KR20130127443A - 데가렐릭스 및 이의 중간 화합물의 제조 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 데카펩타이드 데가렐릭스, 이의 보호된 전구체 및 기타 유용한 중간 화합물의 액상 (또는 용액-상) 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 용액-상 제조 방법에 사용가능한 폴리펩타이드 및 데가렐릭스 자체의 정제 방법에 관한 것이다.
데가렐릭스는 식 II에 따른 데가렐릭스 전구체, 이의 염 또는 이의 용매화물을 절단제로 유기 용매 중에서 처리함으로써 수득할 수 있다.
(P1)AA1-AA2-AA3-AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (II)
P1은 아미노 보호기; 바람직하게는 아세틸이고;
P4는 수소 또는 하이드록시 보호기, 바람직하게는 하이드록시 보호기이고;
P6는 수소 또는 아미노 보호기, 바람직하게는 아미노 보호기이고;
P8은 아미노 보호기임.

Description

데가렐릭스 및 이의 중간 화합물의 제조 방법 {PROCESS FOR THE MANUFACTURE OF DEGARELIX AND ITS INTERMEDIATES}
본 발명은 데카펩타이드 데가렐릭스, 이의 보호된 전구체 및 기타 유용한 중간 화합물의 액상 (또는 용액-상) 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 용액-상 제조 방법에 사용가능한 폴리펩타이드 및 데가렐릭스 자체의 정제 방법에 관한 것이다.
전립선 암은 산업화된 국가에서의 남성 질환의 발병과 사망의 주된 요인이다. 데가렐릭스는 FE200486이라고도 하며, 안드로겐 차단 요법이 필요한 전립선 암 환자를 대상으로 개발되어, 현재 승인된, 제3 세대 고나도트로핀 방출 호르몬 (GnRH) 수용체 길항제 (GnRH 차단제)이다 (Doehn et al., Drugs 2006, vol. 9, No. 8, pp. 565-571; WO　09846634). 데가렐릭스는 뇌하수체에서 GnRH 수용체를 즉각적이고 경쟁적으로 차단함으로써 작용하지만, 다른 GnRH 길항제들처럼 시상하부-뇌하수체-성샘 축을 통해 황체 형성 호르몬의 생산을 조기 자극하지 않으며, 따라서 테스토스테론 서지(testosterone surge)나 임상적인 플레어(clinical flare)를 일으키지 않는다 (Van Poppel, Cancer Management and Research, 2010:2 39-52; Van Poppel et al., Urology, 2008, 71(6), 1001-1006); James, E.F. et al., Drugs, 2009, 69(14), 1967-1976).
데가렐릭스는, 7개의 비천연 아미노산을 포함하며, 이중 5개가 D-아미노산인, 선형의 합성 데카펩타이드이다. 이것은 데카펩타이드의 벡본에 10개의 키랄 센터를 가지고 있다. 서열에서 5번 위치의 아미노산 잔기는 측쇄 치환시 추가적인 키랄 센터를 가지게 되어, 총 11개의 키랄 센터를 제공한다. 이 화합물의 CAS 등록 번호는 214766-78-6 (유리 염기형)이며, 상표 Firmagon™으로 시판되고 있다. 이 약물은 화학적으로는 D-알라닌아미드, N-아세틸-3-(2-나프탈레닐)-D-알라닐-4-클로로-D-페닐알라닐-3-(3-피리디닐)-D-알라닐-L-세릴-4-[[[(4S)-헥사하이드로-2,6-디옥소-4-피리미디닐]카르보닐]아미노]-L-페닐알라닐-4-[(아미노카르보닐)아미노]-D-페닐알라닐-L-루실-N6-(1-메틸에틸)-L-라이실-L-프로릴-로 지칭되며, 아래 화학 구조(이하 식 I로 지칭됨)로 표시된다:
Figure pct00001
데가렐릭스의 구조는 또한 하기 식으로 표시될 수 있다:
Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(Cbm)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2
상기 식에서, Ac는 아세틸이고, 2Nal은 2-나프틸알라닌이고, 4Cpa는 4-클로로페닐알라닌이고, 3Pal은 3-피리딜알라닌이고, Ser은 세린이고, 4Aph는 4-아미노페닐알라닌이고, Hor은 하이드로오로틸, Cbm은 카바모일이고, Leu는 루신이고, Lys(iPr)는 N6-이소프로필라이신이고, Pro는 프롤린이고, Ala는 알라닌이다.
본 발명을 설명하기 위한 목적으로, 데가렐릭스의 각 아미노산은 하기와 같은 약식 표시법으로 제공될 것이다:
AA1은 D-2Nal이고, AA2는 D-4Cpa이고, AA3는 D-3Pal이고, AA4는 Ser이고, AA5는 4Aph(L-Hor)이고, AA6는 D-Aph(Cbm)이고, AA7은 Leu이고, AA8은 Lys(iPr)이고, AA9은 Pro이고, AA10은 D-Ala이다.
즉, 예를 들어, 데가렐릭스는 Ac-AA1-AA10-NH2로 표시될 수 있으며, 테트라펩타이드 Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser은 Ac-AA1-AA4로 표시될 수 있으며, 헥사펩타이드 4Aph(L-Hor)-D-4Aph(Cbm)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2는 AA5-AA10-NH2로 표시될 수 있다.
데가렐릭스는, WO 98/46634 및 Jiang et al., J. Med. Chem. 2001, 44, 453-467에 개시된 바와 같이, Boc-고상 펩타이드 합성 (SPPS) 방법을 이용하여 지금까지 제조되고 있다. 기본적으로, Boc-보호된 D-Ala을 디메틸포름아미드 (DMF)/CH2Cl2 중에서 활성화제 또는 커플링제로서 디이소프로필카르보디이미드 (DIC)와 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt)을 이용하여 MBHA 수지에 커플링시킨다. D-Ala이 수지에 커플링되면, 세척, 블록킹 해제 및 다음 순서의 아미노산 잔기와의 커플링을 데카펩타이드가 완성될 때까지 진행하여 합성한다. 5번 위치의 4Aph와 6번 위치의 D-4Aph의 측쇄 제1 아미노기는 부가시 Fmoc로 보호된 상태이며, 체인에 다음 순서의 아미노산을 부가하기 전에 L-Hor 및 Cbm으로 각각 변형시킨다. 이때, 피페리딘을 이용하여 측쇄 보호를 일차로 제거하고, 펩티도수지 상에 새로운 유리형 아미노기를 tert-부틸 이소시아네이트 또는 L-하이드로오로트산과 반응시키고, 닌히드린 검사로 반응의 완료를 확인한 다음, 다음 순서의 아미노산 잔기를 추가하기 전에 펩티도수지를 세척하는, 추가적인 단계들이 요구된다 (또한, Sorbera et al., Drugs of the Future 2006, Vol. 31, No. 9, pp 755-766 참조).
Boc-SPPS 방법으로 지금까지 데가렐릭스를 충분한 양으로 수득할 수 있지만, 이 폴리펩타이드에 대한 수요 증대는 보다 더 많은 양이 필요하다는 것을 의미한다. Boc-SPPS 방법에는 HF 절단이 요구되어, 산업적인 대량 합성에는 적합하지 않다. 실제, WO 98/46634에서는, SPPS가 최대 1 kg의 제한된 양을 합성하는 경우에만 적합하고, 고전적인 펩타이드 용액 합성 또는 액상 펩타이드 합성 (LPPS)이 산물을 보다 더 대량으로 합성하는데 바람직하다고, 언급하고 있다. WO 98/46634에는 이러한 합성을 수행하는 방식이 명시되어 있진 않다. 데가렐릭스의 액상 펩타이드 합성 방법이 개발되었다고 보고된 적은 있지만 [EMEA 리포트: Assessment Report for Firmagon™(Degarelix): Doc. Ref. EMEA/CHMP/635761/2008], 현재 이러한 방법에 대한 상세 내용이 공개된 것은 아니다.
WO 97/34923 및 WO 99/26964는 생물학적으로 활성인 펩타이드를 제조하는 액상 공정을 다룬 문헌들이다. WO 99/26964는 GnRH 길항제 활성을 가진 데카펩타이드의 액상 합성법을 구체적으로 다루고 있다. WO 99/26964에는 수지의 한정된 용량 (capacity), 과다하게 많이 필요한 시약 및 아미노산, Ser의 하이드록시기, Aph 및 D-Aph의 방향족 아미노기, Lys(i-Pr)의 ε-i-프로필아미노기와 같은 모든 반응성 측쇄의 보호 필요성 등, GnRH 길항제를 제조하는데 있어 SPPS 방법의 원천적인 여러가지 한계들이 열거되어 있다.
WO 99/26964는 데카펩타이드의 5번 및 6번 위치의 중심 펩타이드 단편들에 먼저 측쇄를 충분히 완성시킨 다음, "4-2-4", "3-3-4" 또는 "3-4-3" 단편 조립 패턴을 통해 펩타이드를 조립하는 단계를 포함하는 액상 공정을 개시한다. 예를 들어, GnRH 길항제 Azaline B의 제조시, 테트라펩타이드를 헥사펩타이드와 커플링시켜, 원하는 데카펩타이드를 제조한다. 동일한 단편 조립 패턴을 데가렐릭스에 시도하였을 때, Ser 아미노산 (AA4)의 라세미화가 발생되어 L-Ser 혼성율(impurity)이 약 20%에 이르게 된다. 이러한 혼성은 최종 데카펩타이드에까지 이어지며, 제거하기 어렵다. 아울러, WO 99/26964에 기술된 공정에 따라 트리펩타이드 AA1-AA3에 Ser을 결합시켜 테트라펩타이드를 제조하였을 때, 벤질 에스테르기의 가수분해로 인해 형성되는 테트라부틸암모늄을 후속적인 조작 과정에서 완전히 제거할 수 없어, 최종 산물에까지 유지되게 된다. 데가렐릭스 합성시, L-디하이드로오로트산을 4Amp와 커플링시켜 AA5를 제조하였을 때, L-하이드로오로틸기가 이의 히단토인아세틸 유사체로 재배열된다. 데가렐릭스를 용액-상 합성하는데 있어 이러한 문제들과 기타 문제들을 해결한 바, 이 데카펩타이드에 대한 새로운 용액-상 펩타이드 합성법을 본원에 최초로 기술한다.
WO 97/34923 및 WO 99/26964에 기술된, 데가렐릭스를 제조하기 위한 SSPS 방법의 문제점과 LLPS 방법의 단점들을 해결하였으며, 이는 본 발명의 과제이다.
통상적으로, 본 발명은 데카펩타이드 데가렐릭스의 액상 합성법에 관한 것이다.
일 측면에서, 본 발명은, 하기 식 II에 따른 데가렐릭스 전구체, 이의 염 또는 용매화물에 절단제(cleaving agent)를 처리하는 단계를 포함하는, 식 Ac-AA1-AA10-NH2의 데가렐릴스, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 제조하는 액상 방법에 관한 것이다.
Figure pct00002
식 II의 화합물은
(P1)AA1-AA2-AA3-AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (II)이며,
상기에서, AA1 내지 AA10은 식 (I)에서 정의된 바와 동일하며,
P1은 아미노 보호기 또는 아세틸이고;
P4는 수소 또는 하이드록시 보호기, 바람직하게는 하이드록시 보호기이고;
P6는 수소 또는 아미노 보호기이고, 바람직하게는 아미노 보호기이고;
P8은 아미노 보호기이다.
바람직하게는, 보호기 P1은, 존재하는 경우, P8에 직각(orthogonal)이며, 즉 이들 보호기들을 독립적으로 절단할 수 있다.
바람직한 구현예에서, P1은 아세틸이고, 각각의 P4 및 P8은 한 단계로 절단할 수 있는 보호기이고, P6는 수소 또는 보호기 P4 및 P8로 함께 절단할 수 있는 보호기이다. 보호기의 절단은 바람직하게는 식 II의 전구체에 트리플루오로아세트산 (TFA)을 처리함으로써 수행된다. P4, P6, 및 P8이 tert-부틸 (tBu) 및 t-부틸옥시카르보닐 (Boc)로부터 선택되는 보호기인 것이 특히 바람직하며, P4가 tBu이고, P6가 수소 또는 tBu이고, P8이 Boc인 식 II의 전구체가 가장 바람직하다.
또한, 본 발명은, 식 (III)으로 표시되는 제1 폴리펩타이드 또는 이의 염을, 식 (IV)로 표시되는 제2 폴리펩타이드 또는 이의 염과, 펩타이드 커플링제와 선택적으로 유기 아민 염기의 존재 하에, 액체 시약 매질 중에서, 커플링하여, 식 (II)로 표시되는 데카펩타이드를 제조하는 단계를 포함하는, 식 (II)로 표시되는 중간 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 이의 용매화물을 액상 제조하는 방법에 관한 것이다:
(P1)AA1-AA2-AA3 (III)
AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (IV)
상기에서, AA1 내지 AA10, P4, P6 및 P8은 식 (II)에서 정의된 바와 동일하다.
상기 염은, 염산 등의 산 염, 및 알칼리 금속 염, 알칼리 토금속 염 및 암모늄 등의 염기 염을 포함한다.
본 발명에서, 식 (IV)로 표시되는 상기 제2 폴리펩타이드는, 하기 화합물 (IVa)에서 보호기 PN을 제거함으로써 제조할 수 있다:
(PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (IVa)
PN은, 바람직하게는, N-말단 아미노 보호기이고, 더 바람직하게는, 벤질옥시카르보닐과 같은 수소 첨가 반응에 의해 제거될 수 있는 보호기이다.
식 (IVa)의 화합물은, 식 (V)로 표시되는 폴리펩타이드를 식 (VI)로 표시되는 폴리펩타이드 또는 이의 염을 커플링함으로써 수득할 수 있다:
(PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7 (V)
AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (VI)
상기에서, AA1 내지 AA10, PN, P4, P6 및 P8은 식 (IVa)에서 정의된 바와 동일하다.
또한, 본 발명은 본 발명의 액상 제조 방법에 사용가능한 식 (II) 내지 (VI)로 표시되는 폴리펩타이드에 관한 것이다.
도 1은 펩타이드 합성에서의 AA1 및 AA2 유도체들의 합성 흐름도이다.
도 2는 펩타이드 합성에서의 AA2-AA3 유도체의 합성 흐름도이다.
도 3은 Ac-AA1-AA3의 합성 흐름도이다.
도 4는 AA6-AA7 유도체의 합성 흐름도이다.
도 5는 AA5-AA7 유도체의 합성 흐름도이다.
도 6은 Z-AA4-AA7의 합성 흐름도이다.
도 7은 AA9-AA10의 합성 흐름도이다.
도 8 및 9는 Z-AA8-AA10의 합성 흐름도이다.
도 10은 Z-AA4-AA10의 합성 흐름도이다.
도 11은 식 II의 전구체의 합성 흐름도이다.
도 12는 식 II의 전구체로부터 데가렐릭스의 합성, 정제 및 동결건조 흐름도이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
탈보호 단계
제1 측면에서, 본 발명은 식 Ac-AA1-AA10-NH2의 데가렐릭스, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 이의 용매화물의 액상 제조 방법에 관한 것이다. 상기 방법은, 식 II에 따른 데가렐릭스 전구체 ((P1)AA1-AA2-AA3-AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2), 이의 염 또는 이의 용매화물로부터, 상기 전구체를 포함하는 유기 용액 및 용해된 절단제 중에서, 보호기 (P4), (P6), 및 (P8)을, 존재한다면, 절단하는 단계를 포함한다.
식 II에서, AA1 내지 AA10은 식 (I)에서와 동일한 의미를 가지며, P1은 아미노 보호기 또는 아세틸이고, 바람직하게는 아세틸이다.
P8은 아미노 보호기이다. 바람직하게는, P8은 E. Gross & J. Meienhofer, The Peptides: Analysis, Structure, Biology, Vol. 3: Protection of Functional Groups in Peptide Synthesis (Academic Press, N.Y., 1981)에 기술된 바와 같이, 당해 기술 분야에 공지된 임의의 측쇄 보호기이다. 적합한 예로는 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐 (Fmoc), 벤질옥시카르보닐 (Cbz 또는 Z), 및 치환된 Cbz, 예컨대, 2-브로모-벤질옥시카르보닐 (2-Br-Z), 2-클로로-벤질옥시카르보닐 (2-Cl-Z), p-클로로벤질옥시카르보닐, p-6-니트로벤질옥시카르보닐, p-브로모벤질옥시카르보닐, 및 p-메톡시벤질옥시카르보닐, o-클로로벤질옥시카르보닐, 2,4-디클로로벤질옥시카르보닐, 2,6-디클로로벤질옥시카르보닐 등; 지방족 우레탄-타입의 보호기, 예컨대, t-부틸옥시카르보닐 (Boc), t-아밀옥시카르보닐, 이소프로필옥시카르보닐, 2-(p-비페닐릴)-이소프로필옥시카르보닐 등; 사이클로알킬 우레탄-타입의 보호기, 예 사이클로펜틸옥시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 및 사이클로헥실옥시카르보닐; 알릴옥시카르보닐 (Alloc) 아세틸 (Ac), 벤조일 (Bz), 트리플루오로아세틸 (Tfa), 톨루엔설포닐 (Tos), 벤질 (Bn), 트리페닐메틸 (Trt), o-니트로페닐-설페닐 (Nps), t-부틸-디메틸실릴옥시카르보닐, [2-(3,5-디메톡시페닐)-프로필-2-옥시카르보닐] (Ddz), 2,2,2-트리클로로에틸옥시카르보닐 (Troc), 비페닐릴이소프로필옥시카르보닐 (Bpoc), 및 o-니트로벤질옥시카르보닐을 포함한다. 바람직한 보호기는 Fmoc, Boc 및 Alloc이고, Boc가 가장 바람직하다.
P4는 수소 또는 하이드록시 보호기이고, 바람직하게는 하이드록시 보호기이다. Ser (P4)의 하이드록시기는 바람직하게는 C4-C6 알킬 (예, t-부틸, 사이클로헥실), 아세틸 (Ac), 트리틸, 벤질, 벤질 에테르, 예컨대 p-메톡시벤질, 또는 그외 치환된 벤질, 예컨대 p-니트로벤질, p-클로로벤질, o-클로로벤질, 및 2,6-디클로로벤질, 테트라하이드로피라닐, 트리(C1-C6)알킬실릴, 2-메톡시에톡시메틸 (MEM), 4-디메틸카바모일벤질 및 O-페녹시아세틸 에테르이다.
특히, t-부틸, 벤질 및 9-플루오레닐메틸 에테르가 바람직하며, t-부틸이 가장 바람직하다.
P6는 수소 또는 아미노 보호기이고, 바람직하게는 아미노 보호기이다. 바람직한 보호기는 C4-C6 알킬 (예, t-부틸, 사이클로헥실), 아세틸 (Ac), 트리틸, 벤질, 벤질 에테르, 예컨대 p-메톡시벤질, 또는 기타 치환된 벤질, 예컨대 p-니트로벤질, p-클로로벤질, o-클로로벤질, 및 2,6-디클로로벤질, 테트라하이드로피라닐, 트리(C1-C6)알킬실릴, 2-메톡시에톡시메틸 (MEM), 4-디메틸카바모일벤질 및 O-페녹시아세틸 에테르이다. 특히 바람직하게는, t-부틸, 벤질 및 9-플루오레닐메틸 에테르이고, t-부틸이 가장 바람직하다.
보호기 특성에 따라 절단제를 사용하여 보호기를 제거하며, 이는 당해 기술 분야에 잘 알려져 있다.
Ser 하이드록시 보호기 P4에 대한 바람직한 절단제는 아래와 같다:
● 보호기로서 특히 t-부틸 에테르에 대해, 트리플루오르아세트산 (TFA), HCl, 또는 메탄설폰산,
● 보호기로서 특히 벤질 에테르에 대해, H2/Pd-C, HF, 또는 트리플루오로메탄-설폰산, 및
● 보호기로서 특히 2-(메틸설피닐)벤질에테르에 대해, SiCl4/아니솔.
아미노 보호기 P8에 대한 바람직한 절단제는 아래와 같다:
● 보호기로서 특히 t-부틸 카바메이트에 대해, 트리플루오르아세트산 (TFA), HCl, 또는 메탄설폰산,
● 보호기로서 특히 벤질 카바메이트에 대해, H2/Pd-C, HF, 또는 트리플루오로메탄-설폰산, 및
● 보호기로서 특히 Fmoc에 대해, 피페리딘, DBU 및 DEA.
바람직한 용매는 DCM, DMF, NMP, 디옥산, EtOH, Neat HF, 및 TFA를 포함한다.
특히 아래 표 1에 기재된 여러가지 절단 조건이 바람직하다:
표 1: 절단 조건
보호기 보호된 기 절단 시약 용매
약어 명칭
t-Bu t-부틸 에테르 및 에스테르 -OH 및 -CO2H TFA
HCl
메탄설폰산		 DCM
디옥산
DCM
Bzl 벤질 에테르 및 에스테르 -OH 및 -CO2H H2/Pd-C
HF
트리플루오로메탄-설폰산		 EtOH/물
Neat
DCM
MsOb 4-(메틸설피닐)-벤질 에테르 -OH SiCl4/아니솔 TFA
Cbz 또는 Z 벤질옥시카르보닐 -NH2 H2/Pd-C
HF
트리플루오로메탄-설폰산		 EtOH/물/산
Boc tert-부톡시-카르보닐 -NH2 TFA
HCl
메탄설폰산		 DCM
디옥산
DCM
Fmoc 9-플루오레닐메톡시-카르보닐 -NH2 피페리딘
DBU (1,8-디아자비사이클로 [5.4.0]-운덱-7-엔)
DEA (디에틸아민)		 DMF
DMF

DMF
Trt 트리틸 (Trt) -OH
-NH2 		1% TFA-DCM DCM
TBDMS Tert-부틸-디메틸-실릴 -OH TFA
ACOH-THF-H2O (3:1:1), 18h		 THF
사이클로헥실 (CHX 또는 CHX) 사이클로헥실 -OH HF 또는 TFSMA Neat HF 또는 DCM
참고문헌: Chem. Rev. 2009, 109, 2465-2504 (Albert Isidro-Llobet)
전형적으로, 식 II의 전구체를, 절단제에, 바람직하게는 TFA에, 추가적인 용매를 첨가하거나 첨가하지 않고, 실온 (20 내지 25 ℃)에서, 20 내지 30시간, 바람직하게는 24시간 동안 용해시킨다. 보호기가 제거되며 (바람직하게는 변환 수율은 > 95%이고, 가장 바람직하게는 > 99%임), 데가렐릭스 조산물을 바람직하게는 완충화된 수-에탄올 혼합물에 부어, 후속적인 정제를 위한 조산물 데가렐릭스의 완충화된 용액을 제조한다. 바람직한 pH는 바람직하게는 2 내지 4이고, 더 바람직하게는 2.5 내지 3.5이고, 가장 바람직하게는 대략 3이다.
탈보호 단계의 구체적인 구현예들을 도 12 및 실시예 4 (단계 12 참조)에 열거한다.
정제 및 동결건조
조산물 데가렐릭스 용액을 바람직하게는 분취용 역상 크로마토그래피 (RPC)와 같은 크로마토그래피 기법을 이용하여 정제한다.
그런 후, 수득되는 산물을 바람직하게는 동결건조한다.
3 + 7 커플링
다른 측면에서, 본 발명은, 또한, 식 (III)으로 표시되는 제1 폴리펩타이드 또는 이의 염을, 식 (IV)로 표시되는 제2 폴리펩타이드 또는 이의 염과, 펩타이드 커플링제와 선택적으로 유기 아민 염기의 존재 하에, 액체 시약 매질 중에서, 식 (II)로 표시되는 데카펩타이드를 제조하는 단계를 포함하는, 식 (II)로 표시되는 중간 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 이의 용매화물을 액상 제조하는 방법에 관한 것이다:
(P1)AA1-AA2-AA3 (III)
AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (IV)
상기에서, AA1 내지 AA10, P1, P4, P6 및 P8은 식 (II)에서 정의된 바와 동일하다. 상기 염은, 염산 등의 산 염, 및 알칼리 금속 염, 알칼리 토금속 염 및 암모늄 등의 염기 염을 포함한다.
커플링 반응은, 2종의 펩타이드와 펩타이드 커플링제 및 선택적으로 유기 아민 염기가 용해된 유기 용액 중에서 수행한다. 펩타이드 커플링 첨가제 및/또는 유기 아민도 존재할 수 있다.
유기 용매, 펩타이드 커플링제, 펩타이드 커플링 첨가제 및 유리 아민 염기는 LPPS 기술 분야에 공지된 임의의 것일 수 있다.
전형적인 유기 용매는 THF, NMP (N-메틸 피롤리돈), DCM, DMF, DMSO, 및 이의 혼합물이다. 가장 바람직한 용매는 DMSO이다.
전형적인 펩타이드 커플링제는, o-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU), o-(벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), o-(벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU), 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP), 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스-피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP), N,N-비스-(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스포닉 디클로라이드 (BOP-Cl), 브로모-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBroP), 이소-부틸클로로포르메이트 (IBCF), 1,3 디사이클로헥실카르보디이미드 (DCC), 1,3-디이소프로필-카르보디이미드 (DIC), 1-(디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드 (WSCDI), N-에톡시카르보닐-2-에톡시-1,2-디하이드로퀴놀린 (EEDQ), 이소프로필클로로포르메이트 (IPCF), 2-(5-노르보르넨-2,3-디카르복스이미도)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TNTU), 프로판 포스폰산 무수물 (PPAA) 및 2-숙신이미도-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TSTU) 중 하나 이상이다.
바람직한 커플링제는 DCC이다. DCC는 유기 아민을 첨가하지 않고 사용하는 것이 바람직하다. 특히 바람직한 구현예에서, DCC는 DMSO와 조합하여 사용한다. DCC는 바람직하게는 트리펩타이드에 대해 1.3 내지 2, 가장 바람직하게는 1.4 내지 1.6의 당량으로 사용된다.
다른 바람직한 커플링제는 DIC이며, 이는 바람직하게는 6-클로로-HOBt와 조합하여, 선택적으로 구리 염과 함께 사용된다.
전형적인 펩타이드 커플링 첨가제는 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 (HOBt), 6-클로로-HOBt, 및 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸 (HOAt)이다.
전형적인 유기 아민 염기는 NMM, DIPEA, TEA, 및 콜리딘(collidine)이다.
특히 바람직하게는, 용매로서 DMSO와 커플링제로서 DCC를 이용하여 커플링 반응을 수행한다.
커플링 단계의 구체적인 구현예들을 도 11과 실시예 4 (단계 11 참조)에 나타낸다.
헵타펩타이드의 합성
식 IV의 화합물, 즉, AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2는, 바람직하게는 하기 화합물 IVa의 보호기 PN를 제거함으로써, 수득된다:
(PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (IVa)
상기에서, AA4 내지 AA10, P4, P6, 및 P8은 상기에 정의된 바와 동일한 의미를 가지며, PN은 N-말단 아미노 보호기이다. 바람직한 구현예에서, PN은 예컨대 수소 및 팔라듐 촉매 (예, Pd/C)를 이용한 수소 첨가 반응에 의해 제거될 수 있는 보호기이다. 가장 바람직한 보호기 PN은 벤질옥시카르보닐 (Z)이다.
PN의 제거 단계에 대한 구체적인 구현예는 도 11과 실시예 4 (단계 11 참조)에 나타낸다.
식 (IVa)의 화합물은, 식 (V)로 표시되는 폴리펩타이드 또는 이의 염을, 식 (VI)로 표시되는 폴리펩타이드 또는 이의 염을 커플링하여 수득할 수 있으며,
(PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7 (V)
AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (VI)
상기에서, AA4 내지 AA10, P4, P6 및 P8은 식 (IVa)에서 정의된 바와 동일하다. 커플링 반응은 2종의 펩타이드와 펩타이드 커플링제가 용해된 유기 용액 중에서 수행된다. 펩타이드 커플링 첨가제 및/또는 유기 아민도 존재할 수 있다. 상기에 기술된 동일한 펩타이드 커플링제, 유기 용매, 펩타이드 커플링 첨가제 및 유기 아민이 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, DCC가 커플링제로서, 선택적으로, 용매로서 에틸 아세테이트와 함께 사용된다.
식 V의 테트라펩타이드의 합성
바람직한 구현예에서, 식 V의 테트라펩타이드, 즉, (PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7은 아래 단계를 포함하는 방법으로 제조한다:
(a) P6가 상기 식 IVa에서 정의된 바와 동일한 의미를 가지며, (PN2)가 N-말단 아미노 보호기 또는 수소이고, (PC)가 수소 첨가 반응을 통해 절단할 수 있는 C-말단 카르복시 보호기인, (PN2)AA5-AA6(P6)-AA7(PC)를 제공하는 단계;
(b) 아미노 보호기 (PN2)를, 존재하는 경우, 제거하는 단계;
(c) H-AA5-AA6(P6)-AA7(PC)에 수소 첨가 반응을 수행하여, H-AA5-AA6(P6)-AA7을 수득하는 단계; 및
(d) H-AA5-AA6(P6)-AA7을 (PN)AA4(P4)의 활성화된 에스테르와 반응시켜, (P4)가 하이드록시 보호기 또는 수소이고, P6가 수소 또는 아미노 보호기이고, PN이 예컨대 수소 및 팔라듐 촉매 (예, Pd/C)를 이용한 수소 첨가 반응에 의해 제거할 수 있는 보호기인, (PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7을 수득하는 단계.
가장 바람직한 보호기 PN은 벤질옥시카르보닐 (Z)이다.
바람직한 (PN)AA4(P4)의 활성화된 에스테르는 4-니트로페닐 에스테르 (ONp)이다.
이에, 바람직하게는, AA5-AA7 중간 화합물에서 벤질 에스테르를 제거하여, N- 및 C-비보호된 AA5-AA7을 제조한다. 그 후, 이 트리펩타이드를 미리-활성화된 세린 (예, Z-Ser(tBu)-ONp)과 반응시킨다.
데가렐릭스 제조
따라서, 본 발명은, 상기에서 논의된 탈보호 단계가 제조 단계의 필수 단계인, 데가렐릭스 제조 방법에 관한 것이다. 바람직한 구현예에서, 이러한 탈보호 단계는 전술한 3 + 7 커플링 단계 다음에 수행된다. 보다 더 바람직한 구현예에서, 상기 3 + 7 커플링 단계는 전술한 헵타펩타이드를 합성한 후에 수행되며, 즉, 본 방법은 하기 단계들을 포함한다:
a) AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2, 이의 염 또는 이의 용매화물의 합성 단계;
b) AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2와 (P1)AA1-AA2-AA3를 커플링하여, (P1)AA1-AA2-AA3-AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2), 이의 염 또는 이의 용매화물을 제조하는 단계;
c) (P1)AA1-AA2-AA3-AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2), 이의 염 또는 이의 용매화물을 탈보호화하여, 데가렐릭스, 이의 용매화물 또는 이의 염을 수득하는 단계.
이때, AA1 내지 AA10, P1, P4, P6, 및 P8은 상기에서 정의된 바와 동일한 의미를 가진다.
특히 바람직한 구현예에서,
● P1은 아세틸이고;
● P4는 TFA로 절단가능한 보호기, 바람직하게는 tBu이고;
● P6는 수소 또는 TFA로 절단가능한 보호기, 바람직하게는 tBu이고;
● P8은 TFA로 절단가능한 보호기, 바람직하게는 Boc이다.
가장 바람직한 구현예에서, 헵타펩타이드는 전술한 헵타펩타이드 합성 방법을 이용하여 제조한다. 아울러, 탈보호 단계 이후에는, 바람직하게는 전술한 정제 및 동결건조 방법이 후행된다.
데가렐릭스 또는 이의 전구체의 합성에 있어서, 특히 하이드로오로틸 모이어티를 포함하는 펩타이드가 포함된 모든 단계들은, pH가 바람직하게는 9 미만이고, 더 바람직하게는 8.5 미만이고, 보다 더 바람직하게는 8 미만이다. pH 조정을 위해 NaHCO3와 같은 약염기를 이용하는 것이 바람직하다. 특히, 커플링 단계 후 모든 추출 단계는 pH 2 내지 9, 바람직하게는 2.5 내지 8에서 수행되는 것이 바람직하다 (실험 섹션에서 6, 7, 10 및 11 단락들을 참조함). 추가적으로, 추출 또는 세척 단계 전에, n-부탄올 또는 2-부탄올과 같은 C4-5 지방족 알코올을 첨가하는 것이 바람직하다.
중간 화합물
또한, 본 발명은, 본 발명의 액상 제조 방법에 사용가능한 식 (II) 내지 (VI)로 표시되는 폴리펩타이드에 관한 것이다.
식 (II)에 대한 바람직한 구현예
Figure pct00003
(P1)AA1-AA2-AA3-AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (II)
표 2
화합물 P 1 P 4 P 6 P 8
IIa Ac tBu tBu Fmoc
IIb Ac tBu tBu Boc
IIc Ac H H Alloc
IId Ac H H Boc
IIe Ac tBu H Boc
IIf Boc tBu tBu Fmoc
IIg Fmoc tBu tBu Boc
IIh Boc tBu H Fmoc
IIi Fmoc tBu H Boc
IIj Ac H tBu Boc
IIk Ac H tBu Fmoc
IIl Ac H H Fmoc
바람직한 구현예는 이들 화합물의 염을 포함한다.
식 (III)에 대한 바람직한 구현예
Figure pct00004
(PN)AA1-AA2-AA3 (III)
표 3
화합물 P N
IIIa Ac
IIIb Boc
바람직한 구현예는 이들 화합물의 염을 포함한다.
식 (IV)/(IVA)에 대한 바람직한 구현예
Figure pct00005
(PN) AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (IV)
표 4
화합물 P 4 P 6 P 8 P N
IVa tBu tBu Fmoc H
IVb tBu tBu Boc H
IVc H H Alloc H
IVd H H Boc H
IVe tBu H Boc H
IVf H H Fmoc H
IVg tBu H Fmoc H
IVh tBu tBu Fmoc Z
IVi tBu tBu Boc Z
IVj H H Alloc Z
IVk H H Boc Z
IVl tBu H Boc Z
IVm H tBu Boc Z
IVn H H Fmoc Z
IVo tBu H Fmoc Z
IVp H tBu Fmoc Z
바람직한 구현예는 이들 화합물의 염을 포함한다.
식 (V)에 대한 바람직한 구현예
Figure pct00006
(PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7 (V)
표 5
화합물 P 4 P 6 P N
Va tBu tBu Z
Vb tBu H Z
Vc H tBu Z
Vd H H Z
바람직한 구현예는 이들 화합물의 염 및 용매화물을 포함한다.
식 (VI)에 대한 바람직한 구현예
Figure pct00007
AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (VI)
표 6
화합물 P 8
VIa Boc
VIb Alloc
Vic Fmoc
보호기가 존재하지 않는 경우, 관능기는 탈보호된 기(예, >NH)이다.
바람직한 구현예는 이들 화합물의 염을 포함한다.
실험 섹션
실험 섹션에 사용된 재료
실험 섹션에서 사용되는 재료들을 아래에 열거한다.
화합물:
암모니아 수용액 NH3 (aq)
아세토니트릴 C2H3N
n-부탄올 C4H10O
2-부탄올 C4H10O
이소프로판올 (이소프로판올) C3H8O
부틸 아세테이트 C5H12O2
에탄올, 99.9% C2H6O
메탄올 CH4O
헵탄 C7H16
정제수 H2O
에틸 아세테이트 C3H8O2
아세트산 C2H4O2
암모늄 아세테이트 C2H7NO2
아세틸 이미다졸 C5H6N2O
트리에틸아민 C6H15N
N-메틸모르폴린 C5H11NO
N-메틸피롤리돈 C5H9NO
N,N'-디사이클로헥실카르보디이미드 C13H22N2
디사이클로헥실아민 C12H23N
N,N'-디이소프로필카르보디이미드 C7H14N2
N,N-디메틸에틸렌디아민 C4H12N
N,N-디메틸포름아미드 C3H7NO
디메틸 설폭사이드 C2H6OS
1-하이드록시벤조트리아졸 C6H5N3O
p-니트로페놀 C6H5NO3
N-하이드록시숙신이미드 C4H5NO3
이소부틸 클로로포르메이트 C5H9ClO2
소듐 클로라이드 NaCl
소듐 하이드록사이드, NaOH 수용액 (aq)
염산, HCl 수용액aq)
인산 H3PO4
소듐 하이드로겐설페이트 NaHSO4
소듐 하이드로겐카보네이트 NaHCO3
메탄설폰산 CH4SO3
트리플루오로아세트산 C2HF3O2
차콜 상의 팔라듐, 5% Pd-C
수소 H2
톨루엔 C7H8
출발 물질:
N-t-부틸옥시카르보닐-D-4-클로로페닐알라닌
Boc-D-4Cpa-OH C14H18NO4
N-t-부틸옥시카르보닐-D-2-나프틸알라닌
Boc-D-2Nal-OH C18H21NO4
D-3-피리딜알라닌 하이드로클로라이드
H-D-3Pal-OH x 2HCl C8H12Cl2N2O2
N-α-t-부틸옥시카르보닐-N-4-(t-부틸카바모일)-D-4-아미노페닐알라닌
Boc-D-4Aph(tBuCbm)-OH C19H29N3O5
N-α-t-부틸옥시카르보닐-N-4-(L-하이드로오로틸)-4-아미노페닐알라닌
Boc-4Aph(L-Hor)-OH C19H24N4O7
루신 벤질 에스테르 p-토실레이트
H-Leu-OBzl x TOS C20H27NO5
N-벤질옥시카르보닐-O-t-부틸-세린
Z-Ser(tBu)-OH C8H15NO5
N-t-부틸옥시카르보닐-프롤린
Boc-Pro-OH C10H17NO4
D-알라닌아미드 하이드로클로라이드
H-D-Ala-NH2 x HCl C3H8ClNO2
N-α-벤질옥시카르보닐-N-ε-t-부틸옥시카르보닐-N-ε-이소프로필-라이신,디사이클로헥실아민 염
Z-Lys(iPr,Boc)-OH × DCHA C34H57N3O6
실시예 1: 중간 화합물 Ac(1-3)ONa: Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-ONa[7]의 합성
Boc-D-4Cpa-OH의 활성화 및 분리
단계 1 (반응 단계)
Boc-D-4Cpa-OH (299.75 g)를 iPrOH (3.53 kg)에 용해하고, 이 혼합물을 교반한 다음, HOSu (0.184 kg) 및 DIC (0.164 kg)를 첨가한 후, 1시간 동안 0℃에서 교반한다. 석출물을 여과 수득하고, iPrOH로 세척한다. 고형물을 감압 하 건조하여, Boc-D-4Cpa-OSu[1]을 수득한다.
Boc-D-2Nal-OH의 활성화 및 분리
단계 2 (반응 단계)
Boc-D-2Nal-OH (315.38 g)를 iPrOH (5.35 kg)에 용해하고, IBC (157.07 g)와 NMM (116.7 g)을 첨가한다. 추가적인 NMM (10.11g)을 투입하여 -10℃로 냉각시킨 후, 물 (42 mL), iPrOH (1.1 kg) 및 HOSu (230.14 g)의 혼합물을 첨가하고, 혼합물을 30분간 교반한다. 물 (0.82 L)을 첨가하고, 석출물을 여과 수득하여 iPrOH로 세척한 다음, 감압 하 건조하여 Boc-D-2Nal-OSu[2]를 수득한다.
Boc(2-3)OH: Boc-D-4Cpa-D-3Pal-OH의 합성
단계 3 (반응 단계)
H-D-3Pal-OH x 2 HCl (0.251 kg)과 단계 1에서 제조한 Boc-D-4Cpa-OSu [1] (0.397 kg)을 DMSO (3.33 L)에 용해하고, NMM (318.8 g)을 첨가한다. 혼합물을 6시간 동안 20℃에서 교반한다.
물 (17 L)을 첨가한 다음, HCl을 첨가하여 pH 4.25로 pH를 적정한다. 석출물을 여과 수득하고, 물에 분산시킨다. 수득되는 슬러리를 여과하고, 물로 세척한다. 고형물을 감압하 건조하여, Boc-D-4Cpa-D-3Pal-OH[3]를 수득한다.
중간 화합물 Ac(1-3)ONa: Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-ONa[7] (식 IIIa의 화합물)의 합성
단계 4 (반응 단계)
단계 3에서 제조한 Boc-D-4Cpa-D-3Pal-OH [3] (447.93 g)를 AcOEt (3.4 L) 및 AcOH (675 mL)의 혼합물에 용해하고, 이 혼합물을 MSA (672.77 g)를 첨가한 후 5℃로 냉각시킨다. 반응은 2시간 동안 10℃에서 계속 유지하고, 이 용액에 TEA (1214.28 g)를 첨가하여, H-D-4Cpa-D-3Pal-OH[4]를 수득한다.
단계 2에서 제조한 Boc-D-2Nal-OSu [2] (412.44 g)를 H-D-4Cpa-D-3Pal-OH [4]에 첨가하여, 20℃에서 24시간 동안 교반한다. 여기에 25% NH3 수용액 (0.154 L)과 n-부탄올 (4.5L)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 45℃에서 교반한다.
이 용액을 하기 물질로 세척한다:
● 물
● 물, pH 9.5 (pH는 NaOH 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 물
유기상에 AcOH (4.5 L)를 첨가하고, 이 용액을 감압 하 오일로 농축한다. 이 오일을 AcOH (4.5 L)에 재용해시키고, 다시 감압하 농축하여, Boc-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-OH[5]를 오일로서 수득한다.
Boc-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-OH [5]를 물 (0.09 L)과 AcOH (1.8 L)에 용해한다. MSA (672.77 g)를 첨가하고, 혼합물을 35℃ 미만의 온도에서 2시간 동안 교반한다. 이 용액을 TEA (779.16 g)로 중화한다. 이 용액을 오일로 감압하 농축시킨다. 오일을 톨루엔 (2.5 L)에 다시 용해시켜, 다시 감압하 농축하여, 오일을 수득한다. 최종 단계를 반복하여, H-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-OH[6]를 수득한다.
H-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-OH [6]를 톨루엔 (2.0 L)에 용해하고, 톨루엔 (0.25 L) 중의 아세틸 이미다졸 (132.14 g) 용액을 첨가한다. 이 용액을 20℃에서 2시간 동안 교반하고, 물 (0.1 L)을 첨가한다.
n-부탄올 (4.5 L)을 첨가하고, 유기 혼합물을 35℃에서, 하기 물질로 세척한다:
● 5% NaCl 수용액
● 메탄올 및 물, pH 5.5 (pH는 NaOH 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 메탄올 및 물, pH 11 (pH는 NaOH 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 메탄올 및 10% NaCl 수용액
추출을 통해 수득한 교반한 유기상에, 헵탄 (15 L)을 20℃에서 1시간 동안 첨가하고, 제조되는 현탁물을 1시간 동안 20℃에서 교반하면서 방치한다. 석출물을 여과에 의해 분리하고, 이를 헵탄 (3.5 L)에 현탁한다. 현탁물을 다시 여과한다. 헵탄을 이용한 마지막 세척 단계와 여과를 반복 수행한다. 그 후, 고형물을 감압하 건조하여 Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-ONa[7]를 수득한다.
주요 중간 화합물에 대한 내용
단계 4 중간 화합물 Ac(1-3)ONa [7]
품질 관리 허용 기준
설명 "백색 내지 약간 노란색을 띄는 분말 (육안 검사)"
동정 (1) "587 ± 0.4 Da(MS)"
동정 (2) "2Nal 0.9-1.1, 4Cpa 0.9-1.1, 3Pal 0.9-1.1 (AAA)"
키랄 순도 L-2Nal≤1.3%, L-4Cpa≤0.7%, L-3Pal≤2.0% (GC-MS)
순도 ≥90% (HPLC, 면적%)
실시예 2: 중간 화합물 Z(4-7)OH x DCHA: Z-Ser(tBu)-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OH x DCHA[15]의 합성
중간 화합물 Boc(6-7)OBzl: Boc-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OBzl의 합성
단계 5 (반응 단계)
Boc-D-4Aph(tBuCbm)-OH (379.45 g)를 NMP (0.76 L) 및 AcOEt (4.4 kg)에 용해시킨다. -4℃로 냉각시킨 후, IBC (150.2 g)와 NMM (101.1 g)을 첨가하고, 용액을 0.5시간 동안 -7℃에서 교반하여, Boc-D-4Aph(tBuCbm)-OAct[8]를 수득한다.
H-Leu-OBzl x TOS (491.88 g)를 NMP (1.5 L)에 용해하고, AcOEt (2.7 kg)를 첨가한 후, NMM (126.4 g)을 첨가한다. 이 용액을 다시 Boc-D-4Aph(tBuCbm)-OAct [8]로 옮기고, 1시간 동안 -10℃에서 교반한다. 그 후, 물 (0.5 L)을 첨가한다.
반응 혼합물을 하기 물질로 20℃에서 세척한다:
● 물, pH 8.5 (pH는 NaOH 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 물, pH 2.0 (pH는 HCl 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 물
유기상을 오일로 감압하 농축한다. 오일을 AcOEt (0.6 kg)에 다시 용해시키고, 감압 하에 오일로 재-농축한다. 잔류 오일을 AcOEt (0.6 kg)에 용해한다. 헵탄 (15.5 L)을 20℃에서 교반하면서 첨가한다. 석출물을 여과에 의해 분리하고, 헵탄으로 세척한 다음, 감압하 건조하여 Boc-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OBzl[9]을 수득한다.
Boc-(5-7)-OBzl: Boc-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OBzl의 합성
단계 6 (반응 단계)
단계 5의 Boc-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OBzl [9] (582.7 g)을 AcOEt (3.15 kg)에 용해한다. MSA (481 g)를 첨가하여, 5시간 동안 15℃ 미만에서 교반한 다음, TEA (406 g)를 첨가한다. 이후 DMF (0.333 kg)를 첨가하고, 다시 TEA (101 g)와 NMM (51 g)을 첨가하여, H-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OBzl[10]을 수득한다.
Boc-4Aph(L-Hor)-OH (462.46 g)를 DMF (2.09 kg) 및 AcOEt (1.44 kg)에 용해한다. IBC (150.24 g)와 NMM (111.27 g)을 첨가하고, 0.5시간 동안 -10℃에서 교반하여, Boc-4Aph(L-Hor)-OAct[11]를 수득한다.
H-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OBzl [10]을 Boc-4Aph(L-Hor)-OAct [11]에 첨가하여, -10℃에서 1.5시간 동안 교반한다. 그런 후, AcOEt (5.4 kg)와 n-부탄올 (6.0 L)을 첨가한다.
유기상을 20℃에서 하기 물질로 세척한다:
● 5% NaHCO3 수용액, 약 pH 8 (pH는 NaHCO3 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 10% NaCl 수용액, pH 2.5 (pH는 H3PO4 수용액으로 교반하면서 조정함)
DMF (0.9 L)를 유기상에 첨가한 다음, 오일로 감압하 농축한다. 이 용액을 교반하면서 물 (14 L)에 붓는다. 석출물을 여과 분리하고, 물로 세척한다. 고형물을 감압하 건조하여 Boc-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OBzl[12]을 수득한다.
중간 화합물 Z(4-7)OH x DCHA: Z-Ser(tBu)-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OH x DCHA (식 Va의 화합물)의 합성
단계 7 (반응 단계)
단계 6의 Boc-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OBzl [12] (885.02 g)을 MSA (961.1 g)와 AcOEt (7.2 kg)의 혼합물에 첨가하고, 2-부탄올 (2 L)을 첨가한 후, 수득되는 혼합물을 0℃에서 6시간 동안 교반한다. 그 후, MSA를 TEA (909.0 g)를 첨가하여 중화한다.
2-부탄올 (1 L) 중에 분산된 5% Pd/C (88.5 g)를 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 20℃에서 가압 하 수소 첨가 반응을 수행한다. 그 후, Pd/C를 여과 수득하고, 2-부탄올로 세척하여, H-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OH [13]가 함유된 용액을 수득한다.
Z-Ser(tBu)-OH (413.5 g)를 MeCN (2.5 L)에 용해하고, 용액을 -5℃로 냉각시킨다. HONp (195 g)를 첨가한 다음, DCC (278.5 g)를 첨가하고, 이 혼합물을 24시간 동안 20℃에서 교반한다. 그 후, 혼합물을 여과하고, MeCN으로 세척하여, Z-Ser(tBu)-ONp [14]를 수득한다.
NMM (354.2 g), DMF (4.75 kg) 및 Z-Ser(tBu)-ONp [14]를 H-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OH [13]의 용액에 첨가하고, 혼합물을 3일간 20℃에서 교반 방치한다.
수득되는 혼합물을 하기 물질로 세척한다:
● 10% NaCl 수용액, pH 2.5 (pH는 HCl 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 물, 산성 pH (pH 2.5) (pH는 HCl 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 7.5% NaHCO3 수용액
● 5% NaCl 수용액, (pH 2.5) (pH는 HCl 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 10% NaCl 수용액
최종 유기상에, DCHA (181 g)를 첨가하고, 유기상을 오일로 감압하 농축한다. 이 오일을 iPrOH (3.14 kg)에 다시 용해하고, 다시 오일로 감압하 농축한다. 잔류 오일을 다시 iPrOH (3.14 kg)에 용해하고, 교반하면서 용액을 AcOEt (31.5 kg)에 붓는다. 교반은 석출될 때까지 1시간 동안 20℃에서 지속시키고, 그런 후 석출물을 여과에 의해 분리한 다음 AcOEt로 세척한다. 고형물을 30℃에서 30시간 동안 감압하 건조하여, Z-Ser(tBu)-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OH x DCHA[15]를 수득한다. 중간 화합물 Z(4-7)OH x DCHA[15]의 순도는 ≥80% (HPLC)이다.
단계 7 중간 화합물 Z(4-7)OH [15]
품질 관리 허용 기준
설명 "백색 내지 약간 노란색을 띄는 분말 (육안 검사)"
동정 (1) "972.5 ± 0.4 Da(MS)"
동정 (2) "Ser 0.9-1.1, 4Aph 1.8-2.2, Leu 0.9-1.1 (AAA)"
키랄 순도 D-Ser≤2.0%, D-4Aph 47-53%, D-Leu≤0.7% (GC-MS)
순도(1) [4Aph5(히단토인아세틸)] Z(4-7)OH DCHA ≤0.5%(HPLC, 면적%)
순도(2) ≥80% (HPLC, 면적%)
실시예 3: 중간 화합물 H(8-10)NH 2 : H-Lys(iPr,Boc)-Pro-D-Ala-NH 2 [21]의 합성
Boc(9-10)NH 2 : Boc-Pro-D-Ala-NH 2 의 합성
단계 8 (반응 단계)
Boc-Pro-OH (226.02 g)를 iPrOH (1.73 kg)에 용해한다. 반응 혼합물을 -5℃로 냉각한다. IBC (143.4 g)와 NMM (106.2 g)을 첨가하고, 이 혼합물을 5℃에서 0.5시간 동안 교반하여 Boc-Pro-OAct[16]를 수득한다.
H-D-Ala-NH2 x HCl (124.57 g)을 iPrOH (1.57 kg) 및 NMM (106.2 g)의 혼합물에 현탁한다. 현탁물을 Boc-Pro-OAct [16]에 첨가한다. 반응 혼합물을 10℃에서 3시간 동안 교반 방치한다. 그런 후, DMEDA (10.6 ml)를 첨가한다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 오일로 감압하 농축한다. 이 오일을 다시 용해하고, AcOEt (1.125 kg)로 다시 농축시킨다.
잔류 오일을 AcOEt (1.8 kg)와 n-부탄올 (0.6 L)의 혼합물에 용해한다. 유기상을 아래 물질로 세척한다:
● 15% NaCl 수용액, pH 2.5 (pH는 HCl 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 15% NaCl 수용액, pH 9.5 (pH는 NaOH 수용액으로 교반하면서 조정함)
유기상을 감압하 농축하고, AcOEt (1.08 kg)에 다시 용해하고, 오일로 다시 농축한다.
AcOEt (0.33 kg)와 헵탄 (0.75 L)의 혼합물을 20℃에서 첨가하여, 16시간 동안 교반한다. 형성되는 석출물을 여과하고, AcOEt와 헵탄의 혼합물을 이용하여 필터 상에서 세척한다. 고형물을 다시 감압하 건조하여, Boc-Pro-D-Ala-NH2[17]를 수득한다.
중간 화합물 H(8-10)NH 2 : H-Lys(iPr,Boc)-Pro-D-Ala-NH 2 (식 VIa의 화합물)의 합성
단계 9 (반응 단계)
단계 8의 Boc-Pro-D-Ala-NH2 [17] (313.89 g)를 MSA (528.61 g)와 iPrOH (0.785 kg)의 혼합물에 용해하고, 이 용액을 45℃에서 1시간 동안 교반한다. 그런 후, 혼합물을 TEA (607.14 g)로 중화하여, H-Pro-D-Ala-NH2[18]를 수득한다.
Z-Lys(iPr,Boc)-OH × DCHA (603.83 g)를 AcOEt (1.17 kg)에 현탁하고, 하기 물질로 세척한다:
● 12% NaHSO4 수용액
● 물
● 15% NaCl 수용액
추출로 수득한 Z-Lys(iPr,Boc)-OH [19]의 유기상을 H-Pro-D-Ala-NH2 [18]에 첨가한다. HOBt (183.79 g)와 DCC (227.0 g)를 AcOEt (0.135 kg)에 용해하여 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반한다. 그런 후, 물 (0.2 L)을 첨가한다. 혼합물을 여과하고, AcOEt로 세척한다. 여과물을 조합하여 오일로 감압하 농축한다. 오일을 AcOEt (0.9 kg)에 용해하고, 여과한 다음, 용액을 하기 물질로 세척한다:
● 물, pH 2.5 (pH는 HCl 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 물, pH 9 (pH는 NaOH 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 10 % NaCl 수용액, pH 7 (pH는 HCl 수용액 또는 NaOH 수용액으로 교반하면서 조정함)
유기상을 감압하 농축하여, Z-Lys(iPro,Boc)-Pro-D-Ala-NH2[20]를 수득한다.
Z-Lys(iPro,Boc)-Pro-D-Ala-NH2[20]를 에탄올 (0.04 kg) 및 물 (0.5 L)에 용해하고, 5% Pd/C (50 g)를 첨가한다. 6 M HCl를 첨가하여 슬러리를 pH 2.5로 산성화시킨 후, 20℃에서 수소를 처리한다. 반응 종료 후, 촉매를 여과 제거하고, 32 % NaOH를 첨가하여 pH 7.0으로 pH를 높인다. 이후, 에탄올을 감압 하 증발시켜 제거한다. 수득되는 수상에 n-부탄올 (1 L)을 첨가하고, NaOH 수용액으로 pH 9로 적정하고, 추출을 개시한다. 이 과정을 반복한다. 조합한 유기상을 오일로 감압하 농축시킨다.
오일을 AcOBu (0.5 L)에 용해하고, 20℃에서 감압하 농축한 다음 AcOBu (0.5 L)에 다시 용해한다. 그 후, 헵탄 (2 L)을 50℃에서 1시간 동안 첨가한다. 현탁물을 0℃에서 16시간 동안 교반 방치한다. 석출물을 여과에 의해 분리하고, 헵탄으로 세척한다. 마지막으로, 고형물을 감압하 건조하여 H-Lys(iPr,Boc)-Pro-D-Ala-NH2[21]를 수득한다. 중간 화합물 H(8-10)NH2[21]의 순도는 ≥95% (HPLC)이다.
단계 9 중간 화합물 H(8-10)NH 2 [21]
품질 관리 허용 기준
설명 "백색 내지 약간 노란색을 띄는 분말 (육안 검사)"
동정 (1) "456.3 ± 0.4 Da(MS)"
동정 (2) "Lys(iPr) 0.9-1.1, Pro 0.9-1.1, Ala 0.9-1.1 (AAA)"
키랄 순도 D-Lys(iPr)≤0.3%, D-Pro≤0.3%, L-Ala≤0.5% (GC-MS)
순도 ≥95% (HPLC, 면적%)
실시예 4: 최종 중간 화합물 (식 II의 화합물)로의 분절 축합
중간 화합물 Z(4-10)NH 2 : Z-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH 2 [22] (IVg의 화합물)
단계 10 (반응 단계)
단계 7의 Z-Ser(tBu)-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OH x DCHA [15] (1153.41 g)를 DMF (2.1 kg)에 용해한다. 그 후, HOBt (153.2 g)를 AcOEt (6.9 kg) 및 단계 9의 H-Lys(iPr,Boc)-Pro-D-Ala-NH2 [21] (569.5 g)와 함께 첨가한다. 모든 고형물들이 용해되었을 때, MSA (96.1 g)를 첨가한다. 이 용액을 5℃ 미만으로 냉각시킨 후, DCC (309.5 g)를 AcOEt (0.810 kg)에 용해시켜 첨가한다. 온도를 20℃로 승온시키고, 24시간 동안 반응을 계속 유지시킨다. Z-Ser(tBu)-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(tBuCbm)-Leu-OH x DCHA [15]의 변환율은 ≥96 % (HPLC)이다. AcOEt (4.95 kg)와 물 (5.5 L)을 첨가하고, 혼합물을 교반 및 여과한다.
교반하는 동안, 7.5% NaHCO3 (aq) (35L)를 여과물에 첨가한다. 상 분리하고, 유기상을 아래 물질로 추가적으로 세척한다:
● 7.5% NaHCO3
● 물, pH 3 (pH는 HCl 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 물
최종 유기상을 오일로 감압하 농축한다. 오일을 EtOH (0.405 kg)로 재농축한 다음, AcOEt (0.45 kg)로 농축한다. 잔류 오일을 EtOH (0.405 kg)에 용해하고, AcOEt (0.45 kg)와 AcOBu (4.6 L)를 첨가한다. 이 용액을 헵탄 (27.6 L)에 1시간 동안 20℃에서 첨가한다. 그 후, 석출물을 여과하고, 헵탄으로 세척한다. 고형물을 최대 감압하 건조하여, Z-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH2[22]를 수득한다. Z-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH2 [22]의 순도는 ≥70 % (HPLC)이다.
최종 중간 화합물 Ac(1-10)NH 2 : Ac-d-2Nal-d-4Cpa-d-3Pal-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH 2 [24]
단계 11 (반응 단계)
단계 10의 Z-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH2 [22] (1409.67 g)를 EtOH (10.98 kg)와 물 (3.2 L)의 혼합물에 첨가하고, 용액이 균질해질 때까지 교반한다. 5 % Pd/C (211 g)를 첨가한다. 혼합물을 20℃에서 HCl 수용액으로 pH를 pH 2.5로 유지시키면서 수소 첨가 반응을 수행한다.
촉매를 여과 제거하고, pH를 pH 3.8로 NaOH 수용액으로 적정한다. 여과물을 오일로 감압하 농축한다. EtOH (4.7 kg)를 오일을 첨가하고, 다시 농축시킨다. 그 후, 오일에 AcOEt (5.4 kg)를 첨가하여 재-농축시키고, 이 과정을 반복하여, H-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH2[23]를 수득한다.
H-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH2 [23]를 AcOEt (1.125 kg)에 분산시킨 후, HOBt (153.16 g)를 첨가하여, 혼합물을 0℃로 냉각시킨다. 단계 4의 Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-ONa [7] (609.05 g)를 DMSO (2.5 L)에 용해하고, 이 용액을 H-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH2 [23]를 포함하는 슬러리 용액과 혼합하고, AcOEt (0.45 kg)에 용해한 DCC (309.5 g)를 첨가한다. 혼합물을 5℃에서 24시간 동안 교반한다. [23]의 변환율은 ≥96% (HPLC)이다.
물 (150 mL)과 DMSO (0.5 L)를 첨가하고, 3시간 이상 동안 20℃에서 계속 교반한다. 석출물을 여과하고, AcOEt 및 DMSO의 혼합물로 세척한다. 여과물을 조합하고, n-부탄올 (17 L)를 첨가한다. 유기 용액을 하기 물질로 세척한다:
● 물, pH 2.5 (pH는 HCl 수용액으로 교반하면서 조정함)
● 7% NaHCO3 (aq)
● 10% NaCl 수용액 (혼합물의 pH는 필요에 따라, HCl 수용액으로 교반하면서 pH 7.0로 중화함)
DMF (4.75 kg)를 첨가하고, 유기상을 오일로 감압하 농축한다. 오일을 물 (50 L)에 1시간 동안 20℃에서 왕성하게 교반하면서 서서히 첨가한다. 석출물을 필터 상에서 분리하고, 물로 2회 세척한다. 그 후, 고형물을 감압하 건조하여, Ac-d-2Nal-d-4Cpa-d-3Pal-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH2[24][최종 중간 화합물]를 수득한다. [24]의 순도는 ≥70 % (HPLC)이다.
실시예 5: 최종 중간 화합물 Ac(1-10)NH 2 를 조산물 데가렐릭스[25]로의 탈보호
단계 12 (반응 단계)
단계 11의 Ac-d-2Nal-d-4Cpa-d-3Pal-Ser(tBu)-4Aph(l-Hor)-d-4Aph(tBuCbm)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-d-Ala-NH2 [24] (식 IIb의 화합물)(1844.59 g)를 TFA (28.3 kg)에 20℃에서 용해한다. 이 용액을 20℃에서 24시간 동안 교반한다 (3개의 보호기 제거). [24]의 변환율은 ≥99 % (HPLC)이다.
그 후, 반응 혼합물을 물 (74 L), AcONH4 (19.1 kg), AcOH (18.4 L) 및 EtOH (14.52 kg)의 차가운 (10℃ 미만)과 혼합한다. 2가지 용액을 혼합하는 동안 온도를 25℃ 미만으로 유지시킨다. 최종 용액의 pH를 필요에 따라 TFA 또는 AcONH4로 pH 3으로 조정하여, Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(Cbm)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2[25][조산물 데가렐릭스] 용액을 수득한다.
단계 13 (정제 및 동결건조)
조산물 데가렐릭스 용액을 역상 컬럼으로 펌핑한다. EtOH/0.12 % TFA 수용액을 이용한 농도 구배를 통해 컬럼에서 데가렐릭스를 용출시킨다. ≥95% 순도의 순획을 역상 컬럼에서 EtOH/ 1 % AcOH 수용액의 농도 구배로 재정제한다. 고순도 분획을 동결건조한다.

Claims (13)

  1. 식 Ac-AA1-AA10-NH2의 데가렐릭스(Degarelix), 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 이의 용매화물의 액상 제조 방법으로서,
    AA1이 D-2Nal이고, AA2가 D-4Cpa이고, AA3가 D-3Pal이고, AA4가 Ser이고, AA5가 4Aph(L-Hor)이고, AA6가 D-Aph(Cbm)이고, AA7이 Leu이고, AA8이 Lys(iPr)이고, AA9이 Pro이고, AA10이 D-Ala이고,
    상기 방법은 식 II에 따른 데가렐릭스 전구체, 이의 염 또는 이의 용매화물에 절단제(cleaving agent)를 처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    Figure pct00008

    상기 식에서,
    P1은 아미노 보호기 또는 바람직하게는 아세틸이고;
    P4는 수소 또는 하이드록시 보호기, 바람직하게는 하이드록시 보호기이고;
    P6는 수소 또는 아미노 보호기, 바람직하게는 아미노 보호기이고; 및
    P8은 아미노 보호기임.
  2. 제1항에 있어서,
    P1이 아세틸이고;
    P4가 하이드록시 보호기이고;
    P6가 수소 또는 아미노 보호기이고;
    P8이 아미노 보호기인 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제2항에 있어서,
    P1이 아세틸이고;
    P4가 tBu이고;
    P6가 수소 또는 tBu이고;
    P8이 Boc인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 식 (II)로 표시되는 데카펩타이드, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 이의 용매화물의 액상 제조 방법으로서,
    상기 방법은, 식 (III)으로 표시되는 제1 폴리펩타이드 또는 이의 염을, 식 (IV)로 표시되는 제2 폴리펩타이드 또는 이의 염과, 펩타이드 커플링제의 존재 하에, 액체 시약 매질 중에서, 커플링하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (P1)AA1-AA2-AA3-(P4)AA4(P4)-AA5-(P6)AA6(P6)-AA7-(P8)AA8(P8)-AA9-AA10-NH2
    (II)
    상기 식 II에서,
    AA1은 D-2Nal이고, AA2는 D-4Cpa이고, AA3는 D-3Pal이고, AA4는 Ser이고, AA5는 4Aph(L-Hor)이고, AA6는 D-Aph(Cbm)이고, AA7은 Leu이고, AA8은 Lys(iPr)이고, AA9은 Pro이고, AA10은 D-Ala이고;
    P1은 아미노 보호기 또는 아세틸이고;
    P4는 수소 또는 하이드록시 보호기, 바람직하게는 하이드록시 보호기이고;
    P6는 수소 또는 아미노 보호기, 바람직하게는 아미노 보호기이고;
    P8은 아미노 보호기임,
    (P1)AA1-AA2-AA3 (III)
    AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (IV)
  5. 제4항에 있어서,
    P1이 아세틸이고;
    P4가 하이드록시 보호기이고;
    P6가 수소 또는 아미노 보호기이고;
    P8이 아미노 보호기인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 제1항 내지 제3항에 따른 방법을 후속적으로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 식 (IV)로 표시되는 상기 제2 폴리펩타이드의 제조 방법으로서,
    상기 방법은, 식 (V)로 표시되는 폴리펩타이드, 이의 염 또는 이의 용매화물을 식 (VI)로 표시되는 폴리펩타이드, 이의 염 또는 이의 용매화물과 커플링시킨 후, 보호기 PN을 제거하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (P4)AA4-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (IV)
    상기 식 (IV)에서,
    P4는 수소 또는 하이드록시 보호기, 바람직하게는 하이드록시 보호기이고;
    P6는 수소 또는 아미노 보호기, 바람직하게는 아미노 보호기이고;
    P8은 아미노 보호기임,
    (PN) AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7 (V),
    AA8(P8)-AA9-AA10-NH2 (VI)
    상기 식에서, AA4 내지 AA10, P4, P6, 및 P8은 제1항에서 정의된 바와 동일하며, PN은 수소 첨가 반응(hydorgenation)에 의해 제거될 수 있는 보호기임.
  8. 제7항에 있어서,
    PN이, Pd/C 촉매의 존재 하에 화합물 (PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2의 수소 첨가 반응에 의해 제거되는, 벤질옥시카르보닐인 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 제4항 내지 제6항 중 어느 한항에 따른 방법을 후속적으로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 화합물 (PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7의 제조 방법으로서,
    AA4 내지 AA7, P4, 및 P6는 제1항에 따른 정의와 동일하며,
    PN은 수소 첨가 반응에 의해 제거될 수 있는 보호기이며,
    상기 방법은,
    (a) P6가 상기 정의된 바와 동일한 의미를 가지며, (PN2)가 N-말단 아미노 보호기 또는 수소이고, (PC)가 수소 첨가 반응을 통해 절단될 수 있는 C-말단 카르복시 보호기인, (PN2)AA5-AA6(P6)-AA7(PC)를 제공하는 단계;
    (b) 아미노 보호기 (PN2)를, 존재하는 경우, 제거하는 단계;
    (c) H-AA5-AA6(P6)-AA7(PC)에 수소 첨가 반응을 수행하여, H-AA5-AA6(P6)-AA7을 수득하는 단계; 및
    (d) H-AA5-AA6(P6)-AA7을 (PN)AA4(P4)의 활성화된 에스테르와 반응시켜, AA4가 상기 정의된 바와 동일한 의미를 가지며, (P4)가 하이드록시 보호기 또는 수소이고, PN이 바람직하게는 수소 첨가 반응에 의해 제거될 수 있는 보호기인, (PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7을 수득하는 단계
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 제1항 내지 제3항 중 어느 한항에 따른 방법을 통해 데가렐릭스 용액을 수득하는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한항에 있어서, pH가 9 미만, 바람직하게는 8 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 하기 식으로 표시되는 폴리펩타이드 화합물, 이의 염 또는 이의 용매화물:
    (P1)AA1-AA2-AA3,
    AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2,
    (PN)AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2,
    (PN)AA4 (P4)-AA5-AA6(P6)-AA7,
    AA8(P8)-AA9-AA10-NH2,
    (P1)AA1-AA2-AA3-AA4(P4)-AA5-AA6(P6)-AA7-AA8(P8)-AA9-AA10-NH2,
    상기 식들에서,
    AA1은 D-2Nal이고, AA2는 D-4Cpa이고, AA3는 D-3Pal이고, AA4는 Ser이고, AA5는 4Aph(L-Hor)이고, AA6는 D-Aph(Cbm)이고, AA7은 Leu이고, AA8은 Lys(iPr)이고, AA9은 Pro이고, AA10은 D-Ala이며;
    P1은 아미노 보호기 또는 아세틸이고;
    P4는 수소 또는 하이드록시 보호기, 바람직하게는 하이드록시 보호기이고;
    P6는 수소 또는 아미노 보호기, 바람직하게는 아미노 보호기이고;
    P8은 아미노 보호기이고,
    PN은 보호기임.
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