CN103430853A

CN103430853A - 一种槲蕨的快速繁殖方法

Info

Publication number: CN103430853A
Application number: CN2013104234808A
Authority: CN
Inventors: 杨存
Original assignee: Nanjing Tongze Agricultural Science and Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Tongze Agricultural Science and Technology Co Ltd
Priority date: 2013-09-17
Filing date: 2013-09-17
Publication date: 2013-12-11

Abstract

本发明公开了一种槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨无菌叶片的获得，槲蕨愈伤组织诱导，愈伤组织分化，四倍体的诱导，炼苗移栽等步骤，可以在短期内提供大量的中药原料，并能有效降低生产成本，并可人工控制其繁殖数量和培养周期。

Description

一种槲蕨的快速繁殖方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养的快繁方法，包括外植体的消毒，愈伤组织的诱导，增殖，分化，生根培养等，属于植物技术领域。

背景技术

槲蕨（Drynariea fortunei （Kunze） J. Sm）是蕨类植物槲蕨科（Drynariaceae）槲蕨属（Drynarie）的常绿多年生草本植物，别名骨碎补、石岩姜，分布于中南、西南地区及台湾、福建、浙江等省，常附生在岩壁、石壁、树干上，喜潮湿、通风、稍遮蔽之环境。在医药上，槲蕨属植物具有强筋骨、防止链霉素、抗卡那霉素的毒副作用、降血脂、强心、镇痛镇静，抗肿瘤、免疫促进、抗凝血、抗补体、抗溃疡、抗病毒和降血糖等作用。多生长在较光秃的树干或岩石上，小生境郁闭度较低，且附生的生态学意义就在于获得更多的光线，这些现象似乎说明槲蕨应是一种喜光植物。作为一种应用历史悠久、疗效显著、药理研究比较透彻的药材，槲蕨的市场需求量是可观的。但对于野生资源保护方面还未见有系统的报道。发展槲蕨的人工栽培和组织培养，是资源保护与持续利用的迫切之需。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种槲蕨快速繁殖方法的制备，由该方法可以为大规模种植槲蕨提供种苗，可以保护野生种苗的品质和遗传的稳定性。

本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：

一种槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨无菌叶片的获得，槲蕨愈伤组织诱导，愈伤组织分化，四倍体的诱导，炼苗移栽等步骤，其技术方案如下：野外采取槲蕨幼嫩的叶片，流水冲洗30分钟，0.1%的次氯酸钠10min，流水冲洗4-5次，灭菌后的叶片接种到MS+2ip0.8mg/L+2，4，5-T2mg/l+100mg/l半胱氨酸，培养基中进行愈伤组织诱导，取诱导出来的愈伤组织接入到MS+IAA0.2mg/L+KT1.0mg/L+YE培养基中进行愈伤组织的分化诱导，光照强度2000lx，温度25℃，光期12h，暗期12h，湿度60%-70%，培养数周后，在培养基中加入秋水仙素进行四倍体诱导，四倍体诱导之后加入MS培养基中进行壮苗培养，培养条件为光照强度4000lx，温度25℃，光期14h，暗期10h，湿度60%-70%，试管苗长约5cm时进行炼苗移栽，进而进行大田大规模栽种。

采用本发明调控出来的槲蕨试管苗长势好，成活率94%，周期短，操作可控，可进行野外大规模栽种或推广应用。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

一种槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨无菌叶片的获得，槲蕨愈伤组织诱导，愈伤组织分化，四倍体的诱导，炼苗移栽等步骤，其技术方案如下：野外采取槲蕨幼嫩的叶片，流水冲洗30分钟，0.1%的次氯酸钠10min，流水冲洗4-5次，灭菌后的叶片接种到MS+2ip0.5mg/L+2，4，5-T1mg/l+100mg/l半胱氨酸，培养基中进行愈伤组织诱导，取诱导出来的愈伤组织接入到MS+IAA0.1mg/L+KT0.5mg/L+YE培养基中进行愈伤组织的分化诱导，光照强度2000lx，温度25℃，光期12h，暗期12h，湿度60%-70%，培养数周后，在培养基中加入秋水仙素进行四倍体诱导，四倍体诱导之后加入MS培养基中进行壮苗培养，培养条件为光照强度4000lx，温度25℃，光期14h，暗期10h，湿度60%-70%，试管苗长约5cm时进行炼苗移栽，进而进行大田大规模栽种，成活率85%。

实施例2

一种槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨无菌叶片的获得，槲蕨愈伤组织诱导，愈伤组织分化，四倍体的诱导，炼苗移栽等步骤，其技术方案如下：野外采取槲蕨幼嫩的叶片，流水冲洗30分钟，0.1%的次氯酸钠10min，流水冲洗4-5次，灭菌后的叶片接种到MS+2ip1mg/L+2，4，5-T2mg/l+100mg/l半胱氨酸，培养基中进行愈伤组织诱导，取诱导出来的愈伤组织接入到MS+IAA0.3mg/L+KT1mg/L+YE培养基中进行愈伤组织的分化诱导，光照强度2000lx，温度25℃，光期12h，暗期12h，湿度60%-70%，培养数周后，在培养基中加入秋水仙素进行四倍体诱导，四倍体诱导之后加入MS培养基中进行壮苗培养，培养条件为光照强度4000lx，温度25℃，光期14h，暗期10h，湿度60%-70%，试管苗长约5cm时进行炼苗移栽，进而进行大田大规模栽种，成活率87%。

实施例3

一种槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨无菌叶片的获得，槲蕨愈伤组织诱导，愈伤组织分化，四倍体的诱导，炼苗移栽等步骤，其技术方案如下：野外采取槲蕨幼嫩的叶片，流水冲洗30分钟，0.1%的次氯酸钠10min，流水冲洗4-5次，灭菌后的叶片接种到MS+2ip0.5mg/L+2，4，5-T2mg/l+100mg/l半胱氨酸，培养基中进行愈伤组织诱导，取诱导出来的愈伤组织接入到MS+IAA0.2mg/L+KT0.5mg/L+YE培养基中进行愈伤组织的分化诱导，光照强度2000lx，温度25℃，光期12h，暗期12h，湿度60%-70%，培养数周后，在培养基中加入秋水仙素进行四倍体诱导，四倍体诱导之后加入MS培养基中进行壮苗培养，培养条件为光照强度4000lx，温度25℃，光期14h，暗期10h，湿度60%-70%，试管苗长约5cm时进行炼苗移栽，进而进行大田大规模栽种，成活率90%。

实施例4

一种槲蕨的快速繁殖方法，包括槲蕨无菌叶片的获得，槲蕨愈伤组织诱导，愈伤组织分化，四倍体的诱导，炼苗移栽等步骤，其技术方案如下：野外采取槲蕨幼嫩的叶片，流水冲洗30分钟，0.1%的次氯酸钠10min，流水冲洗4-5次，灭菌后的叶片接种到MS+2ip1mg/L+2，4，5-T1mg/l+100mg/l半胱氨酸，培养基中进行愈伤组织诱导，取诱导出来的愈伤组织接入到MS+IAA0.3mg/L+KT0.8mg/L+YE培养基中进行愈伤组织的分化诱导，光照强度2000lx，温度25℃，光期12h，暗期12h，湿度60%-70%，培养数周后，在培养基中加入秋水仙素进行四倍体诱导，四倍体诱导之后加入MS培养基中进行壮苗培养，培养条件为光照强度4000lx，温度25℃，光期14h，暗期10h，湿度60%-70%，试管苗长约5cm时进行炼苗移栽，进而进行大田大规模栽种，成活率92%。

Claims

1.一种槲蕨的快速繁殖方法，其步骤如下：

（1）外植体的处理：采用常规的组织培养方法对槲蕨叶片进行消毒处理；

（2）诱导培养：取步骤（1）获得的无菌叶片接种到MS+2ip0.8mg/L+2，4，5-T2mg/l+100mg/l半胱氨酸，培养基中进行愈伤组织诱导；

（3）分化培养：取步骤（2）诱导出来的愈伤组织接入到MS+IAA0.1mg/L+KT0.5mg/L+YE培养基中进行愈伤组织的分化诱导；

（4）四倍体的诱导：取步骤（3）分化的愈伤组织，在培养基中加入秋水仙素进行四倍体诱导，四倍体诱导之后加入MS培养基中进行壮苗培养；

（5）炼苗移栽到大田进行大规模培养。

2.根据权利要求1所述的一种槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于：槲蕨愈伤组织的培养，采用MS培养基，附加激素2ip0.5-1mg/L+2，4，5-T1-2mg/l+100mg/l半胱氨酸，半胱氨酸使用过滤灭菌后加入培养基中，可以抗氧化，抑制外植体的褐变。

3.根据权利要求1所述的一种槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于：槲蕨愈伤组织诱导中采用的是黑暗诱导，温度25℃，湿度60%-70%。

4.根据权利要求1所述的一种槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于：槲蕨愈伤组织的分化采用的配方为MS+IAA0.1-0.3mg/L+KT0.5-1.0mg/L+YE，光照强度2000lx，温度25℃，光期12h，暗期12h，湿度60%-70%。

5.根据权利要求1所述的一种槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于：槲蕨愈伤组织的分化过程中使用YE也可以促进愈伤组织的增殖。

6.根据权利要求1所述的一种槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于：槲蕨四倍体的诱导过程中，在培养基中加入秋水仙素，可以获得生长粗壮的槲蕨品种。

7.一种槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于：四倍体诱导之后加入MS培养基中进行壮苗培养，培养条件为光照强度4000lx，温度25℃，光期14h，暗期10h，湿度60%-70%。

8.根据权利要求1所述的一种槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于：炼苗移栽过程中，去掉封口膜，敞口放置在培养室培养一周，然后使用无菌沙质黄土在光照培养箱中培养两周，光照强度4000lx，温度28℃，光期14h，暗期10h，湿度60%-70%。

9.根据权利要求1所述的一种槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于：从光照培养基中取出的小苗，洗取根部的培养基，定植于铺好的苗床上，移栽苗床的铺设：40％黄土+60％蛭石，厚度为25cm，栽种约1.5cm深，盖上薄膜和阴网。

10.根据权利要求1所述的一种槲蕨的快速繁殖方法，其特征在于：在苗床上培养一周后去掉薄膜，两周后去掉阴网，组培苗移栽30天以上就可以移栽大田或推广应用。