CN103444545A - 一种柘树的组培快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种柘树的组培快速繁殖方法。包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，壮苗培养，炼苗移栽等步骤。采用本发明所建立的柘树完整的组培体系，解决了柘树生长速度慢，繁殖率低等技术难题，达到了增殖系数高，成活率高的要求。可以为柘树的工业化生产提供一种周期短、繁殖率高的人工培育方法。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种柘树的组培快速繁殖方法。
背景技术
柘树（Cudrania tricuspidata（Carr.）Bur. ）为桑科柘属植物，又名柘木、刺桑、柘桑、黄桑、奴柘、柞树等。落叶灌木或小乔木，喜生在阳光充足的荒山、坡地、丘陵及水溪旁，广泛分布于我国华东、中南、西南至河北南部柘树在我国分布广泛，且具有重要的药用价值，柘树的根、树皮或根皮、茎叶、果实等均可入药，具有祛风利湿、活血通经、止咳化痰之功效，可治疗风湿关节疼痛、黄疸、淋浊、闭经、跌打损伤以及疔疮痈肿等症，近年来又用于治疗食管癌、胃癌、肠癌等消化系统肿瘤。柘树药材中的主要化学成分为黄酮类、酮类化合物，但其资源有限。为柘树资源的可持续性利用，建立柘树完整的组培体系是目前亟待解决的问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种柘树的组培快速繁殖方法，由该方法所制备得到的柘树组培幼苗生长周期短，增殖系数高，成活率高，可以规模化的进行大田生产。
本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：
野外采取的柘树幼嫩的叶片，洗衣粉浸泡3分钟，流水冲洗30min，在超净工作台上用0.2%的氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，接入愈伤组织诱导培养基为WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l，继代培养2-3代，接种入分化培养基WPM+IAA0.2mg/l+KT1mg/l+2mg/l ABA，诱导分化30天，分化后的柘树幼苗接种入WPM+0.5mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgNO3，椰乳可以促进器官的生长，AgNO3用来防止试管苗的玻璃化及早衰落叶等现象，长约5cm柘树幼苗先在培养室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培养基，放入沙土，放置无菌光照培养箱中，光照4000lx，光期14h，暗期10h，一周后装盆，室内培养，早晚浇一次水，持续日光灯照射，两周后移栽大田栽种。
采用本发明试管苗长势好，成活率95%，周期短，操作可控，可进行工业扩大化生产。
下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1
野外采取的柘树幼嫩的叶片，洗衣粉浸泡3分钟，流水冲洗30min，在超净工作台上用0.2%的氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，接入愈伤组织诱导培养基为WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l，继代培养2-3代，接种入分化培养基WPM+IAA0.1mg/l+KT0.5mg/l+2mg/lABA，诱导分化30天，分化后的柘树幼苗接种入WPM+0.2mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgNO3，椰乳可以促进器官的生长，AgNO3用来防止试管苗的玻璃化及早衰落叶等现象，长约5cm柘树幼苗先在培养室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培养基，放入沙土，放置无菌光照培养箱中，光照4000lx，光期14h，暗期10h，一周后装盆，室内培养，早晚浇一次水，持续日光灯照射，两周后移栽大田栽种，成活率87%。
实施例2
野外采取的柘树幼嫩的叶片，洗衣粉浸泡3分钟，流水冲洗30min，在超净工作台上用0.2%的氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，接入愈伤组织诱导培养基为WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l，继代培养2-3代，接种入分化培养基WPM+IAA0.3mg/l+KT1.5mg/l+2mg/l ABA，诱导分化30天，分化后的柘树幼苗接种入WPM+0.5mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgNO3，椰乳可以促进器官的生长，AgNO3用来防止试管苗的玻璃化及早衰落叶等现象，长约5cm柘树幼苗先在培养室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培养基，放入沙土，放置无菌光照培养箱中，光照4000lx，光期14h，暗期10h，一周后装盆，室内培养，早晚浇一次水，持续日光灯照射，两周后移栽大田栽种，成活率90%。
实施例3
野外采取的柘树幼嫩的叶片，洗衣粉浸泡3分钟，流水冲洗30min，在超净工作台上用0.2%的氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，接入愈伤组织诱导培养基为WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l，继代培养2-3代，接种入分化培养基WPM+IAA0.2mg/l+KT1.5mg/l+2mg/l ABA，诱导分化30天，分化后的柘树幼苗接种入WPM+0.3mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgNO3，椰乳可以促进器官的生长，AgNO3用来防止试管苗的玻璃化及早衰落叶等现象，长约5cm柘树幼苗先在培养室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培养基，放入沙土，放置无菌光照培养箱中，光照4000lx，光期14h，暗期10h，一周后装盆，室内培养，早晚浇一次水，持续日光灯照射，两周后移栽大田栽种，成活率91%。
实施例4
野外采取的柘树幼嫩的叶片，洗衣粉浸泡3分钟，流水冲洗30min，在超净工作台上用0.2%的氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，接入愈伤组织诱导培养基为WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l，继代培养2-3代，接种入分化培养基WPM+IAA0.2mg/l+KT1.5mg/l+2mg/l ABA，诱导分化30天，分化后的柘树幼苗接种入WPM+0.2mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgNO3，椰乳可以促进器官的生长，AgNO3用来防止试管苗的玻璃化及早衰落叶等现象，长约5cm柘树幼苗先在培养室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培养基，放入沙土，放置无菌光照培养箱中，光照4000lx，光期14h，暗期10h，一周后装盆，室内培养，早晚浇一次水，持续日光灯照射，两周后移栽大田栽种，成活率93%。
Claims (5)
1.一种柘树的组培快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，壮苗培养，炼苗移栽等，其主要步骤如下：
（1）按照植物组织培养常规消毒方法对野外采取的柘树叶片进行消毒处理，获得无菌叶；
（2）将步骤（1）获得的无菌柘树叶片接种到愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导，诱导出来的愈伤组织接种入分化培养基中进行胚的诱导，加入ABA，促进胚状体发育成熟；
（3）将步骤（2）获得的胚接入到MS培养基中，不加激素，加入15%的椰乳，促进器官的生长，培养30天；
（4）将步骤（3）获得的分化后生长良好的柘树幼苗，接种入WPM培养基中，附加0.5mg/LNAA，5mg/LAgNO3，进行壮苗培养；
（5）将步骤（4）获得的生长健壮的柘树幼苗，先在实验室里进行炼苗培养，后装盆，然后移栽入大田进行大规模培养。
2.根据权利要求1所述的一种柘树的组培快速繁殖方法，其特征在于：柘树的消毒方法为：野外采取的柘树幼嫩的叶片，洗衣粉浸泡3分钟，流水冲洗30min，在超净工作台上用0.2%的氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次。
3.根据权利要求1所述的一种柘树的组培快速繁殖方法，其特征在于：采用的愈伤组织诱导培养基为WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l，采用的分化培养基为WPM+IAA0.1-0.3mg/l+KT0.5-1.5mg/l，并附加2mg/l的ABA，促进胚状体发育成熟。
4.根据权利要求1所述的一种柘树的组培快速繁殖方法，其特征在于：柘树幼苗接种入WPM+0.5mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgNO3，椰乳可以促进器官的生长，AgNO3用来防止试管苗的玻璃化及早衰落叶等现象。
5.根据权利要求1所述的一种柘树的组培快速繁殖方法，其特征在于：柘树的炼苗移栽分三个步骤，先在培养室中，去掉封口膜，敞口放置一周，清水洗去根部培养基，放入沙土，放置无菌光照培养箱中，光照4000lx，光期14h，暗期10h，一周后装盆，室内培养，早晚浇一次水，持续日光灯照射，两周后移栽大田栽种。
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| CN117136842B (zh) * | 2022-11-09 | 2024-02-13 | 山东柘木产业发展研究院有限公司 | 一种柘树的微体组织培养快繁方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20131218 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |