014-06-26 2017-02-22 丸石制药株式会社 合成五肽的制造方法
CN106916219A (zh) * 2017-04-10 2017-07-04 上海化工研究院有限公司 一种稳定同位素标记α‑乳白蛋白特征肽段的合成方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101993475A (zh) * 2009-08-21 2011-03-30 杭州诺泰制药技术有限公司 一种全液相依替巴肽(Eptifibatide)的合成方法
CN102040652A (zh) * 2009-10-12 2011-05-04 杭州诺泰制药技术有限公司 一种固液相结合依替巴肽(Eptifibatide)的合成方法
US20110118437A1 (en) * 2004-06-14 2011-05-19 Divya Lal Saksena Process for the Synthesis of Cyclic Heptapeptide

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110118437A1 (en) * 2004-06-14 2011-05-19 Divya Lal Saksena Process for the Synthesis of Cyclic Heptapeptide
CN101993475A (zh) * 2009-08-21 2011-03-30 杭州诺泰制药技术有限公司 一种全液相依替巴肽(Eptifibatide)的合成方法
CN102040652A (zh) * 2009-10-12 2011-05-04 杭州诺泰制药技术有限公司 一种固液相结合依替巴肽(Eptifibatide)的合成方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张琦: "血小板糖蛋白Ilb/11Ia受体拮抗剂依替巴肽的合成研究", 《CNKI中国知网数据库》, 10 May 2010 (2010-05-10) *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106459150A (zh) * 2014-06-26 2017-02-22 丸石制药株式会社 合成五肽的制造方法
CN106459150B (zh) * 2014-06-26 2020-01-24 丸石制药株式会社 合成五肽的制造方法
CN106366177A (zh) * 2016-09-07 2017-02-01 烟台海安药物研发有限公司 一种胸腺五肽甲酯偶合物及其制备方法
CN106916219A (zh) * 2017-04-10 2017-07-04 上海化工研究院有限公司 一种稳定同位素标记α‑乳白蛋白特征肽段的合成方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN103450346B (zh) 2015-06-24
CN102924569A (zh) 2013-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103242431B (zh) 一种比伐卢定的制备方法
CN101759777B (zh) 一种戈舍瑞林的合成方法
CN103374054A (zh) 一步法固相合成多肽的方法
CN102702320B (zh) 一种制备爱啡肽的方法
CN103450346B (zh) 一种依替巴肽的液相合成方法
CN103180335A (zh) 用于制备地加瑞克及其中间体的方法
CN101735308A (zh) 一种布舍瑞林的合成方法
CN101104638B (zh) 胸腺素α1的固相合成工艺
TWI247012B (en) Process for rapid solution synthesis of peptides
CN101747412A (zh) 一种依替非巴肽的合成制备工艺
CN105777871A (zh) 一种环五肽的合成方法
CN106478805A (zh) 一种glp-1衍生物的制备方法
CN101857629A (zh) 布雷默浪丹的固相合成方法
CN103665115B (zh) 环十肽化合物gg-110824的化学制备方法
CN105037496B (zh) 一种依替巴肽的制备方法
CN103665109B (zh) 成骨生长肽碳端五肽的合成方法
CN103539832B (zh) 一种硼替佐米工艺的改进方法
CN103172704A (zh) 一种抗肿瘤小肽FpAT的制备方法
CN111285921B (zh) Bdk辅助基团及基于bdk辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法
Yamada et al. Solid-state 17O NMR in Biological Solids: Efficient 17O Labeling of Amino Acids and Peptides
CN102174081B (zh) 埃替非巴肽及其前体的制备方法
CN101255187B (zh) Atl肽的固相合成方法
CN104558159B (zh) 比伐芦定中间体的固相合成方法
CN113292508B (zh) 一类含天冬酰胺或谷氨酰胺的环二肽的合成方法
CN102827249A (zh) 一种依替巴肽的液相合成方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C53 Correction of patent of invention or patent application
CB02 Change of applicant information

Address after: 264006 room B, building, No. 3, No. 32, Pioneer Park, Zhujianglu Road, Shandong, Yantai, China

Applicant after: Hai'an, Yantai medicament research and development company limited

Address before: 264006 room B, building, No. 3, No. 32, Pioneer Park, Zhujianglu Road, Shandong, Yantai, China

Applicant before: Yantai High Polypeptide Pharmaceutical Research & Development Co., Ltd.

CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Gao Xiuyan

Inventor after: Wang Xidi

Inventor after: Xu Wenjuan

Inventor after: Ren Xiaomin

Inventor after: Jiang Guosheng

Inventor before: Gao Xiuwei

Inventor before: Gao Xiuyan

Inventor before: Ren Xiaomin

Inventor before: Wang Pu

COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: GAO XIUWEI GAO XIUYAN REN XIAOMIN WANG PU TO: GAO XIUYAN WANG XIDI XU WENJUAN REN XIAOMIN JIANG GUOSHENG

Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: YANTAI HIGH ACTIVE PEPTIDE DRUGS RESEARCH + DEVELOPMENT TECHNOLOGY CO., LTD. TO: YANTAI HIGH ACTIVE DRUGS RESEARCH + DEVELOPMENT CO., LTD.

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: 264006 Yantai Development Zone, Zhujianglu Road, No. 32, the park, the international students in the park

Patentee after: Shandong Bio Technology Co., Ltd.

Address before: 264006 room B, building, No. 3, No. 32, Pioneer Park, Zhujianglu Road, Shandong, Yantai, China

Patentee before: Hai'an, Yantai medicament research and development company limited