CN108535486A - 一种基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，包括以下步骤：用氯霉素抗原包被微孔板，包被后用洗涤液冲洗板孔并用蛋白液封闭，向处理后的微孔板中加入氯霉素标准品或待测样品，以及加入铕标记的探针，将微孔板孵育后洗涤，用荧光检测仪检测各孔的荧光强度，根据氯霉素标准品的结果绘制标准曲线，将待测样品的荧光强度与标准曲线对比，获得待测样品中的氯霉素浓度。本发明通过优化竞争性免疫反应的各种条件，得到的氯霉素残留药物的测定方法，速度快灵敏度高，还可以根据本发明提供的方法制备快检试剂盒，快速、便捷的实现氯霉素含量的测定。

Description

一种基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法
技术领域
本发明属于荧光免疫分析技术领域，具体涉及一种基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法。
背景技术
氯霉素(Chloramphenicol，简称CAP)是Ehrlich在1947年分离出来的一种广谱抗生素。由于其低廉的价格和稳定的抗菌性，曾在一段时间内用作饲料添加剂和兽医临床常用药。但氯霉素有严重的毒副作用，能引起再生障碍性贫血症和婴儿灰色综合症。美国和欧盟已禁止在动物中使用氯霉素，并规定在动物源食品中不得检出氯霉素，所谓的不得检出，是指底限达到了0.01μg/kg。
氯霉素检测方法包括微生物法、色谱法、免疫测定法。微生物法易操作、费用低，但灵敏度低、特异性差。色谱法精确可靠、灵敏度高，检测极限可达到0.1μg/kg，但前处理步骤多，回收率偏低。免疫测定法具有灵敏度高、特异性强、对仪器设备和人员素质要求低以及样品前处理简单等优点，适于现场监控和大规模样品筛选。
CN1766629提供了一种检测动物源性食品中氯霉素类药物的酶联免疫试剂盒，该试剂盒包括包被酶标板、氯霉素类药物鼠单克隆抗体浓缩液、氯霉素类药物标准品溶液、酶标记物、底物显色液、浓缩洗涤液和浓缩复溶液，该试剂盒及检测方法操作简便，能够现场监控且适合大量样本筛查，然而，该发明属于传统的酶联免疫法，当标记酶为辣根过氧化物酶时，底物显色液液为过氧化氢或过氧化脲，当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，检测灵敏度及其准确性通常都比较低。CN103018450A公开了一种氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，该发明的试剂盒采用的是化学发光酶联免疫法，与传统的比色酶联法比较，操作时间大幅度减少，然而准确度还可以进一步提高。CN103869083A公开了一种用于检测氯霉素的免疫抗原和包被抗原的制备，该发明通过优化偶联技术路线，达到了优化结构，提高抗体质量，进一步增加氯霉素免疫胶体金快速检测的灵敏度的目的，同时免疫抗原和包被抗原的特异性也得到了提高，然而，该发明所用的载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白，均为常用的载体蛋白，由于氯霉素是小分子物质，其分子表面特性不利于与聚苯乙烯微孔板的直接结合，需要将其与更合适的载体蛋白进行偶联后才能借助于载体蛋白的表面特性而达成与聚苯乙烯微孔板的良好结合。
目前，我国动物源食品中氯霉素残留仍然很严重，出口的水产品、蜂蜜屡屡被检出氯霉素残留超标，现有的检测技术在氯霉素检测的灵敏度和特异性上还是存在缺陷，为保障身体健康，迫切需要建立灵敏度高、特异性强、简便易行的检验方法。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，包括以下步骤：
(1)用氯霉素抗原包被微孔板，包被后用洗涤液冲洗板孔并用蛋白液封闭；
(2)往步骤(1)处理后的微孔板中加入氯霉素标准品或待测样品，以及加入铕标记的探针；
(3)将步骤(2)处理后的微孔板孵育后用PBST缓冲液洗涤；
(4)用荧光检测仪检测步骤(3)处理后各孔的荧光强度；
(5)根据氯霉素标准品的荧光强度与浓度绘制标准曲线，将待测样品的荧光强度与标准曲线中的荧光强度对比，获得待测样品中的氯霉素浓度。
优选地，步骤(1)所述的氯霉素抗原为氯霉素-载体蛋白偶联物。
进一步优选地，所述的载体蛋白为牛血清白蛋白。
优选地，步骤(1)所述的包被条件为温度4℃，时间12～16h。
优选地，步骤(1)所述的洗涤液为磷酸缓冲盐溶液与Tween20和NaN3的混合液，制备方法为：将0.2mlTween20及0.1g的NaN3溶于0.02M、pH 7.4的PBS缓冲液中，溶解后用PBS缓冲液(0.02M，pH 7.4)定容至1L。
优选地，步骤(1)所述的微孔板为96孔聚苯乙烯板。
优选地，步骤(1)所述的蛋白液为牛血清白蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中的一种。
优选地，步骤(1)所述的封闭条件为温度37℃，时间2h。
优选地，步骤(2)所述铕标记的探针为活化剂处理的金属铕与抗氯霉素特异性抗体的偶联物。
优选地，步骤(3)所述洗涤的洗涤液为PBST缓冲液。
优选地，所述的交联剂为EDC和NHS。
优选地，所述的交联剂为乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳化二亚胺盐酸化物和N-羟基硫代琥珀酰亚胺。
本发明采用了免疫荧光定量测定的方法，在免疫检测中，抗体的性能指标对于检测的准确性至关重要，通常而言，特异性强、亲和力高的抗体，可以显著地提高检测的准确性。
传统方法制备的量子点的荧光量子产率通常都低于40％，荧光强度较弱。稀土金属铕标记材料是近年来发展起来的一类新型材料，稀土金属铕的激发光波长为345nm，发射波长是620nm，由于其突出的发光和吸收特性，使其具有荧光寿命长，激发光谱宽，发射光谱窄，发射波长可精确调谐，光化学稳定性很高，可进行多色标记等优越特性，采用其作为标记材料，可实现对靶标分子的超微量检测，稀土金属铕荧光量子产率及其荧光强度直接决定了检测灵敏度及其准确性的高低。为用于氯霉素残留物检测，稀土金属铕表面需带有易于与抗氯霉素特异性抗体偶联的基团，这些基团以是羧基、氨基等基团，优化的基团是带羧基的表面官能团，通常采用化学方法连接抗体，即用EDC和NHS活化后，再与抗体发生羧合反应而完成偶联反应，形成金属铕-抗氯霉素特异性抗体偶联物。
本发明检测方法的原理为：采用稀土金属铕作为荧光信号标记分子，将氯霉素抗原直接包被在聚苯乙烯板的微孔中，同时加入氯霉素标准品或检测样品，以及稀土金属铕标记的抗氯霉素特异性抗体，包被在聚苯乙烯微孔中的氯霉素抗原与检测样品中的氯霉素竞争性地与抗氯霉素特异性抗体结合，其中与检测样品结合剩余的抗氯霉素特异性抗体与包被在微孔板中的氯霉素抗原发生特异结合后形成固定在微孔板中的抗原-抗体发光免疫复合物。用荧光检测仪激发并检测该抗原-抗体发光免疫复合物的荧光强度，通过添加不同浓度的氯霉素标准品可制成标准曲线，根据此标准曲线查询各检测样品的荧光强度值可得到对应的氯霉素药物的浓度值。由于所采用的抗体是固定浓度的，通常待测样品中的氯霉素药物的浓度越高，被抗体捕获的药物量越多，与包被的氯霉素抗原结合的抗体越少，测得的荧光强度值越低。
由于氯霉素是小分子物质，其分子表面特性不利于与聚苯乙烯微孔板的直接结合，需要将其与载体蛋白进行偶联后才能借助于载体蛋白的表面特性而达成与聚苯乙烯微孔板的良好结合，本发明选用牛血清白蛋白作为偶联蛋白。
本发明的有益效果
1、本发明通过优化竞争性免疫反应的各种条件，得到的氯霉素残留药物的测定方法，速度快灵敏度高；
2、本发明所提供的方法特异性好、检测限低，最低检测底限可以达到25.78pg/ml；
3、基于以上两点，本发明所提供的方法在氯霉素的检测领域具有广阔的应用前景，可以根据本发明提供的方法制备商业试剂盒，快速、便捷的实现氯霉素含量的测定。
附图说明
图1是本发明测定方法的原理示意图；
图2是氯霉素测定的标准曲线。
具体实施方式
以下采用更具体的实施方式或实施例来描述本发明，但是本发明的保护范围并不限制于此处所述的具体实施方式或实施例。
实施例1
一种基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，原理示意如图1，具体包括以下步骤：
(1)用氯霉素抗原包被微孔板，包被后用洗涤液冲洗板孔并用蛋白液封闭；
(2)往步骤(1)处理后的微孔板中加入氯霉素标准品或待测样品，以及加入铕标记的探针；
(3)将步骤(2)处理后的微孔板孵育后洗涤；
(4)用荧光检测仪检测步骤(3)处理后各孔的荧光强度；
(5)根据氯霉素标准品的荧光强度与浓度绘制标准曲线，将待测样品的荧光强度与标准曲线中的荧光强度对比，获得待测样品中的氯霉素浓度。
步骤(1)中的氯霉素抗原，为牛血清白蛋白标记的氯霉素，制备方法如下：
(1)取50mg氯霉素溶解于1ml无水乙醇溶液中，用1mol/L HCl调pH至1.0，然后加入24mg锌粉65℃反应40min，得到反应液A；
(2)将反应液A离心10min，离心力为4000g，离心的温度为4℃，取上清液，用1mol/LHCl调pH至1.0，于4℃逐滴加入180μl浓度为1.45mol/L的NaNO2水溶液，充分搅拌反应3h，得到溶液B；
(3)在10ml 0.02mol/L，pH为7.4的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中加入400mg牛血清白蛋白，配制成40g/L的牛血清白蛋白-PBS溶液C；
(4)10ml步骤(3)的溶液C中加入1ml步骤(2)得到的溶液B，用2mol/lNaOH调节至pH至8.5，于4℃下进行耦合反应6h，得到反应液D；
(5)将反应液D于0.02mol/L，pH为7.4的PBS中透析48h，每12h更换一次透析液，所得产品用冻干机冻干，于-20℃保存，得到氯霉素抗原。
氯霉素购自北京恒元启天化工技术研究院，产品目录号为2857GBW(E)060907。其化学名称为D-苏式-(-)-N-[(-(羟基甲基)-(-羟基-对硝基苯乙基]-2，2-二氯乙酰胺。
氯霉素与牛血清白蛋白的偶联物，氯霉素分子上有羟基，可据此引入羧基，再与牛血清白蛋白通过氯霉素中的羧基与BSA中的氨基形成的肽键而连接。
步骤(1)中用氯霉素抗原包被微孔板的具体步骤如下：
采用包被缓冲液(0.05M、pH 9.6的碳酸盐缓冲液)将氯霉素抗原稀释为浓度10μg/ml的包被液，在96孔聚苯乙烯微孔板条中每孔各加100μl，于4℃冰箱放置过夜。第二天弃去包被液、用洗涤液冲洗各板孔3次后，各孔加入200μl蛋白液封闭，于37℃封闭处理2h。之后移除蛋白液、用洗涤液冲洗各板孔3次后，进行真空抽干、用铝箔袋密封后放置于-20℃保存。
洗涤液为PBST缓冲液，制备方法为：将0.2mlTween20及0.1g的NaN3溶于0.02M、pH7.4的PBS缓冲液中，溶解后用PBS缓冲液(0.02M，pH 7.4)定容至1L。
步骤(2)中铕标记的探针，制备方法如下：
(1)向去离子水中加入2.8g Na2HPO4·12H2O、0.2g NaH2PO4·2H2O和8.0g NaCl，定容至1L，使用1M的HCl或NaOH调节pH至7.4，得到0.05mol/L的PBS；
(2)将氯霉素抗体加入步骤(1)的PBS溶液中，制备得到浓度为1mg/ml的氯霉素抗体溶液；
(3)将市售含有羧基的铕耦合物用DMF溶解，配制成浓度为5mg/ml的铕溶液；
(4)向4ml的棕色玻璃瓶中依次加入300μL步骤(3)配制的铕溶液、40mg的EDC(先用500μL去离子水溶解)和12.5mg的NHS(先用700μL DMF溶解)，室温振荡过夜，完成铕溶液的活化；
(5)在10ml棕色瓶中加入步骤(2)制备得到的氯霉素抗体溶液1m，再缓慢加入步骤(4)活化后的铕溶液，室温振荡2小时；
(6)将步骤(5)所得液体转移到截留分子量为10000的透析袋中，在4℃和pH为7.4的PBS下透析72h，于-20℃保存，得到铕标记的探针。
步骤(2)中往微孔板中加入氯霉素标准品和铕标记的探针绘制标准曲线的具体方法如下：
在氯霉素微孔板条中加入浓度为0、50、100、300、600、1200ng/L的氯霉素标准溶液，50ul/孔，将稀土金属铕标记CAP抗体用PBST稀释液按1：50稀释(即25ug标记抗体：5ml稀释液)，每个微孔中加入50ul，室温振荡1h，洗涤液洗3次后用荧光酶标仪检测其荧光强度数值，荧光酶标仪设置为激发波长345nm，发射波长620nm。
用吸光度比值作纵坐标，氯霉素浓度的自然对数作横坐标绘制标准曲线，如图2所示。
将竞争检测的检测限定为B/B0＝0.8时(B0为0标准样检测值，B为待测样检测值)的竞争药物的质量浓度，根据曲线回归方程确定检测体系的灵敏度。
氯霉素标准浓度竞争检测结果参见表1。
表1氯霉素竞争检测结果
按照B/B0为0.8时，检测灵敏度为25.78ng/L。
实施例2
本实施例检测了20份阴性猪尿样品，其中5份阴性尿样添加不同浓度的氯霉素标准液(0.01、0.1、0.5、1、5ug/L)。添加样品每个测试5次，并计算回收率。计算得出氯霉素添加样的回收率为83～109％，平均回收率96.4％，变异系数6.02～10.09％，平均变异系数7.60％，准确度较好。
本发明通过选择适合的稀土金属铕与特异性的抗体进行定向共价化学偶联，获得功能性的荧光稀土金属铕标记探针，并通过优化竞争性免疫反应的各种条件，达到对氯霉素残留药物的快速和高灵敏定量测定。本发明方法能实现对氯霉素残留药物的定量检测，并且检测限低、检测灵敏度高、特异性好。

Claims (10)

1.一种基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用氯霉素抗原包被微孔板，包被后用洗涤液冲洗板孔并用蛋白液封闭；
(2)往步骤(1)处理后的微孔板中加入氯霉素标准品或待测样品，以及加入铕标记的探针；
(3)将步骤(2)处理后的微孔板孵育后用PBST缓冲液洗涤；
(4)用荧光检测仪检测步骤(3)处理后各孔的荧光强度；
(5)根据氯霉素标准品的荧光强度与浓度绘制标准曲线，将待测样品的荧光强度与标准曲线中的荧光强度对比，获得待测样品中的氯霉素浓度。
2.根据权利要求1所述的基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，步骤(1)所述的氯霉素抗原为氯霉素-载体蛋白偶联物。
3.根据权利要求2所述的基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，所述的载体蛋白为牛血清白蛋白和血蓝蛋白中的一种。
4.根据权利要求1所述的基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，步骤(1)所述的包被条件为温度4℃，时间12～16h。
5.根据权利要求1所述的基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，步骤(1)所述的洗涤液为磷酸缓冲盐溶液与Tween20和NaN3的混合液。
6.根据权利要求1所述的基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，步骤(1)所述的微孔板为96孔聚苯乙烯板。
7.根据权利要求1所述的基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，步骤(1)所述的蛋白液为牛血清白蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中的一种。
8.根据权利要求1所述的基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，步骤(1)所述的封闭条件为温度37℃，时间2h。
9.根据权利要求1所述的基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，步骤(2)所述铕标记的探针为交联剂处理的金属铕与抗氯霉素特异性抗体的偶联物。
10.根据权利要求9所述的基于铕标记的氯霉素免疫荧光测定方法，其特征在于，所述的交联剂为EDC和NHS。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109781691A (zh) * 2019-02-28 2019-05-21 渤海大学 一种基于聚苯乙烯纳米荧光微球探针检测氯霉素的方法
CN111398235A (zh) * 2020-04-27 2020-07-10 湖北民族大学 一种基于Cu/UiO-66金属有机框架猝灭的同步荧光检测氯霉素的方法
CN113355388A (zh) * 2021-06-04 2021-09-07 江南大学 一种基于核酸外切酶ⅲ辅助信号放大的免疫吸附检测氯霉素的方法
WO2023168822A1 (zh) * 2022-03-11 2023-09-14 杭州傲敏生物科技有限公司 一种基于人工核酶的食品中污染物多色荧光分析方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103175953A (zh) * 2011-12-26 2013-06-26 苏州新波生物技术有限公司 铕纳米粒子荧光质控品及其制备方法和应用
CN103424550A (zh) * 2012-05-18 2013-12-04 北京勤邦生物技术有限公司 一种检测氯霉素的试剂盒及方法
CN204405680U (zh) * 2015-02-12 2015-06-17 北京安百胜生物科技有限公司 检测降钙素原的试纸条
CN105277683A (zh) * 2014-07-24 2016-01-27 江苏维赛科技生物发展有限公司 一种检测虾肉中的氯霉素的荧光分析法
CN105652005A (zh) * 2016-02-04 2016-06-08 中国农业科学院油料作物研究所 定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条、制备方法及其应用
CN206096151U (zh) * 2016-06-14 2017-04-12 中国农业大学 一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条
CN106841612A (zh) * 2016-12-27 2017-06-13 福建普立辰生物技术有限公司 一种人脂蛋白相关磷脂酶a2免疫层析试纸条的制备方法
CN106918704A (zh) * 2016-12-31 2017-07-04 中国农业科学院油料作物研究所 同步检测黄曲霉毒素和甲萘威混合污染的时间分辨荧光免疫层析试剂盒、制备方法及应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103175953A (zh) * 2011-12-26 2013-06-26 苏州新波生物技术有限公司 铕纳米粒子荧光质控品及其制备方法和应用
CN103424550A (zh) * 2012-05-18 2013-12-04 北京勤邦生物技术有限公司 一种检测氯霉素的试剂盒及方法
CN105277683A (zh) * 2014-07-24 2016-01-27 江苏维赛科技生物发展有限公司 一种检测虾肉中的氯霉素的荧光分析法
CN204405680U (zh) * 2015-02-12 2015-06-17 北京安百胜生物科技有限公司 检测降钙素原的试纸条
CN105652005A (zh) * 2016-02-04 2016-06-08 中国农业科学院油料作物研究所 定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条、制备方法及其应用
CN206096151U (zh) * 2016-06-14 2017-04-12 中国农业大学 一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条
CN106841612A (zh) * 2016-12-27 2017-06-13 福建普立辰生物技术有限公司 一种人脂蛋白相关磷脂酶a2免疫层析试纸条的制备方法
CN106918704A (zh) * 2016-12-31 2017-07-04 中国农业科学院油料作物研究所 同步检测黄曲霉毒素和甲萘威混合污染的时间分辨荧光免疫层析试剂盒、制备方法及应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIANZHONG SHEN等: "A monoclonal antibody-based time-resolved fluoroimmunoassay for chloramphenicol in shrimp and chicken muscle", 《ANALYTICA CHIMICA ACTA》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109781691A (zh) * 2019-02-28 2019-05-21 渤海大学 一种基于聚苯乙烯纳米荧光微球探针检测氯霉素的方法
CN111398235A (zh) * 2020-04-27 2020-07-10 湖北民族大学 一种基于Cu/UiO-66金属有机框架猝灭的同步荧光检测氯霉素的方法
CN111398235B (zh) * 2020-04-27 2022-11-29 湖北民族大学 一种基于Cu/UiO-66金属有机框架猝灭的同步荧光检测氯霉素的方法
CN113355388A (zh) * 2021-06-04 2021-09-07 江南大学 一种基于核酸外切酶ⅲ辅助信号放大的免疫吸附检测氯霉素的方法
CN113355388B (zh) * 2021-06-04 2023-10-03 江南大学 一种基于核酸外切酶ⅲ辅助信号放大的免疫吸附检测氯霉素的方法
WO2023168822A1 (zh) * 2022-03-11 2023-09-14 杭州傲敏生物科技有限公司 一种基于人工核酶的食品中污染物多色荧光分析方法

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