CN102924569A - 一种依替巴肽的液相合成方法 - Google Patents

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高秀伟
高秀岩
任孝敏
王朴
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Abstract

本发明涉及一种依替巴肽的液相合成方法，包括合成三肽，合成四肽，合成七肽，环化，脱除保护基和胍基化六个阶段。本发明液相合成依替巴肽的方法，解决了形成分子内二硫键合成环肽过程中导致副产物生成的问题，确立了脱除环肽侧链保护基的相关条件，建立了将环肽氨基转化为胍基的条件及方法，提高了收率；该方法的原料试剂均价廉易得，能有效降低产品成本，显著提高生产效益。

Description

一种依替巴肽的液相合成方法
技术领域
本发明涉及一种依替巴肽的液相合成方法，属于生物化学领域。
背景技术
依替巴肽(Eptifibatide)由美国COR Therapeutic公司研发，1998年在美国上市，用于急性冠脉综合症(Acute Coronary Syndrome，ACS)的治疗。通过抑制凝血因子Ⅰ(Fibrinogen)，与血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa受体结合，从而抑制血小板聚集。在临床应用中，对不稳定型心绞痛、急性心肌梗死、冠状动脉介入等心血管疾病的治疗均显示了良好疗效。目前，心血管疾病逐年增加已成为现代社会对人类健康威胁严重的常见病之一，作为具有药效高、毒副作用低、不会在体内蓄积中毒等优势的多肽药物，依替巴肽可有效减少心血管事件的发生率，降低死亡率，其临床应用将会越来越广。
目前已知的依替巴肽化学合成方法中，固相合成作为实验室研究是一个较好的方法，此方法高效、迅速，但固相合成原料利用率低，使用的试剂及溶剂昂贵、不易处理，用到的乙二硫醇、DMF等毒性较大不适合产业化生产。其中，采用Fmoc-Har-OH这一特殊氨基酸衍生物为起始原料，不但价格相当昂贵，而且由于侧链基团未保护，在有机溶剂中溶解性差，导致副产物增加，合成效率降低。此外，规模较小，仅局限在1L左右的反应体系。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能大规模制备依替巴肽的液相合成方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种依替巴肽的液相合成方法，包括合成三肽，合成四肽，合成七肽，环化，脱除保护基和胍基化六个阶段。
具体步骤如下：
1）合成三肽
将H-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2；然后脱除所述Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基，得到H-Pro-Cys(Trt)-NH2；再将得到的所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
2）合成四肽
将Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基脱除，得到H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；然后将所述H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到四肽Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；再将所述Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基脱除，得到四肽H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
3）合成七肽
首先制备三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH：
将H-Gly-OMe与Cbz-Lys(Boc)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe；然后将所述Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe  中的Cbz保护基脱除，得到H-Lys(Boc)-Gly-OMe；再将所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe与Mpa(Trt)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe；再将所述三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe用NaOH溶液水解，然后再依次用水和乙醚浸洗，得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH，其中所述水和乙醚质量比为3:1；
其次将四肽H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到线性七肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
4）环化
将线性七肽环化得到环肽
Figure BDA00002138853600031
5）脱除保护基
将
Figure BDA00002138853600032
溶于饱和的HCl和AcOEt溶液，脱除所述
Figure BDA00002138853600033
侧链β-羧基上的-OtBu和ε-氨基上的-Boc的保护基，得到环七肽盐酸盐
Figure BDA00002138853600034
6）胍基化
将环七肽盐酸盐
Figure BDA00002138853600035
中Lys的侧链氨基在三氧化硫脲作用下转化为胍基，得到所述依替巴肽。
本发明中用到的缩略语如下：
Figure BDA00002138853600036
Figure BDA00002138853600041
本发明的有益效果是：本发明液相合成依替巴肽的方法，解决了形成分子内二硫键合成环肽过程中导致副产物生成的问题，确立了脱除环肽侧链保护基的相关条件，建立了将环肽氨基转化为胍基的条件及方法，提高了收率；该方法的原料试剂均价廉易得，能有效降低产品成本，显著提高生产效益。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，所述H-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Pro-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时；
所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Trp-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
进一步，所述脱除Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时；
所述H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Asp(OtBu)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时。
进一步，所述H-Gly-OMe与Cbz-Lys(Boc)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Gly-OMe、Cbz-Lys(Boc)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe中的Cbz保护基的具体步骤为：以Pd-C为催化剂，MeOH为溶剂，反应温度为0-35℃的条件下，通入H2进行催化氢化反应，反应时间12小时；其中，所述Pd-C催化剂的重量为所述Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe的10-20%，所述Pd-C催化剂的质量分数为10%；
所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe与Mpa(Trt)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe、Mpa(Trt)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe用NaOH溶液水解的工艺条件为：溶剂为1mol/L的NaOH溶液，反应温度为0～35℃；反应时间为1.5小时。
进一步，所述H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应时间4小时；其中，所述H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2、Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2。
进一步，所述环化的具体步骤为：将所述Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与I2的DCM溶液，在溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下进行反应，反应时间4小时，得到反应液，反应液分别用Na2S2O3溶液和饱和NaCl溶液萃取，再用无水Na2SO4干燥，然后加乙醚析出粗产物，再用DCM和MeOH重结晶，得到环肽
其中，所述Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与I2的摩尔数比为1:5。
进一步，将所述
Figure BDA00002138853600062
溶于饱和的HCl/AcOEt溶液的反应条件为：在反应温度为0～35℃的条件下，反应0.5小时。
进一步，将环七肽盐酸盐
Figure BDA00002138853600071
中Lys的侧链氨基在三氧化硫脲作用下转化为胍基的工艺条件为：在溶剂为MeOH，反应温度为0～35℃的条件下，反应2小时；其中，所述环七肽盐酸盐及三氧化硫脲的摩尔数之比为1:3。
进一步，所述三氧化硫脲的制作步骤为：将浓硫酸、双氧水及二氧化硫脲进行反应，反应温度为4℃，反应时间为12小时，水沉淀出所述三氧化硫脲；其中，所述浓硫酸、双氧水及二氧化硫脲的摩尔比为0.05:1:0.8。
进一步，在上述提到的步骤中，所述洗涤步骤均为用NaHCO3溶液、盐酸溶液及饱和NaCl溶液依次进行洗涤；所述干燥剂均为无水Na2SO4干燥剂；所述减压温度均为30～40℃。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1.Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
将H-Cys(Trt)-NH2（MW 362.49，1.812g，5mmol）溶于10ml DCM中，搅拌下加入DIEA（MW 129.24，1.1ml，6mmol）；Fmoc-Pro-OH（MW 337.37，1.687g，5mmol）与HOCt(MW.157.13,0.943g,6.0mmol)溶于25ml DCM中，搅拌下缓缓滴加DIC(MW 126.20,0.91ml,6.0mmol)于上述溶液中，反应15min。然后将此混合溶液滴加至H-Cys(Trt)-NH2/DIEA/DCM混合液中，室温下搅拌4h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M,25ml*2)、盐酸(0.2M,20ml*2)及饱和食盐水(30ml)依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得油状物，加Et2O放置，得白色固体Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2。
实施例2.H-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
取Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW 681.84,3.410g,5mmol)溶于50mlEt2NH/DCM(10%)中，反应6h,TLC进行监测，直至反应完全。反应液于30℃减压抽去DCM和Et2NH，残物用DCM溶解后用盐酸(0.1M)洗至中性，再依次Na2CO3(0.1M)、水及饱和食盐水萃取，无水Na2SO4干燥后，减压浓缩得H-Pro-Cys(Trt)-NH2。
实施例3.Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
将H-Pro-Cys(Trt)-NH2（MW 459.60，2.298g，5mmol）溶于15ml DCM中，搅拌下加入DIEA（MW 129.24，1.1ml，6mmol）；Fmoc-Trp-OH（MW 426.46，2.132g，5mmol）与HOCt(MW.157.13,0.943g,6.0mmol)溶于30ml DCM中，搅拌下缓缓滴加DIC(MW 126.20,0.91ml,6.0mmol)于上述溶液中，反应15min。然后将此混合溶液滴加至H-Pro-Cys(Trt)-NH2/DIEA/DCM混合液中，室温下搅拌6h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M,25ml*2)、盐酸(0.2M,20ml*2)及饱和食盐水(30ml)依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得油状物，加DCM/Et2O结晶，得白色固体Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2。
实施例4.H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
取Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW 868.05,2.604g,3mmol)溶于50mlEt2NH/DCM(10%)中，反应6h,TLC进行监测，直至反应完全。反应液于30℃减压抽去DCM和Et2NH，残物用DCM溶解后用盐酸(0.1M)洗至中性，再依次Na2CO3(0.1M)、水及饱和食盐水萃取，无水Na2SO4干燥后，减压浓缩得H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2。
实施例5.Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
将H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW 645.81,1.937g,3mmol)溶于15ml DCM中，搅拌下加入DIEA(MW 129.24,0.63ml,3.6mmol)；Fmoc-Asp(OtBu)-OH(MW411.45，1.358g，33mmol)与HOCt(MW 157.13，0.567g，3.6mmol)溶于30ml无水DCM中，搅拌下缓缓滴加DIC(MW 126.20,0.54ml,3.6mmol)于上述溶液中，活化15min。然后将此混合溶液滴加至H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2/DIEA/DCM混合溶液中，室温下搅拌6h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M,25ml*2)、盐酸(0.2M,20ml*2)及饱和食盐水(30ml)依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得油状物，加DCM/Et2O 4℃放置，得白色固体Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2。
实施例6.H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
取Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW 1039.25,2.079g,2mmol)溶于50ml Et2NH/DCM(10%)中，反应6h,TLC进行监测，直至反应完全。反应液于30℃减压抽去DCM和Et2NH，残物用DCM溶解后用盐酸(0.1M)洗至中性，再依次Na2CO3(0.1M)、水及饱和食盐水萃取，无水Na2SO4干燥后，减压浓缩得H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2。
实施例7.Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe的制备
将H-Gly-OMe.HCl（MW 125.55，0.628g，5mmol），混悬于10ml DCM中，搅拌下加入DIEA（MW 129.24，1.95ml，11.0mmol)；将Cbz-Lys(Boc)-OH（MW125.55，0.63g，5mmol)与HOCt（MW 157.13，0.943g，6mmol）溶于25ml DCM中，搅拌下缓慢滴加DIC（MW 126.20，0.91ml，6.0mmol），反应15min。然后将此混合溶液滴加至H-Gly-OMe.HCl/DIEA/DCM溶液中，室温下搅拌4h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M，25ml*2)、盐酸（0.2M，20ml*2）及饱和食盐水（30ml）依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得油状物，加乙醚放置，得白色固体Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe。
实施例8.H-Lys(Boc)-Gly-OMe的制备
取Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe（MW.451.51，2.258g，5mmol）溶于60ml MeOH中，加入Pd-C（120mg），通入H2进行催化氢化，12h后TLC检测反应完全，滤除Pd-C，减压浓缩。得胶状固体为H-Lys(Boc)-Gly-OMe。
实施例9.Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe的制备
将H-Lys(Boc)-Gly-OMe（MW 317.38，1.587g，5mmol）溶于15ml无水DCM中，搅拌下加入DIEA（MW 129.24，1.1ml，6mmol）；将Mpa(Trt)-OH（MW348.45，1.742g，5mmol）与HOCt(MW.157.13，0.943g，6.0mmol)溶于30mlDCM中，搅拌下缓慢滴加DIC（MW 126.20，0.91ml，6.0mmol），活化15min。然后将此混合溶液滴加至H-Lys(Boc)-Gly-OMe/DIEA/DCM中，室温搅拌6h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M，25ml*2)、盐酸（0.2M，20ml*2）及饱和食盐水（30ml）依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得油状物，加DCM/Et2O结晶，得白色固体Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe。
实施例10.Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH的制备
取Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe(MW 647.82，1.943g,3mmol)溶解于55mlMeOH中，搅拌下加入NaOH溶液(1M,6ml)，TLC跟踪反应，1.5h反应完全。加1M盐酸3ml，减压抽去溶剂后，加1M盐酸5ml，得白色絮状物，抽滤，水、乙醚浸洗，得白色固体Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH。
实施例11.Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2的制备
将H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW 817.01,1.634g,2mmol)溶于15ml DCM中，搅拌下加入DIEA(MW 129.24,0.42ml,2.4mmol)；Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH(MW 633.80，1.268g,2mmol)与HOCt(MW 157.13,0.314g,2.4mmol)溶于30ml DCM中，搅拌下缓缓滴加DIC(MW 126.20,0.36ml,2.4mmol)于上述溶液中，活化15min。然后将此混合溶液滴加至H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2/DIEA/DCM混合溶液中，室温下搅拌4h，TLC检测反应完全。反应液过滤后用NaHCO3(0.2M,25ml*2)、盐酸(0.2M,20ml*2)及饱和食盐水(30ml)依次萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得油状物，加乙醚超声，得淡黄色固体，DCM/Et2O重结晶，得淡黄色固体Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2。
实施例12.的制备
将Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2(MW1432.79,1.433g,1mmol)溶于1L DCM中，搅拌下缓慢滴加I2(MW253.81,1.269g,5mmol)的DCM溶液200ml，TLC跟踪反应，4h反应完全，反应液用Na2S2O3溶液(0.05M，200ml*2)、饱和NaCl溶液(200ml)萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩后得到的粗产物用乙醚浸洗，DCM/MeOH重结晶后得白色固体
Figure BDA00002138853600112
实施例13.
Figure BDA00002138853600113
的制备
取(MW 946.14，0.946g,1mmol)溶解于60ml饱和HCl/AcOEt溶液中，室温反应30min，有不溶物产生，TLC检测反应完全，抽滤，得白色固体，硅胶柱层析，得环七肽盐酸盐
Figure BDA00002138853600115
实施例14.依替巴肽的制备
取
Figure BDA00002138853600116
(MW 826.38，0.826g,1mmol)，溶于15ml MeOH中，加DIEA(MW 129.24，0.70ml,4mmol)，室温搅拌下缓慢加入三氧化硫脲一水合物(MW 142.13,0.426g,3mmol)，TLC跟踪反应，2h反应完全，坂口反应检查呈红色(取反应液0.2ml，加甲醇至1ml，再加10%NaOH溶液0.5ml，0.2%α-萘酚2滴，混匀后再加次氯酸钠溶液2滴)，减压抽去溶剂，加2ml MeOH溶解，滤去不溶物，MeOH/DCM结晶，得白色固体为依替巴肽。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将H-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2；然后脱除所述Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基，得到H-Pro-Cys(Trt)-NH2；再将得到的所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
2）将步骤1）中得到的Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基脱除，得到H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；然后将所述H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到四肽Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；再将所述Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基脱除，得到四肽H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2，备用；
3）将H-Gly-OMe与Cbz-Lys(Boc)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到二肽Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe；然后将所述Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe中的Cbz保护基脱除，得到H-Lys(Boc)-Gly-OMe；再将所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe与Mpa(Trt)-OH进行偶合反应，然后再依次进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe；再将所述三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe用NaOH溶液水解，然后再依次用水和乙醚浸洗，得到三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH，其中所述水和乙醚质量比为3:1；
4）将步骤2）中得到的四肽H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与步骤3）中得到的三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH进行偶合反应，然后再依次 进行洗涤、干燥、减压蒸馏、加乙醚重结晶后得到线性七肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2；
5）将步骤4）得到的线性七肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2环化得到环肽
Figure FDA00002138853500021
6）将步骤5）得到的 
Figure FDA00002138853500022
溶于饱和的HCl和AcOEt溶液，脱除所述 
Figure FDA00002138853500023
侧链β-羧基上的-OtBu和ε-氨基上的-Boc的保护基，得到环七肽盐酸盐
7）将环七肽盐酸盐 
Figure FDA00002138853500025
中Lys的侧链氨基在三氧化硫脲作用下转化为胍基，得到所述依替巴肽。
2.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤1)中，所述H-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Pro-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Pro-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1∶1∶1.2；
所述脱除Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时；
所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Trp-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应， 其中，所述H-Pro-Cys(Tr t)-NH2、Fmoc-Trp-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1∶1∶1.2。
3.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤2）中，所述脱除Fmoc-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时；
所述H-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Fmoc-Asp(OtBu)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Pro-Cys(Trt)-NH2、Fmoc-Asp(OtBu)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Fmoc-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2中的Fmoc保护基的工艺条件为：在试剂为Et2NH和DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应6小时。
4.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤3）中，所述H-Gly-OMe与Cbz-Lys(Boc)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Gly-OMe、Cbz-Lys(Boc)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2；
所述脱除Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe中的Cbz保护基的具体步骤为：以Pd-C为催化剂，MeOH为溶剂，反应温度为0-35℃的条件下，通入H2进行催化氢化反应，反应时间12小时；其中，所述Pd-C催化剂的重量为所述Cbz-Lys(Boc)-Gly-OMe的10-20%，所述Pd-C催化剂的质量分数为10%；
所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe与Mpa(Trt)-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下反应，其中，所述H-Lys(Boc)-Gly-OMe、Mpa(Trt)-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2； 
所述三肽Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OMe用NaOH溶液水解的工艺条件为：溶剂为1mol/L的NaOH溶液，反应温度为0～35℃；反应时间为1.5小时。
5.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤4）中，所述H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH进行偶合反应的工艺条件为：在偶和试剂为DIC和HOCt，溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下，反应时间4小时；其中，所述H-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2、Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH及偶和试剂的摩尔数之比为1:1:1.2。
6.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤5）中，所述环化的具体步骤为：将所述Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与I2的DCM溶液，在溶剂为DCM，反应温度为0～35℃的条件下进行反应，反应时间4小时，得到反应液，反应液分别用Na2S2O3溶液和饱和NaCl溶液萃取，再用无水Na2SO4干燥，然后加乙醚析出粗产物，再用DCM和MeOH重结晶，得到环肽 
Figure FDA00002138853500041
其中，所述Mpa(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-Cys(Trt)-NH2与I2的摩尔数比为1:5。
7.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤6）中，将所述 
Figure FDA00002138853500042
溶于饱和的HCl/AcOEt溶液的反应条件为：在反应温度为0～35℃的条件下，反应0.5小时。
8.根据权利要求1所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤7）中，将环七肽盐酸盐 
Figure FDA00002138853500043
中Lys的侧链氨基在三氧化硫脲作用下转化为胍基的工艺条件为：在溶剂为MeOH，反应温度 为0～35℃的条件下，反应2小时；其中，所述环七肽盐酸盐及三氧化硫脲的摩尔数之比为1:3。
9.根据权利要求8所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，所述三氧化硫脲的制作步骤为：将浓硫酸、双氧水及二氧化硫脲进行反应，反应温度为4℃，反应时间为12小时，水沉淀出所述三氧化硫脲；其中，所述浓硫酸、双氧水及二氧化硫脲的摩尔比为0.05:1:0.8。
10.根据权利要求1至9任一项所述的依替巴肽的液相合成方法，其特征在于，在步骤1）至步骤4）中，所述洗涤步骤均为用NaHCO3溶液、盐酸溶液及饱和NaCl溶液依次进行洗涤；所述干燥剂均为无水Na2SO4干燥剂；所述减压温度均为30～40℃。 
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