CN103424550A - 一种检测氯霉素的试剂盒及方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测氯霉素的试剂盒及方法。试剂盒包括微孔试剂和试纸，所述微孔试剂中冻干有胶体金标记的氯霉素特异性抗体，所述氯霉素特异性抗体可为氯霉素单克隆抗体或氯霉素多克隆抗体；所述试纸由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜、底板依次连接组成，所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被有抗抗体。用本发明试剂盒检测氯霉素的方法，简单、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。

Description

一种检测氯霉素的试剂盒及方法

技术领域

本发明涉及一种检测氯霉素的试剂盒及方法，具体涉及一种用于检测氯霉素的胶体金试纸条，其特别适于动物源性食品中氯霉素残留的检测。

技术背景

氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一种高效广谱抗生素，能够抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，广泛应用于各类家禽、家畜、水产品生产过程中的传染性疾病控制。但氯霉素在食品中的残留会对人体健康构成潜在危害，引起人的骨髓造血机能紊乱，造成再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症及新生儿、早产儿灰色综合症等疾病，欧美等发达国家已相继禁止或严格禁止使用。我国农业部公告第235号文件也规定，氯霉素及其盐、酯（包括琥珀氯霉素）在所有食品动物的所有可食组织中不得检出。

目前用来检测氯霉素的最常用方法主要是气相色谱、液相色谱及色谱-质谱法，这些方法虽然具有灵敏度高、结果准确、重复性好、假阳性少等优点，但仍存在一定缺点，如样品前处理过程复杂，仪器化程度高且价格昂贵，分析速度慢，已逐渐不能满足发达国家及食品加工企业对检测方法检测限的要求。与之相比，免疫学测定方法灵敏度较高、特异性强、试样预处理简单、分析时间短，适合现场监控和大量样本的筛查

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测氯霉素的试剂盒。

本发明所提供的试剂盒包括微孔试剂和试纸，微孔试剂具有微孔塞，试纸包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜，其依次连接；所述微孔试剂中冻干有氯霉素特异性抗体-胶体金标记物；氯霉素特异性抗体可为氯霉素单克隆抗体或氯霉素多克隆抗体；反应膜上包括检测区和质控区；当氯霉素特异性抗体为氯霉素单克隆抗体时，检测区包被氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗鼠抗抗体；当氯霉素特异性抗体为氯霉素多克隆抗体时，检测区包被氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗兔抗抗体。

所述氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物是由氯霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述氯霉素半抗原是由氯霉素与琥珀酸酐反应得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述氯霉素特异性抗体-胶体金标记物中的氯霉素特异性抗体是以氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。

所述样品吸收垫上粘贴有保护膜，为检测端，上面有MAX标记线。

所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一端，所述质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试剂盒的方法，其包括步骤：

1）制备冻干有氯霉素特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2）制备具有包被氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜；

3）将2）制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4）将1）和3）制备好的冻干有氯霉素特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

具体地说，步骤包括：

1）将氯霉素与琥珀酸酐反应，制备氯霉素半抗原；

2）将氯霉素半抗原与载体蛋白偶联，制备氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物；

3）用氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株或用氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物免疫兔，得到氯霉素多克隆抗体；

4）提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体；

5）用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

6）将制备的氯霉素特异性抗体加入到制备的胶体金中，得到氯霉素特异性抗体-胶体金标记物；

7）将氯霉素特异性抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中后，将微孔试剂加上微孔塞；

8）将样品吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白（体积百分含量）、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；

9）在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜；

10）将制备好的微孔试剂和试纸组装成试剂盒，2~8℃条件下保存12个月。

本发明的另一个目的是提供一种应用上述试剂盒检测动物源性食品中氯霉素残留的方法，它包括步骤：

（1）样品前处理；

（2）用试剂盒进行检测；

（3）分析检测结果。

本发明试剂盒的检测原理：将处理后的待检样品液滴加于微孔试剂中，混匀后，孵育5min，将标有MAX标记线端向下，插入孵育后的微孔试剂，待检样品液与微孔中的金标抗体结合后一起向反应膜扩散；若待检样品液中氯霉素的含量高，则扩散过程中待检样品液中的氯霉素可与金标抗体相结合，进而完全封闭金标抗体上氯霉素的抗原结合点，阻止金标抗体与反应膜上氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物结合，检测区不显色，而抗抗体则可与金标抗体结合，质控区显色；若待检样品液中氯霉素的含量低或无，则金标抗体上的抗原结合位点不能被封闭，进而金标抗体会与反应膜上氯霉素半抗原-载体蛋白偶联抗原结合，检测区显色，同时抗抗体也可与金标抗体结合，质控区显色。如果质控区不显色，则试纸失效。如图4所示。

阳性：当质控区（C）显示出红色条带，而检测区（T）不显色时，判为阳性。

阴性：当质控区（C）显示出红色条带，检测区（T）同时也显示出红色条带，判为阴性。

无效：当质控区（C）不显示出红色条带，则无论检测区（T）显示出红色条带与否，该试纸判为无效。

本发明的试剂盒具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。其中，采用高特异性的氯霉素单克隆抗体，保证了检测结果的可靠性；将金标抗体冻干在微孔试剂中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反映，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。用本发明试剂盒检测氯霉素抗生素的方法，简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。

附图说明

图1为试纸剖面结构示意图。

图2为试纸俯视图。

图3为微孔试剂图。

图4为试纸检测结果判定图。

图5为氯霉素半抗原的合成路线图。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

实施例1 检测氯霉素的试剂盒的构成

一、试纸（称作试纸条）（图1）

所述试纸是由底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜组成；

所述样品吸收垫1、反应膜2、吸水垫3和保护膜7依次按顺序粘贴在底板6上，样品吸收垫的末端与反应膜相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐；

所述试纸粘贴有保护膜，保护膜7覆盖在样品吸收垫上，为检测端，上面印有MAX字样（图2）；

所述反应膜上有检测区4和质控区5，均呈与所述试纸条的长相垂直的条带状，检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一端，质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端，检测区包被有氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物（氯霉素半抗原-卵清蛋白的偶联物），质控区包被有羊抗鼠抗抗体；

所述底板为PVC底板；所述样品吸收垫为吸滤纸；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜为硝酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

二、微孔试剂（图3）

所述微孔试剂8上冻干有氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物；所述微孔试剂具有微孔塞9。

将上述微孔试剂与试纸组装成试剂盒，在2~8℃环境中保存，有效期12个月。

实施例2 实施例1中所述试剂盒的制备方法

一、试剂盒的制备

该试剂盒的制备方法主要包括以下步骤：

1）制备冻干有氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2）制备具有包被氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被羊抗鼠抗抗体的质控区的反应膜；

3）将2）制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4）将1）和3）制备好的冻干有氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

下面分步详细叙述：

（一）各部件的制备

1.氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的合成与鉴定

氯霉素是小分子物质，只有免疫反应性，没有免疫原性，不能诱发机体产生免疫应答，必须与大分子载体蛋白偶联后才具有免疫原性。

（1）氯霉素半抗原的制备（合成路线见图5）

a. 取1.0g氯霉素加30ml N,N-二甲基甲酰胺（DMF）溶解，加咪唑0.44g、叔丁基二甲基氯硅烷0.37g，室温搅拌3h，加水乙酸乙酯萃取分离，有机相水洗，蒸干，上硅胶柱，石油醚:乙酸乙酯=5:1洗脱，得到产物（b）1.20g；

b. 1.2g洗脱产物（b）用吡啶30ml溶解，加琥珀酸酐0.65g，70℃加热搅拌12h。反应停止后，蒸干溶剂，石油醚:乙酸乙酯=3:1洗脱，得到产物（c）1.33g；

c. 1.3g洗脱产物（c）加甲醇溶解，加对甲苯磺酸0.2g，室温搅拌3h，加水乙酸乙酯萃取分离，蒸干，上硅胶柱。石油醚:乙酸乙酯=1:1洗脱，得到氯霉素半抗原产物（d）0.46g。

（2）免疫原的制备——氯霉素半抗原与牛血清白蛋白偶联物合成

取20mg半抗原，溶解于1.5ml DMF中，得溶液Ⅰ；取50mg 碳化二亚胺（EDC）用0.2ml水充分溶解后于加入Ⅰ中，室温下搅拌24h，得溶液Ⅱ；称取牛血清白蛋白（BSA）60mg，使之充分溶解在4.3ml PBS（pH 7.2）中，将溶液Ⅱ逐滴缓慢滴加到蛋白溶液中，并于室温下搅拌24 h，用0.01mol/L PBS 4℃透析3d，每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质；分装，于-20℃保存备用。

（3）包被原的制备——氯霉素半抗原与卵清蛋白偶联物合成

取15mg半抗原，溶解于1.5ml DMF中，得溶液Ⅰ；取36mg二环己基碳二亚胺（DCC）和18mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）用0.2ml DMF充分溶解后于加入Ⅰ中，室温下搅拌24 h，得溶液Ⅱ；称取卵清蛋白（OVA）45mg，使之充分溶解在4.3ml PBS（pH 7.2）中，将溶液Ⅱ逐滴缓慢滴加到蛋白溶液中，并于室温下搅拌24h，用0.01mol/L PBS 4℃透析3d，每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质；分装，于-20℃保存备用。

（4）氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的鉴定

将载体蛋白、氯霉素半抗原、氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物用pH7.4的PBS配成0.5mg/ml的溶液，以0.01mol/L pH7.4 PBS调零，用紫外分光光度计在波长200~800nm范围内扫描，得到载体蛋白、氯霉素半抗原、氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的吸收曲线。三者出现不同的吸收曲线，表明氯霉素半抗原与载体蛋白偶联成功。

2.氯霉素单克隆抗体的制备

（1）动物免疫

将步骤1得到的免疫原注入Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。

（2）细胞融合和克隆化

取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按8:1（数量配比）比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，筛选得到稳定分泌氯霉素单克隆抗体的氯霉素单克隆杂交瘤细胞株。

（3）细胞冻存和复苏

将杂交瘤细胞用冻存液制成1×10⁶个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。

（4）单克隆抗体的制备与纯化

增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，用辛酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，-20℃保存。

所述细胞培养基为向RPMI1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20%（质量百分含量），碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2%（质量百分含量）；所述细胞培养基的pH为7.4。

3.羊抗鼠抗抗体的制备

以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体。

4.氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物的制备

（1）胶体金的制备

用双蒸去离子水将1%氯金酸（购于sigma公司，产品目录号T09041）稀释成0.01%（质量百分含量），取100ml置于锥形瓶中，用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，在持续高温、持续搅拌下加入2.5ml 1%柠檬酸三钠（购于广州化学试剂厂，产品目录号BG11-AR-01KG），继续匀速搅拌加热至溶液呈透亮的红色时停止，冷却至室温后用去离子水恢复到原体积，4℃保存。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。

（2）氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物的制备

在磁力搅拌下，用0.2mol/L碳酸钾调胶体金的pH至7.2，按每毫升胶体金溶液中加入50~100μg的标准向胶体金溶液中加入上述氯霉素单克隆抗体，搅拌混匀，室温静置10min后，加入10%牛血清白蛋白（BSA）使其在胶体金溶液中的终浓度为1%（体积百分含量），静置10min。12000r/min，4℃离心40min，弃上清液，沉淀用复溶缓冲液洗涤两次，用体积为初始胶体金体积1/10的复溶缓冲液将沉淀重悬，置4℃备用。

复溶缓冲液：含牛血清白蛋白0.1%~0.3%（体积百分含量）、吐温-800.05%~0.2%（质量百分含量）、pH7.2的0.02mol/L磷酸盐缓冲液。

5.将氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干到微孔试剂上

向微孔试剂微孔板中加入100μl氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物，放入冷冻干燥机中，在冷阱温度-50℃条件下，预冻3h后，再真空干燥15h，即可取出，得到冻干有氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂，密封保存。

6.样品吸收垫的制备

将样品吸收垫置于含0.5%牛血清白蛋白（体积百分含量）、pH7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液中浸泡2h，37℃烘2h备用。

7.反应膜的制备

包被过程：用磷酸缓冲液将氯霉素半抗原-卵清蛋白偶联物稀释到10mg/ml，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的检测区（T），包被量为1.0μg/cm²；用0.01mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释到200μg/ml，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控区（C），包被量为1.0μg/cm²。将包被好的反应膜置于37℃条件下干燥2h，备用。

（二）各部件的组装

1.试纸的组装

将所述样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜依次按顺序粘贴在所述底板上；样品吸收垫的末端与反应膜的始端相连，反应膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐；在组装好的试纸上粘贴保护膜，保护膜上印有MAX标记线的一端粘贴在样品吸收垫上。

2.试剂盒的组装

将上述步骤1得到的试纸与微孔试剂组装成试剂盒，在2~8℃的环境中贮存，有效期12个月。

实施例3 动物源性食品中氯霉素的检测

1.样品前处理

（1）猪肉、鸡肉、鱼、虾等组织样品的前处理方法

称取5g±0.05g均质样本至50ml聚苯乙烯离心管中，加入8ml乙酸乙酯，用振荡器振荡5min，3000g以上，室温（20-25℃）离心5min；移取全部上层有机相至10ml干净的玻璃试管中，于50~60℃水浴氮气流下吹干；加入1ml正己烷，用涡旋仪涡动1min，再加1ml pH7.2、0.02mol/L磷酸缓冲液，用涡旋仪涡动30s，3000g以上，室温（20-25℃）离心5min；除去上层有机相，取下层无机相用于分析。

（2）牛奶样品的前处理方法

称取4.0ml±0.05ml牛奶至50ml离心管中，加入6ml乙酸乙酯，2ml乙腈，上下振荡5min，室温（20-25℃/68-77℉）3000g以上离心5min；移取6ml上层有机相至10ml 干燥玻璃试管中，于50~60℃水浴氮气流下吹干，加入0.5ml pH7.2、0.02mol/L磷酸缓冲液，涡动1min溶解干燥的残留物，待检。

（3）蜂蜜样品的前处理方法

称取4.0g±0.05g蜂蜜至50ml离心管中，加入4ml去离子水，用振荡器振荡至蜂蜜全部溶解；加入4ml乙酸乙酯，4ml乙腈，上下振荡5min，室温（20-25℃/68-77℉）3000g以上离心5min；移取6ml上层有机相（相当于3g样本）至10ml 干燥玻璃试管中，于50~60℃水浴氮气流下吹干，加入0.5ml pH7.2、0.02mol/L磷酸缓冲液，涡动1min溶解干燥的残留物，待检。

2.用试剂盒检测

从原包装中取出试剂桶（若低温存放需要预先平衡至室温），打开后取出所需数目的微孔试剂和试纸条，并做好标记；吸取待检样品溶液，用微量移液器移取200μl于微孔中，缓慢抽吸且充分与微孔中试剂混匀，室温（20℃-25℃）孵育5min；将标记好的试纸条插入微孔中——印有“MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中；室温（20℃-25℃）孵育10min后，取出试纸条，判定结果。

3.检测结果分析

阳性：当质控区（C）显示出红色条带，而检测区（T）不显色时，判为阳性，如图4a所示；

阴性：当质控区（C）显示出红色条带，检测区（T）同时也显示出红色条带，判为阴性，如图4b所示；

无效：当质控区（C）不显示出红色条带，则无论检测区（T）显示出红色条带与否，该试纸判为无效，如图4c、4d所示。

实施例4 试剂盒技术参数的确定

1.灵敏度试验

将氯霉素标准品（购自Sigma公司）稀释为0、0.05、0.1、0.2、0.4μg/L；所用稀释液为pH7.2、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液。

用试剂盒进行检测，结果为：氯霉素标准品浓度为0、0.05μg/L时，试纸条上显示出肉眼可见的两条红色条线，呈阴性；氯霉素标准品浓度为0.1、0.2、0.4μg/L时，试纸条质控区显色，但检测区不显色，呈阳性，表明本试剂盒检测氯霉素的灵敏度为0.1μg/L。

2.假阳性率、假阴性率试验

取已知氯霉素含量大于0.1μg/L的猪肉、鸡肉、鱼、虾、牛奶、蜂蜜阳性样本各20份和浓度小于0.1μg/L的猪肉、鸡肉、鱼、虾、牛奶、蜂蜜阴性样本各20份，用3个批次生产的试剂盒分别进行检测，计算其阴阳性率。结果见表1、表2。

表1 检测阳性样本结果

表2 检测阴性样本结果

结果表明：用3个批次生产的试剂盒检测阳性样本时，结果全为阳性，可知阳性样本符合率为100%，假阴性率为0。检测20份阴性鸡肉、虾、牛奶样本时，结果全为阴性，可知阴性符合率为100%，假阳性率为0；检测20份阴性猪肉样本时，结果出现了1份阳性，可知阴性符合率为98%，假阳性率为2%；检测20份阴性鱼、蜂蜜样本时，结果各出现了2份阳性，可知阴性符合率为96%，假阳性率为4%。说明本发明的检测氯霉素试剂盒可以对氯霉素残留进行快速检测。

3.特异性试验

特异性常用交叉反应率表示，是指抗体与结构不同的抗原决定簇发生结合的能力。本试剂盒对氯霉素的检测灵敏度为0.1μg/L，将常检的其他药物（链霉素、四环素类、喹诺酮类、沙丁胺醇、克仑特罗）用pH7.2、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液进行稀释，用实施例1中所述的试剂盒进行检测。结果显示，用该试剂盒检测链霉素、四环素类、喹诺酮类、沙丁胺醇、克仑特罗等药物时，试纸条质控区和检测区均显色，说明本试剂盒对这些药物无交叉反应，特异性较好。

Claims (9)

1.一种检测氯霉素的试剂盒，其特征在于包括试纸和微孔试剂，所述试纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板，所述反应膜上有检测区和质控区，检测区包被有氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被有抗抗体，所述微孔试剂上冻干有氯霉素特异性抗体-胶体金标记物。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述试纸由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜依次粘贴在底板上组成，所述微孔试剂上具有微孔塞。

3.根据权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于所述样品吸收垫上粘贴有保护膜，为检测端，上面有MAX标记线。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一端，所述质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物由氯霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

6.根据权利要求1或5任一项所述的试剂盒，其特征在于所述氯霉素半抗原是由氯霉素与琥珀酸酐反应得到，其分子结构式为：

。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述氯霉素特异性抗体-胶体金标记物中的氯霉素特异性抗体是以氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述氯霉素特异性抗体可为氯霉素单克隆抗体或氯霉素多克隆抗体。

8.一种制备权利要求1-7任一项所述试剂盒的方法，其包括步骤：

1）制备冻干有氯霉素特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2）制备具有包被氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜；

3）将2）制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4）将1）和3）制备好的冻干有氯霉素特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

9.一种检测动物源性食品中氯霉素残留的方法，其包括步骤：

1）样品前处理；

2）用权利要求1-7任一项所述的试剂盒进行检测；

3）分析检测结果。

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