CN104849461A - 一种检测玉米赤霉烯酮的试纸条及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测玉米赤霉烯酮的试纸条及其应用。试纸条包括样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）和底板（7），所述反应膜上具有包被有玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物的检测线（5）和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线（6），所述结合物释放垫（2）喷涂有玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物。本发明还提供了一种应用上述玉米赤霉烯酮试纸条检测谷物中玉米赤霉烯酮残留的方法。本发明所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。

Description

一种检测玉米赤霉烯酮的试纸条及其应用

技术领域

本发明涉及一种检测玉米赤霉烯酮的试纸条及其应用，具体涉及一种用于检测玉米赤霉烯酮的胶体金试纸条，特别是用于谷物中玉米赤霉烯酮残留的检测。

背景技术

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)为一种白色结晶，又称F-2毒素，是由禾谷镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物。1962年Stob等首先从发霉的玉米中分离得到了该毒素，命名为玉米赤霉烯酮；1966年Urry首次阐明了该毒素的结构，并将此结构命名为F-2毒素，后又被改称为ZEN。ZEN为白色晶体，分子式C18H22O5，化学名为6-(10-羟基-6氧基-1-碳烯基)β-雷琐酸-μ-内酯[6-(10-hydroxy-6-OXO-trans-1-undeceny)β-resorcylicacid lactone]，熔点164～165，℃紫外线光谱最大吸收为236nm、274nm和316nm。红外线光谱最大吸收为970nm，其甲醇溶液在254nm短紫外光照射下呈明亮的绿-蓝色荧光。ZEN不溶于水，溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇及乙醇等。在植物体内，ZEN主要代谢产生α-玉米赤霉烯醇(α-Zearalenol，a-ZOL)。在动物及人体内，除了可以代谢产生α-ZOL外，ZEN还可代谢产生β-玉米赤霉烯醇(β-zearalenol，β-ZOL)，a-ZOL和β-ZOL又可以相互转化并进一步代谢产生α-玉米赤霉醇(zeranol，α-zearalanol，ZAL)及β-玉米赤霉醇(Taleranol，β-Zearalanol，TAL)，而ZAL、TAL以及玉米赤霉醇(zearalanone，ZAN)又可相互转化。

ZEN主要污染玉米、高粱、小麦、大麦等粮谷类作物及其制品。Toshitsugu对19个国家和地区的谷物、食品及饲料中所含的ZEN进行了调查发现，包括中国、阿根廷、加拿大、波兰及也门等众多国家和地区的样品均有不同程度的污染。借助被污染的乳制品、肉制品等动物源性食品，ZEN及其代谢产物可以进入人体，给人类的健康造成威胁。ZEN对动物及人类危害主要表现在影响和破坏生长发育及生殖系统方面，人畜误食含有该毒素的食物后，会引起雌性激素中毒症，造成生殖系统的严重损伤。此外，ZEN及其衍生物对肝脏系统，免疫系统均有很大的危害，并且有引发肿瘤的可能性。Schoental R在进行致癌试验时发现，试验组大鼠出现由致癌剂处理而诱发的肿瘤；此外，试验组和对照组大鼠还发生了乳腺纤维瘤、腺瘤、腺癌、垂体腺癌、睾丸间质肿瘤以及子宫纤维瘤等。在其他致癌试验中也有类似情况发生，这些肿瘤所涉及的器官表明，它们可能与动物饲料中的雌激素物质有关。因此认为，它们是由污染饲料的ZEN或其代谢产物引起的。

目前大多数国家对食品、谷物、饲料中的玉米赤霉烯酮含量都有十分严格的规定。例如澳大利亚规定谷物中玉米赤霉烯酮的含量不能超过0.05mg/kg；意大利规定在谷物和谷类产品中玉米赤霉烯酮的含量不能超过0.1mg/kg；而在法国，植物油和谷类当中玉米赤霉烯酮的含量必须低于0.2mg/kg。中国则规定小麦、玉米中的玉米赤霉烯酮含量不得超过0.06mg/kg。

玉米赤霉烯酮的分析测定一般采用薄层色谱法(TLC)、酶联吸附免疫法(ELISA)和高效液相色谱法(HPLC)。TLC法繁琐费时，且灵敏度、特异性较差，提取过程中所需有机溶剂品种多且量大，易污染环境，对人体有较大危害。而ELISA法测定结果受试剂盒差异、实验温度、仪器灵敏度等条件影响较大，重复性差，假阳性率高，难以达到相关技术要求。常规的HPLC法虽然比TLC灵敏度高。但由于样品前处理手续繁琐，操作复杂，也难以推广。以上几种方法均耗时较长，而随着商品经济的发展，人们对时间概念的加强，无论是商家还是政府部门对检测时间的要求越来越高，而胶体金试纸条作为一种快速检测技术，能很好的解决这个问题，提高检测效率，缩减检测时间。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的玉米赤霉烯酮残留检测试纸条。

本发明所提供的检测玉米赤霉烯酮残留的试纸条，包括样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）和底板（7）；所述反应膜上具有包被有玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物的检测线（5）和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线（6），所述结合物释放垫（2）喷涂有抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物。

所述玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物是由玉米赤霉烯酮半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体是以玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。

所述样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）依次粘贴在底板（7）上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：

1）制备喷涂有抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2）制备具有包被有玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

具体地说，步骤包括：

1）半抗原制备：将玉米赤霉烯酮与1，3-丙二胺反应得到玉米赤霉烯酮半抗原；

2）将玉米赤霉烯酮半抗原与载体蛋白偶联，得到玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物；

3）用玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到可分泌抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

4）提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；

5）用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

6）将步骤3）制备的抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体加入步骤5）制备的胶体金中，得到抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物；

7）将抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，置于干燥环境中保存备用；

8）将玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线；

9）将样品吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白（体积分数）、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；

10）在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，样品吸收垫盖住结合物释放垫，最后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装，4～30℃条件下可保存12个月。

本发明的另一个目的是提供一种应用上述试纸条检测谷物中玉米赤霉烯酮残留的方法，它包括步骤：

（1）样品前处理；

（2）用试纸条进行检测；

（3）分析检测结果。

本发明的玉米赤霉烯酮快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，将抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物固定于结合物释放垫上，样品中的玉米赤霉烯酮在流动过程中，与结合物释放垫上的抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物结合，形成药物-抗体-胶体金标记物。样本中的药物与反应膜检测线上的玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物竞争结合抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物，根据检测线红色条带有无或颜色深浅来判断待测样品液中是否含有玉米赤霉烯酮残留。

检测时，样品经处理后滴入试纸条卡孔内，当玉米赤霉烯酮在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体-胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物结合，在检测线（T）和质控线（C）内各出现一条红色条带；如果玉米赤霉烯酮在样品中的浓度等于或高于检测限，单克隆抗体-胶体金标记物会与玉米赤霉烯酮全部结合，从而在T线处因为竞争反应不会与玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带。如图2所示。

阴性：当质控线（C）显示出红色条带，检测线（T）同时也显示出红色条带，判为阴性。

阳性：当质控线（C）显示出红色条带，而检测线（T）不显色，判为阳性。

无效：当质控线（C）不显示出红色条带，则无论检测线（T）显示出红色条带与否，该试纸条均判为无效。

本发明的试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。用本发明试纸条检测玉米赤霉烯酮残留的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。

附图说明

图1为试纸条剖面结构示意图。

图2为试纸条检测结果判定图。

图3为玉米赤霉烯酮半抗原合成图。

图4为玉米赤霉烯酮半抗原核磁共振氢谱图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用来限制本发明的范围。

实施例1玉米赤霉烯酮检测试纸条的制备

该试纸条的制备方法主要包括以下步骤：

1）制备喷涂有抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2）制备具有包被有玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和PVC底板组装成试纸条。

下面分步详细叙述：

1、玉米赤霉烯酮半抗原的制备

取玉米赤酶烯酮32mg，1，3-丙二胺0.1mL及少量4-二甲氨基吡啶加入5mL干燥的二甲基甲酰胺中，作为A液；取N，N’-二环己基碳二亚胺40mg溶解于1mL干燥的二甲基甲酰胺，作为B液；0℃条件下缓慢滴加B液于A液中，滴加完毕后自然升温至室温，继续反应24小时。蒸除溶剂，柱层析纯化后得到羧丙基玉米赤酶烯酮，合成路线如图3。

取上述产物经核磁共振氢谱测定，如图4所示，1.1-2.7ppm之间增加的丙二胺片段伤的烷基信号峰，说明半抗原合成成功。

2、免疫原的制备

取7mg半抗原，溶解于1mL二甲基甲酰胺中；取戊二醛水溶液0.1mL，加入半抗原溶液中，室温下搅拌24h，即可得到反应液A；称取牛血清白蛋白（BSA）30mg，使之充分溶解在2.7mL0.1mol/L CB（pH9.6）中，将反应液A逐滴缓慢滴加到BSA溶液中，并于室温下搅拌24h，用5M的硼氢化钠水溶液0.2mL进行还原反应4小时，用0.01mol/L PBS4℃透析3d，每天换透析液3次，以除去未反应的小分子物质；分装，于-20℃保存备用。

3、包被原的制备

取7mg半抗原，溶解于1mL二甲基甲酰胺中；取戊二醛水溶液0.1mL，加入半抗原溶液中，室温下搅拌24h，即可得到反应液A；称取卵清蛋白（OVA）30mg，使之充分溶解在2.7mL0.1mol/L CB（pH9.6）中，将反应液A逐滴缓慢滴加到OVA溶液中，并于室温下搅拌24h，用5M的硼氢化钠水溶液0.2mL进行还原反应4小时，用0.01mol/L PBS4℃透析3d，每天换透析液3次，以除去未反应的小分子物质；分装，于-20℃保存备用。

4、抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备

（1）动物免疫

将步骤2得到的免疫原注入Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。

（2）细胞融合和克隆化

取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按8:1（数量配比）比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争ELISA法测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并发现，其中一株效价显著高于其它杂交瘤细胞株，将该抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚克隆化，并进行扩增，以备冻存保存。

（3）细胞冻存和复苏

将杂交瘤细胞用冻存液制成1×10⁶个/mL的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。

（4）单克隆抗体的制备与纯化

增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，用辛酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，-20℃保存。

所述细胞培养基为向RPMI1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20%（质量分数），碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2%（质量分数）；所述细胞培养基的pH为7.4。

5、羊抗鼠抗抗体的制备

以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体。

6、抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物的制备

（1）胶体金的制备

用双蒸去离子水将1%氯金酸稀释成0.01%（质量分数），取100ml置于锥形瓶中，用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，在持续高温、持续搅拌下加入2.5ml1%柠檬酸三钠，继续匀速搅拌加热至溶液呈透亮的红色时停止，冷却至室温后用去离子水恢复到原体积，4℃保存。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。

（2）抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物的制备

在磁力搅拌下，用0.2mol/L碳酸钾溶液调胶体金的pH值至7.0，按每毫升胶体金溶液中加入20～50μg的标准向胶体金溶液中加入抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体，继续搅拌混匀30min，加入10%BSA，使其在胶体金溶液中的终浓度为1%（体积分数），静置10min。12000r/min、4℃离心40min，弃上清液，沉淀用复溶缓冲液洗涤两次，用体积为初始胶体金体积1/10的复溶缓冲液将沉淀重悬，置4℃备用。

复溶缓冲液：含酪蛋白0.02%～0.1%（质量分数）、吐温-800.05%～0.2%（质量分数）、pH7.2的0.02mol/L磷酸盐缓冲液。

7、结合物释放垫的制备

将结合物释放垫浸泡于含有牛血清白蛋白（牛血清白蛋白在缓冲液中的浓度为0.5%）、pH为7.2、0.5mol/L的磷酸盐缓冲液中，均匀浸湿1h，37℃烘3h备用。用Isoflow喷膜仪将制备好的抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物均匀喷涂在结合物释放垫上，每1cm结合物释放垫喷涂0.01ml抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物后，置于37℃环境中（湿度＜20%）60min后取出，置于干燥环境（湿度＜20%）中保存备用。

8、反应膜的制备

将玉米赤霉烯酮半抗原-卵清蛋白偶联物包被到反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线。

包被过程：用磷酸缓冲液将玉米赤霉烯酮半抗原-卵清蛋白偶联物稀释到10mg/ml，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的检测线（T线），包被量为0.8μl/cm；用0.01mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液将羊抗鼠抗抗体稀释到200μg/ml，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控线（C线），包被量为1.0μl/cm。将包被好的反应膜置于37℃条件下干燥2h，备用。

9、样品吸收垫的制备

将样品吸收垫置于含0.5%牛血清白蛋白（体积分数）、pH7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液中浸泡2h，37℃烘2h备用。

10、试纸条的组装

将样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）依次按顺序粘贴在PVC底板（7）上；结合物释放垫（2）从起始端有1/3区域被样品吸收垫（1）覆盖，结合物释放垫（2）的末端与反应膜（3）的始端连接，反应膜（3）的末端与吸水垫（4）的始端相连，样品吸收垫（1）的始端与PVC底板（7）的始端对齐，吸水垫（4）的末端与PVC底板（7）的末端对齐；所述反应膜（3）上有检测线（5）和质控线（6），检测线（5）和质控线（6）均为与所述试纸条的长相垂直的条状带；检测线（5）位于靠近结合物释放垫（2）的末端的一侧；质控线（6）位于远离结合物释放垫（2）的末端的一侧；将试纸条用机器切成3mm宽的小条，装在特制的塑料制卡中，4～30℃条件下可保存12个月。

实施例2 样品中玉米赤霉烯酮残留的检测

1、样品的前处理

称取5.0±0.05g粉碎的谷物样品至50ml聚苯乙烯离心管中，加入5ml甲醇，将瓶塞盖紧，振荡5min；室温（20-25℃），3000g以上离心5min。移取0.1ml上清液至盛有0.9ml样本复溶液的2ml聚苯乙烯离心管中混匀，涡动30s。

2、用试纸条进行检测

用吸管吸取待检样品溶液垂直滴加2～3滴于加样孔，液体流动时开始计时，反应5～10min，判定结果。从原包装袋中取出检测卡回温至室温，打开后请在一个小时内尽快使用。用吸管吸取稀释后的待检样品溶液垂直滴加3滴于加样孔。液体流动时开始计时，反应5-10min，根据示意图判定结果。15min后判读无效。

3、分析检测结果

阴性（—）：T线和C线都显色，表示样品中玉米赤霉烯酮浓度低于检测限。

阳性（＋）：T线很模糊或无显色，表示样品中玉米赤霉烯酮浓度等于或高于检测限。

无效：未出现C线，表明不正确的操作过程或试纸卡已变质失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸卡重新测试。

实施例3 样品检测实例

1、检测限试验

取空白谷物样本（黄豆、玉米），在其中分别添加玉米赤霉烯酮至终浓度为250、500、1000μg/kg，取试纸条进行检测，每个样本重复测定三次。

用试纸条检测黄豆、玉米样本时，当其中玉米赤霉烯酮添加浓度为250mg/kg时，试纸条上显示出肉眼可见的两条红色线条，呈阴性；当其中玉米赤霉烯酮添加浓度为500、1000mg/kg时，试纸条质控线显色，检测线不显色，呈阳性，表明本试纸条对谷物中玉米赤霉烯酮的检测限为500mg/kg。

2、假阳性率、假阴性率试验

取已知玉米赤霉烯酮含量大于500mg/kg的黄豆、玉米阳性样本各20份和含量小于500mg/kg的黄豆、玉米阴性样本各20份，用三批试纸条进行检测，计算其阴阳性率。结果见表1。

表1检测样本结果

结果表明：用3个批次生产的试纸条检测阳性黄豆样本时，结果全为阳性，可知阳性样本符合率为100%，假阴性率为0；检测20份阴性黄豆样本时，结果全为阴性，可知阴性符合率为100%，假阳性率为0，用3个批次生产的试纸条检测阳性玉米样本时，结果全为阳性，可知阳性样本符合率为100%，假阴性率为0；检测20份阴性玉米样本时，结果全为阴性，可知阴性符合率为100%，假阳性率为0。说明本发明检测玉米赤霉烯酮的试纸条可以对谷物中玉米赤霉烯酮残留进行快速检测。

3、特异性试验

将呕吐毒素、黄曲霉毒素B1、赭曲霉素A用pH7.2、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液稀释至10mg/kg，用玉米赤霉烯酮试纸条进行检测。结果显示，用该试纸检测10mg/kg呕吐毒素、黄曲霉毒素B1、赭曲霉素A时，试纸条质控线和检测线均显色，呈阴性。说明本试纸条对呕吐毒素、黄曲霉毒素B1、赭曲霉素A无交叉反应。

Claims (8)

1.一种检测玉米赤霉烯酮的试纸条，包括样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）和底板（7），其特征在于所述反应膜上具有包被有玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物的检测线（5）和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线（6），所述结合物释放垫（2）喷涂有玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物。

2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）依次粘贴在底板（7）上。

3.如权利要求1-2任一项所述的试纸条，其特征在于所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。

4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物由玉米赤霉烯酮半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

5.如权利要求1或4任一项所述的试纸条，其特征在于所述玉米赤霉烯酮半抗原是由玉米赤霉烯酮与1，3-丙二胺反应得到，其分子结构式为：

6.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述玉米赤霉烯酮单克隆抗体是以玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。

7.一种制备权利要求1-6任一项所述试纸条的方法，其包括步骤：

1）制备喷涂有玉米赤霉烯酮单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2）制备具有包被有玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

8.一种检测谷物中玉米赤霉烯酮残留的方法，其包括步骤：

1）样本前处理；

2）用权利要求1-6任一项所述的试纸条进行检测；

3）分析检测结果。