2.根据权利要求1所概括的阶段,其特征在于本发明包括以下二十二个具体步骤:
(1).Trt-Mpa-Lys(Fmoc)-OMe的制备。由Trt-Mpa-OH与H-Lys((Fmoc)-OMe偶合得来;
反应体系中:
偶合试剂为DIC/HOCt;溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
H-Lys((Fmoc)-OMe,Trt-Mpa-OH,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(2).Trt-Mpa-Lys-OMe的制备。由Trt-Mpa-Lys(Fmoc)-OMe去Fmoc保护基而得;反应体系中:去Fmoc试剂为25%六氢吡啶/DCM;反应持续一个小时。
(3).Trt-Mpa-Harg(Boc)2-OMe的制备。由Trt-Mpa-Lys-OMe与Boc-NH-C(S)-NH-Boc在有机碱存在条件下,金属盐络合 剂催化回流反应而得;
反应体系中:
反应溶剂为DMF;回流反应温度为40℃;
Boc-NH-C(S)-NH-Boc的摩尔数是Trt-Mpa-Lys-OMe的摩尔数的2倍;
过渡金属盐络合剂 的摩尔数与Boc-NH-C(S)-NH-Boc的摩尔数等同;
过渡金属盐络合剂包括锰盐,铁盐,钴盐,镍盐,铜盐,银盐,汞盐,镉盐,锌盐以及铅盐;
有机碱包括吡啶,三乙胺等叔胺;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(4).Fmoc-Pro-Cys(Acm)-NH2的制备。由Fmoc-Pro-OH与H-Cys(Acm)-NH2聚合而得;
反应体系中:
偶合试剂为DIC与HOCt;反应溶剂为DMF;反应温度0-35℃;
Fmoc-Pro-OH,H-Cys(Acm)-NH2,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(5).H-Pro-Cys(Acm)-NH2的制备。由Fmoc-Pro-Cys(Acm)-NH2去Fmoc保护基而得;
反应体系中:
去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM;反应持续一个小时。
(6).Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2的制备。由H-Pro-Cys(Acm)-NH2与Fmoc-Trp(Boc)-OH偶合而得;
反应体系中:
偶合试剂为DCC与HOBt;反应溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
Fmoc-Trp(Boc)-OH,H-Pro-Cys(Acm)-NH2,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(7).H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2的制备。由Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2去Fmoc保护基而得;
反应体系中:
去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM;反应持续一个小时。
(8).Fmoc-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2的制备。
由H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH偶合而得;
反应体系中:
偶合试剂为DCC与HOAt;反应溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
Fmoc-Asp(OtBu)-OH,H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(9).H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2的制备。
由Fmoc-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2去Fmoc保护基而得;
反应体系中:
去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM;反应持续一个小时。
(10).Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2的制备。
由H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2与Fmoc-Gly-OH聚合而来;
反应体系中:
偶合试剂为DCC与HOAt;反应溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
Fmoc-Gly-OH,H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(11).H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2的制备。
由Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2去Fmoc保护基而得;
反应体系中:
去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM;反应持续一个小时。
(12).Trt-Mpa-Harg(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2的制备。由H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2与Trt-Mpa-Harg(Boc)2-OH聚合而来;
反应体系中:
偶合试剂为DIC与HOCt;反应溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
Trt-Mpa-Harg(Boc)2-OH,H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(13).Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备。由Fmoc-Pro-OH与H-Cys(Trt)-NH2聚合而得;
反应体系中:
偶合试剂为DIC与HOCt;反应溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
Fmoc-Pro-OH的摩尔数,H-Cys(Trt)-NH2的摩尔数,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(14).H-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备。由Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2去Fmoc保护基而得;
反应体系中:去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM;反应持续一个小时。
(15).Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备。由H-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Trp(Boc)-OH偶合而得;
反应体系中:
偶合试剂为DCC与HOBt;反应溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
Fmoc-Trp(Boc)-OH的摩尔数,H-Pro-Cys(Trt)-NH2的摩尔数,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出产物。
(16).H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备。
由Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2去Fmoc保护基而得;
反应体系中:
去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM;反应持续一个小时。
(17).Fmoc-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备。
由H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH聚合而得;
反应体系中:
偶合试剂为DCC与HOAt;溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
Fmoc-Asp(OtBu)-OH,H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(18).H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备。
由Fmoc-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2去Fmoc保护基而得;
反应体系中:
去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM;反应持续一个小时。
(19).Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备。
由H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Gly-OH偶合而得;
反应体系中;
偶合试剂为DCC与HOAt;反应溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
Fmoc-Gly-OH,H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2,偶合试剂的摩尔数均等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(20).H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备。
由Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2去Fmoc保护基而得;
去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM;反应持续一个小时。
(21).Trt-Mpa-Harg(Boc)2-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备。
由H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2与Trt-Mpa-Harg(Boc)2-OH偶合而得;
反应体系中:
偶合试剂为DIC与HOCt;反应溶剂为DMF;反应温度为0-35℃;
Trt-Mpa-Harg(Boc)2-OH,H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2,偶合试剂摩尔数等同;
冰乙醚沉淀出反应产物。
(22).依替巴肽(Eptifibatide)的制备与纯化。
Trt-Mpa-Harg(Boc)2-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH2,用试剂三氟醋酸/苯甲醚/茴香硫醚/三异丙基硅烷/水(95∶2.5∶2.5∶2.5∶2.5)去保护基后用乙醚沉淀出Mpa-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH2;
Trt-Mpa-Harg(Boc)2-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH2用试剂三氟醋酸/苯甲醚/茴香硫醚/三异丙基硅烷/水(95∶2.5∶2.5∶2.5∶2.5)去保护基后用乙醚沉淀出Mpa-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Acm)-NH2;将以上所得二线性七肽用80-100mM I2的乙醇溶液氧化环化后均得依替巴肽(Eptifibatide)。